Celulas Madre y Reprogramacion Celular2013

CLONACIN, CLULAS MADRE Y REPROGRAMACIN CELULAR
JUSTO AZNAR DIRECTOR DEL INSTITUTO DE CIENCIAS DE LA VIDA NOVIEMBRE 2011 1
CLONACIN
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DEFINICIN DE CLONACIN
Por clonacin se entiende: Producir mltiples copias de una secuencia de ADN mediante tcnicas de ADN recombinante Producir una clula genticamente idntica a partir de otra clula Obtener una poblacin celular con idntico genotipo Producir un ser biolgico genticamente idntico a otro a partir del material gentico de una clula de la persona o animal que se va a clonar
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EN QUE CONSISTE LA CLONACIN DE EMBRIONES REALIZADA POR TRANSFERENCIA NUCLEAR SOMTICA?
TRANSFERENCIA NUCLEAR SOMTICA

Ovocito
Clula adulta
Enucleacin
Enucleacin
TRANSFERENCIA NUCLEAR
Cigoto hbrido
ACTIVACIN
Clulas madre embrionarias Masa granulosa interna
Embrin de dos clulas
Resto embrionario
Embrin de 64 a 200 clulas (blastocisto)
CLONACIN REPRODUCTIVA Y TERAPUTICA

Implantacin en el tero de una mujer embarazo nio
Clonacin reproductiva Clonacin teraputica Blastocisto masa granulosa interna cultivo Clulas de: Hgado Corazn Msculo Nerviosas Sangre etc.
obtencin de clulas madre
resto del embrin que se destruye

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ES ADECUADO EL TRMINO CLONACIN TERAPUTICA? NO SE DEBERA LLAMAR CLONACIN EXPERIMENTAL?

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CLONACIN ANIMAL
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CLONACIN ANIMAL
RESUMEN HISTRICO
Heidi Ledford. Nature 445; 800-802, 2007
CLONACIN ANIMAL
Clonacin de lobos
Investigadores de la Universidad de Sel publican en marzo de 2007 la clonacin de dos lobos, Snuwolf y Snuwolffy
M.K. Kim y col. Cloning and Stem Cells 9; 130-137, 2007
Un equipo de la propia Universidad de Sel confirma, el 27 de abril de 2007, que los lobos clonados son genuinos clones
Nature / DOI: 10.1038 / News 070430- 4. 1 de mayo de 2007 10 )
CLONACIN ANIMAL
Clonacin de blastocistos de primates
El equipo de Shoukhrat Mitalipov ha conseguido por primera vez en el mundo clonar blastocistos de primates no humanos a partir de fibroblastos de piel de macacus rhesus Obtuvieron 304 ovocitos a partir de 14 hembras de esta misma raza de monos de los que se derivaron 21 blastocistos y 2 lneas de clulas madre embrionarias, la CRES 1 y la CRES 2 Pero hasta esa fecha no se haba logrado clonar un primate vivo
Eficiencia 0.7%
J.A. Byrne y col. Nature 450; 497-502, 2007
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CLONACIN ANIMAL
En un estudio ms reciente del mismo equipo en el que tambin utilizan fibroblastos de piel de macacus rhesus hembras consiguen derivar dos nuevas lneas de clulas madre embrionarias, la CRES 3 y CRES 4 Destaca el hecho de que han utilizado menos de diez ovocitos obtenidos tras una nica estimulacin ovrica, es decir consiguen mejorar sustancialmente la eficiencia de la tcnica
M S Sparman Stem Cells 27; 1255-1264, 2009 12
CLONACIN ANIMAL
En este mismo trabajo se describe que han conseguido 5 embarazos despus de transferir 67 embriones a 10 hembras de los cuales solamente 1 progres hasta el 81 da de la gestacin Los estudios realizados en el feto obtenido muestran un pobre desarrollo de la placenta y menos vellosidades coriales que los controles. Adems en el tejido fetal faltan componentes del ectodermo. Todo ello sugiere un insuficiente desarrollo de los componentes placentarios, lo que podra justificar la deficiente evolucin de los fetos obtenidos
CLONACIN ANIMAL
Clonacin de blastocistos de primates. Inters biomdico de esta tcnica
La transferencia nuclear somtica realizada en primates es un atractivo modelo experimental por su indudable similitud con el modelo humano, al cual podra sustituir con ventaja en muchas ocasiones Ello hace que los beneficios de esta tcnica sea de gran inters biomdico
CLONACIN ANIMAL
CONCLUSIN
Aunque todava no se ha conseguido la clonacin de un primate no humano vivo la reciente aportacin del equipo de Mitalipov sugiere que pueda conseguirse en un futuro prximo, lo que abrira la puerta a que tambin pudiera lograrse en humanos, con las dificultades ticas que ello conllevara
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TIENEN PROBLEMAS LAS ANIMALES CLONADOS? Prematuro envejecimiento Desarrollo de malformaciones congnitas Padecimiento de distintas patologas: reuma, ceguera, sordera, defectos musculares, diabetes y procesos neurodegenerativos
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TIENE PROBLEMAS LA TCNICA?

Baja eficiencia
Para la obtencin de la oveja Dolly se realizaron 270 intentos de clonacin Para el galgo afgano se produjeron 1095 embriones, que se transfirieron a 123 perras, llegando a trmino 2 y sobreviviendo 1 La eficiencia de la clonacin de primates es del 0,7% aproximadamente
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CLONACIN HUMANA
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INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

1. Cibelli JB. J Regener Med 2; 25, 20011
2. Chen Y. Cell Res 13; 251, 2003

3. Guangxin L. Chinese Sci Bull 48; 1240, 20031 4. Hwang WS et al. Science 303; 1669, 2004
5. Hwang WS et al. Science 308; 1777, 2005

6. Stojkovic M et al. Reprod Bio Med Online 11; 226, 20051 7. Zavos P. et al. Archives of Andrology 52; 243, 2006
No consiguieron obtener clulas madre de los blastocistos clonados
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SE HABA CONSEGUIDO HASTA EL AO 2007 LA CLONACIN HUMANA? No parece que hasta este momento existiera evidencia de que se hubiera logrado la clonacin de blastocistos humanos de los que se hubieran podido derivar lneas celulares
J. Yu y col. Science 318; 1917-1920, 2006 J. Hanna y col. Science 318; 1920-1923, 2007 T. Kakahashi y col. Cell 131; 861-872, 2007 X Yang y col. Nature Genetics 39; 295-302, 2007 20

