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 總校閱序

在過去幾年，醫學分子檢驗技術的發展，有多項技術已廣泛應用於各
大醫院及生技公司，其結果可作為病人疾病之診斷、治療及預防之參考。如
海洋性貧血、血友病、蠶豆症及唐氏症的診斷及篩選，腫瘤標誌的診斷及篩
選，結核分枝桿菌及細菌抗藥性基因的快速診斷等，都已有良好成效。目前
國內各大專院校在生科及醫農相關科系皆有開授分子檢驗及生物技術的相關
課程，雖然國內外已有多本撰寫得相當好的生物技術中英文書籍，九十二年
教育部顧問室在生物技術科技教育改進計畫中也曾出版《分子檢驗》專書，
然而分子檢驗技術發展快速，國內亟需一本最新醫學分子檢驗初階的中文教
科書。
遺傳疾病、腫瘤標誌及感染性疾病是目前醫學分子檢驗最重要的領域，
也已廣泛的應用於疾病的診斷、治療及預防。本書共邀請 34 位國內各領域
專家學者一起參與撰寫，書中涵蓋四大領域：分子檢驗技術、遺傳疾病、腫
瘤標誌及感染性疾病之分子檢驗，是引領初學者的重要學習指南。本書的特
點，除以淺顯易懂的文字表達外，所採用的圖片均自行繪製、拍攝或由國內
各領域專家提供，彌足珍貴。相關章節的討論及參考文獻也大多引用國內學
者的學術論文期刊，讓初學者了解台灣的現狀。同時本書很多章節內容以精
簡的方式書寫，並不涵蓋所有醫學分子檢驗的項目，而以常用之分子檢驗為
主。有興趣的學習者可以善用參考文獻，進一步查閱。本書除提供醫技系初
學者外，也適合醫學系學生、生命科學相關科系學生、生技研發人員、醫師
及相關醫護人員學習使用。
本書能如期出版，首先要感謝孫光蕙教授、趙崇義教授及李宏謨教授

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的鼎力支持，在他們的邀約下獲得多位老師慨允共襄勝舉。此外，楊燿榮醫
師、顏經洲醫師、周如文研究員、蘇玲慧老師提供寶貴的圖片，五南圖書出
版公司在編輯上的協助，在此一併感謝。本書雖經再三修正，仍恐有疏漏之
處，煩請各位先進給予指正。

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 總校閱簡介

吳俊忠
• 現職
成功大學特聘教授
成功大學醫學院副院長
成功大學醫學院分子醫學研究所教授
成功大學醫學院醫學檢驗生物技術學系教授
成功大學醫學院附設醫院病理部醫檢師
教育部生物及醫學科技人才培育先導型計畫醫衛分子檢驗組召集人
國家衛生研究院臨床研究組兼任研究員
• 學歷
美國賓州費城天普大學微生物暨免疫研究所博士
美國賓州費城湯姆斯傑佛遜大學臨床微生物研究所碩士
美國賓州費城湯姆斯傑佛遜大學醫事技術系學士

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 主編者簡介

吳俊忠
• 現職
成功大學特聘教授
成功大學醫學院副院長
成功大學醫學院分子醫學研究所教授
成功大學醫學院醫學檢驗生物技術學系教授
成功大學醫學院附設醫院病理部醫檢師
教育部生物及醫學科技人才培育先導型計畫醫衛分子檢驗組召集人
國家衛生研究院臨床研究組兼任研究員
• 學歷
美國賓州費城天普大學微生物暨免疫研究所博士
美國賓州費城湯姆斯傑佛遜大學臨床微生物研究所碩士
美國賓州費城湯姆斯傑佛遜大學醫事技術系學士

李宏謨
• 現職
中臺科技大學校長
台北醫學大學醫學檢驗暨生物技術學系教授
• 學歷
美國田納西大學生化學博士

孫光蕙
• 現職
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系教授
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 教育部醫學教育委員會醫技教育組召集人
• 學歷
陽明大學微生物暨免疫學研究所博士
陽明醫學院微生物暨免疫學研究所碩士

趙崇義
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系教授兼研發長
• 學歷
美國加州大學戴維斯分校生化學博士

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 作者簡介

王聖帆
• 現職
陽明大學博士後研究
• 學歷
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系博士

朱大成
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系副教授
• 學歷
美國阿拉巴馬州立大學伯明罕分校醫學遺傳博士

