Disciplina Bioqumica

Professora Luciane Belmonte Pereira

1. Definio de Metabolismo; 2. Catabolismo Anabolismo; 3. 4. 5. Reaes Redox; Enzimas desidrogenases; Coenzimas FAD e NAD+; X

6. 7.

Respirao celular; Acoplamento de Ciclo de Krebs; Cadeia respiratria; Fosforilao

energia; 8. 9. 10.

METABOLISMO CELULAR
o somatrio de todas as transformaes da matria e da energia (reaes qumicas) que ocorrem em determinada clula ou As reaes qumicas organismo no ocorrem isoladamente nas clulas, mas esto organizadas em rotas, onde o produto de uma reao serve como substrato da reao subsequente; O precursor convertido por meio de uma srie de intermedirios denominados metablitos; As rotas se interrelacionam, formando uma rede multidimensional de reaes

GLICLISE

 de todas as vias metablicas que interconvertem precursores, metablitos e produtos de baixo peso molecular.

Metabolismo intermedirio refere-se s atividades combinadas

Existem vias:
1) Lineares (Ex. gliclise: 1 glicose 2 piruvatos); 2) Ramificadas a partir de um nico precursor, conduzem a diferentes produtos finais teis ou convertem diferentes precursores em um nico produto final; 3) Cclicas um precursor da via regenerado por meio de uma srie de reaes em que um segundo precursor convertido em produto (Ex. oxaloacetato renenerado no ciclo de Krebs). CATABOLIS MO CONVERGE NTE

ANABOLIS MO

Metabolismo = Catabolismo + Anabolismo

CATABOLISMO
Os processos vitais requerem que as molculas consumidas como nutrientes sejam decompostas para se extrair a sua energia e tambm para que sejam fornecidos os blocos de construo para a criao de novas molculas;

 Para manter um estado estacionrio dinmico, os organismos vivos precisam de uma fonte de energia constante para organizar o seu interior frente s variaes externas;

O processo de extrao de energia ocorre em uma srie de vrias etapas pequenas, nas quais os doadores de eltrons transferem energia aos aceptores de eltrons. Essas REAES DE OXIDORREDUO so fundamentais para a extrao de energia de molculas como a

 Reaes de oxidorreduo, tambm referidas como reaes redox, so aquelas em que os eltrons so transferidos de um doador a um aceptor. A oxidao a perda de eltrons e a reduo o ganho de eltrons.
A substncia que perde eltrons (o doador; a molcula que oxidada) chamada agente redutor!

REAES DE OXIDORREDUO

Oxidao = perda de e Reduo = ganho A substncia que ganha eltrons (o de e receptor; a molcula
que reduzida)

 EXEMPLO PRTICO DE REAES REDOX:

 A transferncia de grupos fosfato e de eltrons so eventos centrais no metabolismo celular; Os eltrons movem-se de diferentes intermedirios metablicos para carreadores especializados, por meio de reaes enzimticas;

COENZIM AS:

 Os carreadores doam seus eltrons, atravs de reaes enzimticas, a receptores que apresentam maior eletroafinidade, liberando energia;

Enzimas oxidorredutases ou desidrogenases so holoenzimas que necessitam de NAD+ (NADP+) ou FAD (FMN) como coenzimas!

TRANSPORTADORES DE ELTRONS
NAD+ (oxidado)/NADH (reduzido): Nicotinamida adenina dinucleotdeo

FADH (oxidado)/FADH2 (reduzido): Flavina adenina dinucleotdeo

NAD (NADP )
+ +

on hidreto (:H-): possui 2 eltrons e 1 prton

O NADP+ difere do NAD+ por ter um grupo fosfato adicional!!!

 As coenzimas NAD+ ou NADP+ movem-se facilmente de uma enzima para a outra, atuando como um transportador hidrossolvel de eltrons de um

medida que uma molcula de substrato sofre oxidao (desidrogenao), liberando dois tomos de hidrognio, a forma oxidada (NAD+ ou NADP+) recebe um on hidreto (:H-, o equivalente a um prton e dois eltrons), sendo transformada na sua forma reduzida (NADH ou NADPH). O segundo prton removido do substrato liberado no solvente aquoso (NADH + H);

 As coenzimas NAD+ apresentam funes especializadas:

ou NADP+ metablicas
em a

NAD+ atua OXIDAES, geralmente associadas processos CATABLICOS. NADP+ atua REDUES, geralmente associadas processos ANABLICOS.

em a

FAD (FMN)

Na maioria das flavoprotenas a coenzima encontra-se FORTEMENTE ligada, e em algumas, a ligao covalente.