Utilizando ovocitos viejos
Se intenta obtener embriones humanos tempranos utilizando ovocitos viejos no tiles para fecundacin in vitro Se encuentran mltiples fallos de desarrollo especialmente la produccin de un elevado nmero de embriones aneuploides
Human Reproduction 22; 52-62, 2007
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Se comparan la eficacia de la clonacin utilizando ovocitos madurados artificialmente y frescos
Dada la dificultad para obtener ovocitos frescos se intenta practicar la transferencia nuclear somtica utilizando ovocitos madurados artificialmente comparando los resultados con ovocitos frescos Con los primeros a partir de 22 ovocitos activados obtienen 13 embriones de dos clulas y solamente dos que evolucionan hasta el estadio de mrula Con los ovocitos frescos a partir de 27 de ellos se obtiene 17 embriones de dos clulas y solamente una mrula
Human Reproduction 22; 1982.1990, 2007
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Eficacia de la clonacin utilizando ovocitos madurados artificialmente
Consiguen la produccin de embriones tempranos utilizando ovocitos madurados artificialmente sobrantes de fecundacin in vitro pero no se desarrollan hasta blastocistos ni se obtienen lneas celulares
RBM Online 16; 684-693, 2008
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Comparacin de resultados obtenidos utilizando ovocitos animales y humanos
Utilizan ovocitos madurados artificialmente sobrantes de fecundacin in vitro para obtener embriones tempranos, comparando ovocitos animales y humanos Comprueban que solamente los humanos consiguen la reprogramacin del ncleo de la clula adulta utilizada para la trasferencia nuclear somtica
Cloning and Stem Cells 11; 213-223, 2009
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Obtencin por primera vez de blastocitos humanos obtenidos por trasferencia nuclear somtica
Sin embargo, en 2008 un equipo de la firma comercial Stemagen Corporation de la Jolla, California pudo obtener blastocistos humanos por transferencia nuclear somtica utilizando clulas adultas de piel y ovocitos de mujeres jvenes (20-24 aos) sobrantes de fecundacin in vitro Tambin obtuvieron blastocistos a partir de un pequeo nmero de ovocitos humanos activados partenogenticamente
Se han obtenido lneas celulares?
AJ French. Stem Cells 26; 485-493, 2008
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SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS?

Obtencin de lneas celulares a partir de embriones humanos de pacientes con una determinada patologa
Se intenta derivar lneas celulares de enfermos con una determinada patologa a partir de embriones clonados Esto no se pudo lograr tras 270 intentos de transferencia nuclear somtica siguiendo la tcnica habitual
Nature 478; 70-75, 2011
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SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES DE PACIENTES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS?

Obtencin de un cigoto hbrido humano del que se pudieron derivar lneas celulares embrionarias humanas
Sin embargo, s que lo consiguieron si al ovocito utilizado no se le extrae el ncleo sino que simplemente se le aade el de la clula somtica adulta, pudiendo el cigoto hbrido as conseguido desarrollarse hasta la fase de blastocisto del que pudieron obtenerse lneas celulares de un paciente diabtico Estas clulas fueron cultivadas durante 6 meses completando ms de 30 pases de cultivo sin que se produjeran anomalas cromosmicas La dificultad tcnica es que las lneas celulares obtenidas eran triploides
Nature 478; 70-75, 2011
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SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES DE PACIENTES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS? Otro grupo de autores evala cual puede ser la tcnica idnea para obtener ovocitos humanos para ser utilizados en la transferencia nuclear somtica En estas experiencias solo consiguen que una mujer entre en el protocolo experimental De ella se obtienen solamente seis ovocitos Y no se consigue transferir eficazmente ninguno de ellos
Cell Stem Cell 7 de octubre 2011 DOI 10.1016/j.stem.2011.08.002 28
SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES DE PACIENTES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS?
Hasta el momento solamente en dos trabajos (AJ French. Stem Cells 26; 485493, 2008 y Nature 478; 70-75, 2011) se ha conseguido la produccin de blastocitos humanos, aunque solamente en el segundo de ellos se han podido derivar lneas celulares
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REFLEXIN TICA SOBRE LA CLONACIN
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HIBRIDACIN
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HIBRIDACIN HOMBRE ANIMAL
JUSTIFICACIN
Sustituir los vulos humanos en el proceso de clonacin
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HIBRIDACIN HOMBRE-ANIMAL TIPOS

Embriones humanos o animales
transgnicos a los que se les ha trasferido algn gen animal Quimera producida a partir de una clula procedente de un embrin animal que se transfiere a un embrin humano
HIBRIDACIN
Transferir el ncleo de una clula humana adulta a un vulo animal enucleado El 98% del material gentico es humano Algunos lo llaman cbrido 33 Fertilizacin de un vulo humano con esperma animal o viceversa. Son verdaderos hbridos
CBRIDOS DE HOMBRE Y ANIMAL

vulo de vaca
vulo ennucleado
Clula adulta
Ncleo clula adulta
Cbrido
Clulas madre hbridas
Masa granulosa interna
Blastocisto
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HIBRIDACIN
Podramos llegar a ser as?
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ES POSIBLE LA PRODUCCIN DE CBRIDOS?

Experiencias recientes parecen demostrar que los factores de activacin del genoma existentes en el ovocito de los animales no son capaces de activar el genoma humano Si esto se confirmara no parece que fuera posible la produccin de cbridos entre humano y animal
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ES POSIBLE LA PRODUCCIN DE CBRIDOS? Robert Lanza de la Advanced Cell Technology ha demostrado que los hbridos entre humano y vaca o entre humano y ratn no se desarrollan ms all de embriones de 16 clulas
Cloning Stem Cells DOI:10.1089/clo.2009.0004;2009 37
HIBRIDACIN HOMBRE-ANIMAL
RIESGOS del uso de cibridos
El uso eventual de clulas troncales extradas de cbridos podra implicar riesgos aun desconocidos para la persona que las recibe por la presencia de material gentico animal procedente de sus mitocondrias Exponer conscientemente a un ser humano a este riesgo es ticamente inaceptable
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CLULAS MADRE
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QUE SON LAS CLULAS MADRE?

Las clulas madre, tambin denominadas clulas troncales, estaminales o en ingls clulas stem son clulas que tienen la capacidad, no solamente de poder cultivarse y reproducirse a si mismas, sino tambin de poder producir clulas adultas de diferente progenie, es decir de diferentes tejidos
I.L. Weissman. New England Journal of Medicine 346; 1576-1583, 2002
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TIPOS DE CLULAS MADRE

Pueden ser: Por su potencialidad Totipotentes Pluripotentes Clulas Multipotentes Unipotentes Pueden dar lugar a
Capaces de formar clulas de todos los linajes del organismo. En los mamferos solamente lo son el cigoto y los primeros blastmeros Capaces de formar clulas de todos los linajes del cuerpo, son las denominadas clulas madre embrionarias. Son las clulas madre adultas capaces de formar distintos tipos de clulas de un mismo linaje, como las clulas madre hematopoyticas
Por su origen
Clulas madre embrionarias Clulas madre de tejidos adultos
Son clulas madre adultas que producen clulas de un solo linaje, como las clulas madre germinales, entre ellas las espermatogonias que generan el esperma
Textos de: R. Jaenisch y R. Young. Cell 132; 567-582, 2008
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CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
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DE DNDE SE PUEDEN OBTENER LAS CLULAS MADRE EMBRIONARIAS?
De embriones: Sobrantes de fecundacin in vitro Producidos por transferencia nuclear somtica (clonacin) Generados por partenognesis a partir de ovocitos animales o humanos
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FUNDAMENTO DE LA POLMICA TICA
Porque para obtenerlas hay que destruir ineludiblemente un embrin humano

