CLASE NUCLEO INTERFASICO Los eucariontes tienen un nucleo verdadero. Cario significa nucleo.

Me voi a refererir a la organizacin del nucleo de las clulas eucariontes. El nucleo se define como compartimiento celular en el cual esta contenido el material gentico. Este compartimiento mas q ser un lugar en el q esta almacenada la informacin gentica, debe expresarse en el fenotipo de la celula, debe nacer una interaccion citoplasma- nucleo, nucleo-citoplasma de manera q esa informacin se traduzca en protenas, en interacciones, etc. Si ustedes toman una celula y la miran al microscopio y se les preguntara si la celula es eucarionte o procarionte utds deberan como criterio el buscar si es que tiene o no tiene una envoltura nuclear, un compartimiento definido por un limite que es la envoltura nuclear. Sin embargo si bien este es el criterio de clasificacin, no es el nico que define la diferencia de una cel procarionte y una eucarionte. Me gustara que utds visualizaran entonces al nucleo como uno de los estados del sistema gentico de los eucariontes. Una cel procarionte contiene tambin material gentico sin embargo ste se encuentra asociado a protenas pero no esta en un compartimiento definido. Y se supone q a lo largo de la evolucin por una invaginacin de la mb plasmtica externa se genero el compartimento interno q hoy dia llamamos nucleo. Ese compartimento esta rodeado por un limite q conocemos como el nombre de envoltura nuclear puesto qe esta formado por dos membranas una mb nuclear externa y otra interna. Si uno mira al microscopio el nucleo de la cel eucarionte aparece como una estructura central, esfrica y con distintos tamaos pero aprox ocupa un tercio del tamao celular. Cuando observo al microscopio de luz se ven las clulas q estn en cel epitaliales de mucosa bucal, la cel son transparentes y el nucleo por lo mismo que tienen un gran contenido de agua no se distingue demasiado bien, de manera q cuando se le tie uno puede distinguirlo perfectamente, sin embargo, si uno lo mira al microscopio, se fijan q es difcil identificar o la envoltura nuclear o el contenido del nucleo. Nos damos cuenta si, qe esta rodeado de un limite, cuando se visualiza con microscopio de fluorescencia en el q se ha realizado una tincin de prot del citoesqeleto, podemos ver lo mismo q antes pero un poquito mas grande pero no distinguimos precisamente su estructura. En cambio cuando nos vamos al microscopio electrnico, la fuente de luz son los electrones, que tienen muy poquita masa, de manera q cualquier muestra que tenga un grosor muy grande detiene los electrones y ustedes no tienen imagen por lo tanto es necesario ver estructuras muy finitas. De manera que la miscroscopia electrnica dio mas info pero no mucha mas q la q haba dado el microscopio de luz. Y fue posible descubrir que el nucleo esta rodeado por una envoltura nuclear, estructura q esta formada por una mb nuclear interna y otra externa, y en ciertos puntos se fusionan las dos membranas generando puntos de comunicacin. Entre las dos membranas esta el espacio perinuclear. Cada una de estas mbs es una bicapa de fosfolipidos. La mb nuclear externa adems, como se aprecia perfectamente en la microfotografa, se ven como pelotitas q corresponden a los ribosomas y se continua o tiene comunicacin con el RER. Qu es lo q hay adentro del nucleo? Cromatina, y la cromatina contiene el material gentico, osea, tiene DNA condensado y adems contiene protenas de carcter bsico llamadas histonas, es decir, la cromatina es el agregado molecular entre DNA unido a las histonas. Desde hace mucho se sabia q la cromatina estaba constituida de DNA y protenas histonicas. El DNA es un acido y se asociaba con mucha facilidad a las histonas de carcter bsico, sin embargo, no era fcil responder como era la asociacin entre estos 2 elementos y al observar el nucleo en MET q era el instrumento ptico q permitia ver con mayor resolucin, no se descubran tampoco como era esta organizacin. Si ustedes miran aca este es el nuclolo y esta es la cromatina, podamos descubrir al ver esta imagen cual era la relacin entre el DNA y las protenas histonicas, o como se esperaba que