江倪全
• 現職
成功大學醫學檢驗生物技術學系博士後研究員
• 學歷
成功大學基礎醫學研究所博士
成功大學微生物及免疫學研究所

吳俊忠
• 現職
成功大學特聘教授
成功大學醫學院副院長
成功大學醫學院分子醫學研究所教授
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 成功大學醫學院醫學檢驗生物技術學系教授
成功大學醫學院附設醫院病理部醫檢師
教育部生物及醫學科技人才培育先導型計畫醫衛分子檢驗組召集人
國家衛生研究院臨床研究組兼任研究員
• 學歷
美國賓州費城天普大學微生物暨免疫研究所博士
美國賓州費城湯姆斯傑佛遜大學臨床微生物研究所碩士
美國賓州費城湯姆斯傑佛遜大學醫事技術系學士

李宏謨
• 現職
中臺科技大學校長
台北醫學大學醫學檢驗暨生物技術學系教授
• 學歷
美國田納西大學生化學博士

吳芳姿
• 現職
疾病管制局研究檢驗中心副研究員
• 學歷
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系博士班進修中

李建宏
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系兼任講師
長庚醫療財團法人林口長庚紀念醫院檢驗醫學科教學醫檢師
• 學歷
台灣大學毒理學研究所碩士

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何鴻耀
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系助理教授
• 學歷
國防醫學院生命科學研究所博士

林文昌
• 現職
中央研究院生醫所副研究員
• 學歷
美國凱斯西儲大學分子生物學及微生物學博士

林佳霓
• 現職
台灣大學醫學檢驗暨生物技術學系博士後研究員
• 學歷
台灣大學醫學檢驗暨生物技術學系博士

林淑容
• 現職
中原大學生物科技系助理教授
• 學歷
台灣大學分子醫學研究所博士

林淑華
• 現職
台灣大學醫學檢驗暨生物技術學系教授
• 學歷
美國北卡羅萊納大學教堂山分校博士
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 台灣大學微生物研究所碩士

林景堉
• 現職
台北醫學大學醫學檢驗暨生物技術學系助理教授
• 學歷
台灣大學農業化學研究所生化博士

施浤彰
• 現職
中國醫藥大學附設醫院檢驗醫學部分子醫學科醫檢師
• 學歷
中興大學獸醫學系獸醫學博士
中興大學生命科學院理學碩士

孫光蕙
• 現職
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系教授
教育部醫學教育委員會醫技教育組召集人
• 學歷
陽明大學微生物暨免疫學研究所博士
陽明醫學院微生物暨免疫學研究所碩士

陳佑誠
• 現職
台塑生醫醫學技術事業部顧問
• 學歷
台灣大學農業化學所微生物組博士

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張長泉
• 現職
成功大學醫學院醫學檢驗生物技術學系教授
• 學歷
台灣大學農業化學系生化組博士
台灣大學醫學院生化學研究所碩士

陳盈汝
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系博士後研究員
• 學歷
長庚大學生物醫學研究所博士

張建國
• 現職
高雄醫學大學附設醫院檢驗醫學部主任
• 學歷
高雄醫學院醫學系學士

陳桂添
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系博士後研究員
• 學歷
交通大學生物科技研究所博士

許蕙玲
• 現職
國防醫學院助理研究員

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• 學歷
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系博士班進修中

張懿欣
• 現職
中山醫學大學醫學檢驗暨生物技術學系教授兼系主任
• 學歷
陽明大學微生物暨免疫學研究所博士
高雄醫學大學醫學技術學系學士

黃智生
• 現職
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系副教授
• 學歷
美國德州大學蓋維斯頓醫學分校實驗病理學博士

楊正芬
• 現職
行政院衛生署疾病管制局研究檢驗中心病媒病毒及立克次體實驗室助理研究員
• 學歷
陽明大學醫學生物技術暨檢驗學系博士班進修中

楊雅倩
• 現職
台灣大學醫學檢驗暨生物技術學系助理教授
• 學歷
台灣大學醫學院微生物學研究所博士
台灣大學醫學院微生物學研究所碩士

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 台灣大學醫事技術學系學士

詹爾昌
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系教授
• 學歷
美國普度大學生物技術博士

趙崇義
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系教授兼研發長
• 學歷
美國加州大學戴維斯分校生化學博士

鄭恩加
• 現職
長庚大學醫學生物技術暨檢驗學系教授
• 學歷
美國德州大學安德生癌症中心腫瘤生物學博士

鄧麗珍
• 現職
台灣大學醫學院醫學檢驗暨生物技術學系教授兼主任
台灣微生物學會常務理事
• 學歷
台灣大學微生物學研究所碩士
台灣大學醫事技術學系學士

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蕭明裕
• 現職
弘光科技大學醫護學院護理系（所）副教授兼基礎醫學組總召集人
• 學歷
中山醫學大學醫學研究所博士
高雄醫學大學醫學研究所碩士
高雄醫學大學醫學技術學系學士