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DESARROLLO EMBRIONARIO
//
cigoto
2 clulas embriones de: 3 clulas
blastocisto 4 clulas
ser humano adulto
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POR QU LA UTILIZACIN DE CLULAS MADRE EMBRIONARIAS SUSCITA UNA POLMICA SOCIAL TAN VIVA?
Porque su uso puede ser importante para diversos estudios biomdicos, especialmente para el mejor conocimiento de las primeras etapas del desarrollo del embrin humano Por sus hipotticas aplicaciones teraputicas de cara a la medicina regenerativa y reparadora Por los importantes problemas ticos que su utilizacin conlleva Incluso, por la posibilidad de rentabilizar econmicamente su uso
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EXPERIENCIAS PRECLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
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EXPERIENCIAS PRECLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS
En 2007 se demostr por primera vez que cardiomiocitos generados a partir de clulas madre embrionarias humanas podan mejorar la funcin cardiaca de corazones de rata infartados
M.A. Laflamme y col. Nature Biotechnology 25; 1015 1024, 2007
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EXPERIENCIAS PRECLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS
En 2008 se comprob que a partir de clulas madre embrionarias se podan obtener clulas de msculo esqueltico y que cuando stas se transferan a ratones con distrofia muscular se lograba mejorar la funcin muscular sin que se produjeran teratomas Estas experiencias sugieren la posibilidad de aplicarlas en pacientes con distrofia muscular, particularmente en la distrofia muscular de Duchenne
R Darabi y col. Nature Medicine 14; 134-143, 2008 49
COMPLETAR EXPERIENCIAS PRECLNICAS

completar
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ENSAYOS CLNICOS CON CLULAS MADRE

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110.468 ensayos
174 pases 3.601 ensayos con clulas adultas 11 ensayos con clulas embrionarias humanas
Acceso 6 octubre 2011
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11 ENSAYOS
Ensayo 1 (Recruiting) Safety and Tolerability of Sub-retinal Transplantation of hESC Derived RPE (MA09hRPE) Cells in Patients With Advanced Dry Age Related Macular Degeneration Condition: Dry Age Related Macular Degeneration Intervention: Biological: MA09hRPE Cellular Therapy Ensayo 2 (Recruiting) The Derivation of Human Embryonic Stem Cell Lines From PGD Embryos Condition: Infertility Ensayo 3 (Recruiting) Derivation of New Human Embryonic Stem Cell Lines Lines for Clinical Use Condition: Infertility Ensayo 4 (Recruiting) Sub-retinal Transplantation of hESC Derived RPE(MA09-hRPE)Cells in Patients With Stargardt's Macular Dystrophy Condition: Stargardt's Macular DystrophyI ntervention: Biological: MA09-hRPE Cellular therapy Ensayo 5 (Not yet recruiting) Derivation of New Human Embryonic Stem Cell Lines: Identification of Instructive Factors for Germ Cells Development Condition: Normal Healthy Embryos Ensayo 6 (Active, not recruiting) Development of iPS From Donated Somatic Cells of Patients With Neurological Diseases Condition: Neurodegenerative Disorders
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11 ENSAYOS
Ensayo 7 (Recruiting) The Transendocardial Autologous Cells (hMSC or hBMC) in Ischemic Heart Failure Trial (TAC-HFT) Conditions: Stem Cell Transplantation; Ventricular Dysfunction, Left Interventions: Biological: Autologous human mesenchymal cells (hMSCs); Biological: Autologous human bone marrow cells (hBMCs); Biological: Placebo Ensayo 8 (Recruiting) The Percutaneous Stem Cell Injection Delivery Effects on Neomyogenesis Pilot Study (The POSEIDON-Pilot Study) Condition: Stem Cell Transplantation Interventions: Biological: AutohMSCs; Biological: Allo-hMSCs Ensayo 9 (Recruiting) Stem Cell Educator Therapy in Type 1 Diabetes Condition: Type 1 Diabetes Intervention: Device: Stem Cell Educator Ensayo 10(Recruiting) Evaluation of Circulating Levels of Adult Stem Cells in the Peripheral Blood of Patients With Acute Decompensated Heart Failure and Following Stabilization, in Comparison With Healthy Volunteers Condition: Heart Failure Ensayo 11(Recruiting) Stem Cell Educator Therapy in Type 2 Diabetes Condition: Type 2 Diabetes Intervention: Device: Stem Cell Educator
Ensayo n
Fecha de inicio
Titulo del ensayo
Institucion
Situacion en la que se encuentra
Tipo de clulas utilizado
Objetivo del ensayo
Es un ensayo realizado con celulas madre embrionarias y fin terapeuticos?
Julio 2002
Derivacin de nuevas lneas de clulas madre embrionarias para uso clnico Obtencin de clulas madre de embriones humanos
Hadassah Medical Organization
En desarrollo
Clulas madre embrionarias
Obtencin de lneas celulares a partir de embriones humanos Obtencin de lneas celulares a partir de embriones humanos Reparar el miocardio lesionado Derivar clulas iPS de pacientes con enfermedades neurofsicas Evaluar los niveles circulantes de clulas madre adultas en pacientes cardacos
No
Abril 2004
En desarrollo
No
Agosto 2008
Uso de clulas madre adultas en el infarto de miocardio Obtencin de clulas iPS de pacientes con enfermedades neurolgicas Evaluacin del nmero de clulas madre adultas circulantes en pacientes cardiacos
University of Miami
En desarrollo
Clulas madre adultas autlogas clulas iPS
No
Abril 2009
En desarrollo
No
Diciembre 2009
Monash University
Reclutando pacientes
Clulas madre adultas
No
Marzo 2010
Evaluacin del efecto de clulas madre adultas en la miognesis
National Heart, Lung and Blood Institute
Clulas progenitoras
Valorar el efecto miognico de clulas madre adultas
No
Octubre 2010
Derivacin de nuevas lneas de clulas madre embrionarias Valoracin de las clulas madre adultas en la diabetes tipo I Evaluacin de la seguridad y tolerabilidad del uso de clulas madre embrionarias en pacientes con degeneracin macular Valorar el efecto de clulas madre embrionarias en la enfermedad de Statgadt Valoracin de las clulas madre adultas en la diabetes tipo I
Soroka University Medical Center University of Illinois
Todava no iniciado
Clulas madre embrionarias Sangre de cordn umbilical Clulas madre embrionarias
Estudiar los factores que contribuyen a su desarrollo Valoracin del efecto en pacientes con diabetes tipo I Valorar la seguridad y la tolerabilidad
No
Septiembre 2010
No
Abril 2011
Advanced Cell Technology
10
Abril 2011
Advanced Cell Technology
Tratamiento de la enfermedad de Statgardt Valoracin del efecto en pacientes con diabetes tipo I
11
Julio 2011
University of Illinois
Reclutado pacientes
Sangre de cordn umbilical
No
La revisin de Clinical Trials.gov solamente incluye dos ensayos con clulas madre embrionarias humanas con fin directamente teraputico Por otro lado no incluye otros dos ensayos clnicos realizados con clulas madre embrionarias humanas actualmente en desarrollo, como se evala posteriormente Por lo tanto dicha revisin parece errnea e incompleta
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LTIMOS ENSAYOS CLNICOS REALIZADOS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
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ENSAYOS CLNICOS PROPUESTOS PARA SU APROBACIN POR LA FDA NORTEAMERICANA