fuera la cromatina? La molecula de DNA es alargada, entonces se esperaba que la cromatina, y con otras series de evidencias, fuera una fibra, fuera fibrilar, sin embargo, cuando se miraba con el MET, no se vea as. El instrumento no era el problema pero el mtodo q se empleaba obligaba a q se tuviera una seccin fina del nucleo. Por lo tanto si adentro del nucleo estaba esta fibra de cromatina, al seccionar el nucleo en una muy delgada capa q se obtendra? Puntos, y eso es lo q se ve en la microfotografa. Entonces, si bien el instrumento tenia un harto poder de resolucin, no era la forma adecuada de ver la cromatina y su estructura fibrilar, y cuando uds ven estos puntos juntos corresponde a cromatina condensada y cuando ven estas zonas claras hacen un acto de fe de q es cromatina descondensada pero utds no ven cromatina ni condensada ni descondensada solo ven los puntos mas cercanos o los puntos mas lejanos q corresponden a la seccin fina de una estructura fibrilar. Entonces q se les ocurrira hacer si no es posible en una seccin fina descubrir una estructura fibrilar? Con fluorescencia? Pero con fluorescencia en un preparado de este tipo igual tendras la fibra cortada, suponiendo q la fibra es fibra. Como demostraras q hay fibras?, q es lo q buscas en verdad, buscar entender como est esta fibra. En una celula en cultivo, con el metodo de fluorescencia, si tu haces con anticuerpos antihistonas, supongamos q usaste un anticuerpo con un flurocromo azul, veras esto resolveras lo de la fibra? No. A este nivel de resolucin no ves fibras de cromatina. En el metodo de anticuerpo, el anticuerpo reconoce algo q esta y q es especfico. El metodo radioautografico funciona en una cel viva y q este en sntesis, entonces la cel al sintetizar una molecula, tu le das un elemento radiactivo especifico q es constituyente de esa mol. Por ej, si estas realizando sntesis de prot, tu le colocas un a radiactivo, luego entonces si la cel esta sintetizando una prot q necesita ese a radiactivo, lo va a incorporar, y tu vas a detectar como radioactivan esas prot. Si bien es un mtodo muy relevante no sirve para lo q estamos viendo. Y se podria hacer esto mismo con las histonas? Si se podria, pero q requisito tendran las histonas radiactivas que uds han puesto a la celula, para que las incorporara? Q este replicando en DNA, y si me creen q la cromatina esta formada por DNA e histonas cuando se duplica el DNA tambin se incorporan nuevas histonas. Entonces en esa condicin celular si habra incorporacin de histonas radiactivas y tendramos una cromatina radiactiva. Entonces el mtodo radioautografico significa detectar q estructura quedo radiactiva. Pero la pregunta es como descubriramos la estructura de la cromatina, no si esta o no replicando el DNA. Entonces necesitamos resolver si es que efectivamente la estructura es fibrilar y en una seccin fina no me resulta posible. Entonces cual es la otra alternativa? No cortarlo. Y como lo hago? Una celula viva en un medio hipotonico se infla hasta q se rompe, y lo primero q sucede es q se rompe el citoplasma y si la hipotona es mas drstica se puede romper el nucleo, la envoltura nuclear, y obtendramos un derrame del contenido q tenia el nucleo pero sin cortarlo. Y eso fue a lo q algunos investigadores se les ocurri y entonces obtuvieron el contenido del nucleo y lo observaron en el Microscopio electrnico y all entonces obtuvieron una imagen q se parece bastante mas a una fibra, se ve como una cosa gruesa, pero al observarlo con mas detenimiento notaron q aqu se vea como una subestructura, como q no haban llegado a aquella estructura q era la esencial, la bsica. Y entonces entregaron soluciones salinas de mayor fuerza ionica q disgregan las protenas q puedan estar all sostenidas. Y cuando hicieron eso encontraron q esta fibra gruesa q acabo de mostrarles se poda desagregar en esta otra fibra, y sorprendemente en vez de encontrar un cordel o una fibra constante en dimetro se encontraron con esta estructura, en q haban como especies de esferitas unidas entre si por un pegamento. A esta estructura, relativamente esfrica, se le denomino nucleosoma y lo q esta entremedio y tambin entorno al nucleosoma es

DNA. Esta corresponde a la fibra bsica de cromatina y se pudo demostrar q cada una de estas nucleosomas o esferas contena un conjunto de histonas y q el DNA dicurria por sobre este conjunto. Entonces cada nucleosoma estaba compuesto por un core central de histonas. El conjunto de histonas q hay en cada nucleosoma es de 8 (octamero) y se habla q esas 8 son 2 tetrameros porq estn repetidas 2 veces cada una de las 4 histonas. Entonces las histonas se llaman H2A, H2B, H3 y H4. Y fue muy sorprende descubrir q el DNA no estaba rodeada de histonas, sino q por el contrario, el DNA rodeaba a las histonas. Si el DNA, q tiene la informacin gnica, estuviera cubierto por histonas, estara muy protegido pero tambin seria inaccesible. Entonces el descubrir esta estructura, no solamente es relevante por la estructura sino q porque era un camino mas cercano para comprender como es q se poda producir la expresin gnica, el q pudiramos conocer la informacin q contena el DNA al interior del ncleo. Esta q esta aqu entonces q es como cuencas de un collar, algunos mas observadores, notaron q en realidad haba una tendencia de q se viera como un zig-zag entre los