EDITORES

PAULO BAYARDDIAS GONALVES JOS RICARDO DE FIGUEIREDO VICENTE JOS DE FIGUEIRDO FREITAS

Biotcnicas aplicadas reproduo animal

Livraria

l~~~
VARELAEDITORA LIVRARIALTOA E So PAULO 2002 -

Sumrio

Captulo

1. Diagnstico de Gestao em Bovinos...........................................

Jairo Pereira Neves, Joo Francisco Coelho Oliveira, Marlon Nadal Maciel

Captulo

2. Diagnstico de Gestao em Caprinos.........................................

Vicente Jos de Figueirdo Freitas, Aurino Alves Simplcio 3. Controle do Estro e da Ovulao em Bovinos e Ovinos

15

Captulo

................

25

Jos Carlos Ferrugem Moraes, Carlos Jos Hoff de Souza, Paulo Bayard Dias Gonalves

Captulo

4. Controle do Estro e da Ovulao em Caprinos .............................

Vicente Jos de Figueirdo Freitas, Edilson Soares Lopes Jnior

57 69

Captulo

5. Inseminao Artificial em Ces ....................................................

Lcia Daniel Machado da Silva, Alexandre Rodrigues Silva, Rito de Cssio Soares Cardoso

Captulo

6. Inseminao Artificial
Otvio Mitio Ohashi

em Bubalinos

............................................. 97
"

Captulo

7. Inseminao Artificial em Caprinos Jos Ferreiro Nunes

111 127

Captulo

8. Transferncia e Criopreservao de Embries Bovinos...................

Horst-Dieter Reichenbach, Marcos Antnio Lemosde Oliveira, Paulo Fernandes de Lima, Antnio Santana dos Santos Filho, Joaquim Corra de Oliveira Andrade

Captulo

9. Transferncia de Embries em Caprinos

Vicente Jos de Figueirdo Freitas, Aurino Alves Simplcio

"................... 179
195

Captulo

10. Produo in vitro de Embries

Paulo Bayard Dias Gonalves, Jos Antnio Visintin, Marcos Antnio Lemos de Oliveira, Marcelo Marcos Montagner, Lus Fabiano Santos da Costa

Captulo

11. Manipulao de Ocitos Inclusosem Folculos Ovarianos Pr-antrais - Moifopa .................................................................. Jos Ricardode Figueiredo,Ana Paulo Ribeiro Rodrigues, ChristianiAndrade Amorim 12. Marcadores Moleculares em Reproduo Animal.......................... Joo FranciscoCoelho de Oliveira, LuizErnaniHenkes 13. Clonagem Animal por Transferncia Nuclear
Vilceu Bordignon, Lawrence C. Smith

227

Captulo

261

Captulo

................................

281

Captulo

14. Produo de Animais Transgnicos Tecnologia e Aplicaes

nas Espcies Domsticas:

........

303

Matthew B. Wheeler, Seong:Jun Choi, Gary R. Voelker, Eric M. Walters, Gabriela G. Cezar

Prefcio

A grande maioria de publicaes, na rea de reproduo animal, disponveis no Brasil gerada em outros pases e, at certo tempo atrs, no se dispunha de bibliografiade autores brasileiros. Um dos primeiros livros sobre biotecnologia foi a obra do Dr. Antnio Mies Filho que, editada mais de uma vez, tem sido, praticamente, uma das poucas fontes de consulta nacional para estudantes e profissionais. No entanto, a referida obra concentrou maior nfase na inseminao artificial. Com a expanso da informtica, tem ocorrido uma proliferao de livros que se baseiam em compilaes de obras estrangeiras, sem uma contribuio mais consistente dos autores. O presente livro, Biotcnicas Aplicadas Reproduo Animal, est divulgando resultados de pesquisa bsica e aplicada, produzida por pesquisadores brasileiros e colaborao de estrangeiros que mantm programas de cooperao cientfica com entidades brasileiras. O conhecimento na rea de biotecnologia existe (h um grande nmero de artigos cientficos e comunicaes em congressos), entretanto est disponvel de uma maneira dispersa e no h publica-

o nacional que apresente essas informaes sistematizadas facilitando o acesso do pblico alvo: Mdicos Veterinrios que atuam na rea, alunos de graduao e ps-graduao e outros profissionais da rea como Bilogos, Agrnomos, Zootecnistas, Geneticistas, Mdicos, etc. Sob o ponto de vista de crescimento cientfico, a poltica educacional de um pas deve estimular paralelamente pesquisa bsica e aplicada. Em pases subdesenvolvidos ou em desenvolvimento, comum se ouvir crticas s pesquisas bsicas e uma maior valorizao da pesquisa aplicada. Da decorre uma dependncia destes pases daqueles mais desenvolvidos. As informaes obtidas nas pesquisas bsicas que esto nesta obra colocam o nosso pas em nvel qualitativo de igualdade aos pases do primeiro mundo. Do mesmo modo, os resultados das pesquisas aplicadas apresentados neste livro, permitem uma utilizao imediata em nosso meio, dispensando adaptaes que se fazem necessrias quando se consulta autores estrangeiros cuja realidade diferente da brasileira. com grande satisfao que redijo o prefcio desta obra que vem trazer aos profis-

VII

sionais brasileiros, informaes atualizadas e geradas pelos autores de cada captulo em seus laboratrios e ambientes de trabalho. O livro consta de tpicos avanados em reproduo animal, com uma abrangncia de informaes que vo desde o diagnstico de gestao at clonagem em espcies domsticas. Cada captulo escrito de uma maneira didtica e com referncias que permitem ao leitor localizar a fonte das informaes disponveis. Alm disso, os autores no apenas apresentam tpicos os quais dominam, como relatam resultados gerados em trabalhos de pesquisa nos quais participaram ativamente. Portanto, essa

obra contm ensinamentos atualizados e de fundamental importncia, no apenas para profissionais brasileiros como para usurios de outros pases. Finalmente, a edio de uma obra deste porte, unindo pesquisadores capazes de dar brilho ao conhecimento cientfico nacional, pode ser comparada ao seguinte pensamento de Edson Pereira Neves: "...diante do colar - belo como um sonho - admirei sobretudo, o fio que unia as prolas e se imolavaannimo para que todas fossem um..."

Prof. Cludio Alves Pimentel

VIII

Captulo 1

Diagnstico de Gestao em Bovinos

Jairo Pereira Neves, Joo Francisco Coelho Oliveira, Marlon Nadal Maciel

Introduo
O diagnstico de gestao uma tcnica que permite determinar a existncia e o perodo de gestao. Em bovinos, atravs da palpao retal, essa tcnica utilizada desde o incio do sculo XX. Posteriormente, a partir da dcada de oitenta, o emprego da ultrasonografia possibilitou o diagnstico de gestao em fases mais precoces. A utilizao do diagnstico de gestao em criatrios bovinos, tanto de leite como de corte, constituise numa ferramenta estratgica no manejo geral de uma propriedade. O conhecimento da existncia ou no de gestao possibilita a tomada de decises as quais podem afetar diretamente os ndices de produtividade com reflexos econmicos imediatos. O diagnstico precoce, por exemplo, com a identificao de fmeas no gestantes, se constitui em uma importante ferramenta na avaliao do futuro desses animais dentro da propriedade, possibilitando que sejam tomadas providncias no sentido de reduzir o perodo parto-concepo ou de descartar o animal, minimizando dessa forma as perdas econmicas. Assim, a utilizao rotineira dessa tcnica facilita o manejo dos animais e evita gastos desnecessrios com alimentao. Permite ainda uma

avaliao imediata da eficincia de programas de induo, sincronizao ou transferncia de embries. tambm utilizada na formulao de laudos periciais e fmeas que iro participar de feiras e exposies. Reconhecimento da Gestao