 Como as flavoprotenas podem participar da transferncia tanto de um quanto de dois eltrons, a diversidade de reaes nas quais essa classe de protenas est envolvida maior que a das desidrogenases ligadas s coenzimas NAD+ e
+

Estados de oxidao do carbono nas biomolculas

Os tomos de C encontrados nos compostos bioqumicos podem estar em cinco diferentes estados de oxidao, dependendo dos elementos com que o tomo de C compartilha os eltrons.

 As vias catablicas so as sequncias de reaes oxidativas que resultam na transferncia de eltrons, por meio de uma srie de transportadores, das molculas combustveis at o oxignio. A GRANDE AFINIDADE POR ELTRONS QUE O O2 APRESENTA TORNA ALTAMENTE EXERGNICO ESSE PROCESSO DE TRANSFERNCIA QUE FORNECE A ENERGIA QUE IMPULSIONA A SNTESE DE ATP OBJETIVO CENTRAL DO CATABOLISMO!!!

RESPIRAO CELULAR
Fase aerbica do catabolismo 3 estgios!

Os 3 estgios do catabolismo

1 Estgio: as molculas dos combustveis orgnicos (glicose, cidos graxos e aminocidos) so oxidadas para liberar fragmentos de 2 tomos de carbono na forma de um grupo acetila do acetil-coenzima A (Acetil-CoA); (

Os 3 estgios do catabolismo

2 Estgio: esses grupos acetila so introduzidos no ciclo do cido ctrico, o qual os oxida enzimaticamente at CO2. A energia liberada pela oxidao conservada nos transportadores eltrons reduzidos: NADH e FADH2; de

Os 3 estgios do catabolismo

3 Estgio: os equivalentes reduzidos so oxidados, desfazendo-se de prtons (H+) e eltrons; Os eltrons so conduzidos ao longo de uma cadeia de molculas transportadoras de eltrons, conhecida como Cadeia Respiratria, at o O2

Durante este processo de transferncia de eltrons atravs da cadeia respiratria, uma grande quantidade de energia liberada e conservada na forma de ATP, atravs do processo chamado fosforilao oxidativa.

Ento, como produzimos a molcula ATP?

FOSFORILAO OXIDATIVA Ocorre nas mitocndrias; FOSFORILAO AO NVEL DE SUBSTRATO Ocorre geralmente na ausncia de oxignio e o grupo fosfato transferido para o ADP provm de um

FOSFORILAO AO NVEL DE SUBSTRATO

Em alguns casos, a energia livre da hidrlise dos organofosfatos mais alta que a do ATP e por isso pode impulsionar a fosforilao do ADP em ATP.

1 2

on fosfato (Pi)

 HIDRLISE DO FOSFOENOLPIRUVATO (PEP):

Os produtos HIDRLISE DO 1,3 - BIFOSFOGLICERATO: mais so estveis que os 3 reagentes!

1 2

Como a produo e o uso da energia so acoplados?

Uma questo muito importante do metabolismo : Como a energia liberada pela oxidao dos nutrientes capturada e utilizada? Essa energia deve ser transformada em uma forma de energia qumica de fcil acesso ATP!

A energia livre de Gibbs (G) prediz o sentido em que uma reao ocorrer espontaneamente.
Quando uma reao ocorre com LIBERAO de energia livre, ou seja, quando o sistema se transforma de maneira a possuir menos energia livre, a variao de energia livre (G) apresenta valor NEGATIVO REAO uma reao qumica Quando EXERGNICA. LIBERA CALOR REAO EXOTRMICA, e o contedo de calor dos produtos menor que o dos reagentes e H possui valor NEGATIVO. Quando os produtos de uma reao so menos complexos e mais desordenados que os reagentes, a reao ocorre com

G < 0 NEGATIVA forma direta G = 0 equilbrio ZERO

Ocorre de Est no Ocorre de

G > 0 POSITIVA forma inversa e

n nt po !!! Es a

O produto (B) apresenta MENOR energia livre que o reagente (A).