nucleosomas y observaron tambin que junto con esta disgregacin de las fibras de cromatinas se produca el desprendimiento, la solubilizacion de la histona H1, de manera q en una fibra real de nucleosomas el DNA nunca estaba desnudo, no haba entre un nucleosoma y otro un segmento de DNA q estuviera desnudo xq en la fibra exista la histona H1 q unia nucleosomas contiguos y q cubria el DNA q estaba entre un nucleosoma y el siguiente. Entonces en esta representacin, cada uno de los tetrmeros, el octamero de histonas el DNA q da dos giros alrededor de cada nucleosoma comprendiendo 146 pares de bases nucleotidicas y entre uno y otro nucleosoma se encuentra aqu la histona H1. A la estructura q se forma con el octamero de histonas, el DNA enrollado sobre ellas y la histona H1 constituyen lo se conoce como la fibra bsica de cromatina y tiene un ancho de 10 nm, q es el ancho del nucleosoma. Todas las estructuras nucleares en donde participa la cromatina van a partir de esta organizacin bsica q es la fibra nucleosomica. En el nucleo entonces vamos a tener la fibra bsica de cromatina, pero esta fibra bsica experimenta mas condensacin en distintos niveles. El siguiente es un nivel en el q se van enrollando como en un solenoide, como en un rizo y forma lo q se conoce como la fibra solenoidal q tiene un espesor de 30 nm. En el nucleo cual de ellas estn presentes? Ambas. La fibra solenoidal es la primera q se obtuvo, y q esta presente en el nucleo. En el nucleo entonces, ac tenemos la envoltura nuclear, hacia el interior del nucleo va a ver cromatina y esa cromatina va a tener distintos niveles de compactamiento, por lo tanto el DNA se encuentra enrollado, en q nivel? En un primer nivel en la fibra bsica de cromatina y en un sgte nivel en la fibra solenoidal. De manera que esta organizacin permite q si en un momento dado de existe en una regin gnica la necesidad de la celula

de q esa expresin ocurra aqu no se requiere q toda la cromatina se descondense, sino q puede solamente en este sector cambiar de fibra solenoidal a fibra bsica y hacer accequible el DNA q all este contenido. La dimensin del DNA es de una longitud muchsimo mayor de la del dimetro del nucleo, por lo tanto, aunque la cromatina este descondensada como en la fibra bsica, el DNA un grado de compactacin por el enrollamiento q tiene. Si tuviramos la longitud de un lpiz de fibra bsica tendramos aprox 7 veces de long del DNA all comprometido. Y eso permite explicar porque en un dimetro nuclear de aprox de 10 um puede caber 1,80 metros de DNA como el q tiene nuestra cel eucarionte.

Continuando con esta organizacin tenemos aqu la mb nuclear externa mas el ribosoma, la mb nuclear interna y por dentro de la mb nuclear interna en toda la superficie de ella existen tres protenas q forman un polmero proteico q se conoce como Lamina. Entonces la Lamina es una prot q recubre toda la mb nuclear interna en toda la superficie interna del nucleo. Cual es su funcion? Esta cromatina q describamos como fibrilar hasta el interior del nucleo, tiene puntos de apoyo, esta parcialmente suelta. La cromatina es tremendamente dinmica en el nucleo, sin embargo, tiene ciertos puntos de unin, y uno de esos puntos es a esta lamina q se conoce como carioesqueleto perifrico del nucleo y es el esqueleto q sustenta parcialmente la cromatina. Particularmente la cromatina no esta condensada, aqu, pudiendo ver luz hacia el interior del nucleo. Porque no es relevante esta unin? Porque vamos gestando en nuestro concepto de nucleo una organizacin de esta cromatina, no solamente en la relacin de todas las DNA, sino q de disposicin de la cromatina hacia el interior del nucleo, y porque en este sistema gentico en que en un momento esta organizado como nucleo y en otro deja de estarlo cuando vieron la divisin celular, las prot laminas tienen un rol fundamental; 1) sustentan parcialmente la cromatina, 2) contribuyen a la forma esfrica q tiene el nucleo y 3) su fosforilacion hace posible q se desarme la envoltura nuclear cuando va a ocurrir la divisin celular, y tambin son las prot laminas las q participan en rearmar el nucleo cuando termina la divisin celular. Por lo tanto entonces estas prot tienen un rol fundamental en la dinmica del nucleo. Cmo es q las prot laminas sustentan la cromatina? La lamina es como una malla, un polmero insoluble de la unin de 3 prot laminas, y esta unida a travs de esta prot transmembrana y de esta otra prot, entonces la cromatina q ah esta dibujado una parte de una cromatina en q esta unida la lamina y a esta prot. Y eso permite entonces q en la dinamina del nucleo, pueden haber sectores q estn sujetos y otros q estn sueltos hacia el interior del nucleo, y q cuando se desarme el nucleo se desagrege esa organizacin celular.