鍾明怡
• 現職
陽明大學生命科學系暨基因體科學研究所副教授
• 學歷
美國明尼蘇達大學病理生物博士（人類遺傳）
美國明尼蘇達大學臨床實驗科學碩士（臨床生化）
台灣大學醫事技術學系學士

羅時燕
• 現職
慈濟大學醫學檢驗生物技術學系教授兼主任
• 學歷
美國南加州大學分子微生物免疫研究所博士

羅梅真
• 學歷
台北醫學大學醫學科學研究所博士候選人

蘇怡寧
• 現職
台灣大學醫學院臨床基因醫學研究所副教授
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 台灣大學醫學院附設醫院基因醫學部暨婦產部主治醫師
台灣大學醫學院附設醫院基因醫學部分子遺傳暨細胞遺傳研究室主持人
• 學歷
台灣大學醫學院臨床醫學研究所博士
台灣大學醫學系學士

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 目錄

第一單元 分子檢驗技術（孫光蕙教授　主編）

第一章 分子檢驗基本技術 3

（吳芳姿、王聖帆、許蕙玲 、楊正芬、黃智生、孫光蕙　著）

等位基因特異性寡核 酸雜交 5

原位螢光雜交法 5

脈衝式電泳分析 8

限制片段長度多形性 10

聚合 連鎖反應 13

單股結構多形性 19

增幅阻礙突變系統 22

增幅限制 切位點 23

突變分辨聚合 連鎖反應 25

化學切割錯誤的鹼基 26

變性梯度膠體電泳法 28

應用核酸序列的放大反應 30

轉錄介導的擴增法 32

連接 連鎖反應 35

分枝 DNA 訊號放大技術 39

DNA 甲基化分析技術 41

總結 50

學習評估 50

參考文獻 50

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第二章 微衛星標記分析與應用（楊雅倩　著） 59

前言 61

何謂微衛星標記 61

微衛星的基因變異 63

微衛星標記分析 65

微衛星標記在生物醫學上的用途 67

總結 68

學習評估 68

參考文獻 68

第三章 單一核 酸多型性檢測技術之原理與應用 71

（蕭明裕、張懿欣　著）

前言 73

單一核 酸多型性 73

SNP 檢測技術之基礎原理 74

SNP 檢測技術 77

SNP 在醫學領域的應用 86

學習評估 89

參考文獻 89

第四章 生物資訊在分子檢驗之應用（林文昌　著） 93

前言 95

生物資訊學與基因體計畫資料庫 95

資訊搜尋與序列比對 97

序列比對生物資訊工具之分子檢驗實例 102

學習評估 107

參考文獻 107

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第五章 生物晶片（陳佑誠、陳桂添、詹爾昌　著） 109

生物晶片的簡介 111

生物晶片的種類 111

生物晶片製造與偵測原理 116

生物晶片的應用 119

學習評估 124

參考文獻 124

第二單元　基因疾病之分子檢驗（趙崇義教授　主編）

第六章 海洋性貧血分子檢驗 129

（李建宏、朱大成、施浤彰、張建國　著）

甲型海洋性貧血簡介 131

台灣常見甲型海洋性貧血基因型 131

甲型海洋性貧血基因型的偵測方法 133

甲型海洋性貧血帶因者的篩檢流程 133

產前診斷甲型海洋性貧血 135

乙型海洋性貧血簡介 136

血紅素的形成及其功能 137

乙型海洋性貧血之基因診斷 138

乙型變異血紅素 146

學習評估 147

參考文獻 150

第七章 血友病分子檢驗（林淑容、蘇怡寧、林佳霓、林淑華　著） 155

血液凝固的機轉 157

血友病 157

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 第八因子蛋白質及基因 158

A 型血友病患之基因異常及診斷 159

第九因子蛋白質及基因 164

B 型血友病患之基因異常及診斷 165

總結 166

學習評估 166

參考文獻 167

第八章 唐氏症的產前篩檢及診斷（朱大成、鍾明怡　著） 169

唐氏症簡介 171

產前篩檢唐氏症 171

現行細胞遺傳學方法之唐氏症診斷 172

分子診斷唐氏症 180

學習評估 180

參考文獻 180

第九章 葡萄糖六磷酸去氫 缺乏症之分子檢驗 183

（何鴻耀、趙崇義　著）

前言 185

G6PD 的生化特性 185