O reconhecimento materno da gestao em ruminantes se d atravs da ao de uma protena (172 aminocidos) produzida pelas clulas trofoblsticas do blastocisto, denominada de Interferon tau (lNF-t). O INF-t expresso somente em ruminantes e representa uma das cinco famlias de interferon do Tipo I, classificadas como IFN -a, IFN -~, IFN -, IFN -O) e IFN -to Anteriormente identificao do IFN -t, j havia indicativos da ao de protenas blastocsticas no processo de reconhecimento da gestao em ruminantes. Pesquisas realizadas ainda na dcada de sessenta, apontaram para a ocorrncia de inibio da lutelise a partir da liberao de substncias blastocsticas antes do momento da implantao (Moor & Rowson, 1966). Posteriormente, por ter sido isolada das clulas trofoblsticas, essa substncia foi denominada de trofoblastina ou protena trofoblstica (Martal et aI., 1979). Aps a sua purifica-

o, realizada na espcie ovina (Imalawa et al., 1987), por apresentar grande semelhana estrutural com algumas classes de interferons, passou a ser chamada de INF-"[. Subseqentemente, foi caracterizada no concepto bovino, entre os dias 16 e 24 de gestao. O IFN -"[bovino uma protena com peso molecular entre 22 a 24 KDa, com diferentes isoformas, diferenciando-se do seu anlogo da espcie ovina por algumas alteraes na sua estrutura bioqumica. O processo de lutelise a partir da secreo de PGF 2a necessita da secreo luteal da ocitocina, bem como da interao da ocitocina circulante com os seus receptores, os quais se localizam, principalmente, nas clulas do epi tlio endometrial. Os efeitos anti-Iuteolticos do IFN -"[so traduzidos a partir da sua ao inibitria sobre a expresso dos genes que codificam para os receptores endometriais de ocitocina e de estrgenos, substncias essas que atuam sobre as clulas do endomtrio, estimulando-as a produzirem PGF2a. Dessa forma, o IFN -"[regula a produo de PGF 2a atravs da inibio da sua expresso no endomtrio. O IFN -"[no detectado na circulao perifrica de fmeas gestantes, sendo sua ao localizada apenas no tero. Um marcado aumento na expresso do

mente programada e independente do ambiente uterino, considerando que a sua expresso ocorre tambm in vitro, esse processo largamente afetado pelas concentraes plasmticas de progesterona. A suplementao de progesterona no incio da gestao, auxilia o desenvolvimento do blastocisto, aumentando os nveis de IFN-"[ no tero e diminuindo os ndices de perda gestacional nesse perodo (Mann & Lamming, 1999). O decrscimo na expresso do IFN -"[ parece ser

dependente do processo de implantao, ocorrendo diminuio na medida que determinadas regies do trofoblasto comeam a estabelecer contato com o epitlio uterino. Fases Iniciais do Desenvolvimento Gestacional Parafins didticos,a gestaopode serdividida em trs estdios. O estdio inicialvai desde a fecundao at o 13dia; o segundo, denominado embrionrio se estende do 14 ao 45 dia; e o terceiro,denominado feta!,vai 1 do 46 dia at o parto (Peters & BaTI, 991). Imediatamenteaps a fecundao ocorre um processo de clivagem, seguido de divises mitticas dando origem ao zigoto. Essas divisesse processam at o 5 ou 6 dia, quando se forma uma massa de clulas denominada mrula. O oviduto propicia condies ambientaisfavorveisao desenvolvimentodo zigoto independentemente da situao hormona!, enquanto que o ambiente uterino desfavorvel a sobrevivncia dos mesmos quando presentesprematuramente no seu lmen. Aps essa fase, ocorre a formao do blastocistoque consistenuma estrutura esfrica de clulas denominadas de trofoblasto. Essa estrutura apresenta um halo central de clulas que daro origem ao embrio. Aps o 8 dia, ocorre a perda da zona pelcida, iniciando o perodo de alongamento do blastocisto. O desenvolvimento das clulas germinativas tem o seu incioa partir do 14

gene do IFN -"[ ocorre no 15dia de gestao

nos bovinos, coincidindo com a fase de transio morfolgica do blastocisto, que nesse perodo passa da forma esfrica para a forma filamentosa. Por isso, a produo de IFN-"[ parece ser mais dependente do desenvolvimento blastocstico do que propriamente do dia de gestao. O pico de produo do

IFN -"[ ocorre no 17 dia de gestao e o seu

mRNA detectado no trofoblasto at o 25 dia de gestao nos bovinos. No momento do pico de produo, o seu mRNA est presente no blastocisto em nveis mais elevados do que qualquer outro mRNA. Embora a expresso do gene parea ser genetica2

dia e caracteriza o incio da fase embrionria. Dessas, originam-se trs cordes de clulasdenominadas de ectoderma, mesoderma e endoderma. O ectoderma ir constituir estruturas como pele, plos, cascos, glndula mamria, e sistema nervoso. O corao, msculos e ossos sero formados a partir do mesoderma e os outros rgos internos do endoderma. No 18 dia, o alantide expande-se no corno ipsilateral e logo em seguida no contralateral,seguido de uma eroso gradual no epitliodas carnculaspelas clulasbinucleadas do trofoblasto. Antes do 22 dia ocorre uma ligaoatravs de microvilosidadesque se torna progressivamente mais ntima at o 27 dia. A partir do 32 dia de gestao o alantideiniciasua fIXao corno uterino. no O mnio, formado de clulas do mesoderma e ectoderma, cresce juntamente com o embrio envolvendo-ocompletamente. Essa estrutura esta formada a partir do 18 dia. As bolsas amnitica e alantoideana so densamente vascularizadas e conectadas com o cordo umbilical.Nos ruminantes, a placenta do tipo cotiledonria, caracterizando-se pelo contato apenas em determinadas reas endometriais, denominadas de carnculas. Nesses pontos, ocorrem as trocas gasosas de 2 e CO2, assim como de nutrientes entre feto e a me. Esse processo se denomina placentao, tem seu inciono 20 dia e consolida-se entre 40-45 dias de gestao. Modificaes Fisiolgicas Observadas na Gestao O estabelecimento da gestao provoca uma sriede alteraes no organismo materno, de ordem hormonal, anatmica e comportamental. Uma delas, que diz respeito ao comportamento reprodutivo da fmea, o no retorno ou ausncia do estro. Esse fato, no entanto, no suficiente para garantir o diagnstico, pois o no retorno ps-servio

poder tambm ser resultante de outras causas. O ideal seria poder realizar o diagnstico antes do primeiro estro. No entanto, isso somente possvel de ser realizado, com boa margem de segurana, antes do segundo estro. As modificaes anatmicas que servem de suporte para o diagnstico clnico, dizem respeito s alteraes evidenciadas no tama nho, simetria, contedo e parede uterina e so de grau e intensidade variveis dependendo do estdio gestacional. O corno gestante apresenta alterao no seu tamanho e posio, ficando progressivamente maior que o no gestante, gerando uma assimetria. Em virtude do aumento progressivo do tero observam-se mudanas na sua posio em relao s cavidades plvica e abdominal, com variaes individuais, dependendo do porte do animal. Geralmente at aos 60 dias o tero gestante permanece na cavidade plvica. A partir dos trs meses, situa-se numa posio de transio plvico-abdominal e aos cinco/seis meses, localiza-se direita, ventralmente no abdmen. A partir dos sete meses, ocorre uma expanso, inicialmente transversal e fmalmente crnio-dorsal. Uma das primeiras evidncias clnicas de gestao a presena da vescula amnitica, constituda pelo fludo e concepto. Essa estrutura pode ser palpada a partir dos 28 dias de gestao. Nessa fase, apresenta forma esfrica, dimetro de 1 cm e consistncia trgida. Permanece parcialmente livre, flutuando no lquido alantoideano, sendo freqentemente encontrada no pice do corno gestante. Aumenta progressivamente de tamanho com o avano da gestao, porm o seu reconhecimento aps 65 dias dificultado pela reduo da sua turgidez e maior volume de lquido alantoideano. A palpao da vescula amnitica deve ser feita por profissional habilitado, considerando os riscos de leso do concepto e conseqente perda gestacional. 3

