Biotecnologa agrcola

Laboratorio No. 6 SUELOS MICORRIZADOS Prof. Diana Crdenas Caro

Luisana Cristina Villamizar Flrez2 Ana Mara Arismendy Pabn2 Yenny Lorena Patio Ramrez2 MATERIALES INTRODUCCION Los microorganismos tiene gran potencial para contribuir a la solucin de mltiples problemas de la agricultura, dentro de los cuales los biofertilizantes con base en Micorrizas arbusculares (MA) son una alternativa para la nutricin de las plantas y recuperacin de los suelos. Estas asociaciones pueden ser utilizadas en la agricultura en forma de biofertilizantes tanto en vivero como durante el enraizamiento de vitroplantas, constituyndose as, en una oportunidad valiosa para solucionar problemas de micropropagacin, aclimatacin y nutricin de diferentes especies de importancia en la agricultura y reduciendo al mismo tiempo, los costosa de produccin ya que requieren una menor aplicacin de fertilizantes qumicos, aguas de riego y plaguicidas y a su vez, permitiendo establecer sistemas de produccin mas eficiente, precoces y productivo, que aumenten la sostenibilidad de los cultivos. OBJETIVOS Reconocer la importancia de actividad simbitica de las micorrizas en la produccin vegetal. Desarrollar la metodologa para el aislamiento de esporas microarbusculares y la observacin de races colonizadas. .
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bolsas de vivero de 1 Kg,Suelo estril (750g/bolsa), Cernidor o colador, Arena (250g/bolsa), Semillas de maz (3/bolsa), Propgulos de micorrizas (10 mL/bolsa), Balanza, Tamices de 720 y 355 um, Centrfuga ,Cajas petri, Frasco lavador, Esptula, Tubos centrfuga, Bao maria, Pinzas, Glicerol, azul tripan, HCL, KOH, Sacarosa, perxido de hidrgeno.METODOLOGA

Preparacin del Suelo en bolsas de Vivero Cernir el suelo hasta obtener 7.5 Kg de suelo mullido y mezclar con 2.5 Kg de arena. Llenar 10 bolsas y esterilizar este sustrato en autoclave. Esto con el objeto de reducir la poblacin contaminante del suelo a utilizar,

Practica No. 6 Suelos Micorrizados Biotecnologa Agrcola. Estudiantes de Ingeniera Biotecnolgica, Facultad de Ciencias Agrarias y del Ambiente, Universidad Francisco de Paula Santander. San Jos de Ccuta, II Semestre 2008.

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AISLAMIENTO DE ESPORAS Y TINCIN DE RACES COLONIZADAS Observacin de Esporas. Se pesan 100 gr de suelo y se pasan lavando con el chorro de agua a presin por los tamices de 720 /lm, 355 /lm y 38 /lm (o 45 /lm), colocados en el anterior orden. La fraccin colectada en el tamiz de 38 /lm, se vierte con la ayuda de un embudo y un frasco lavador a los tubos centrfuga y se agrega agua hasta completar las 2/4 partes, se agita la suspensin con una esptula y se aplica al fondo del tubo con una jeringa plstica de 10 cc solucin de azcar hasta completar su volumen. Se centrifuga durante 3 minutos a 3500 r.p.m. Al finalizar la centrifugacin, se recoge el sobrenadante en un tamiz de 38 o 45 /lm, se enjuagan muy bien las esporas con agua corriente y una vez lavadas son colocadas en una caja Petri para su observacin. INOCULACIN DE ESPORAS EN SUELO : Este vial con las esporas de los hongos de los hongos formadores de Micorrizas (HFM) se adiciona en cada bolsa mezclando previamente con el suelo (slo en dos bolsas, las otras quedan como testigos sin micorrizas para realizar la comparacin). Abrir un hoyo en este suelo y poner las tres semillas de maz y tapar el hoyo. Debe fijarse que las semillas no queden ms de 2cm de profundidad Regar frecuente hasta la capacidad de campo, no encharcamiento (saturacin del suelo) Despus de 2030 das dejar de regar para que se induzca la produccin de esporas y adems, puede
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analizar el crecimiento foliar y radical de las plantas de maz. Tincin de races colonizadas. Luego de tomar la muestra de suelo fresco, se seleccionan races que se colocarn en tubos de ensayo. Las races seleccionadas al azar, se enjuagan muy bien para retirar las partculas de suelo adheridas a ellas. Despus de esto, se agrega KH 10% hasta cubrirlas y se llevan al bao Mara el cual se ha calentado con anticipacin a 60 o 70C durante 15 minutos. Pasado este tiempo, ser retiran los tubos y se dejan enfriar, se descarta el KOH y se enjuagan 3 veces con agua corriente (si se requiere tonar ms claras las races despus de descartar el KOH y sin enjuagar, se cubren las races con perxido de hidrgeno, se deja reaccionar se descarta y enjuagan las races 3 veces con agua corriente). Posterior a esto se cubren las races en HCL 10% y se dejan a temperatura ambiente durante 15 minutos; pasado este tiempo se descarta este reactivo y se cubren las races con azul de tripano y se llevan los tubos a bao Mara durante 15 mino Al finalizar este tiempo, se descarta el azul y sin sacar las races de los tubos de ensayo se cubren con agua hasta utilizarlas para su anlisis correspondiente. Segmentos de races ya teidas de hasta 2 cm de longitud, se distribuyen al azar en una caja Petri y con ayuda de pinzas se colocan paralelamente en un portaobjetos, se les adiciona glicerol y se les coloca una lmina cubreobjetos. Se realiza la observacin de las races colonizadas en el microscopio