G6PD 在紅血球中扮演之角色 187

G6PD 在其它細胞的角色 187

G6PD 缺乏症的臨床症狀與問題 188

G6PD 分子生物學與遺傳特性 192

G6PD 缺乏症的分子流行病學 194

G6PD 缺乏症之診斷 195

G6PD 缺乏症之分子診斷 202

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 病例 206

學習評估 206

參考文獻 207

第三單元　腫瘤標誌之分子檢驗（李宏謨教授　主編）

第十章 血液中的腫瘤標誌（李宏謨　著） 217

前言 219

腫瘤標誌臨床效益的評估 219

腫瘤標誌的發展歷史 222

血液中的蛋白類腫瘤標誌 223

血液中的核酸類腫瘤標誌 229

學習評估 230

參考文獻 230

第十一章 致癌基因與抑癌基因（李宏謨　著） 231

前言 233

致癌基因的發現 233

原型致癌基因的活化 234

致癌基因的分類 235

抑癌基因 242

學習評估 247

參考文獻 247

第十二章 組織的腫瘤標誌（羅梅真、李宏謨　著） 249

前言 251

組織的腫瘤標誌各論 251

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 學習評估 268

參考文獻 268

第十三章 蛋白質體學及腫瘤標誌蛋白的研發 269

（陳盈汝、鄭恩加　著）

蛋白質體學導言 271

二維電泳分析 271

定量二維電泳分析 273

磁珠親和分離法 274

MALDI-TOF 質譜分析 277

SELDI-TOF 質譜分析 280

腫瘤蛋白標誌的研發現況 281

學習評估 282

參考文獻 282

第十四章 蛋白質晶片（林景堉　著） 285

前言 287

蛋白質晶片的原理 287

蛋白質晶片的種類 290

蛋白質晶片的檢測平台 295

蛋白質晶片應用於癌症的研究與檢測 298

總結 300

學習評估 300

參考文獻 300

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第四單元　感染性疾病之分子檢驗（吳俊忠教授　主編）

第十五章 細菌及真菌之分子鑑定（張長泉　著） 305

前言 307

DNA 定序法 307

聚合 連鎖反應或其延伸技術 310

探針雜交反應法 311

前言 313

真菌傳統鑑定方法 314

血清學鑑定方法 315

DNA 定序法 315

以 PCR 為基礎之分子診斷法 316

寡核 酸微陣列晶片技術 318

學習評估 319

參考文獻 319

第十六章 病毒感染之分子鑑定（羅時燕　著） 327

前言 329

常用於檢測病毒感染的分子鑑定法 329

常見病毒感染的檢測 332

總結 349

學習評估 350

參考文獻 350

第十七章 細菌抗藥基因檢測（鄧麗珍　著） 355

前言 357

細菌抗藥基因檢測 357

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 總結 370

學習評估 370

參考文獻 370

第十八章 細菌分子檢驗之分型法（江倪全、吳俊忠　著） 381

前言 383

基因型分型法 383

聚合 連鎖反應相關分型法 392

核酸定序相關之分型法 401

總結 402

學習評估 403

參考文獻 403

索引 421

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第二章 微衛星標記分析與應用
（Analysis and application of
microsatellite markers）

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本章大綱 學習目標
前言 1. 微衛星標記的特性及其發生多形性的
散布重複DNA 機轉。
串聯重複DNA 2. 微衛星分析方法。
何謂微衛星標記（microsatellite markers） 3. 微衛星標記在生物醫學上的用途。
微衛星的基因變異（genetic alteration）
微衛星不穩定性
微衛星失異合性
微衛星標記分析
微衛星標記在生物醫學上的用途
人類身分及親源鑑定
疾病相關基因的搜尋
腫瘤診斷與治療上的應用
總結
學習評估
參考文獻