La compaa Geron propuso realizar un ensayo clnico con clulas madre embrionarias para el tratamiento de lesiones de la mdula espinal Tambin Novocell ha propuesto generar clulas productoras de insulina a partir de clulas madre embrionarias Igualmente Mytogen quera desarrollar clulas epiteliales pigmentadas de retina para tratar a pacientes con degeneracin macular
Nature Biotechnology 26, 598-599, 2008
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LA FDA DENIEGA LA AUTORIZACIN PARA REALIZAR ESTAS EXPERIENCIAS

Las tres propuestas fueron denegadas por la FDA norteamericana, objetando que antes de pasar a realizar en humanos los ensayos clnicos anteriormente referidos haba que cumplimentar rigurosos controles de seguridad y llevar a cabo las pertinentes experiencias en animales que a su juicio no se haban realizado.
Nature Biotechnology 26, 598-599, 2008
Aunque Geron haba presentado un informe previo de 21.000 pginas

Nature 479; 272-273, 2011
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ENSAYO CLNICO PROPUESTO POR GERON

Sin embargo, el 23 de enero de 2009 la propia FDA a propuesta de la firma Geron aprob la realizacin de un ensayo clnico de fase 1 con clulas madre embrionarias dirigido a tratar pacientes con lesin de mdula espinal El ensayo deba incluir 11 pacientes. En octubre de 2010 se introdujo el primer paciente Geron anunci a mediados de septiembre de este ao 2011 que ya se haba incluido en el ensayo el cuarto paciente Arlene Weintraub
Boston Article 20-07-2011 aweintraub@xconomy.com 61
Nature Biotechnology 2009; 27: 213214
ENSAYO CLNICO PROPUESTO POR GERON

Procedimiento tcnico
Antes del trasplante las clulas madre embrionarias deberan de diferenciarse a clulas progenitoras de oligodendrocitos que posteriormente evolucionaran hasta este tipo celular El objetivo de la tcnica es tratar de reponer la vaina de mielina de las fibras nerviosas
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ENSAYOS CLNICOS PROPUESTOS POR ADVANCED CELL TECHNOLOGY

La firma Advanced Cell Technology ha propuesto recientemente un segundo ensayo clnico utilizando clulas madre embrionarias para a tratar la distrofia macular de Stargardt, una enfermedad progresiva que afecta a los jvenes y que puede llegar a producir ceguera en la edad adulta y un tercero para tratar la degeneracin macular que puede desarrollarse en la edad avanzada
Nature.com Posted by Elie Dolgin on September 22, 2011 63
PRIMER ENSAYO CLNICO CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS PROPUESTO POR ADVANCED CELL TECHNOLOGY REALIZADO FUERA DE ESTADOS UNIDOS
La misma firma Advanced Cell Technology ha propuesto el primer ensayo clnico con clulas madre embrionarias a realizar fuera de Estados Unidos, en el Moorfields Eye Hospital de Londres En l se pretende as mismo tratar 12 enfermos con distrofia macular de Stargardt
Nature.com Spoonful of medicine Posted by Elie Dolgin on September 22, 2011
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POSIBLES ENSAYOS FUTUROS

En el momento actual la misma firma norteamericana est en avanzadas conversaciones con las autoridades sanitarias de Francia, China y otros pases para iniciar nuevos ensayos con clulas madre embrionarias
Nature.com Spoonful of medicine Posted by Elie Dolgin on September 22, 2011
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GERON SUSPENDE SU ENSAYO CLNICO CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
El 14 de noviembre de 2011 la firma californiana Geron, lder mundial en biotecnologa, anunci que interrumpa su ensayo clnico de fase I dirigido a tratar pacientes con lesin de mdula espinal traumtica reciente
Nature 479; 272-273, 2011
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Razones por las que ha abandonado su proyecto
La razn esgrimida por Geron para suprimir el ensayo clnico parece ser fundamentalmente debida a problemas econmicos al no haber encontrado nuevas fuentes de financiacin para su proyecto dado que sus acciones haban cado drsticamente en el ltimo ao En los tres primeros trimestres de 2011 haba perdido 65 millones de dlares
Suspender su ensayo cnico con clulas madre embrionarias supondr para Geron la prdida de 66 puestos de trabajo, el 38 % de su plantilla
Nature 479; 272-273, 2011
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Sin embargo, la firma californiana juntamente al anuncio de suspensin de su ensayo clnico manifestaba que aunque el tratamiento parece ser que es seguro no han encontrado ninguna mejora en la funcin de la mdula espinal de los pacientes tratados
Nature 479; 272-273, 2011
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Por lo que no ser la dificultad econmica debida a no haberse obtenido los resultados terapeticos que la firma esperaba la causa ltima de la suspensin del ensayo clnico por ser muy arriesgado seguir invirtiendo en un proyecto cientfico de tan incierto resultado?
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GERON SUSPENDE SU ENSAYO CLNICO CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS Consecuencias ticas
Pero sea de una u otra forma lo cierto es que ha sido suspendido el primer ensayo clnico iniciado con clulas madre embrionarias lo que supone un fuerte contratiempo para este tipo de experiencias Pero adems, dado que para desarrollar este tipo de ensayos hay que destruir embriones humanos, desde un punto de vista tico nos parece una noticia muy positiva
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DIFICULTADES TCNICAS QUE PUEDE TENER EL USO DE LAS CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
El escaso nmero de experiencias clnicas con clulas madre embrionarias posiblemente se haya debido a la ineficiencia del proceso de clonacin, la falta de conocimiento de los mecanismos que regulan estos procesos, la necesidad de mantener terapia inmunosupresiva durante toda la vida, el riesgo de inducir el desarrollo de teratomas y finalmente por las dificultades ticas que su uso conlleva
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PRIMERAS EXPERIENCIAS CLNICAS DIFICULTADES TCNICAS QUE PUEDE TENER EL USO CONDE LAS CLULAS MADREEMBRIONARIAS CLULAS MADRE EMBRIONARIAS
Con respecto a la produccin de teratomas importantes investigadores como James Thomson y John Gearhart, creen que existe una gran preocupacin entre muchos de nosotros ante la posibilidad de que algunos de los pacientes incluidos en el estudio puedan desarrollar tumores lo que podra ser un autntico desastre
Nature Biotechnology 2009; 27: 213-214
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PRIMERAS EXPERIENCIAS CLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS

En este sentido en febrero de 2009 un nio israel que padeca una ataxia telangiectasia y que haba recibido varios trasplantes de clulas madre neurales fetales desarroll teratomas en el cerebro y medula espinal cuatro aos despus de iniciado el tratamiento
PLoS Med 6; e1000029
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POSIBILIDADES DE OBTENER CLULAS SIMILARES A LAS EMBRIONARIAS HUMANAS EN TEJIDOS ADULTOS
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POSIBILIDADES DE OBTENER CLULAS SIMILARES A LAS EMBRIONARIAS HUMANAS EN TEJIDOS ADULTOS
Recientemente se han encontrado clulas madre similares a las embrionarias humanas en el lquido amnitico y en el cordn umbilical, pero nunca se haban detectado en un tejido adulto Ahora se acaba de describir la existencia de clulas madre similares a las embrionarias en la leche materna
New Scientist 2839; 14, 2011
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CELULAS MADRE SIMILARES A LAS EMBRIONARIAS EN LA LECHE MATERNA

Aproximadamente el 2% de las clulas existentes en la leche materna son clulas madre Cultivando estas clulas se ha comprobado que pueden convertirse en clulas seas, adipocitos, pancreticas y neuronales Adems estas clulas expresan la mayora de los marcadores de las clulas madre embrionarias
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Las clulas madre de la leche materna podran tener un gran potencial teraputico dentro de la medicina regenerativa al poder tericamente ser aplicadas para la propia mujer si sta las requiriera en el futuro por alguna enfermedad degenerativa
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El descubrimiento de las clulas madre embrionarias en la leche materna plantea la pregunta sobre si stas podrn jugar algn papel en el desarrollo de los nios amamantados habindose sugerido que podran contribuir a la regeneracin de tejidos, a su desarrollo o incluso a combatir alguna enfermedad degenerativa concreta
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CLULAS MADRE DE TEJIDOS ADULTOS

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DE DONDE SE OBTIENEN LAS CLULAS MADRE DE TEJIDOS ADULTOS?

Diferentes tejidos adultos Cordn umbilical Placenta Fetos abortados Teratocarcinomas o carcinomas embrionarios, especialmente de tumores testiculares
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MECANISMOS POR LOS CUALES EJERCEN SU FUNCIN LAS CLULAS MADRE ADULTAS
Fusionndose con las clulas del rgano lesionado Diferencindose a clulas especficas de ese rgano Favoreciendo la vasculognesis a partir de clulas progenitoras endoteliales contenidas en el material celular o de clulas mononucleares de la mdula sea Ejerciendo acciones paracrinas por liberacin de factores de crecimiento, protenas angiognicas, factores trficos o factores moduladores del sistema inmunolgico Remodelando fsicamente la arquitectura tridimensional del rgano afectado
Estos mecanismos in vivo no parecen relevantes
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EXPERIENCIAS CLNICAS CON CLULAS MADRE ADULTAS
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EXPECTATIVAS CLNICAS DERIVADAS DEL USO DE CLULAS MADRE DE TEJIDOS ADULTOS
Seguramente no hay un precedente as en la ciencia actual

J. Martin. The Lancet 365; 2070-2071, 2005
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CLULAS MADRE ADULTAS BREVE RESUMEN HISTRICO

En 1992, se publicaron las primeras experiencias demostrando que las clulas madre de tejidos adultos se podan diferenciar en clulas de su mismo tejido celular, es decir, se comprob que mostraban ms plasticidad de lo que hasta ese momento se crea
Proc Natl Acad Sci 89; 850, 1992 Science 255; 1717, 1992
84
CLULAS MADRE ADULTAS BREVE RESUMEN HISTRICO En 1996 se confirm su plasticidad y se demostr que podan transformarse en clulas multipotentes
Proc Natl Acad Sci 94; 4080, 1997
85
En 2001 se pudo observar por el equipo de Catherine Verfaille que las clulas madre mesenquimales de mdula sea se podan transformar en clulas de corazn, hueso, cartlago, grasa y endotelio
Reyes y col Blood 98; 2615, 2001
86

Al ao siguiente se comprob por primera vez que las clulas cardiacas lesionadas podan regenerarse as mismas Hasta esa fecha se crea que esto solamente podan hacerlo las clulas madre de mdula sea, hgado o intestino
N Engl J Med 346; 5, 2002
87
CLULAS MADRE ADULTAS BREVE RESUMEN HISTRICO Junto a estas experiencias, otras muchas, han confirmado la posibilidad de obtener clulas de distintos tejidos a partir de clulas madre del propio tejido o de otro diferente
88
USO CLNICO DE LAS CLULAS MADRE ADULTAS

Todo lo anterior sugiri que las clulas madre de tejido adulto podran ser utilizadas en la medicina regenerativa y reparadora
89
ENSAYOS CLNICOS CON CLULAS MADRE ADULTAS

90
ENSAYOS CLNICOS REALIZADOS

ENSAYOS CLNICOS CON CLULAS MADRE ADULTAS APROBADOS POR LA FDA
En enero de 2007 ya haba
1238
ensayos clnicos aprobados por la Food and Drug Administration norteamericana utilizando clulas madre de tejidos adultos De ellos, ms de 250 en infarto de miocardio, 24 en linfoma de tipo no-Hodgkin y 5 en tumores testiculares
A. D. Prentice y G. Tarne Science 315; 328,2007
91

En octubre de 2011 haba en desarrollo 110.468 ensayos clnicos en 174 pases 3.601 con clulas madre adultas 11 con clulas madre embrionarias humanas
Clinical Triasl.gov. Acceso 6 octubre 2011
92
APLICACIONES CLNICAS DE LAS CLULAS MADRE ADULTAS

En un interesante artculo de febrero de 2008 se revisan los estudios realizados entre enero de 1997 y diciembre de 2007 sobre la utilizacin de las clulas madre de tejidos adultos con fines teraputicos
FUENTES: MEDLINE, EMBASE, Science Citatim Index, pagmes web FDA y de INS de Estados Unidos
R.K. Burt y col. JAMA 299; 925-936, 2008
93
ENSAYOS CLNICOS CON CLULAS MADRE ADULTAS
94
Burt, R. K. et al. JAMA;299,925-936,2008
TERAPIA CELULAR DE LA ENFERMEDAD CORONARIA
95
TERAPIA CELULAR EN LA ENFERMEDAD CORONARIA

Aunque la terapia celular en pacientes con infarto de miocardio se inici hace ms de una dcada
Nat Med 4; 929-933, 1998
no se ha desarrollado con amplitud hasta estos ltimos aos. En el momento actual en el mundo hay ms de 1500 pacientes incluidos en ensayos clnicos dirigidos a tratar enfermedades cardiovasculares con clulas madre adultas
Circulation 121; 325-335, 2010
96

PRINCIPALES PATOLOGAS TRATADAS
Infarto agudo de miocardio Fallo isqumico cardiaco Enfermedad isqumica miocrdica crnica
97
TERAPIA CELULAR EN EL INFARTO DE MIOCARDIO