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ANLISIS Y PRESENTACIN DE RESULTADOS

Raz de la Planta Sin Espora

Raz de la Planta Con Espora Despus de pasado el tiempo de la prctica se procedi a la medicin de las races de cada una de las plantas a las cuales se les aplico el HFM y a las plantas testigo. Los resultados fueron los siguientes: TESTIGO Raz (cms) P1: 8 P2: 9 P3:10 P4: 7 P5: 5 Promedio: 7,8 TRATAMIENTO Raz (cms) P1: 10 P2: 13 P3: 15 P4: 17 P5: 12 Promedio: 13,4

Suelo con Esporas

Suelo sin Esporas

Teniendo en cuenta los resultados podemos decir que los tratamientos crecieron de forma ms eficiente que las plantas testigo, lo que demuestra que las micorrizas son asociaciones benficas que promueven un mejor desarrollo del rea radicular de la planta.

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Con el crecimiento eficiente de la raz, la planta puede realizar una mejor absorcin de nutrientes que se traduce a un mejor crecimiento. DESCRIBIR LAS ESPORAS OBSERVADAS Y LA COLONIZACIN DE LAS RACES EN EL MICROSCOPIO Esporas: Se puede observar la presencia de una espora color negra.

CARACTERISTICAS ESPORAS Y COLONIZADAS

DE RAICES

Las races colonizadas por micorrizas presentan varios pelos radicales salientes de las races primarias, son races alargadas; y la raz primaria se diferencia bien de las otras; estas races tienen mas poder de absorcin de nutrientes, ya que con ayuda del hongo pueden penetrar mas los suelos; el numero el nivel de lignificacion; el numero de cloroplastos; etc debido a la mayor absorcin de nutrientes las esporas tienen una forma ovalada no son tan pequeas y se ven coloreadas de negro. Consultar acerca de las caractersticas de los diferente gneros Micorrizas arbusculares Los hongos formadores de micorrizas arbusculares (HFMA) constituyen micorrizas que colonizan el tejido intrarradical de la planta hospedera, donde desarrollan estructuras caractersticas de la simbiosis (arbsculos y vesculas), as como micelio extrarradical, el cul interacta con el ecosistema de la rizsfera y es el encargado de la toma de nutrientes del suelo. Es importante tener en cuenta que las micorrizas constituyen una asociacin multifuncional con las plantas, cuyos beneficios van ms all de los aspectos nutricionales. Los HFMA son considerados como un recurso biolgico multipropsito cuyo manejo, adems de los efectos sobre la productividad vegetal,

Races colonizadas en el microscopio.