Uma caracterstica marcante e de importncia fundamental para o diagnstico de gestao o efeito de parede dupla. detectado atravs do deslizamento da parede uterina sobre a membrana alantoideana e percebido palpao, em algumas vacas, j aos 35 dias. Esse sinal torna-se mais evidente aps os 40 dias de gestao. O crescente acmulo de fludos gestacionais acompanhados pela distenso e reduo da espessura da parede uterina, proporciona ao toque o efeito de flutuao observado a partir dos 45 dias. Os cotildones da placenta fetal com suas vilosidades penetram nas criptas das carncuIas uterinas constituindo os placentnios, dispostos em ftleiras dorsais em nmero de 75 a 120, os quais so detectados j a partir dos 75 dias de gestao. Apresentam uma variao de tamanho de tal maneira que os maiores situam-se medialmente e os menores nas extremidades cervical e apical do corno gestante. O feto pode ser percebido aps 65 dias, quando a vescula amnitica reduz sua turgidez, at os quatro meses de gestao. No perodo seguinte, quando ocorre o deslocamento do corno grvido no sentido ventral, sua deteco fica dificultada ou inviveI. A partir dos 6 meses, devido ao seu crescimento e expanso dorso-craneal, haver maior facilidade para sua deteco. A crescente demanda de sangue, como conseqncia do curso gestacional, provoca um aumento do dimetro da artria uterina mdia a partir dos 90 dias, provocando um frmito arterial. Esse sinal corresponde ao pulso arterial aumentado, mais facilmente detectado quando se provoca uma obstruo parcial da artria. importante destacar que aps um aborto, parto ou determinadas condies patolgicas esta evidncia poder ainda estar presente. O corpo lteo gravdico presente durante toda a gestao no difere do cclico, localizando-se geralmente no ovrio ipsilateral ao corno gestante. 4

Perfil de Hormnios Ligadas Gestao

e Protenas

O perodo inicial da gestao marcado por eventos que prolongam o perodo funcional do corpo lteo a partir da inibio do mecanismo de lutelise, conforme descrito anteriormente. Esse processo responsvel pela manuteno dos nveis adequados de progesterona necessrios para que ocorra a continuidade do desenvolvimento embrionrio. Diversos estudos evidenciam a relao entre baixas concentraes de progesterona e perdas gestacionais, assim como descrevem o aumento nos ndices de gestao e desenvolvimento embrionrio aps a suplementao com progesterona (Garret et aI., 1988, Nephew et al., 1991, Mann & Lamming, 1999). Os bovinos so corpo lteo dependente, significando que necessitam da produo luteal para a manuteno dos nveis de progesterona durante todo o perodo gestacional, embora essa tambm seja produzida pela placenta. As concentraes de progesterona detectadas no leite e no plasma de vacas nos primeiros dias de gestao so semelhantes aquelas observadas nas fmeas no gestantes que se encontram na fase de diestro. Assim, sua utilizao para diagnstico de gestao limitada a perodos bem especficos, sendo em conseqncia dependente de registros criteriosos da data do servio. Os nveis de estrgenos, estrona e estradiol-17B, comeam a aumentar na segunda metade da gestao, atingindo o seu pice prximo ao parto. Assim sendo, sua utilizao no adequada para diagnstico de gestao. O hormnio lactognico placentrio bovino (bPL) uma protena secretada pelas clulas binucleadas e possvel de ser detectada na circulao materna a partir do 26 dia de gestao. As concentraes maternas desse hormnio aumentam progressivamente durante o perodo gestacional, atingindo nveis em torno de 1 a 2 ng/rnl prximo ao

parto. A protena especfica da gestao B (PSPB) uma glicoprotena especfica da placenta com peso molecular entre 47.000 e 53.000 daltons. Os seus nveis perifricos podem ser detectados j a partir do 24 dia de gestao nos bovinos (Sasser et al., 1986), os quais apresentam uma elevao gradual at o parto. As glicoprotenas associadas gestao (PAG) so pertencentes superfamlia das proteases asprticas, no entanto, so consideradas enzimaticamente inativas. Nos bovinos, o seu perfil caracteriza-se por um aumento gradativo do primeiro ao oitavo ms de gestao, apresentando uma rpida elevao aps esse perodo. Mtodos de Diagnstico
Paipoo retal A adequada contenso da fmea um importante fator a ser considerado para o diagnstico de gestao. A fmea deve ser contida em estao, de tal forma que sejam evitados movimentos bruscos ou mesmo quedas que venham provocar leses ou ferimentos, tanto nos animais examinados quanto no examinador. Alm disso, para a realizao do exame de palpao reta! de forma segura, indispensvel que o mdico-veterinrio tambm tenha alguns cuidados com relao ao seu material de trabalho, devendo utilizar sempre luvas especiais de boa qualidade bem como lubrificante adequado. O diagnstico de gestao por palpao retal um mtodo seguro, que no oferece risco para a integridade da vaca e tampouco para a viabilidade do feto quando realizada por profissional habilitado. Antes do incio do exame propriamente dito, aconselhvel efetuar uma inspeo da vulva, seus arredores e glndula mamria o que poder servir de subsdio para o diagnstico final. O diagnstico de gestao em bovinos realizado levando-se em considerao determinadas caractersticas do controle reproduti-

vo, se individual ou de rebanho. O controle individual realizado em criaes intensivas, de gado de leite ou plantis de gado de corte, e nesses casos h geralmente informaes sobre datas de servio e principalmente interesse acentuado em um diagnstico precoce. Quando se trata de um controle de rebanho, tpico de criaes extensivas de gado de corte, submetidos a monta natural ou inseminao artificial, o diagnstico realizado em perodos estratgicos, contribuindo para racionalizao do manejo. Esse mtodo considerado o mais prtico e preciso para o diagnstico de gestao em fmeas bovinas, desde que realizado aps 45-50 dias ps-servio, dependendo da capacidade do examinador. Uma vaca somente dever ser considerada gestante se pelo menos um dos sinais indicativos de gestao for detectado e reconhecido. O estdio da gestao pode ser estimado com base nas caractersticas uterinas e fetais, com maior preciso em sua primeira metade. Cabe destacar que algumas evidncias descritas no item "Modificaes Fisiolgicas Observadas na Gestao", quando consideradas isoladamente, no servem como parmetro para o diagnstico de gestao. Determinadas situaes fisiolgicas, como por exemplo a fase de puerprio precoce ou mesmo distrbios reprodutivos tais como piometra, mumificao ou macerao fetal, proporcionam tambm um aumento de tamanho uterino. Outras caractersticas so peculiares e exclusivas da gestao, razo pela qual indispensvel fundamentar o diagnstico considerando, pelo menos um dos seguintes sinais positivos para gestao (Zemjanis, 1970): Vescula amnitica Efeito de parede dupla Placentnios