Revisin de los ensayos clnicos realizados en el infarto de miocardio agudo entre enero de 1997 y diciembre de 2007 que incluyen treinta o ms pacientes
Burt, R. K. et al. JAMA 299; 925-936,2008
98
Clinical Trials of Stem Cell Therapy for Acute Myocardial Infarction With >=30 Patients
99
Burt, R. K. et al. JAMA;299,925-936,2008
RESULTADOS DE LOS ENSAYOS CLNICOS REALIZADOS EN PACIENTES CON INFARTO DE MIOCARDIO AGUDO MEJORA DE LA FUNCIN VENTRICULAR IZQUIERDA
Se observa un modesto beneficio de la fraccin de eyeccin ventricular izquierda prcticamente en todos los ensayos En los interensayos es de 86 % y en los intraensayos del 24 %
Burt, R. K. et al. JAMA;299,925-936,2008
100
RESULTADOS DE LOS EN ENFERMEDAD ENSAYOS CLNICOSENSAYOS CLNICOS REALIZADOS EN PACIENTES CON INFARTO DE ISQUMICA CORONARIA CRNICA MIOCARDIO AGUDO VALORACIN GLOBAL
Aumento de la perfusin regional Mejora de la contractibilidad cardiaca Modesto aumento de la fraccin de eyeccin ventricular izquierda Reduccin del dolor anginoso No se producen efectos secundarios negativos 101
Burt, R. K. et al. JAMA;299,925-936,2008
TERAPIA CELULAR EN EL INFARTO DE MIOCARDIO AGUDO

ENSAYOS MS RECIENTES
Revisin de los ensayos clnicos randomizados con pacientes de infarto agudo de miocardio realizados entre 2000 y 2009
102
RESULTADOS DE LOS ENSAYOS CLNICOS TERAPIA CELULAR EN ELINFARTO DEor REALIZADOS EN PACIENTES CON INFARTO Table 1 Randomized trials in patients with acute myocardial infarction ischemic MIOCARDIO failure AGUDO DE heart AGUDO MIOCARDIO
Tabla 1 art..
Wollert, K. C. & Drexler, H. (2010) Cell therapy for the treatment of coronary heart disease: a critical appraisal Nat. Rev. Cardiol. doi:10.1038/nrcardio.2010.1
103
ENSAYOS EN LOS QUE HUBO UNA MEJORA DE LA FRACCIN DE EYECCIN GLOBAL

MEJORA DE LA FRACCIN DE EYECCIN CONSEGUIDA TRAS VARIOS MESES DESPUS DE LA TRASFERENCIA CELULAR
BOOTS: mejora del 6% a los 3 meses

Am J Physiol Cell Physiol 287; C572-C579, 2004
REPAIR-AMI: mejora del 2,5% a los 3 meses

Differenciation 76; 772-783, 2008
FINCELL: mejora del 5% a los 6 meses

Mod Pathol 21; 837-847, 2008
REGENT: mejora del 3% a los 6 meses 23

N Eng J Med 355; 1222-1232, 2006
104
ENSAYOS EN LOS QUE NO HUBO MEJORA EN LA FRACCIN DE EYECCIN
Leuven AMI: no se detect mejora a los 4 meses

J Mol Cell Cardiol 45; 530-544, 2008
ASTAMI: no se detect mejora a los 6 A 12 meses

Proc Natl Acad Sci USA 97; 3422-3427, 2000
HEBE: no se detect mejora a los 4 meses

Circulation 109; 2692-2697, 2004
105
TERAPIA CELULAR EN EL FALLO ISQUMICO CARDIACO

TOPCARE. TOPCARE Se introdujeron 75 pacientes. Se utilizaron clulas mononucleadas de mdula sea. Tres meses despus de administrarse la terapia celular se comprobaron mejoras funcionales objetivas sin efectos adversos
N Engl J Med 355; 1222-1232, 2006
MAGIC. MAGIC. Fue el primer estudio randomizado que inclua grupo placebo. En l se incluyeron 97 pacientes. Se utilizaron clulas autlogas de musculo esqueltico. A los 6 meses no se obtuvieron mejoras funcionales.
Circulation 117; 1189-1200, 2008 106
TERAPIA CELULAR EN LA ENFERMEDAD ISQUMICA CARDIACA CRNICA

TRES ENSAYOS REALIZADOS
En el primero se incluyen 24 pacientes a los que se administraron clulas CD 34+ obtenidas de sangre perifrica. No se evidenci reduccin del Circulation 115; 3165-3172, 2007 tamao del infarto de miocardio El segundo el denominado proyecto PROTECT-CAD se incluyeron 28 pacientes a los que se administraron clulas mononucleadas de mdula sea. Obtenindose resultados moderadamente favorables
Eur Heart J 28; 2998-3005, 2007
En el tercer estudio se incluyeron 50 pacientes a los que tambin se les transfundieron clulas mononucleadas de mdula sea, pero a una concentracin cinco veces superior al estudio PROTECT obtenindose a los tres meses objetivas mejora de la funcin del ventrculo izquierdo
JAMA 301; 1997-2004, 2009
De cara a futuros tratamientos parece que habra que plantearse el trasfundir mayor nmero de clulas
107
ENSAYOS CLNICOS EN DESARROLLO EN EFERMEDAD ISQUMICA CORONARIA

108
Table 2 Ongoing cell therapy trials in patients with coronary heart disease
Wollert, K. C. & Drexler, H. (2010) Cell therapy for the treatment of coronary heart disease: a critical appraisal Nat. Rev. Cardiol. doi:10.1038/nrcardio.2010.1
109
ENSAYOS CLNICOS EN MARCHA
Se recogen 20 estudios en sndrome coronario agudo sin elevacin ST (1), infarto agudo de miocardio (7) y fallo isqumico cardaco (12)
Nature Reviews Cardiology 7; 204-215, 2010
110

RESUMEN
Los ensayos clnicos hasta ahora realizados para tratar la enfermedad isqumica cardiaca con clulas cardiacas muestran resultados modestos en la mayora de los trabajos pero no en todos
Circulation 121; 325-335, 2010
111

COMENTARIO FINAL
Los ensayos clnicos muestran que la terapia celular del infarto de miocardio con clulas madre de mdula sea muestran que en la mayora de los casos mejoran la perfusin miocrdica y la contractilidad muscular en pacientes con infarto de miocardio agudo, fallo cardiaco e isquemia cardiaca crnica, lo que condiciona una mejora de la fraccin de eyeccin global El que los resultados clnicos no sean uniformes probablemente sea debido a la falta de estandarizacin y optimizacin de las clulas utilizadas y de los protocolos usados El uso de nuevas fuentes de clulas madre pluripotenciales y su diferenciacin en clulas cardiacas maduras puede contribuir ms positivamente a la regeneracin del tejido cardiaco infartado
112
TERAPIA CELULAR EN EL INFARTO DE MIOCARDIO