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genera beneficios ambientales al mejorar las condiciones fsico-qumicas y biolgicas del suelo (Guerrero et al., 1996). Los beneficios desde el punto de vista biolgico, se derivan de su interaccin con los diversos grupos de macro y microorganismos de la rizsfera. Tal es el caso de aquellos que estn implicados en el reciclaje de nutrientes como las bacterias fijadoras de nitrgeno y los microorganismos solubilizadores de fosfato (Azcn y Barea, 1996; Kim et al.,1998; Hodge, 2002). As mismo, dichos hongos interactan con microorganismos implicados en el control biolgico de patgenos presentes en el suelo, demostrando que existen diferentes tipos de interaccin con HFMA. Para el caso de Trichoderma sp., se ha demostrado que diferentes especies pueden mejorar el desarrollo del simbionte micorrcico y que esta interaccin tiene influencia sobre el crecimiento de la planta hospedera (Calvet et al., 1993; Godeas et al., 1999). Trabajos realizados en diversas partes del mundo y con varios modelos, han combinado inculos de HFMA con cepas de distintas especies de Trichoderma sp. E incluso con otros microorganismos como fitopatgenos o promotores del crecimiento vegetal (Srinath et al., 2003). La existencia de interacciones semejantes es una muestra ms de la complejidad de los HFMA, que adems de haberse adaptado a una simbiosis completa con las plantas superiores, parecen interactuar de forma permanente y muchas veces sinergstica con la microflora del suelo. Las implicaciones evolutivas de tales interacciones y las adaptaciones
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especiales que estn involucradas, son todo un universo dispuesto a ser estudiado y aprovechado de manera sostenible. Teniendo en cuenta la importancia que ha cobrado en la actualidad la utilizacin de productos biolgicos (controladores biolgicos y biofertilizantes) como complementos de las actividades agrcolas, resulta fundamental ampliar el conocimiento que se tiene hasta el momento de los efectos de la inoculacin con micorrizas arbusculares, haciendo nfasis en la relacin de estos con otros microorganismos del suelo y de la rizsfera, en especial con aquellos que son utilizados comercialmente. En este contexto, el objetivo del presente estudio es determinar las posibles interacciones entre HFMA y el controlador biolgico Trichoderma harzianum, as como el efecto de dichas interacciones sobre el crecimiento de plantas de Brachiaria decumbens, un pasto comnmente usado en Amrica tropical para el mantenimiento de ganado para la produccin de carne. Dicha planta tiene exigencia moderada en el riego, sus semillas son fciles de manipular, su follaje tiene una cobertura mnima (mayor densidad de plantas por unidad de rea), tolera podas y es perenne; adicionalmente, es compatible con un amplio rango de HFMA y desarrolla un sistema radical amplio, caractersticas que debe tener una planta para que sea fcilmente micorrizada (Ferrera et al., 1993). Describir las funciones de las micorrizas y su efecto en la produccin vegetal.

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Se puede afirmar que el principal beneficio que realizan las Micorrizas est relacionado con la nutricin de las plantas. Este proceso de la nutricin por medio de las Micorrizas est, pues, extremadamente difundido entre los vegetales, tiene notable importancia porque permite la vida de las plantas en determinadas condiciones y facilita la toma de los alimentos por parte de las plantas superiores, en competencia con la infinita y mucho mas adaptable microflora del suelo. Son muchos los beneficios que nos brindan las Micorrizas para la plantas, que las convierten fieles aliadas de productores, empresarios, investigadores, cientficos y poblacin en general. A continuacin tratamos de resumir las ms importantes: Una mejor asimilacin de los nutrientes en las plantas, que facilita un aumento de laproduccin y mayor calidad biolgica de sta. Una mayor tolerancia de las plantas frente a muchos factores de estrs: sequa, desequilibrios en el pH, altos contenidos de sales, exceso de viento, entre otros . Esto se debe a que facilita una adecuada evapo-transpiracin de la planta y un mejor funcionamiento fisiolgico de stas en sentido general. Al estar mejor nutridas las plantas, promueve en stas una mayor resistencia frente a organismos patgenos, mejorando su salud sin aplicacin de agrotxicos. Es sumamente importante para el crecimiento de las plantas. Ello tiene una mayor significacin, en aquellas zonas o regiones, en las cuales los factores importantes para la produccin agrcola, se encuentran por debajo del estado ptimo para el desarrollo de las
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plantas (dunas de arena, suelos pobres, superficies devastadas, etc.). Pero tambin en el cultivo de plantas bajo buenas condiciones en comparacin con otras, se obtienen efectos visibles muy positivos despus de una inoculacin suplementaria con Micorriza. El desarrollo ptimo de los cultivos demanda una elevada aplicacin de fertilizantes minerales y pesticidas. El uso de dichos insumos qumicos implica no solo un costo y requerimientos energticos elevados, sino que su aporte indiscriminado pudiera provocar problemas de salinizacin y contaminacin del manto acufero. El empleo de las Micorrizas significa un ahorro de insumos y una mejor proteccin del medio ambiente. La inoculacin de las plantas con hongos micorrizgenos provoca, de manera general, un marcado incremento en los procesos de absorcin y traslocacin de nutrientes como: N, P, K, Ca, Mg, S, Zn, Cu, Mo, Fe, Mn, entre otros. Un aspecto de gran inters en el empleo de las Micorrizas es lo relacionado a la nutricin del Fsforo (P). stas desempean un importante papel en la toma del P presente en los suelos principalmente en las zonas tropicales donde las cantidades de P asimilables a las plantas son frecuentemente bajas: Generalmente bajo estas condiciones, en la zona de crecimiento radical ocurre un rpido agotamiento del P, debido al pobre suministro del mismo provocado por la alta capacidad de fijacin del elemento en el propio suelo. Los mecanismos qumicos involucrados en la absorcin de este elemento por el hongo se desconocen, sin embargo se sabe que