. . . Feto .

importante salientar que profissionais menos experientes devem procurar fundamentar o diagnsticopor pelo menos dois ou 5

mais desses sinais caractersticos, tendo assim maior segurana. A deteco desses sinais vai depender tambm da fase gestacional. Devese tambm destacar que nenhum animal deve ser considerado no-gestante a menos que o examinador provoque uma retrao uterina, pela crvice, e se certifique de que no h sinais indicativos de gestao. A utilizao de fases gestacionais propostas originalmente por Grunert & Berchtold

(1988); Grunert (1993), apresentadas na tabela 1.1 proporcionam maior facilidade e segurana, no s para o estabelecimento do diagnstico de gestao, como tambm para estimativa do perodo em que ela se encontra. importante ressaltar que esses dados servem apenas como parmetro para o examinador. Devem ser consideradas variaes individuais e no existem limites rgidos entre as fases.

Tabelo 1.1.

Principois coractensticos queservem suporte de parao diagnsticoe gestao estimativo penado d e do gestocionol bovinos. em PERODO (meses) POSIO DOUTERO Plvico TAMANHO FETO (cm) CARAaERSTICAS

FASE

Semsinais evidentes Pequeno bolso

I
1-11 (31'00 60' dia)

I
3-9

sem sinaisevidentes

Plvico

iJssimetriaoscornos terinos; d u -vescula amnitico; -efeito deporede duplo; -IIutuaa; -carpa lteaipsilateral.

Grande olso b

1-111 (61' 0090')

Plvico/ Abdominal

10-14

iJssimetriaronunciado p doscornos uterinos; -IIutuaa; -efeito deparede duplo;

-feto possvelde ser palpado;

Balo

III-IV
(91'001200)

Plvico/
Abdominal

15o 20

-grande balo; -IIutuao; -plocentnios; -feto; -frmito arterial.

Descido

IV-VI (121'001800)

Abdominal Ventral

-crviceistendido; d -plocentnios;
-difcil paipoodo feto.

Final

VII-IX

Abdominal Ascendente

-palpoo dofeto; -placentnios; -frmito arterial.

(181'280')

~ Eficincia do Mtodo de Palpao Retal O diagnstico de gestao por palpao retal considerado um mtodo eficiente e seguro, cuja acuidade aproxima-se de 100%, 6

desde que realizado por profissional treinado (Youngquist, 1997). Erros de diagnstico podem ocorrer devido a repleo vesical, contedo uterino no fisiolgico, ps-parto pre-

coce, projees de pores do rmen no sentido dorso ventral ou confuso devido palpao de ovrios por placentnios. A incidncia de perdas gestacionais principalmente no primeiro tero gestacional maior que nas outras fases, e esse fato deve ser de conhecimento do proprietrio. O parto pode no ocorrer por erro de diagnstico ou por perda/morte pr-natal. Os erros de diagnstico ocorrem por falhas na interpretao dos exames realizados ou devido a condies patolgicas peculiares, no entanto, nesses ltimos, os sinais positivos de gestao no esto presentes. As condies patolgicas mais comuns so piometra, hidrometra, doenas das novilhas brancas, linfoma uterino, morte fetal, mumificao e macerao fetal e tumores ovarianos. A discusso detalhada dessas patologias, no entanto, fogem ao escopo deste captulo.
Ultra-sonografia ... Princpios Bsicos da Ultra-sonografia A ultra-sonografia ou ecografia um mtodo de diagnstico para explorao de estruturas, atravs da emisso de ultra-som e captao de ecos. Constitui-se em uma tcnica complementar ao exame clnico e utilizada para avaliao de tecidos moles em todas as espcies. uma tcnica no invasiva e no provoca modificaes biolgicas, tanto aos pacientes como ao operador. A ultra-sonografia permite a avaliao do tamanho, da forma, da localizao e da consistncia dergos em funcionamento ou o monitoramento de suas funes. Possibilita ainda o registro de imagens para ser utilizado em atestados ou laudos clnicos. Uma das limitaes da ultra-sonografia inclui a natureza no especfica de muitas alteraes observadas, o que impede, muitas vezes, um diagnstico preciso e imediato. Para obteno de imagens precisas, h necessidade de uma perfeita interao entre o homem, a mquina e o paciente. A apli-

cao dessa tcnica a partir da dcada de 80 constituiu-se em um dos passos mais importantes para o estudo e entendimento dos eventos fisiolgicos que ocorrem no ciclo estraI e gestao em diversas espcies. Permite ainda maior preciso e segurana para o diag nstico, prognstico e teraputica proporcionando uma maior eficincia reprodutiva, principalmente em exploraes intensivas. Infelizmente sua utilizao ainda restrita considerando o elevado custo de aquisio e manuteno do equipamento em relao ao retorno econmico com a prestao de servios. O som uma onda mecnica caracterizada por compresso e rarefao, dentro de um meio, audvel pelo homem (8-20 KHz) oupelo co at 50 KHz. Uma onda sonora possui comprimento, freqncia e velocidade. O comprimento o nmero de ciclos que elas percorrem em um dado perodo de tempo, medido em ciclos por segundo ou Hertz. O ultrasom caracterizado por uma onda sonora com freqncia muitas vezes superior que percebida pelo ouvido humano, medida em MHz. A velocidade do som varia conforme a textura das reas a serem examinadas mas so muito prximas, na maioria dos tecidos moles, com exceo do ar, ossos e pulmes. Para a ultra-sonografia diagnstica, os aparelhos so programados para uma velocidade constantede 1540m/seg. (Griffith, 1980). Ondas ultra-snicas so emitidas a uma velocidade constante at encontrarem uma superfcie refletora. Nessa superfcie, uma pequena poro do som refletida e captada pelo transdutor. O transdutor possui cristais que tm propriedades piezeltricas, como a da transformao de um tipo de energia em outro, como por exemplo, mecnica em eltrica. O aparelho converte essa transformao em pontos de luz em uma tela conversora de varredura. A amplitude do ponto na tela proporcional distncia percorrida. Assim, temos reconstruda uma imagem dos tecidos

e rgos atingidos pelo ultra-som. As ondas sonoras so atenuadas medida que percorrem os rgos do animal examinado. As principais causas de atenuao so absoro, reflexo e espalhamento. Pores de onda sonora poderiam ser responsveis por danos biolgicos sofridos pelo tecido examinado. No entanto, a intensidade da onda to baixa que a quantidade absorvida de calor nfima. Alm disso, a posio do transdutor mudada constantemente e o tempo de exame no suficiente para ocasionar danos aos tecidos. Quando o som atinge uma interface, que a linha formada entre tecidos de diferentes impedncias acsticas, uma poro ser refletida com maior intensidade e a amplitude do eco retomado ser determinada pela diferena absoluta na impedncia acstica de um tecido comparado a outro. Quanto mais semelhantes forem as impedncias acsticas entre os tecidos tanto menor ser o eco. Esse eco retomar ao transdutor onde ser transformado em impulsos eltricos e finalmente em imagens. A elasticidade dos tecidos tambm contribui para sua ecogenicidade. Os gases e os ossos agem como barreiras s ondas sonoras. Para ser possvel examinar um local circundado por gs ou estruturas sseas h necessidade de se utilizar uma janela acstica, ou seja um meio que no impea a passagem do eco (Nyland & Matoon, 1995). Atualmente, utiliza-se o sistema em tempo real que permite a observao de movimento na imagem, representada pela variao de tons na escala cinza. Diversos planos podem ser observados mediante mudana da posio do transdutor. De acordo com a natureza e capacidade em absorver e refletir os feixes de ultra-som os tecidos so caracterizados na imagem gerada dentro de uma escala que vai desde o preto at o branco com vrios tons intermedirios de cinza. Existe uma terminologia prpria para interpretar essas imagens que so aneci8