El nucleo es uno de los estados de organizacin del material hereditario, vamos a tener en una celula q no esta en divisin, el nucleo, cromatina y luego cuando esta celula se divida vamos a tener el huso mittico, y aca vamos a ver los cromosomas en metafase, si este fuera una celula humana, Cuntos cromosomas debieran haber en esta metafase? 46 cromosomas. Esta estructura de cromosomas es la mayor compactacin de lo mismo q tenemos ac. Uds siempre se enredan donde hay cromatina y donde hay cromosomas. Primero cromosomas es la cromatina compactada. Entonces cuando una celula se va a dividir, no es q surjan los cromosomas mgicamente, sino q se hacen aparentes pero ya estaban presentes, por lo tanto, si aqu nosotros sacaramos las fibras de cromatina, cuantas deberamos sacar? 46. Y van a ver unas de mayor longitud y otras de menor dependiendo del tamao de los cromosomas. Entonces aqu ha sido muy difcil, por la dinmica q les mostraba, descubrir la organizacin de la cromatina y mas aun, identificar a los cromosomas, porq la cromatina de ellos esta descondensada, parcialmente o menos parcialmente pero nunca tan compacta como esta ac. Entonces no es fcil identificar el nmero de cromosomas. Este estado del material gentico y en q esta como cromatina en el nucleo, y en el q hay cromosomas pero estn descondensados, es el estado funcional, aqu hay expresin gnica. En cambio en esta otra fase, es una fase de distribucin donde no hay expresin gnica, se distribuye el material gentico y se retoma la funcion nuclear de expresin gnica una vez q se reconstituyen en la telofase los nuevos nucleos, los nucleocitos. Es muy fundamental esta fase xq aqu es donde esta la actividad principal del material hereditario, la transcripcin. La replicacin q suele ser para uds la principal actividad q tiene el DNA, es un fenmeno q es muy relevante pero va a estar presente en las cel q estn es proliferacin. La mayor parte de sus cel estn con nucleo. Las clulas q estn en proliferacin circulan en un ciclo donde estn las etapas de mitosis, replicacin del DNA, G1 y G2. Pero la gran mayora de sus cel no estn en ciclo proliferativo, sino q salen principalmente de G1 y se encuentran en un estado G0 de diferenciacin. Por ej las cel del pncreas, las del hgado, las neuronas, las cel musculares, las del hueso, todas esas estn en un periodo no proliferativo, diferenciadas y realizando expresin gnica, relevando parte de la info q contienen los genes propios de esa celula. Una de las preocupaciones una vez q se resolvi como era la estructura de la cromatina, y q se sabia q cada cel contiene en su nucleo el mismo numero de cromosomas q se relevan en la metafase, era saber como estn puestos los cromosomas. Y en muchas representaciones los cromosomas se ven como entremezclados incluso algunos los describen como una plato de tallarines, en cambio, cuando se emplearon mtodos que identificaban con distintos colores a los distintos cromosomas y luego se les situaba en el nucleo se encontr q ellos no estaban entremezclados, sino q ocupaban territorios discretos. En el nucleo de fibroblastos de pollo fue en el primer organismo en q se obtuvo esta imagen, sin embargo, cuando se repiti no hace muchos aos un experimento similar en una cel humana se encontr el mismo resultado. Los cromosomas estn formando territorios discretos, incluso, los cromosomas homologos no estn juntos, estn gral separados. Si x ej en un mismo organismo tomamos clulas hepaticas y las comparamos con cel pancreticas o renales, vamos a encontrar q los nucleos no son exactamente iguales, entonces se superpone a los territorios de cada cromosoma el fenmeno de expresin gnica, q va a ser distinto en un tipo cel q en otro, y eso va a estar relacionado con la condensacin de la cromatina. Entonces la distribucin de los cromosomas al interior del nucleo es ocupando territorios discretos pero eso no significa que aqu este condensada la cromatina y forme una especia de peasco cada cromosoma, q lo hace imposible de interactuar con otros. Recuerden uds q la organizacin q tienen los cromosomas en el nucleo favorece la expresin de los genes, no la explosin de esa informacin.

Cuando se realizo un experimento q las metodologas permitieron hacerlo, lo q esta teido en azul es todo el DNA y esta revelado solo el cromosoma 7. Se ven dos cuerpos xq el otro seria el cromosoma homologo del 7 (somos diploides). Y despus se ve una regin mas bien roja, se esta revelando con un mtodo especifico una regin gnica dentro del cromosoma 7. Y q se revela en la imagen sgte, aca repito lo mismo q vimos antes, el cromosoma 7 con un gen, y aca la dif entre este nucleo y este otro, esqe este gen fue estimulado a hacer transcrito. Y entonces se observa en esta imagen, aqu esta un cromosoma 7 y aqu esta el otro, y aqu vemos los puntos gnicos, entonces una interpretacin es decir q se solto ese gen de donde estaba el cromosoma, sin embargo, la interpretacin correcta es q la cromatina donde esta en ese gen q participa de la transcripcin, hace un loop, se descondensa y accede al centro del nucleo. Entonces la transcripcin o expresin gnica ocurre hacia el centro del nucleo y all participan una serie de protenas q forman lo q se llama la matriz interna del nucleo, q no es un esqueleto rigido, sino q son protenas q participan en la actividad transcripcional del nucleo y q se van a a agregar o desagregar dependiendo de los territorios q se van a transcribir. Entonces es muy distinta la matriz interna del nucleo q el carioesqueleto perifrico formado por la lamina. Y este es un muy bonito ej de cmo una regin gnica puede estar condensada y silente, sin expresarse, y luego cuando se expresa en transcripcin, se descondensa la cromatina donde esta ese gen y accede al centro del nucleo donde esta la maquinaria transcripcional, y eso esta sucediendo en los distintos nucleos. Entonces si se compara un nucleo con otro vamos a tener variaciones xq va a depender de que genes y en que cuanta estn siendo expresados. Y por eso vamos a ver una