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 第二章　微衛星標記分析與應用 61

前言 何謂微衛星標記（Microsatellite
markers）
人類基因體（genome）約含有 30 億鹼
基對（3×109 base pairs, bp）的遺傳物質， 微衛星，亦稱為短串聯重複 （short
其中，具「功能性的 DNA 序列」（包 tandem repeats, STRs; simple sequence repeats,
括：25,000∼30,000 個基因及其轉錄調控 SSRs） 3 ，其是由 1∼5 個核 酸為重複
的序列、維持染色體結構與完整性的區 單位的重複性序列（圖 2-1），例如雙
域等）約占1/4，而真正會轉譯成蛋白質 核 酸（dinucleotide）之 CA 重複序列：
的序列則僅約 2∼3%；反之，人類染色 (CA) n ，n 即是代表其重複次數 （repeat
體中存在大量的重複 DNA 序列（repetitive number）， 在 5∼100 之間。一般而言，
DNA sequences），約占整個人類基因體的 微衛星常見的重複次數在 10 次以下，如
1
55%，其又可分為兩類 ： 重複在 10 次以上，則此微衛星容易出現
「長度」的多形性（polymorphism），也就
散布重複 DNA（Interspersed repeti- 是說其 n 值在不同個體間可能不同，即有
tive DNA） 所謂「不同的對偶基因（alleles）」。參核
約占人類基因體 45%，此種重複 酸（trinucleotide）重複序列有 CAG, CGG,
DNA 乃一個一個地分布在各染色體中， CTG 等，而肆核 酸（tetranucleotide）重複
最著名的是靈長類動物特有的 Alu 重複 序列有 AGAT, AAAG, GATA 等。目前對人
（Alu repeat），此一由約 280 bp 組成的重 類微衛星的命名有一套標準方式，例如：
複 DNA 在人類基因體中重複高達約 75 萬 D4S3360，4 代表其位於第四條染色體，
次，平均每 4 kb（kilo base pairs）就有一 而 3360 則為其獨特之代號。
個 Alu 重複，其總長度約占整個基因體的 原核細胞及真核細胞皆有微衛星，
5%。 而微衛星 DNA 乃廣泛地分布於生物體
的基因體中。目前，人類基因體已鑑定
串聯重複 DNA（Tandem repetitive 出約 3 萬個微衛星，約占人類基因體的
DNA） 3%4，其多數無生物功能，但有些微衛星
約占人類基因體 10%，顧名思義， 可能會細微影響附近基因的表現；另外，
此類重複 DNA 乃一個接一個地聚集在 已知一些參核 酸重複與人類的疾病相
染色體的某一處，而其依每一個重複單 關，特別是已有超過 20 種不穩定的微衛
位 （repeating unit）之序列的長度及總長 星重複序列被報告與人類神經性疾病相
度，又可分為衛星 （satellites）、小衛星 關 5，例如(CAG)n 重複序列的重複次數
（minisatellites）及微衛星（microsatellites） 增加與 Huntington's disease 疾病的發生相
三種亞群重複 DNA（表 2-1）2。 關，而(CGG)n 重複次數增加則與 fragile X

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62 醫學分子檢驗

表 2-1　串聯重複 DNA（tandemly repetitive DNA）三種亞群的特性

衛星 DNA 小衛星 DNA 微衛星 DNA

其他名稱 無 Variable number tandem Short tandem repeats

repeats （VNTRs） （STRs）

重複單位大小 50 至幾百 6∼50 1∼5

（bp）

總長度 100 kb∼several Mb 100 bp∼20 kb 10∼100 bp（某些參

核 酸重複除外）

分布位罝 Heterochromatin 特 全部基因體，但大部分在 全部基因體

別是在中心粒（cen- 染色體終端（telomeres）
tromeres）附近

生物功能 未知（可能沒有） 有些具保護染色體終端的 未知，但有些可能

功能；有極少數可被表 會細微影響附近基
現，但功能未知；其他未 因的表現；此外，
知（可能沒有） 某些參核 酸重複與
人類的疾病相關
備註：串聯重複 DNA 亞群的定義目前尚未統一，以上分類乃根據下列文獻報告 Bennett, P. (2000)
Mol. Pathol. 53, 177-1832。

5’ CA CA CA 3’

5’ CA CA CA CA 3’

5’ CA CA CA CA CA 3’

5’ CA CA CA CA CA CA 3’

5’ CA CA CA CA CA CA CA 3’

5’ CA CA CA CA CA CA CA CA 3’

Flanking sequences

圖 2-1　雙核 酸微衛星 (CA)n。個體間此 CA 雙核 酸之總長度會因其重複次數（n

值）不同而異，即產生所謂不同的「對偶基因」。

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 第二章　微衛星標記分析與應用 63

syndrome 的發生相關6。 微衛星不穩定性（microsatellite inst-

ability; MSI）
微衛星的基因變異（Genetic alter- 微衛星存在的部位由於本身序列的重

ation） 複性高，所以在 DNA 複製時，可能會因

為 DNA 的滑動（slippage）而導致 DNA 伸
在現今的分子醫學研究中，已經利用 展（expansion）或縮短（contraction）的情
微衛星的基因變異來探究人類疾病發生的 形（圖 2-2）7，也就是說在 DNA 複製時
原因，例如在某些腫瘤中可檢測到微衛星 因為模板（template）或新合成的 DNA 為
不穩定性（microsatellite instability），進而 重複序列，所以可能會因滑動而形成不
發現其有 DNA 修復系統的缺陷。此外， 同單位數目之重複序列的環狀結構（loop
遍布於人類基因體的微衛星因細胞在發生 structure），而此環狀結構前後的序列仍
癌化過程的染色體不穩定而發生被刪除的 維持很好的配對，在正常的細胞中，此時
情形，即是所謂微衛星失異合性（loss of 會有 DNA 錯誤配對修復（mismatch repair;
heterozygosity）的現象。 MMR）系統，例如 MLH1, MSH2, MSH3,