co, ecico, hipoecico, hiperecico, isoecico e interfaces. Anecico significa ausncia de ecos, transmisso completa de som aparecendo na tela em cor preta, ecica ou ecognico a presena de ecos ou a capacidade de refletir as ondas sonoras em maior ou menor intensidade aparecendo na tela diversos tons de cinza. Hiperecico representa estruturas brilhantes, altamente reflexivas predominando o branco e hipoecico, ecos esparsos, reflexo intermediria. Aspecto isoecico traduzido por estruturas com a mesma ecotextura ou ecogenicidade. Os artefatos so estruturas que aparecem na imagem por interaes ecogrficas, erros tcnicos, interferncias ou rudos eletrnicos como, por exemplo, sombra acstica, reverberao e reforo posterior, cujo conhecimento evitar falsas interpretaes. Os equipamentos de ultra-sonografia so fundamentalmente constitudos por um console, que possui uma fonte de energia e serve para recebimento, amplificao e converso de sinais em imagens; por um teclado alfa numrico e outro de funes; transdutor, constitudo por cristais de quartzo turmalina, zirconato de chumbo e titanato de brio conectados ao console atravs de um cabo e impressora ou vdeo para documentao de imagens. Para reviso ver Fritsch & Gerwing (1996) e Nyland & Matton (1995). ~ Condies para Diagnstico Ecogrfico de Gestao Para realizao do diagnstico ecogrfico de gestao, a fmea deve ficar contida de tal maneira que oferea segurana tanto para o examinador como para o equipamento. O equipamento de ultra-sonografia dever ficar posicionado em plano elevado, permitindo fcil visualizao da tela em ambiente de pouca luminosidade, protegido de chuva e poeira. Os transdutores, para uso retal, possuem geralmente uma freqncia de 5- 7,5 MHz e devero ser recobertos com plstico descart-

'--

vel.A utilizao de gel entre o transdutor e essaproteo permitir uma imagem de melhor qualidade.
.,. Tcnica de Ultra-sonografia O diagnstico gestacionaI, por ultra-sonografia, na vaca, pode proporcionar o ganho de tempo correspondente ao de um ciclo estral em relao ao que utilizado por palpao retal (Chaffauxetal., 1988; Neves, 1991; Santos, 1993; Santos & Neves, 1994). Alm disso, permite que o desenvolvimento embrionrio seja monitorado, com total inocuidade

para o feto e para a gestante (Kastelic et al., 1991; Khn, 1990; Totey et a!, 1991). A vescula embrionria pode ser detectada entre os 17 -19 dias aps o servio e caracteriza-se por uma rea no ecognica e esfrica no lmen uterino, geralmente ipsi-Iateral ao corpo lteo, prximo juno tero tubrica. O embrio poder ser detectado a partir do 23 dia psservio, caracterizando-se como uma estrutura de ecogenicidade mdia no interior da vescula embrionria, que anecica. A tabela 1.2 e a figura 1.1 (Santos, 1993) servem de subsdio para o diagnstico e estimativa do

c
Figura 1.1. amnitica

Imagens ecogrficas da gestao na vaca. As setas indicam embrio aos 18 (AIe 24 dias (S), membrana
no 31 dia (CI membros anteriores e posteriores no 33 dia (DI e coluna vertebral no 41 dia (E).

perodo da gestao. O primeiro rgo a ser identificado o corao caracterizado como uma estrutura ora no ecognica, ora com pouca ecogenicidade. A freqncia cardaca de 184 a 188 batimentos por minuto. O mnio poder ser visualizado dos 25 aos 30 dias de gestao (Curran et al., 1986ab; Fissore et al., 1986; Toteyet al., 1991). Os membros so detectveis aos 32 dias; a coluna vertebral aos 40 dias e os movimentos fetais so percebveis aos 45 dias. Do dia 23 ao 50 a vescula embrionria cresce em dimetro na razo de 1,38 mm/dia e o embrio aumenta seu comprimento em 1,15 mm/ dia, conforme Santos & Neves, 1994. O diagnstico realizado antes do 22 dia de gestao atravs da presena de fludos uterinos no seguro considerando que a deteco do concepto nem sempre vivel. Isso depende tambm da resoluo do equipamento, freqncia do transdutor e habilidade do examinador, podendo ser tambm mascarado pela presena de fludos uterinos fisiolgicos. Portanto, o perodo mais conveniente e seguro a partir dos 25 dias ps-servio. Uma prtica recente que tem sido utilizada em vacas leiteiras e receptoras de embries a determinao do sexo fetal. Fundamenta-se na observao do tubrculo genital, escroto e glnTabelo 1.2. Caractersticos gestacianais que servem de parmetro paro diagnstico nos fases iniciais de gestao atravs do ultrasonogrofia. CARAaERSTICAS GESTAClONAIS
Vesculo embrionrio Embrio BoIimentos mnio Membros Coluna vertebral Movimentos Costelas Plocentnios Plocentnios junto 00 embrio em todo o tero fetois cardacos

dula mamria a partir dos 50 dias de gestao (Curran et al.,1989). Eficinciado Mtodo de Diagnstico Ecogrfico de Gestao A eficincia do diagnstico ecogrfico de gestao depende do equipamento, habilidade do examinador e perodo gestacional. Exames realizados antes dos 25 dias esto mais susceptveis a erros (50%) em relao aos realizados posteriormente, quando o embrio e os batimentos cardacos possibilitam um diagnstico mais consistente (Kastelic et aI., 1989). A localizao plvica dos rgos genitais permite um diagnstico mais seguro em relao a animais cujos genitais localizam-se no abdmen. Assim, o perodo mais indicado para a realizao do diagnstico por ultra-sonografia vai do dia 25 at quando for possvel uma avaliao segura por palpao retal. A crescente utilizao da ultra-sonografia tem proporcionado um salto de qualidade na assistncia veterinria em algumas regies do Pas no mbito da reproduo animal. As falhas na concepo e morte embrionria precoce podem ter seus efeitos minimizados mediante uma maior preciso e rapidez diagnstica. Novas biotecnologias como induo e sincronizao do estro, transferncia e produo de embries in vitro tm sido otimizados. Considerando ainda que a mdia dos ndices reprodutivos brasileiros, mesmo com todos os avanos tecnolgicos, apresentem poucos sinais de progresso, as utilizaes de tcnicas de diagnstico mais precisas podem contribuir substancialmente para a reverso desse quadro. Para isso, as instituies de ensino, cooperativas, ncleos de criadores, profissionais liberais e entidades afins devem avaliar o potencial incremento que poder ser gerado na produtividade com a adoo dessa tecnologia.