O produto (A) apresenta MAIOR energia livre que o reagente (B).

RELEMBRANDO:

As enzimas aumentam a velocidade das reaes qumicas, mas NO alteram o equilbrio termodinmico da reao (o sentido)!!!

As enzimas NO alteram a energia livre do sistema e, assim sendo, NO ALTERAM O EQUILBRIO TERMODINMICO DA REAO, ou seja, a reao obedece a mudanas de energia livre do sistema sendo realizada caso seja energeticamente possvel.

ATP: Transportador de energia!

os produt Os is so ma que is estve os ! gentes ea

A energia liberada na hidrlise do ATP NO armazenada!!!

ELETRFILO: NUCLEFILO:

 NUCLEFILO: um tomo rico em eltrons;

ELETRFILO: um tomo pobre em eltrons.

GASTO DE ENERGIA!

Exemplo de acoplamento de energia:

Exemplo de acoplamento de energia:

1 estgio da Respirao Celular:

Nos organismos aerbicos, a glicose e outros acares, os cidos graxos e a maioria dos aminocidos so oxidados, em ltima instncia, a CO2 e H2O atravs do ciclo de Krebs. Entretanto, antes que possam entrar no ciclo, os esqueletos carbnicos precisam ser degradados at o grupo acetil do acetil-coenzima A (Acetil-CoA) forma na qual o ciclo aceita a maior parte do seu combustvel.

O catabolismo passo a passo de carboidratos, gorduras e aminocidos ser estudado na sequncia da disciplina!

*** No caso da via de degradao da glicose, o piruvato (produto final da gliclise) deve ser descarboxilado e oxidado para liberar acetil-CoA e CO2. I. O piruvato entra na mitocndria associado ao transportador do piruvato; II. Posteriormente, sofre descarboxilao oxidativa por ao de um complexo multienzimtico associado REAO membrana interna da IRREVERSVEL!!! mitocndria.
Complexo da piruvato desidrogenase

5 coenzimas do complexo:
1) Tiamina pirofosfato (TPP) 2) FAD 3) CoA-SH 4) NAD 5) Lipoato

3 enzimas do complexo:

 Grupos acila ligam-se covalentemente ao grupo SH (tiol) da Coenzima A, formando tiosteres. Devido a sua energia livre de hidrlise relativamente alta, os tiosteres tm um alto potencial de transferncia de grupos acila, doando esses grupos a uma variedade de molculas receptoras.

Coenzima A (CoA-SH)

Acetil-CoA = Acetato ativado

O grupo acila ligado CoA pode, assim, ser visto como um estado ativado para a transferncia do mesmo grupo!!!

*** Forma-se o Acetil-CoA que entra no Ciclo de Krebs...

2 estgio da Respirao Celular:

Ciclo do cido Ctrico ou Ciclo de Krebs ou Ciclo dos cidos Tricarboxlicos

O Ciclo de Krebs o centro do metabolismo energtico na maioria das clulas aerbicas; Representa a 2 fase da respirao celular, sendo responsvel pela oxidao total de unidades carbnicas (AcetilCoA) C02, produo de equivalentes redutores (NADH e FADH ) e ATP;

Mitocndria
e rm e Imp vel
Cadeia respiratria Fosforilao oxidativa

Ciclo de Krebs

Intermedirios do Ciclo *** Uma molcula de de Krebs 2 carbonos oxaloacetato

empregada para formar citrato, mas uma molcula de oxaloacetato REGENERADA VIA 4 carbonos CCLICA! 6 carbonos

6 carbonos

4 carbonos 4 carbonos

5 carbonos

4 carbonos 4 carbonos

os ss pa 8 do e od icl s: C eb Kr

Reaes 1, 3 e 4 so: IRREVERSVEIS

1. Formao do CITRATO
1 Passo: condensao do Acetil-CoA + oxaloacetato citrato (enzima = citrato sintase)

__ [

REAO IRREVERSVEL!!!