5' CA CA CA CA 3'
3' GT GT GT GT GT GT GT 5'

環狀結構
（Loop structure）
CA
5' CA CA CA 3'
3' GT GT GT GT GT GT GT 5'

DNA 聚合 校正 錯誤配對修復 插入一個重複單位

（Proofreading） （Mismatch repair） （Insertion of a repeat）

圖 2-2　DNA 滑動（DNA slippage）。DNA 複製時，如新合成的一股 DNA 發生滑動，

其可能再滑動恢復完整配對狀態，或經細胞內正常的 DNA 修復機制修復完成；而此
環狀結構如未被修復，則於下一次 DNA 複製後，即在子代細胞產生插入一個重複單
位的結果。
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64 醫學分子檢驗

MLH1 PMS2
1
MSH2 MSH6

2-5

MLH1 PMS2

MSH2 MSH3

圖 2-3　錯誤配對修復蛋白（Mismatch repair proteins）。在正常的細胞中，DNA 複製

時因錯誤配對或 DNA 滑動而形成環狀結構，會由錯誤配對修復蛋白質，例如 MLH1,
MSH2, MSH3, MSH6 及 PMS2 等，負責辨識之，而啟動 DNA 修復機制。

MSH6 及 PMS2 等，負責將其修復回正 因功能的抑制或過度活化而導致癌症的發

確的狀態（圖 2-3）。然而，在腫瘤細胞 生。
中，如果錯誤配對修復系統所有缺陷，不 某些細菌帶有特殊的「偶然性基因」
具有修復這種錯誤的能力，將使得細胞突 （contingency genes），其內含有微衛星而
變機率增加，新生的細胞就會產生核酸插 有助於細菌面對外在環境的改變而存活；
入（insertion）或刪除（deletion）等核酸不 例如 Neisseria gonorrhoeae 擁有大約 12 個
穩定的情形，此現象稱為微衛星不穩定 做外膜（outer membrance）蛋白質的基因，
性或複製錯誤（replication error; RER）（圖 其皆含有相當不穩定的五核 酸重複，即
2-4）。大多數微衛星不在基因的編碼序 可因 DNA 滑動而影響蛋白質的表現，進
列（coding sequence）中，因此，當微衛星 而做出不同組合的外膜蛋白質，以逃避宿
序列發生不穩定性時，其本身多數不會引 主免疫系統的辨識。此外，人類某些神經
起表現型的變化（phenotypic silence），但 方面的疾病與其疾病基因內或附近的參核
是，它代表了細胞錯誤配對修復系統的缺 酸重複不穩定而造成其重複次數不正常
陷，亦即在 DNA 複製之忠貞度（fidelity） 的增加有關，則稱為「參核 酸重複相關
上廣泛性的缺陷，在某些重要基因，如腫 疾病」，例如亨丁頓舞蹈症（Huntington
瘤抑制基因（tumor suppressor genes）或是 Disease）即是第四號染色體上的 huntingtin
原始致癌基因（proto-oncogene），可能因 基因發生參核 酸（CAG）異常擴增（可
為複製錯誤而快速累積突變，引起這些基 達 39∼50 次重複），導致其蛋白質產物
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 第二章　微衛星標記分析與應用 65

Homozygous for TP53-Dint 正常

1,200 both alleles = 121 bp
600
0

11 Y : 11 • CRC57N/CRC57

Increased number of peaks 腫瘤

420 in tumor DNA
210
0
12 Y : 12 • CRC57T/CRC57

圖 2-4　微衛星不穩定性（Microsatellite instability）。腫瘤 DNA 於 TP53-Dint 標記的結果

相較於其正常 DNA 的結果，顯示多出了許多不同長度的 PCR 產物（ ），即表示此腫
瘤有發生 MSI 的情形。

中之 polyglutamine tract 增長，而影響了細 失去功能的常見機轉，因此，目前利用微

胞正常功能，最終造成腦部的退化疾病， 衛星發生失異合性的研究，來尋找各種癌
且研究指出參核 酸（CAG）重複次數越 症相關之腫瘤抑制基因在各個染色體上可
5
高，則發病年齡越早 。 能存在的位置。