DIASPS-SERVIO

13-19 20-24 24-27 30-32 28-34 40 42-50 51-55 33-38 60

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DosagemHormonal
.. Progesterona A progesterona secretada pelo corpo lteo no decorrer da gestao. Nas vacas no gestantes ocorre uma queda brusca em torno do 17 dia do ciclo. Portanto, a determinao dos teores de progesterona no soro e leite entre os dias 21 a 24, ps-servio, permite avaliar a existncia ou no de uma funo ltea indicativa de gestao. Testes de radioimunoensaio e ELISA tm sido utilizados comercialmente para aplicao em diagnstico precoce de gestao nos bovinos. Vacas gestantes apresentam nveis de progesterona semelhantes ao de uma vaca na fase ltea. Ao contrrio, se a concentrao de progesterona nos dias 21 a 24 for baixa significar que a vaca no est gestando. A eficincia do mtodo estimada em 75 a 85% para deteco de gestao e de 100% para deteco das no gestantes. Resultados falso-positivos ocorrem devido a erros de identificao de amostras, variaes individuais na durao do ciclo, anormalidades ovarianas (cistos) ou uterinas e morte embrionria. Na verdade, a determinao da progesterona nesse perodo indica unicamente a presena ou no do corpo lteo o que pode estar ou no associado com uma gestao. Considerando a baixa eficincia do mtodo e o custo relativamente alto, em relao aos demais, a dosagem de progesterona no se tornou um procedimento usual em nosso meio. .. Estrgenos O sulfato de estrona, produzido pela placenta das vacas em concentraes suficientes para um diagnstico de gestao, ocorre a partir dos 100 dias de gestao. Em comparao com outros mtodos existentes, a determinao de estrgenos deixa de ser uma opo vivel, considerando o perodo gestacional em que poder ser utilizado.

... Hormnio lactognio PlacentrioBovino Em virtude da sua deteco somente ser possvel a partir do 110 de gestao na grande maioria das vacas, o seu uso no indicado para o diagnstico de gestao na espcie bovina.
... Protena especfica da gestao B A mensurao das concentraes da PSPB,

atravs de radioimunoensaio, pode ser utilizada para o diagnstico de gestao a partir do 28 de gestao em bovinos. O risco de erro no diagnstico de no mximo10%.
... Protenas associadas gestao (PAGj

A utilizao da dosagem de PAG como mtodo de diagnstico de gestao em bovinos recomendada, somente, aps os 34 dias de gestao (Zoli et al., 1992). Alm dos altos ndices de preciso da tcnica, descritos entre 87 e 98%, a PAG conserva-se em nveis detectveis por at 10 dias aps a colheita de sangue, mesmo em temperatura ambiente elevada (Skinner et aI., 1996). Considerando as vantagens de precocidade e precises do mtodo existem perspectivas de uma efetiva utilizao desta tcnica no futuro. Consideraes Finais indiscutvel a importncia do diagnstico de gestao em qualquer tipo de explorao bovina. O mtodo mais utilizado e mundialmente consagrado apalpao retal pela sua praticidade, eficincia e baixo custo. Em fmeas de maior valor comercial, principalmente vacas de leite ou plantis de corte, crescente a utilizao da ultra-sonografia. Isso se deve a possibilidade de um diagnostico mais precoce, preciso e passvel de ser documentado. Assim, pode-se otimizar a eficincia reprodutiva atravs de novo servio diminuindo dessa forma o intervalo entre

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partos. A baixa eficincia, custo relativamente elevado e pouca praticidade das dosagens hormonais fazem dessa opo a menos utilizada em nosso meio. Deve-se destacar que a determinao de PAG pela sua preciso e perodo de determinao constitui-se numa possibilidade de diagnstico. Sua utilizao comercial vai depender fundamentalmente do custo e agilidade para retorno do diagnstico.

tries and gyneeology.Harper & Row, 1980, capo 1, p. l-tO. GRUNERT, E. BERCHTOLD, M. Infertilidad

en Ia vaca. HemisferioSur S.A., 1a edio,

475p.,1988. GRUNERT,E. SistemaGenitalFeminino.IR:Rosenberger, G. Exame Clnico dos Bovinos. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1993. p.269-314. lMAKAWA, .ANTHONY, RY., KAZEMI, M., K et aI. Inteferon-likesequence of ovinetrophoblast protejo secreted by embryonic trophectoderm. Nature, v.330, p.377-379, 1987. KHN, W Sonographic imaging of lhe bovine uterus fetos. Theriogenology, v.33, p.385396, 1990. KASTELIC,J.P.,CURRAN, S., GINTHER, O.J. Accuracy of ultrasonography for pregnancy diagnosis on days tO to 22 in heifers. Theriogenology, v.31, p.313-820, 1989. KASTELIC,J.P.,BERGFELD,DR, GINTHER, O. J.Ultrasonicdetectionof lhe concertos and caracterizationof intrauterine fluidon days 10 to 22 in heifers.Theriogenology,v.35, p.569581,1991. MANN, G.E., LAMMING, G.E. The influence of progesterone during early pregnancy in caule. Reprod Domestie Anim, v.34, p.269274, 1999. MARTAL, ., LACROIX,M.C., LOUDES, C., et J aI. Trophoblastin an antiluteolytic protejo present in earlypregnancy in sheep. J Reprod Fert, v.56, p.63-73, 1979. MOOR, RM., ROWSON, LE.A. The corpus luteum of lhe sheep: effect of lhe removal of embryos on luteal function. J Endoe, v.34, p.497 -502, 1966. NEPHEW,K.P.,MCCLURE K.E., OTT, T.,et aI. Relationship between variation in conceptus development and differences in estrous cycle duration in ewes. Biol Reprod, v.44, p.536539, 1991. NEVES, J.P.Diagnsticode gestao por ultrasonografm.CinciaRural,v.21,p.457-465, 1991. NYLAND,T.G.,MATOON,J.S.Veterinarydiagnostie ultrasound. WB. Saunders Company, 1995. 357p.

Referncias Bibliogrficas
CHAFFAUX,ST., BIANCHI, P.,BHAT,P.,et aI. I..:chographieen temps rel par vaie transretale-Intrt polir le diagnostic de gestation chez Ia vache. Ree Md Vt, v.I64, p.l O1108,1988. CURRAN,S., PIERSON, RA, GINTHER, O.J. Ultrasonographic appearance of lhe bovine conceptus from days 10 to 20. J A Vet Med Assoe, v.189, p.1289-1294, 1986a. CURRAN,S., PIERSON, RA, GINTHER, O.J. Ultrasonographic appearance of lhe bovine conceptus from days 20 to 60. J A Vet Med Assoe, v.189, p.1295-1302, 1986b. CURRAN,S. KASTELIC,J.P.,GINTHER, O.J. Determining sex of lhe bovine fetus by ultrasonic assessement of lhe relative location of lhe genital tubercle. Reprod Sei, v.19, p.217227, 1989. FISSORE, R A, EDMONDSON, A J., PASCHEN, RL et ai The use of ultrasonography for lhe study of lhe bovine reproductive tract, 11.Non-pregnant and pathologicalconditions ofthe uterus. Anim Reprod Sei, v.2, p.167177, 1986. FRITSCH, R, GERWING, M. Fundamentos fsicos y tcnicos de Ia ecografia. IR: Fritsch, R,Gerwing, M. Ecografia de perros y gatos. Zaragoza (Espanha):Editora Acribia, S.A., 1996. p.3-34. GARRET,J.E., GEISERT, RD., ZAVY,M.T., et aI. Evidence for maternal regulation of early concertos growth and development in beef caule. J Reprod Fert, v.84, p.437-446, 1988. GRIFFITH, C.R Basicphysics.IR:SABBACHA, RE. Diagnostie ultrasound applied to obste12