CONCLUSIN
Estos resultados experimentales unidos a los ensayos clnicos ya concluidos y a los que todava estn en desarrollo hacen prever que la terapia celular en infarto de miocardio podra empezar a utilizarse en la clnica mdica habitualmente en la prxima dcada
J Am Col Cardiol 57; 466-468, 2011
113
TERAPIA CELULAR DE LA ENFERMEDAD ISQUMICA ARTERIAL PERIFRICA

114

OBJETIVOS
Restaurar la estructura vascular Restaurar la funcin Revertir la senectud de las clulas Favorecer el desarrollo de nuevos vasos
115
En los primeros cuatro estudios piloto no controlados realizados en pacientes con claudicacin vascular perifrica tras la trasferencia celular se pudo comprobar pequeas mejoras circulatorias
Vascular Medicine 13; 157-172, 2008 Circulation 109; 1215-1218, 2004 Proc Natl Acad Sci USA 102; 17202-17206, 2005 Circ J 70; 1093-1098, 2006
116
En este tipo de pacientes solamente se ha realizado un estudio controlado, el TACT, observndose tras el trasplante celular mejoras de la presin de oxgeno transcutnea, disminucin del dolor en reposo y aumento de la distancia a recorrer sin dolor
Lancet 360; 427-435, 2002
117

Ensayos en desarrollo
En el momento actual hay varios ensayos de fase II dirigidos a evaluar la seguridad y eficacia de la terapia celular en la enfermedad vascular isqumica perifrica
Circulation 122; 517-526, 2010
118

CONCLUSIONES
La terapia celular en la enfermedad arterial isqumica perifrica puede ser potencialmente til pero queda todava mucho camino por recorrer antes de poder utilizarla en la clnica mdica Dentro de las nuevas posibilidades teraputicas la ms prometedora parece ser el uso de las clulas adultas reprogramadas (iPS)
Circulation 122; 517-526, 2010
119
TERAPIA CELULAR EN ENFERMEDADES AUTOINMUNES
120

La terapia celular en enfermedades autoinmunes se empez a utilizar hace ms de 13 aos
Lancet 349; 254, 1997
En la base de datos PROMISE se indica que en el momento actual estn siendo tratados ms de 1000 pacientes de 172 instituciones y 27 pases
Haematologica 95; 284-282, 2010
121

Enfermedades tratadas
Esclerosis mltiple Esclerosis sistmica Artritis reumatoide Lupus sistmico eritrematoso Artritis ideopatica juvenil Citopenia autoinmune
Hematologica 95; 185-188, 2010
122

RESULTADOS GLOBALES
La supervivencia libre de recadas a los cinco aos de tratamiento ha sido del 85 % y la progresin libre de mejoras estables de enfermedad en el 43% La mortalidad asociada al tratamiento no excede el 5% y aun es menor cuando la terapia se aplica en centros especializados
Haematologica 95; 185-188, 2010
123

Estudios prospectivos
124
TERAPIA CELULAR DE LA ESCLEROSIS SISTMICA

CASOS CLNICOS
Nevskaya et col encuentran una mejora en la cicatrizacin

Rheumatology (Oxford) 48; 61-64, 2009
Ishigatsubo y col encuentran una reduccin en el nmero y tamao de las lceras y una neovascularizacin de la base de las uas tras la administracin de clulas mononucleares de la mdula sea autlogas
Mod Rheumatol 20; 263-272, 2010
Guiducci et col utilizando clulas mesenquimales autlogas encuentran una reduccin del rea necrtica despus del primer trasplante celular. Despus del tercero una revascularizacin de las extremidades
Annals Internal Medicine 153; 650-654, 2010
125
TERAPIA CELULAR EN EL REA NEUROLGICA
126
USO DE CLULAS MADRE ADULTAS EN EL REA NEUROLGICA

Se han realizado numerosos ensayos clnicos para el tratamiento de la enfermedad de Parkinson, esclerosis lateral amniotrfica, Alzheimer y otras enfermedades neurodegenerativas, aunque no se han conseguido verdaderos beneficios para estos pacientes Tambin en casos de stroke existe abundante experiencia preclnica, as como en lesiones de mdula espinal
The Journal of Clinical Investigation 2010; 120: 29-40

127

En cuanto a las perspectivas futuras parece que los estudios orientados a la remielinizacin de la mdula espinal lesionada empezarn pronto y que clulas productoras de dopamina se podran utilizar en potentes en Parkinson en cinco aos. Sin embargo, el tratamiento de pacientes con esclerosis lateral amniotrfica parecen ms distantes, y aun ms para pacientes de Alzheimer que aun estn ms lejanos
The Journal of Clinical Investigation 120; 29-40, 2010
128

En general parece que hay un amplio consenso que para aplicar las clulas madre adultas para el tratamiento de enfermedades neurolgicas degenerativas y traumticas se requiere mucho ms investigacin bsica para conocer los mecanismos biolgicos que regulan la proliferacin, migracin, diferenciacin, supervivencia y funcin de las clulas madre y de sus derivados, para que siendo bien conocidos puedan ser bien controlados
The Journal of Clinical Investigation 120; 29-40, 2010
129
PRIMER ENSAYO CLNICO PARA TRATAR PACIENTES CON INFARTO CEREBRAL

Se ha puesto en marcha el primer ensayo piloto para evaluar la terapia celular en pacientes con un infarto cerebral. El ensayo se realiza conjuntamente entre la Universidad de Glasgow y la firma ReNeuron Group. Se piensa incluir 11 pacientes que hayan sufrido el accidente cerebral entre 6 y 24 meses antes Fue aprobado por la Medicine and Healthcare Products Regulatory Agency en enero de 2009 Se utilizarn clulas madre derivadas de cerebros de fetos de entre 16 y 20 semanas Los pacientes sern controlados durante dos aos En noviembre de 2010 se comunic la inclusin del primer paciente British Medical Journal 341; c5724, 2010 130
ENSAYO CLNICO PARA TRATAR LA ENFERMEDAD DE BATTEN
La compaa ReNeurons tiene en desarrollo un ensayo clnico en fase I para evaluar el efecto de clulas adultas de fetos humanos para tratar en la lipofuscinosis cerea neuronal infantil o tambin denominada enfermedad de Batten
Nature Biotechnology 29; 95, 2011
131
ENSAYO CLINICO PARA TRATAR LA ESCLEROSIS AMIOTRFICA LATERAL
Ensayo clnico de fase I promovido por la firma Neuralstem utilizando lneas celulares neurolgicas obtenidas de espina medular humana dirigido a tratar la esclerosis amiotrfica lateral
132
LESIONES CRNICAS DE LA MDULA ESPINAL
Ensayo clnico de fase I promovido por Stem Cells utilizando clulas madre de tejido fetal para tratar pacientes con lesiones crnicas de la mdula espinal Se piensa incluir el primer paciente a principios de 2011
133
TRATAMIENTO DE LA ESCLEROSIS MLTIPLE