fisonoma nuclear distinta entre un tipo celular y otro. Interactuan o no las regiones gnicas de un cromosoma y otro?. Cuando se explica q los cromosomas ocupan territorios discretos se tiende a pensar que quedan sin interactuar con otro, y eso no ocurre asi. Aqu esta ilustrado un cromosoma, otro y otro. Este tiene un gen A, un gen B y un gen C. Y ellos pueden interactuar formando x ej aqu un sector de transcripcin conjunta. Y este otro puede participar de una regin de condensacin y de silencio gnico. Puede quedar excluido de la transcripcin y eso ocurre en las cel muy diferenciadas, en q hay territorios cromosmicos q quedan condensados, se van a la periferia y quedan silentes. Y otros que acceden al centro del nucleo. Entre estos territorios en q interactan genes de un cromosoma y de otro, hay uno muy particular en el nucleo, el nuclolo. El nuclolo es un territorio nuclear en donde esta ocurriendo tal actividad transcripcional en la sntesis de ribosomas q forma un territorio q podemos verlo. Primero se pens q era como un nucleo chiquitito y por eso se le llamo nuclolo. Sin embargo es un territorio donde hay una gran actividad transcripcional, generalmente con la concurrencia de los genes ribosomales de mas de un cromosoma. Entonces si recuerdan una imagen al principio, donde se vea un tremendo sector negro q corresponda al nuclolo y q se ve muy bien en el microscopio de luz tambin, ese un sector donde esta ocurriendo la sntesis de ribosomas y participan ah, desde el punto de vista de los genes, los genes ribosomales q son muy abundantes en varios sectores del genoma. En los cromosomas homologos, uno es de origen paterno y otro de origen materno. Ambos van a tener la misma secuencia de genes pero no necesariamente la misma accin. Por ej. Cromosomas homologos q contienen los grupos sanguneos, el de origen paterno podria indicar el gen grupo A y el otro el grupo B, o podran ambos ser grupo A, entonces existe una gran complejidad de interaccin. Podra entonces estar interactuando los genes alelos en su expresin como podran no estarlo, podran estar apagados o encendidos (transcribiendo o no transcribiendo). Y se ha descubierto en el anlisis del genoma en su conjunto y como estn puestos los genes q algunos genes codificantes de prot q tienen relacin con la funcion estn juntos, en la misma hebra de DNA y q

cuando acceden hacia el centro del nucleo son transcritos todos ellos, lo cual favorece la eficiencia del sistema, y entre ellos x ej las hemoglobinas. Entonces la interaccion no es solo y necesariamente entre cromosomas homologos. Van a ver q muchos de los elementos q regulan el q un gen se transcriba mas o menos, provienen a veces de otros sectores de otros cromosomas q no son homologos y q regulan la actividad transcripcional. Si usaramos el mtodo radioautografico en una celula viva y en el nucleo tuviramos cromatina condensada y descondensada hacia el interior, donde debera detectarse la marca radioactiva si estoy colocando un precursor de la sntesis de RNA, donde debera yo ver que se incorpora ese RNA marcado? Tericamente donde hay una transcripcin y donde debera verlo en el nucleo? Las marcas radioautograficas deberan quedar en el centro, y eso fue lo q se hizo, por eso se pudo demostrar q en esta cromatina como en los cromosomas de aqu no hay transcripcin. Y en el nuclolo habra marca? Si ya que el nuclolo es casi pura transcripcin. Como se relaciona el nucleo con el resto de la celula. Este esquema tomado del Alberts revela 3 sistemas de comunicacin en la celula. Lo q esta sealado en verde a travs del transporte de vesculas, lo q esta en azul a travs de una membrana y lo q esta en rojo es a travs de una puerta, una esclusa, y eso es lo q ocurre entre el nucleo y el citosol. Es decir esta envoltura nuclear no es atravesada por elementos q van o vienen del nucleo, solo es entran y salen elementos del nucleo a travs de los poros. Y estos poros q se producan en donde haba una fusin de la mb nuclear externa con la interna, no es un agujero de libre transito, sino q existe un conjunto de protenas dispuestos en cada uno de estos poros que dan lugar a lo q se conoce como COMPLEJO DE PORO y q va a ser el regulador de lo q entra y sale. Entonces en este transito del nucleo al citoplasma van a ver una serie de molculas de grandes dimensiones o de pequeas dimensiones q van a estar transitando. Cuales intuyen uds q deberan ir al nucleo? Histonas por ej, cuando ocurre la replicacin del DNA se necesitan unas histonas, o sea tienen q haber histonas y xq tienen q ir desde el citoplasma al nucleo? Porque se sintetizan en el citoplasma. Que otra protena? Las DNAs Polimerasas si es una cel q esta en replicacin o RNAs Polimerasas si es una q esta en transcripcin. Y del nucleo al citoplasma? Los RNAs trancritos como el mRNA o los rRNA q van como subunidades, estructuras de grandes dimensiones y peso molecular. Los microRNA funcionan en el interior del nucleo y regulan la transcripcin y participan en otros procesos. Esta es una imagen del Microscopio electrnico q da una especie de idea como una huella q se ven en la envoltura nuclear. Y con distintos mtodos a permitido suponer cual es la organizacin q tiene cada uno de estos complejos de poros. Y como muchas veces van a ver se representa por un modelo, Samir Patel lo represento de esta manera, es decir, reunieron toda la info q exista respecto al tamao y estructura del Complejo de Poro y lo representaron de esta manera. Hacia el nucleo existira este cantillo, aqu tienen la mb nuclear externa e interna y aca esta el citoplasma. Estas protenas q estn aca participaran en regular el trnsito hacia el nucleo, o desde el nucleo hacia el citoplasma. Y esta es con microscopia electrnica de Barrido, q se le asignan colores y q se ve esta estructura como en roseta de cada uno de los complejos de poros. Aqu tienen otra imagen donde tenemos las estructuras q componen la porcin anular del Complejo de Poro, estas fibrillas, y el canasto q hace prominencia hacia el nucleoplasma.