PETERS, AR, BALL,P.J.H. Reproduccin dei ganado vacuno. Zaraboza (Espanha): Editora Acribia, S.A. 1991. 222p. SANTOS, I.W Diagnstico ginecolgico bovino. Santa Maria-RS: Programa de Ps-Graduao em MedicinaVeterinria,Universidade Federal de Santa Maria. 1993. 59p. Dissertao (Mestradoem MedicinaVeterinria). SANTOS, I.W, NEVES, J.P. Diagnstico de gestao na vaca pela ultra-sonografia. Cincia Rural, v.24, p.365-369. 1994. SASSER,RG., RUDER, C.A., IVANI, KA, et aI. Detection of pregnancy by radioimmunoassay of a novel Pregnancy-Specific Protein in serum of cows and a prof11e serum of concentrationsduring gestation. Biol Reprod, v.5, p.936-942, 1986. SKINNER, J.G., GRAY,D., GEBBIE, EE., et aI. Fieldevaluationof pregnancy diagnosis using

bovine pregnancy-associated glycoprotein (bPAG). Cattl Pract, v.4, p.281-284, 1996. YOUNGQUlST, RS. Pregnancy Diagnosis. In: Youngquist, RS. Current therapy in large animal Theriogenology. Philadelphia:WB. Saunders Company, 1997. p.295-303. TOTEY, S.M., SINGH, G., TANEJA,M., et aI. Ultrasonography for detection os earlypregnancy folowing embryo transfer in unknown breed of Bos indicus cows. Theriogenology, v.35, p.487,497, 1991. ZEMJANIS, R Diagnostic and therapeutic techniques in animal reproduction. Baltimore: 2a edio. The Williams & Wi1kirts Company, 1970, 242p. ZOLI, A.P. Isolement, purification et caractrisation d'une protine placentaire associe Ia gestation chez les bovines. Liege - Blgica.166p. Tesede Doutorado em Medidna Veterinria.Universidadede Liege,1992.

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Captulo 2

Diagnstico de Gestao em Caprinos

VicenteJos de
Figueirdo Freitas, Aurno Alves Simplcio

Bases Fisiolgicas Quando ocorre um ciclo estral normal na cabra, esse geralmente associado a uma ou mais ovulaes que ocorrem 30 a 36 horas aps o incio do estro. O corpo lteo formado

aps a luteinizao do folculo ovulatrio secreta uma elevada quantidade de progesterona que ser responsvel pela manuteno da posterior gestao, caso ocorra a fecundao (Figura 2.1). O embrio resultante da fecun-

14 12 10 ]' 8 bb 5
6
,::l.,

4 2 O

Ciclo

Gestao

1 3 5 7 9 11 13 15 17 1921 2325272931

33 35 37 3941

t
Estro
etal.1991).

Dns

Figura 2.1. Curva de progesterona plasmtica em uma cabra cclica e, em seguida, gestante (Adaptado de Chemineau

15

dao comea a implantar-se no 149dia do ciclo quando a vescula corinica est desenvolvida suficientemente para entrar em contato estreito com o epitlio uterino. No momento da implantao (entre o 149e o 17Qdia ps-estro), o embrio desenvolve, juntamente com o tero, uma placenta do tipo cotiledonria. Todas as trocas sero feitas atravs dessa placenta, na qual a fixao embrionria ocorre em um nmero restrito de regies arredondadas ou ovais, onde uma camada de vilosidades sai do crio fetal e agregam-se em uma salincia da mucosa uterina denominada carncula (Oeriveaux et aI., 1988). Do lado materno, o corpo lteo continua a secretar progesterona at o parto. Na cabra, a destruio qumica ou fsica do corpo lteo, em qualquer momento da gestao, provoca o aborto. A durao da gestao em caprinos est entre 144 e 152 dias (lshwar, 1995). No entanto, em cabras nativas do Nordeste do Brasil (Moxot, Canind, Marota e Repartida), uma durao de 137 dias considerada normal. A durao da gestao tambm geralmente ligada ao nmero de fetos, pois as fmeas gestantes de vrios fetos tm uma durao mais curta que aquelas com um nico feto. A durao da gestao tambm determinada pelo peso dos fetos, onde cabras gestantes de fetos mais pesados tm uma gestao mais curta (Martal & Charlier, 1985).

dos exames de gestao em todo o rebanho. Por outro lado, o diagnstico precoce de gestao em caprinos, como em outras espcies domsticas, tornou-se uma necessidade em regimes de manejo semi-intensivo e intensivo dentro de sistemas de explorao produtivos. A prtica do repasse mediante o uso de rufio e o no retorno ao estro no so mtodos eficazes de diagnstico de gestao, servindo apenas como elementos auxiliares. Ainda, em caprinos, no possvel proceder apalpao do sistema genital atravs do reto objetivando o diagnstico de gestao, a exemplo do que feito na gua e na vaca. Em adio, condies patolgicas do tero e dos ovrios so causas de anestro na cabra, dificultando, desta forma, um diagnstico de gestao baseado no no retorno ao estro. A incapacidade de proceder-se o diagnstico precoce de gestao na cabra pode resultar em perdas econmicas significativas, quer em sistema de produo de leite quer de carne, devido ao aumento no intervalo entre partos (Freitas & Simplcio, 1999). Vrios mtodos para diagnstico precoce de gestao em caprinos tm sido descritos; todavia, a grande maioria deles depende de mo-de-obra qualificada e do uso de equipamentos sofisticados e, por conseqncia, de elevado custo. Como exemplos destes mtodos, pode-se citar: bipsia vaginal, radiografia, laparotomia, laparoscopia, dosagem hormonal, mtodos ultra-snicos, determinao do antgeno especfico da gestao e outros mtodos que no podem ser considerados precoces, como por exemplo a palpao abdominal. A escolha do mtodo depender, dentre outros fatores, da disponibilidade de laboratrio, equipamentos e mo-de-obra qualificada, idade provvel da gestao, custo operacional e eficcia desejada. Neste captulo, so descritos os mtodos de diagnstico de gestao disponveis e mais freqentemente usados na espcie caprina.

Introduo Em regime de manejo extensivo, onde machos e fmeas so explorados juntos durante todo o ciclo de produo, a realizao do diagnsticoprecoce de gestao apresenta poucas vantagenspara o sistemade produo, desde que se trabalhe com matrizes e reprodutores de fertilidadecomprovada.Geralmente, nesse tipo de manejo, o custo de manuteno de algumas cabras no gestantes substancialmente menor que o preo
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Mtodos Ultra-snicos O ultra-som refletido de tecidos mveis, em suaves mudanas de freqncia, o que o qualifica como um instrumento importante para exames de tecidos pela sua segurana para o operador e o paciente (Bishop, 1966). Em adio, tcnicas ultra-snicas tm sido usadas para examinar estruturas sub-superficiais em tecidos vivos pelo uso de scan-A e do efeito Doppler. A gestao na cabra pode ser diagnosticada por um dos trs mtodos ultra-sonogrficos a seguir enumerados: o scan-A (amplitude do eco-tempo), o efeito Doppler (registro de movimentos) e o scan-B (tempo real). Todos eles podem ser usados em condies de campo. A preciso do diagnstico, o tempo despendido para a realizao do exame e a acurcia na determinao do nmero de fetos e sua idade variam entre as trs tcnicas e dependem da sensibilidade do equipamento usado, alm da qualificao e experincia do profissional. Entretanto, independente do mtodo a ser usado deve-se atentar para os seguintes pontos:

.
.

proceder a jejum hdrico e alimentar de, pelo menos, 12 horas; o exame cutneo deve ser priorizado a menos que um diagnstico precoce seja essencial; o diagnstico transabdominal, feito entre o 252 e o 352 dia ps-cobrio ou inseminao artificial, propicia boa acurcia desde que conduzido com transdutor de 5 MHz e com a cabra em posio de estao.