微衛星失異合性（loss of heterozy- 微衛星標記分析

gosity; LOH）
微衛星廣泛地存在於人類的染色體 雖然微衛星之重複次數可能不同，但
上，它們可能位於一些重要基因的附近， 其兩旁的側邊序列（flanking sequences）卻
例如一些腫瘤抑制基因，像是 p53, Rb , 是固定的（圖 2-1），因此，1989 年發展
APC（adenomatous polyposis coli）及 DCC 出之微衛星標記分析主要是用特定的引子
（deleted in colon carcinoma）基因附近，如 進行核酸聚合 連鎖反應（polymerase chain
果這些腫瘤抑制基因發生異常的刪除，連 reaction; PCR），然後將其增幅產物以高解
帶地也可能遺失其附近的微衛星，其表現 析的聚丙烯醯胺膠電泳（polyacrylamide gel
出來的情形就是：對於某一個微衛星標記 electrophoresis; PAGE）的方法依 DNA 片段
而言，正常細胞原來有兩種對偶基因，在 的大小分開後進行對偶基因分析，此稱為
腫瘤細胞中發生刪除的結果就只剩下一種 PCR-based microsatellite 或 genotyping。早
對偶基因，此現象即稱為失異合性（圖 期將電泳後的聚丙烯醯胺膠進行銀染色，
2-5）。失異合性現象是導致腫瘤抑制基因 或使用放射性同位素標記聚合 連鎖反應
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66 醫學分子檢驗

60 80 100 120 140 160

正常 NM23-H1 D5S346 TP53-Penta

1,200 (APC) 155.99 160.74
600 112.97 126.65
0
1B : 01 • CRC72N / CRC72

1,800 腫瘤 Loss of 2nd allele at D5S346 and TP53-Penta 160.74

1,200 112.97
600
0
2B : 02 • CRC72T / CRC72

圖 2-5　失異合性（Loss of heterozygosity）。正常 DNA 的 NM23-H1 標記為同合性

（homozygosity），因此無法判定是否發生 LOH；而腫瘤 DNA 於 D5S346 及 TP53-Penta
標記皆少掉一個對偶基因，即表示此兩標記皆有發生 LOH 的情形。