Como es el pasaje de sustancias? Estructuras pequeas de menos de 10 nm, en general pueden difundir si la gradiente de concentracin le es favorable. Pero en general y si recuerdan todos los elementos q Uds han mencionado son mas grandes q esas dimensiones, por lo tanto, es un proceso energtico q requiere la activacin de estas protenas, el ingreso o el pasaje. Y como ser? Sera solo un problema de tamao o de cargas? Si tenemos todo el citoplasma y se estn sintetizando distintas protenas, el destino nuclear es simplemente un fenmeno de azar? De q llegue aca y sea pequea y pase o de que sea grande y le ayude a pasar? No hay selectividad? Si la hay. Entonces les presento un experimento muy antiguo q se realizo en ovocitos, y q mostraba lo sgte: hay una prot cuyo nombre es nucleotransclina(?) aqu representada por unas colas azules y por una cabezita roja, entonces cuando se colocaba esta prot marcada por radioactividad en el citoplasma, se vea q rpidamente se diriga al nucleo, o sea, era una prot nuclear. Entonces se realizo una protelisis, una ruptura de esta prot quedando las dos porciones separadas, se volvieron a marcar prot en estas cel y se observo q una parte de la prot quedaba en el nucleo y la otra porcin se dirijia la nucleo. Se poda concluir q haba algo o alguna informacion en esa porcin de la prot q hacia q se vaya al nucleo y esa info no estaba en la otra porcin. Entonces esto hizo sospechar q en la estructura de la propia protena estaba alguna seal de destino nuclear, algo q le indicaba al resto del citoplasma q esas protenas eran de destino nuclear. Y otro experimento realizado bastante dp por Calderon y colaboradores, consisti en lo sgte: tenan una prot q era nuclear, en la secuencia de a de esta prot iban alterando ciertos a y observaban si la prot se dirijia al nucleo o no. Y observaron q cuando existe esta sec de a la prot es capaz en su totalidad de dirigirse al nucleo, y lo q estamos viendo aqu brillante corresponde a los nucleos q estn revelados por la presencia de prot q eran brillantes. Vieron q era critica esta secuencia dentro del conjunto de a de la prot, xq cuando alteraban aunque fuera uno de los a de la secuencia, se quedaba la prot en el citoplasma. Entonces a esa sec de a q precisaba el destino nuclear de una prot, se le llamo SECUENCIA SEAL DE LOCALIZACION NUCLEAR. Y en la configuracin q tiene una prot q es sintetizada en el citoplasma, en una o mas partes de esta prot se hace aparente esta sec q indica destino nuclear. Si lo q hicieron los investigadores es cierto, q experimento se les ocurre uds para hacer mas genrica la sec y decir esta sec da destino nuclear a cualquier prot? Lo q hicieron los investigadores fue tomar un prot de una celula procarionte q no era nuclear y colocarle la sec de destino nuclear y la protena se dirigi al nucleo. Entonces se pudo demostrar q exista un sealizacin hacia el nucleo, asi como lo haba en los distintos compartimientos en el citoplasma y este trafico entre el citoplasma y el nucleo era regulado, tenia un destino la prot q estaba sealada. Y mas adelante se demostr q algunas prot entraban al nucleo y quedaban retenidas en el interior. Y esta info molecular solamente es para lo q entra al nucleo o tambin para lo q sale del nucleo? Entre los elementos mas relevantes q salen del nucleo, son el producto de la expresin gnica, es decir, x ej un mRNA, y ste, como todos los RNAs, tiene una configuracin q esta asociado a proteinas, entre las prot q se asocian a un mRNA es numerosa, sin embargo, destaco alguna prot q tienen q ver con la salida de este mRNA desde el nucleo. El RNA es una ribonucleoproteina xq esta formada por RNA mas protenas de grandes dimensiones y existen protenas q son receptores nucleares de exportacin y q se van a unir precisamente a las prot del complejo de poro sealando la salida de estas ribonucleoproteinas aca en el interior de la celula. Entonces no solamente van a haber seales de las prot q ingresan y seales de las prot q salen, sino q van a haber prot desde el interior del nucleo y desde el citoplasma q van a colaborar a q este proceso pase, salida o ingreso, exportacin o importacion. Y lo van hacer de una manera muy eficiente, de manera q en muy pocos minutos va a salir este RNA y se van a recuperar las prot q participaron en la salida. En la salida del mRNA como ribonucleoproteina hacia el exterior, generalmente el mRNA cambia la configuracin, acurdense q todas