2 Passo: desidratao seguida de hidratao do citrato isocitrato (enzima = aconitase)

2. Formao do ISOCITRATO

3. Formao do CETOGLUTARATO 3 Passo: descarboxilao oxidativa do isocitrato

-cetoglutarato (enzima = isocitrato desidrogenase)
REAO Neste passo ocorre a sada do 1 CO2 e formao IRREVERSVEL!!! do 1 NADH

oxidativa do cetoglutarato succinil-CoA (enzima = complexo da -cetoglutarato desidrogenase) Neste passo ocorre a sada do 2 CO2 e formao do 2 NADH

4. Formao do 4 SUCCINIL-CoA Passo: descarboxilao

Succinil-CoA = Succinato ativado

REAO IRREVERSVEL!!!

5 do substrato do succinil-CoA succinato (enzima = succinil-CoA sintetase); Neste passo ocorre a formao de GTP (ATP) Fosforilao ao nvel do substrato o Cadeia la o respiratria (Fosforilao oxidativa); sfori l d
Fo nve to ao bstra su

5. Formao do SUCCINATO Passo: fosforilao ao nvel

__
Nucleosdeo difosfato quinase

6. Formao do FUMARATO 6 Passo: desidrogenao do succinato

fumarato (enzima = succinato desidrogenase) Anlogo do Neste passo ocorre a formao succinato e inibidor de competitivo da succinato FADH2
desidrogenase bloqueador do ciclo de Krebs

Nos eucariotos, a succinato desidrogenase est firmemente ligada membrana mitocondrial interna (cadeia transportadora de

7 Passo: hidratao do fumarato malato (enzima = fumarase)

7. Formao do MALATO

8 Passo: oxidao do malato oxaloacetato (enzima = malato desidrogenase) Neste passo ocorre a formao do 3 NADH e a regenerao do oxaloacetato, o qual pode condensar-se a uma nova molcula de acetil-CoA, dando continuidade ao ciclo.

8. Formao do OXALOACETATO

Produtos do ciclo de Krebs

3 NADH 1 FADH2 1 (ATP) GTP

2 CO2

Rendimento energtico do ciclo de Krebs/volta Embora o ciclo de Krebs diretamente gere apenas uma
molcula de ATP por volta, os 4 passos de oxidao do ciclo fornecem um grande fluxo de eltrons para a cadeia respiratria, atravs de NADH e FADH2, e esta leva formao de um grande nmero de molculas de ATP durante a fosforilao oxidativa. Cadeia respiratria/Fosforilao oxidativa: A passagem de dois eltrons do NADH para o oxignio potencia a formao de 2,5 molculas de ATP (ou 3); A passagem de dois eltrons do FADH2 para o oxignio potencia a formao de 1,5 3 NADH X 2,5 = molculas de ATP (ou 2); 7,5 ATPs
1 FADH2 X 1,5 = 1,5 ATPs

10 ATPs/volta

O ciclo de Krebs uma VIA ANFIBLICA

VIA ANFIBLICA: serve tanto a processos catablicos quanto anablicos.

O ciclo de Krebs alm de funcionar no catabolismo oxidativo de carboidratos, cidos graxos e aminocidos, tambm fornece precursores para

 medida que os intermedirios do ciclo de Krebs so removidos para servirem como precurssores biossinteticos, eles so repostos por meio das REAES ANAPLERTICAS (reaes de reposio/preenchimento) equilbrio dinmico!

Regulao do ciclo de Krebs

O controle do ciclo de Krebs exercido em trs pontos, ou seja, trs enzimas dentro do ciclo so regulatrias: 1)citrato sintase 2)isocitrato desidrogenase 3)complexo da cetoglutarato desidrogenase Tambm h um controle de acesso ao ciclo pelo

Regulao do ciclo de Krebs ATP e NADH so

compostos abundantes quando uma clula tem uma boa quantidade de energia disponvel, logo, no surpreendente que algumas destas enzimas regulatrias sejam INIBIDAS por estas molculas uma vez que o ciclo de Krebs faz parte de uma via que LIBERA energia.

Por outro lado, AMP, ADP, NAD+ e CoA, ATIVAM estas enzimas

Regulao do ciclo de Krebs

A PDH INIBIDA por altos nveis de acetilCoA.