無變異（Normal） 微衛星不穩定性（MSI） 失異合性（LOH）

*
L T L T L T
異合子（Heterozygote）

L T
同合子（Homozygote）

*：腫瘤 DNA(T) 比白血球 DNA(L) 多一個對偶基因產物，表示腫瘤發生微衛星不穩定性（MSI）。

#：腫瘤 DNA(T) 比白血球 DNA(L) 少一個對偶基因產物，表示腫瘤發生失異合性（LOH）。

圖 2-6　傳統微衛星標記分析—同位素標記及放射性自動顯像（Autoradiography）

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之引子，以及利用 X 光底片自動放射顯像
術（autoradiography）的方法（圖 2-6），其
解析度和精確度不夠理想，且放射性同位
素並不適合一般實驗室的常規檢驗。目前
普遍使用的方法為「自動片段分析技術」
（automatic fragment analysis），乃利用不同
顏色的螢光物質標記引子進行聚合
反應，並配合自動核酸片段分析儀進行電
泳與分析（圖 2-4 及 2-5），大大提升了
微衛星標記分析的速度、方便性及正確
8, 9
性 。
微衛星標記在生物醫學上的用途
人類身分及親源鑑定
微衛星是非常好的遺傳標記（genetic
markers），因為它們的數目相當多，遍布
人類每一條染色體中，同時，比起染色體
的其他位置，微衛星的重複次數有相當明
顯的多形性，而一個人從父親及母親所遺
傳到的同一個微衛星標記就可能是兩種不
同的對偶基因，因此使用數個不同位置的
微衛星標記，於臨床檢驗上已作為親子鑑
定的依據，或是看骨髓移植病人是否長出
捐贈者的血液細胞，抑或白血病病人在骨
髓移植成功後是否有復發的跡象。在法醫
學上則可用來辨識受害者的身分或是判別
可能的嫌疑犯，在近年來的幾起空難事件
中亦用以鑑定罹難者的身分。於人類學方
面的研究，利用微衛星多形性的特性亦可
10
探討不同族群之間的親源關係 。
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第二章　微衛星標記分析與應用 67
疾病相關基因的搜尋
人類的每條染色體上皆分布了許多
微衛星標記，加上其為重複序列所造成高
度的多形性，因此，目前微衛星另一個重
要的應用乃是當作遺傳標記，以連鎖分析
（linkage analysis）或相關性分析方法，可
連鎖 以對整個基因體進行疾病相關基因的搜
尋 11。例如有研究報告乃利用微衛星標記
分析，推測在 D10S1423 基因座附近可能
存在著阿茲海默症（Alzheimer's disease）之
易感基因（susceptibility gene）12。
腫瘤診斷與治療上的應用
目前對於癌發生（carcinogenesis）的
遺傳學理論有一個共同的看法：腫瘤是由
於體細胞經遺傳而來，或是自然發生之基
因突變的累積，使得細胞生長不受管制而
成為癌。細胞在致癌過程的初期，可能會
成為一個突變者（mutator），使這個細胞
本身的遺傳性質變得不穩定，因而就可能
根據遺傳物質（DNA）的變化來判斷癌細
胞。
近幾年研究發現：在遺傳性非息肉性
大腸直腸癌 （hereditary non-polyposis
colorectal cancer; HNPCC）及其它特發的腫
瘤中，若干微衛星標記經常發生突變，
此現象與癌細胞的前身是一個突變者的假
說不謀而合13。其最初是在大腸直腸癌發
現微衛星不穩定性14-16，之後，陸續在不
同的腫瘤中也發現了相似的變化。目前已
清楚地了解：遺傳性非息肉性大腸直腸癌
主要是 DNA 錯誤配對修復基因 hMSH2,
68 醫學分子檢驗
hMLH1, hPMS1, hPMS2 和 hMSH6 之一發
17
生突變 ，這些蛋白質是負責修復配對錯
誤的核酸。由於微衛星在複製時容易產生
滑動生成配對錯誤，如果缺乏核酸修復的
能力，會增加核酸插入或是刪除的突變，
造成不穩定，也因此約 95% 的遺傳性非
息肉性大腸直腸癌腫瘤中可發現微衛星不
穩定性的現象18，因此，「微衛星不穩定
性」即成為此癌症的分子標記之一。而腫
瘤是否出現微衛星不穩定性與病人對化學
治療的感受性及預後間的關聯性，目前亦
在各種癌症病人中進行廣泛的研究。
除了微衛星的突變以外，原發腫瘤也
經常發生包含腫瘤抑制基因之染色體位置
的刪除，而形成失異合性的情形，例如在
肝癌中常發生第四號染色體（4q）有失異
合性的現象，在膀胱癌則最常發生第九號
染色體失異合性，而這種失異合性的現象
在進行微衛星標記分析時也很容易測出。
因為目前在人類的 23 對染色體上的許多
區域都已發現了微衛星標記。因此，利用
微衛星標記失異合性的分析，可以找出與
特殊癌症發生或癌細胞轉移相關的染色體
區域，再配合上人類基因體計畫對人體
「遺傳密碼」的破解，很快地就可以發現
癌症發生的相關基因。
總結
綜合而言，因為微衛星多形性的特性
且數量極多，加上分布於整個基因體，而
分析方法的自動化、高產量與高準確性，
讓微衛星標記分析已廣泛應用於各領域，
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包括：各種生物體演化與親緣關係研究、
臨床檢驗醫學、法醫學、臨床及基礎醫學
研究。特別在腫瘤醫學上可應用於多種癌
症的診斷、預後、治療與追蹤，包括：大
腸直腸癌、肝癌、膀胱癌、乳癌、肺癌、
胃癌、子宮頸癌、卵巢癌及頭頸部鱗狀細
胞癌等13, 19-22；主要的分析依據是觀察是否
產生微衛星不穩定性或失異合性等現象；
而進行分析的檢體可以是尿液、痰液、血
液及手術移除的組織等。在後基因體時代
中，可以預期利用微衛星分析將有助於疾
病相關基因的快速定位與發現。
學習評估
1. 是否了解微衛星的特性。
2. 是否了解微衛星發生多形性的機轉。
3. 是否了解微衛星標記分析方法。
4. 是否了解微衛星標記在親緣鑑定上的應
用。
5. 是否了解微衛星標記在腫瘤醫學上的應
用。
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 醫學分子檢驗／王聖帆等著. --一版.--臺北
市：五南, 2009.11
　面；　公分
含參考書目及索引
ISBN 978-957-11-5842-6(平裝)
1. 檢驗醫學
415.12 98020631

5J32

醫學分子檢驗
總 校 閱 ／ 吳俊忠(66.3)
主 編 者 ／ 吳俊忠 李宏謨 孫光蕙 趙崇義(依姓名筆劃排序)
作 者 ／ 王聖帆 朱大成 江倪全 吳俊忠 李宏謨 吳芳姿
　　 　　　 李建宏 何鴻耀 林文昌 林佳霓 林淑容 林淑華
　　　 　　 林景堉 施浤彰 孫光蕙 陳佑誠 張長泉 陳盈汝
　　　 　　 張建國 陳桂添 許蕙玲 張懿欣 黃智生 楊正芬
　　　 　　 楊雅倩 詹爾昌 趙崇義 鄭恩加 鄧麗珍 蕭明裕
　　　 　　 鍾明怡 羅時燕 羅梅真 蘇怡寧(依姓名筆劃排序）
發 行 人 ／ 楊榮川
總 編 輯 ／ 龐君豪
責任編輯 ／ 許杏釧　李志宏
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