estas molculas tienen tridimensionalidad, estn en un medio hidratado, pero adems las prot del complejo de poro modifican estas ribonucleoproteinas de manera que puedan pasar de modo eficiente por el complejo de poro. En esta imagen tenemos la envoltura nuclear, la lamina y la cromatina, no esta el citoplasma. Esta representacin solo alude a q en el nucleo la cromatina esta mayoritariamente descondensada y se condensa en forma intensa cuando ocurre la divisin celular. Entre esta etapa y la otra, obviamente ocurre replicacin del DNA y fosforilacion de la lamina y eso hace q se desagrege la envoltura nuclear, y los cromosomas queden en el citoplasma sin el nucleo polarizado. Y luego cuando termina anafase y sobreviene la telofase a partir de estas mismas laminas cuando las membranas se vuelven a reorganizar en todos los cromosomas, la envoltura nuclear y el nucleo en su completitud y se recupera la prioridad funcional del nucleo. Entonces aqu vamos a hacer una generalidad sobre la condensacin de la cromatina y la expresin gnica. Habiamos llegado desde el DNA con las histonas, fibra bsica de cromatina, de la fibra nucleosomica o fibra bsica de cromatina podamos tener la fibra solenoidal, hasta aqu poda estar presente en el nucleo interfasico. Pero cuando la cel se va a dividir para llegar entonces a esta parte, esta cromatina de aca experimenta mas niveles de condensacin. Entonces de la fibra solenoidal pasamos a una FIBRA PLEGADA, y de sta a la cromatide de un cromosoma en este cromosoma hay fibra bsica de cromatina? Si. Aqu el DNA se encuentra compactado del orden de 7000 veces, o sea, es de una magnitud de compactacin en q es totalmente ineficiente. aqu solo hay enrollamiento de la fibra bsica, solo tngo DNA y las histonas? Debe haber mas protenas xq no es mgico q haya interaccion moleculares q permitan q este enrollamiento se vaya produciendo. Y eso le preocupo a un cientfico hace muchos aos, tomo un cromosoma N1 humano q es el mas grande del cariotipo y extrajo todas las histonas. Si no hubieran las prot y saco las histonas me quedo con puro DNA, pero no paso eso. Se encontr una estructura formada por estas prot q remedan la forma de ese cromosoma. Esas prot contribuyen al armado del cromosoma, y se llaman PROTEINAS DE ANDAMIAJE. Son como un esqueleto del cromosoma q mantienen condensada a la cromatina. Aqu tenemos un nucleo y en el cual hay un nuclolo y otro nuclolo. Empieza a venir la divisin celular, se condensa la cromatina, se van abriendo los cromosomas, se van separando, y aqu estn los genes ribosomales, se empieza a armar el nucleo, aqu ya tenemos los nucleos y a cualquier de estos sectores gnicos se recupera la actividad nucleonar. Entonces ese es el ciclo q va a ocurrir entre un nucleo q se le llama el interfase, xq esta organizado por envoltura nuclear y este lio divisional en q hay cromosomas. En un periodo de embriognesis van a tener sucesivas multiplicaciones celulares. La cromatina va a estar en general descondensada, pero en la medida q va ocurriendo la diferenciacin celular, la cromatina se va compactando, se van compactando ciertos territorios, cuales quedaran activos? En embriognesis, en la medidad q van surgiendo las distintas lneas celulares, cada una va tornndose especifica hacia una funcion, eso se llama diferenciacin y va ocurriendo entonces q las prot q conforman esas clulas van siendo mas especificas, y eso conlleva tambin a q se silencien territorios cromosmicos, pero hay unos q van quedar activos necesariamente en todas las clulas, y esos se van a ir al centro. Ej una neurona va a tener los genes q codifican para los neurotransmisores y una celula pancretica no va a tener esos genes. Y van a tener algo en comn la cel pancretica con la neurona en cuanto actividad gnica? No se olviden q todas su clulas tiene el mismo genoma (el conjunto de genes, toda la info gentica) Creen q en una cel heptica, neuronal, muscular tienen algunos genes en comn q estn activos? Todas ellas van a necesitar ribosomas, es una funcion genrica, el sistema gentico funciona con la sntesis de protenas, por lo tanto va a ser comn a todas esas clulas el necesitar protenas, y por lo tanto, sintetizar ribosomas. Algunas cel van a necesitar una cantidad mayor xq van a tener una demanda mayor de prot y de ribosomas, y otras menor, pero todas ellas van a necesitar tener ribosomas funcionales. Que otro ej de genes comunes funcionales? La RNA polimerasa xq estn haciendo