(Quando as gorduras so abundantes e esto sendo degradadas para gerar energia, seu produto Acetil-CoA e, se a Acetil-CoA for abundante, no h motivo para enviar carboidratos para o ciclo de Krebs A PDH inibida e, a Acetil-

Regulao do ciclo de Krebs

A PDH, em mamferos, tambm ATIVADA por desfosforilao (junto ao complexo de 3 enzimas e 5 coenzimas existem outras duas enzimas: PDH quinase fosforila e PDH fosfatase desfosforila). A enzima PDH quinase ATIVADA por ATP; A enzima PDH

Regulao do ciclo de Krebs

Os ons Ca2+, que nos msculos dos vertebrados so o sinal para contrao e o concomitante aumento na demanda por ATP, ATIVAM o ciclo.

3 estgio da Respirao Celular:

Cadeia respiratria Fosforilao oxidativa

As nicas molculas que atravessam a membrana mitocondrial interna so aquelas que o fazem atravs de TRANSPORTADORES ESPECFICOS!

adeia respiratria

A cadeia respiratria consiste de uma srie de transportadores de eltrons localizados na membrana mitocondrial interna e que atuam sequencialmente objetivando a reduo do O2 a H2O com eltrons doados pelo NADH e FADH2. Os eltrons fluem dos catablitos intermedirios ao O2, produzindo energia para a gerao do ATP.

Complexos Enzimticos:
I- NADH desidrogenase: transfere eltrons
ubiquinona (NADH Q).

II- Succinato desidrogenase: transfere eltrons

ubiquinona (succinato Q). Ciclo de III- Ubiquinona-citocromo c oxidorredutase: Krebs transfere eltrons da ubiquinol ao citocromo c oxidado (QH2 citocromo c oxidado).

IV- Citocromo oxidase: transfere eltrons do

citocromo c reduzido ao O2, reduzindo-o a H2O (citocromo

 Alm do NAD+ e do FAD, trs outros tipos de molculas transportadoras de eltrons funcionam na cadeia respiratria:
1) Ubiquinona (Coenzima Q, CoQ ou Q): pode receber 1 ou 2 eltrons. uma molcula pequena e hidrofbica que se difunde livremente na camada lipdica da membrana.

 Alm do NAD+ e do FAD, trs outros tipos de molculas transportadoras de eltrons funcionam na cadeia respiratria:

2) Citocromos (Cyt): participam da transferncia de 1 eltron. So protenas que contm o grupo prosttico heme que contm Fe. As mitocndrias contm 3 classes de citocromos a, b e c;

* O citocromo c uma protena solvel que se associa com a superfcie externa da membrana interna da mitocndria por meio de interaes

 Alm do NAD+ e do FAD, trs outros tipos de molculas transportadoras de eltrons funcionam na cadeia respiratria:
3) Protenas que contm ferro-enxofre (FeS): participam da transferncia de 1 eltron. O Fe est presente no no grupo heme, mas associado a tomos de enxofre (S) inorgnico ou a tomos de S orgnicos (provenientes de cistena), ou ambos.

 Os complexos I e II catalisam a transferncia de eltrons para a ubiquinona (Q) a partir de dois doadores de eltrons diferentes: NADH (complexo I) e succinato (complexo III);

 O ubiquinol (QH2, a forma totalmente reduzida) difundese na membrana do complexo I ou II at o Complexo III onde oxidado a Q; O complexo III transporta eltrons da ubiquinona at o citocromo c o qual move-se at o complexo IV; O complexo IV completa a sequncia transferindo eltrons do citocromo c para o O2 produzindo gua.

 Para cada par de eltrons transferidos para o oxignio a partir de NADH, 4H+ so bombeados da matriz para o espao intermembranoso pelo complexo I, 4H+ pelo complexo III e 2H+ pelo complexo IV; Os complexos I, III e IV so bombas de prtons (transferncia endergnica de H+ contra o gradiente de concentrao utilizam a energia proveniente do fluxo de

A transferncia de eltrons ao longo da cadeia respiratria energeticamente favorecida, pois o NADH um forte doador de eltrons e o oxignio um vido aceptor de eltrons! Os pares redox diferem em sua tendncia de perder/ganhar eltrons.