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toma el P en forma de ion ortofosfato y lo transporta a travs de las hifas en forma de polifosfato. Se logra una mayor eficiencia en el uso de los fertilizantes fosfricos aplicados en suelos deficientes y con elevada capacidad de fijacin de fosfatos, predominantes en las zonas tropicales. Adems del efecto directo sobre el crecimiento de las plantas, el favorecimiento en la absorcin del P, aumenta el crecimiento de las races y la fijacin biolgica de N en plantas, el cual es deficiente en la mayora de los suelos tropicales. Una mayor resistencia de las plantas a las toxinas. Por su parte, en suelos afectados por los efectos negativos de los metales pesados, se ha comprobado que las plantas micorrizadas poseen mayor resistencia, gracias a la capacidad que obtiene para inmovilizar los metales en la raz, impidiendo que stos pasen a la parte area de la planta. DISCUSIONES En la realizacin de la prctica de laboratorio observamos plantas con esporas, y otras que servan como testigo a las cuales no se les aplico esporas; las esporas eran los agentes formadores de micorrrizas; se puede notar la diferencia entre las dos ya que la que contena esporas mostraba mejor apariencia debido a los beneficios obtenidos por las micorrizas. En la tincin de races tomadas de la palma africana se observo en el microscopio la presencia de una espora la cual se veia de color negro; esto indicaba
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que las races estaban colonizadas por hongos formadores de micorrizas; la colonizacin de hongos formadores de micorrizas se produce mediante una identificacin mutua planta-hongo en la rizosfera, en regiones prximas a las races nutricias; este reconocimiento parece mediado por sustancias exudadas por la raz que provocan el crecimiento del micelio y un biotropismo positivo del mismo hacia la raz. Luego se produce el contacto intercelular al formarse una estructura llamada _apresorio_. En tercer lugar se producen cambios morfolgicos y estructurales tanto en los tejidos colonizados por el hongo, como en la organizacin de la pared celular del simbionte fngico, y por ltimo se produce una alteracin de las actividades enzimticas, que se coordinan entre los simbiontes para integrar sus procesos metablicos. Se observo en las lecturas realizadas a las plantas de maz para la medicin de sus races que las plantas testigo tuvieron mucha diferencia de crecimiento en comparacin con las plantas a las que se les aplico las esporas; ya que las plantas tratamiento mostraron un promedio de crecimiento de l3.4 cm y las plantas testigo mostraron un promedio de 7,8; se noto bastante la diferencia lo cual indica que las plantas sin micorrizas tienen menor crecimiento, menos absorcin de nutrientes; son menos resistentes a condiciones adversas que las plantas micorrizadas; debido que no poseen los beneficios que brindan la relacin simbitica entre un hongo y la raz de una planta. CONCLUSIONES

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Se observo que a las plantas a las cuales se les aplico esporas con micorrizas mostraron un mejor crecimiento, ya que crecieron ms rpido que las plantas testigo o las que no se les aplico esporas; las races presentaban mayor longitud, y el tallo era un poco ms grueso; debido a la accin de las micorrizas las cuales hacen que la planta pueda aumentar la absorcin de agua y sales minerales del suelo; por al accin simbiotica creada entre las races de la misma y un hongo. En la tincin realizada a las races de la planta llevada al laboratoriose observo que eran muy delgadas, pequeas; lo cual indicaba que la planta careca de hongos formadores de micorrizas; debido a su apariencia fsica. Las micorrizas proporcionan grandes beneficios a la planta como son una mejor asimilacin de los nutrientes lo cual que facilita un aumento de la produccin y mayor calidad biolgica de sta, una mayor tolerancia de las plantas frente a muchos factores de estrs: sequa, desequilibrios en el pH, altos contenidos de sales, exceso de viento, entre otros. Algunos hongos que como Trichoderma sp tienen gran capacidad de formar micorrizas porque colonizan el tejido intrarradical de la planta hospedera, donde desarrollan estructuras caractersticas de la simbiosis (arbsculos y vesculas), as como micelio extrarradical, el cul interacta con el ecosistema de la rizsfera y es el encargado de la toma de nutrientes del suelo.
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BIBLIOGRAFIA ALCAL DE MARCANO D., MARCANO A. J., MORALES M. Patogenicidad de Beauveria bassiana y paecilomyces fumosoroseus sobre adultos del picudo de la batata Cylas formicarius elegantulus Summers (Curculionidae). Venezuela, 1999. Disponible en: http://209.85.165.104/search? q=cache:bklTL22NRhMJ:www.revfacagr onluz.org.ve/v16_1/v161z005.html+paeci lomyces+fumosoroseus&hl=es&ct=clnk &cd=1&gl=co

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