transcripcin, entonces necesitan esas clulas q se incorpore al nucleo, pero xq no podramos pensar q la celula ya hizo acopio de todas la RNApol q necesitaba en el nucleo, entonces esa cel neuronal ya tiene en su nucleo la RNApol y la cel pancretica tmbien? Porque la cel esta constantemente produciendo prot y dp las van DEGRADANDO. Entonces estas clulas van a tener genes distintos q se van a expresar y q las van hacer clulas, pero van a tener genes comunes q van hacer q el sistema en celular funcione, xq esas cel requieren de expresin gnica y sntesis de protenas, no solo xq esas prot son necesarias, sino xq hay un constante recambio. A los genes q son comunes a los distintos tipos celulares y q mantienen a la celula se les llama HOUSEKEEPING GENS o genes mantenedores de la casa. Y los otros genes q se van a expresar en una celula especial y no en otra son los GENES TEJIDO-ESPECIFICO. Y todo esto con un genoma q es igual pero q tiene esta diferenciacin en la expresin. Esta imagen muestra como junto con este fenmeno de expresin diferencial se va produciendo q cierto sectores de la cromatina se van condensando, y eso es un reflejo de q esos van quedando silentes. Y en la medida en q una celula va diferencindose mas va teniendo grandes territorios q estn condensados y q ya no transcriben, tienen los genes pero no los ocupan. Y este es un ej, esta el mismo segmento de DNA que aqu hay un gen, y este gen esta perdido o activo y van haber una serie de prot regulatorias q va a ser factores de transcripcin, activan las transcripcin. Por el contrario cuando estas prot no participan la expresin de ese gen es muy escasa, y aun mas, si se retira el DNA ese gen ya no se transcribe, se apaga, cuando ese fenmeno ocurre xq hay una gran METILACION del DNA, q es un cambio qumico del DNA, se agrega sobre esa metilacin un conjunto de prot, y eso es lo q va a producir esta condensacin de la cromatina, una intensa regin del genoma q va quedando inactivo. En algunos casos la heterocromatina se hace sinnimo a cromatina condensada, sin embargo la heterocromatina tiene un DNA especifico q subyace a la condensacin, es una cromatina condensada especial. Cada cromosoma tiene un DNA con distintos genes en su longitud total entonces se va a dar como en la globalidad de un nucleo, aqu representado el nucleo con tres cromosomas distintos lo sgte: en el cromosoma de arriba est representado un gen 1, en el cromosoma de abajo el 2 y el 3. Tamos suponiendo q estos 3 genes se estn expresando, entonces vamos a tener en el gen 1 un producto de la transcripcin q es un mRNA q va a salir del nucleo al citoplasma, q va a ser ledo por los ribosomas y va a dar lugar a una prot de secrecin y q sale de la cel. El gen 2 va a dar lugar tambien a un mRNA, q va a salir como ribonucleoproteina x el complejo de poro, q va a ser traducido por ribosomas del citoplasma, pero va a quedar la protena en el citoplasma. Y el gen 3 va a dar lugar tambien a un mRNA q va ser traducido y va a formar parte de la mitocondria. Entonces son tres genes distintos q coincidieron en ese momento en expresarse, pero van a dar lugar a prot distintas, eso va produciendo la diferenciacin de las clulas de su funcion. Entonces un cromosoma va a tener distintos genes q se van a prender o se van a apagar en el tiempo, a esa regulacin de la expresin gnica en el tiempo, se le conoce como TEORIA DE LA EXPRESION GENICA DIFERENCIADA, q significa q las distintas cel teniendo todo el genoma regulan su expresin segn el tipo celular y en el tiempo. Eso va a dar lugar a cel q tienen distintas funciones y pueden interactuar entre ellas. OVEJA DOLLY Fue un organismo clonado. q es lo normal en nosotros y en una oveja, como se produce un organismo diploide? Con el papa y la mama xD, cada uno nos aporta genoma haploide y nos hace hacer un organismo diploide. El fundamento biolgico para pensar q el clonamiento pueda resultar esa saber q cualquier celula somatica, aunque este diferenciada, conserva toda la informacin gentica de la celula original a la q provino. Tenemos una celula somatica, en el caso de la Dolly era una celula de la glandula mamaria, de esa celula se tomo el nucleo, xq sabemos q tiene toda la info gentica. Y dp los investigadores necesitaban a alguien q hiciera q esa informacin llegara a ser una oveja, un sistema celular q la desarrolle. Y eso lo hace el citoplasma del ovocito de la oveja nodriza, no se sabe bien como, pero el citoplasma del ovocito es capaz hacer que esa informacin llegue a ser un organismo completo. Y hay otra oveja q es la q participa aportando su utero para el desarrollo del organismo clonado.