~ Tcnica Ultra-snica- $can-A O princpiodo ultra-som, considerando a amplitude do eco x tempo, baseado na deteco da faixa fluida presente no tero. A unidade scan-Aemite ondas ultra-snicas a partir de um transdutor manual colocado externamente contra a pele do abdmen e em direo ao tero (Figura 2.2). As ondas ultra-snicas so refletidas entre os diferentes tecidos para o transdutor e convertidas em energia eltrica na forma de sinais audveis ou visuais. A unidade sensvel a uma profundidade de 10 a 20 cm. Um sinal sonoro ou luminoso emiti-

Figura 2.2. Locale ngulo de aplicao direita (8)

do mdulo transreceptor do aparelho, em vista pstero-anterior (AI e lateral

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do pela unidade quando uma faixa de estrutura fluida registrada. O ultra-som scan-A considerado um mtodo de gestao satisfatrio em caprinos com idade fetal entre 50 a 120 dias conforme descrito por Wani (1981). Contudo, Haibel (1990) descreve uma acurcia de, no mnimo, 95% quando o diagnstico feito entre 60 e 80 dias aps a cobrio ou inseminao artificial. importante considerar que a bexiga urinria repleta, a hidrometra e a piometra podem levar a resultados falsos positivos. Por outro lado, resultado falso negativo pode ocorrer no incio ou final da gestao, devido reduzida quantidade de fluido uterino em relao ao volume de tecido feta!. A viabilidade fetal e o nmero de fetos no so detectveis por esse mtodo. Ressalta-se que a tcnica pode ser muito til em reas onde a eletricidade no disponvel. ~ Efeito Doppler O princpio envolvido no efeito Doppler para a confirmao diagnstica de gestao o registro de movimentos como um indicador da gestao tais como: a pulsao sangunea, o batimento cardaco e os movimentos fetais. A tcnica foi pela primeira vez usada por Callahan et aI. (1964) para diagnstico de gestao na espcie humana.
Doppler Cutneo

essa tcnica apresenta uma eficinciamuito baixa durante o primeiro tero da gestao (Lindahl, 1969).
Doppler Retal

A tcnica Doppler retal superior cutnea no diagnstico de gestao, pois a viabilidade fetal pode ser avaliada. Entretanto, a acurcia do diagnstico diferencial entre a gestao, simples e mltipla, no elevada. Por outro lado, a tcnica Doppler retal pode ser utilizada mais precocemente para o diagnstico de gestao quando comparada tcnica de ultra-som scan-A (lshwar, 1995). ~ Tcnica Ultra-snica- Scan-B At recentemente no existia uma tcnica que permitisse determinar satisfatoriamente o nmero de fetos na espcie caprina. O ultra-som scan-B foi desenvolvido na Austrlia e oferece acurcia, rapidez, segurana e praticidade para diagnosticar a gestao e determinar o nmero de fetos. O mtodo produz uma imagem bidimensional e mvel do tero, fluidos fetais, feto, batimento cardaco fetal e dos placentomas, a qual pode ser fotografada. O exame pode ser realizado sob a luz solar ou sob uma luz tnue permitindo uma visibilidade tima (lshwar, 1995). A cabra deve estar em posio de estao e a parte correspondente cabea do transdutor colocada contra a pele, aps a tricotomia na regio inguinal cruzando o abdmen cranialmente. A melhor acurcia alcanada quando o exame feito entre 40 e 75 dias aps a cobrio ou inseminao artificial. Neste perodo, o tero gestante, que se encontra em distenso, ocupa principalmente o lado direito do abdmen. O mtodo, quando usado por via trans-abdominal, permite uma boa acurcia a partir do 50Qdia aps a cobrio ou inseminao artificial. No entanto, Haibel (1990) demonstrou que o diagnstico de gestao possvel entre o 25Qe o 30Qdia aps

Semelhantemente ao scan-A o transdutor deve ser posicionado no flanco direito, cranialmente e ligeiramente ao lado do bere, com a cabra em posio de estao. Os pelos da rea devem ser, preferencialmente, retirados objetivando favorecer um melhor contato. Agentes de ligao, tais como gel para ultra-som ou leo vegetal, devem ser aplicados no transdutor para eliminar espaos vazios entre a pele e a parte correspondente cabea do transdutor. A acurcia da tcnica de, aproximadamente, 100% durante a segunda metade da gestao (Ishwar, 1995). Contudo, 18

a cobrio ou inseminao artificial, desde que se use a via transreta1. Para tanto, o reto deve ser esvaziado reduzindo-se a possibilidade das fezes envolverem o transdutor dificultando, por conseguinte, o contato deste com a parede do reto e levando a obteno de uma imagem de m qualidade. Otransdutor deve ser lubrificado e colocado no reto mediante movimentos delicados e rotativos. O feto e o seu batimento cardaco so, geralmente, perceptveis a partir do 25Qdia de gestao. A viabilidade fetal pode ser avaliada pelo registro dos movimentos e batimentos cardacos fetais. Os placentomas podem ser visualizados a partir do 26Qdia da gestao. A possibilidade e a acurcia da determinao do nmero de fetos com o uso da ultrasonografia em tempo real uma vantagem sobre as demais tcnicas ultra-snicas. O perodo mais seguro para contagem dos fetos entre 45 e 90 dias de gestao, uma vez que a partir dos 90 dias os fetos estaro muito desenvolvidos para serem diferenciados um dos outros (Dawsonetal., 1994). Umaoutravantagem do ultra-som em tempo real que esse permite diferenciar com segurana a gesta-

o da hidrometra, da piometra e da mumificao feta! (Haibel, 1990). Nos dois primeiros casos, os placentomas esto ausentes e o tero aparece distendido com um fluido ecognico na hidrometra (Figura 2.3), alm de um fluido cinza-esbranquiado na piometra. A mumificao fetal caracterizada pela ausncia de fluido e a presena de uma imagem densa, hiperecognica. A idade fetal pode ser determinada entre 40 e 100 dias de gestao pela mensurao da largura da cabea, o que torna a tcnica valiosa na predio do provvel perodo do parto quando a data da cobrio ou inseminao artificial no conhecida (Dawson et aI., 1994). A ultra-sonografia em tempo real para o diagnstico de gestao na espcie caprina pode ser fcil e rapidamente dominada, permitindo que um profissional qualificado e com boa experincia obtenha uma acurcia no diagnstico da ordem de 90% a 100%. O diagnstico falso positivo raro e pode ser devido morte embrionria precoce com absoro fetal, aborto no observado ou erro no registro da bexiga como se fosse o tero (Bruckell, 1988). O diagnstico falso negati-

Figura 2.3. Imagens de gestao

(A)e hidrometra (8) obtidas atravs do mtodo de ultra-som scan-8.

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