Quanto mais POSITIVO for o potencial de reduo-padro de um par redox, MAIOR ser a tendncia da forma OXIDANTE

osforilao oxidativa
Processo responsvel pela sntese de ATP (ADP + Pi) direcionada atravs da transferncia de eltrons ao O2; responsvel pela maior parte da sntese de ATP nos COMO O organismos aerbicos;GRADIENTE

1948 - As mitocndrias so os stios da fosforilao oxidativa em eucariotos!

DE CONCENTRAO DE PRTONS TRANSFORMADO EM ATP? 1961 Modelo

quimiosmtico!

Modelo quimiosmtico

Potencial qumico: pH CIDO Potencial eltrico: Positivo

O potencial eletroqumico dirige a sntese de ATP.

A hiptese quimiosmtica prope prtons que, aps os sido eles sentido de terem

transferidos para o espao intermembranoso, mitocondrial do seu no podem reentrar na matriz gradiente a

concentrao (movimento favor) passando atravs de um canal (Fo) na molcula de ATP sintase (complexo V), acoplando o fluxo de

ATP sintase (Complexo FOF1 ou Complexo V)

Fo: protena integral de membrana que constitui o poro de prtons. Possui trs unidades: a, b e c. F1: protena perifrica de membrana formada por 9 subunidades 33. Cada uma das subunidades apresenta um sitio cataltico para a sntese de ATP.

Catlise Mecanismo de catlise em que os trs stios ROTACIONAL

ativos de F1 giram catalisando a sntese de ATP; H 3 stios para o substrato na ATP sintase e 3 possveis estados conformacionais: 1) aberto (O); 2) ligao fraca (L) com baixa afinidade pelo substrato e que no cataliticamente ativo; As mudanas conformacionais 3) ligao forte (T) que mecanismo so fundamentais para esse cataliticamente ativo. dirigidas pela passagem dos prtons atravs da poro Fo da ATP sintase; Um rotao completa da ATP sintase libera 3 ATPs;

(ATP produzido por tomo de Razo oxignio reduzido) P/OO bombeamento de 4 prtons so

requeridos para a sntese de 1 ATP

NADH bombeia 10 H+ 10 4 = 2,5 ATPs FADH2 bombeia 6 H+ 6 4 = 1,5 ATPs Cadeia respiratria/Fosforilao oxidativa: A passagem de dois eltrons do NADH para o oxignio potencia a formao de 2,5 molculas de ATP (ou 3); A passagem de dois eltrons do FADH2 para o oxignio potencia a formao de 1,5

 O ADP e o Pi so transportados especificamente para o interior da matriz mitocondrial medida que o ATP recm-sintetizado transportado para fora.

A transferncia de eltrons e a sntese de ATP so OBRIGATORIAMENTE acopladas!

Inibidores da cadeia respiratria e da fosforilao oxidativa Esses agentes inibem o transporte de eltrons
bloqueando a sntese de ATP ou o contrrio;

* Rotenona: um composto vegetal comumente usado como inseticida; Inibe Complexo I; * Cianeto: Inibe Complexo IV; * Oligomicina: Bloqueia ATP sintase.

Desacopladores da cadeia respiratria e da oxidativa Esses agentes fosforilaoo fluxo de eltrons e o permitem
consumo de substratos e oxignio, permitem que o ATP seja formado;
* Dinitrofenol (DNP): conduz prtons matriz fora dos canais da ATP sintase, liberando calor;

mas

no

Protena desacopladora TERMOGENINA interna Na membrana

das mitocndrias do tecido adiposo marrom (grande presena de mitocndrias) existe a protena termogenina (protena desacopladora), que proporciona uma via para os prtons retornarem a matriz sem passar pela ATP sintase a energia de oxidao no conservada em ATP mas dissipada em calor, que contribui para manuteno da temperatura corporal.

Maioria dos mamferos recm-

Hibernao

Ufaaaa.....terminou a aula! *-*

Referncias bibliogrficas:

Campbell, M.K.; Farrell, S.O. (2007). Bioqumica. 5 Edio, Editora Thomson Learning, So Paulo, 845p. Champe, P.C.; Harvey, R.A.; Ferrier, D.S. (2009). Bioqumica Ilustrada. 4 Edio, Editora Artmed, Porto Alegre, 528p. Nelson, D.L.; Cox, M.M. (2006). Lehninger: Princpios de Bioqumica. 4 Edio, Editora Sarvier, So Paulo, 1202p.