Ensayo clnico de fase I-II en el que se han incluido 35 pacientes con esclerosis mltiple agresiva para ser tratados con clulas de mdula sea y seguidos durante un periodo de 2 a 15 aos (media 11 aos) Se concluye que este tipo de terapia no parece til para la poblacin general de pacientes con esclerosis mltiple pero s podra ser para los casos agresivos
Neurology 76; 1066-1070, 2011
134
OTRAS ENFERMEDADES
135
UTILIZACIN CLNICA DE CLULAS MADRE DE MUSCULO ESQUELTICO

DISTROFIA MUSCULAR
Problemas tcnicos Las clulas madre no se distribuyen uniformente por todos los msculos afectados Se han descrito reacciones inmunolgicas adversas Se ha constatado la muerte rpida de las clulas inyectadas
Journal of Clinical Investigation 120; 11-19, 2010
136
TERAPIA CELULAR EN OTRAS PATOLOGAS

EPIDERMOLISIS BULLOSA DISTRFICA
Entre octubre de 2007 y agosto de 2009 se han tratado 7 nios con esta enfermedad por medio de trasplante celular alognico
New England Journal of Medicine 363; 629-639, 2010
137

Es una enfermedad recesiva e incurable en el momento actual que se caracteriza por erosiones dolorosos en las membranas, mucosa y en la piel que incluso producen mutilaciones y que se acompaan de infecciones sistmicas contracturas articulares, fusin de dedos y pies y desarrollo de procesos cancerosos
138

RESULTADOS
Uno de los nios muri por una cardiomiopata antes del trasplante. De los 6 restantes uno mostr una severa toxicidad cutnea En 5 de los 6 nios se not un incremento ene l gen codificante del colgeno 5 nios sobrevivieron 130 a 176 das tras el trasplante y uno muri a los 186 das como consecuencia del rechazo del trasplante y una infeccin Finalmente se necesitan nuevos estudios para evaluar los riesgos y beneficios de esta terapia
139

EPIDERMOLISIS BULLOSA DISTRFICA RESUMEN
Estos estudios muestran que la infusin de clulas madre de mdula sea alognicas puede inducir un incremento del gen que codifica el colgeno de tipo 7 y reducir la produccin de ampollas en la piel en los pacientes afectados severamente por esta enfermedad A pesar de los beneficios clnicos obtenidos existe un alto riesgo de efectos secundarios negativos que podran acortar la supervivencia de estos pacientes, especialmente los ms graves
140
POSIBLE ALTERNATIVA AL TRANSPLANTE DE RGANOS
141
TRABAJOS EXPERIMENTALES EN ANIMALES
142
PRODUCCIN DE UN CORAZN BIOARTIFICIAL El equipo de Doris A Taylor, de la Universidad de Minessota, ha conseguido por primera vez crear un corazn bioartificial
HC Ott. Nature Medicine 14; 213-221, 2008
143
PRODUCCIN DE UN CORAZN BIOARTIFICIAL

METDICA PARA OBTENERLO
Descelularizacin de corazones de cadver de rata por perfusin con detergentes Mantenimiento de la matriz extracelular, con conservacin de una estructura espacial cardiaca acelular Reperfusin con clulas cardiacas neonatales o clulas endoteliales articas de rata Cultivo de estas estructuras recelularizadas en un medio similar al que se utiliza para el mantenimiento de rganos Mantenimiento de la perfusin durante 28 das
144
PRODUCCIN DE UN CORAZN BIOARTIFICIAL

RESULTADOS
A los 4 das de finalizar la reperfusin celular la estructura cardiaca generada empez a contraerse A los 8 das adquiri la funcin de bomba cardiaca
145
PRODUCCIN DE UN PULMN ARTIFICIAL EN RATAS

El pasado 24 de junio de 2010 se public online en la revista Science, que un equipo de la Universidad de Yale haba conseguido generar un pulmn bioartificial en ratas El procedimiento tcnico utilizado fue similar al desarrollado por Doris Taylor Cuando el pulmn se haba regenerado fue trasplantado a otras ratas, funcionando entre 45 y 120 minutos, intercambiando oxgeno y dixido de carbono de forma similar a como hacen los pulmones naturales
Science 329; 538, 2010
146
PRODUCCIN DE UN PULMN ARTIFICIAL EN RATAS

En agosto de este mismo ao, otro equipo dirigido por Joseph Vacanti, del hospital General de Massachussets, ha conseguido tambin producir un pulmn bioartificial, igualmente en ratas El mtodo utilizado ha sido tambin el descrito por Doris Taylor
Nature Medicine 16; 927-933, 2010 147
GENERACIN DE UN PNCREAS ARTIFICIAL EN RATAS

Clulas madre pluripotenciales de ratas se transfirieron a blastocistos de ratn que padecan una afeccin pancretica congnita que condicionaba que estos animales tuvieran el adecuado nicho pancretico, consiguiendo regenerar en ellos un nuevo pncreas derivado de las clulas pluripotenciales
Cell 142; 787-799, 2010
148
CREACIN DE UN OVARIO BIOARTIFICIAL

Un equipo de la Universidad Brown de Rhode Island, ha logrado producir in vitro un ovario bioartificial del cual se han podido derivar ovocitos maduros El sustrato sobre el que se desarroll el ovario era un molde de agarosa a partir del cual se construy una estructura tridimensional, recubrindola con clulas de teca obtenidas de donantes, que posteriormente fueron recubiertas por clulas de granulosa tambin de donantes De este rgano bioartificial se extrajeron ovocitos que maduraron adecuadamente
J Assist Reprod Genet DOI 10.1007/S10815-010-9468-6
149
CONSTRUCCIN DE VLVULAS CARDACAS EXPERIMENTALES EN PERROS

Sobre una estructura de varillas artificiales tridimensional que fueron recubiertas con tejido conectivo autlogo, se pudieron construir vlvulas artificiales del sinus de Vasalva, vlvulas, que tras remover las varillas, funcionaron como vlvulas normales Las vlvulas bioartificiales se implantaron en las venas pulmonares sustituyendo a las vlvulas lesionadas, funcionando adecuadamente Es la primera vez que se construyen biovlvulas autlogas, que implantadas en un sabueso funcionan como las nativas 150
PRODUCCIN DE RGANOS BIOARTIFICIALES EN HUMANOS
151
PRODUCCIN DE UNA TRQUEA ARTIFICIAL

En diciembre de 2008, se public la construccin del primer rgano humano producido por bioingeniera Se trataba de una trquea artificial construida con clulas madre de una enferma de treinta aos, con lesiones traqueales irreversibles, utilizando la matriz de una trquea donada y descelularizada utilizando un sistema similar al de Doris Taylor Las clulas madre utilizadas para la reconstruccin de la trquea fueron clulas epiteliales y clulas madre mesenquimales derivadas de condrocitos de la paciente A los cuatro meses del trasplante la trquea transferida tena caractersticas funcionales normales
The Lancet 372; 2023-2030, 2008 152
PRODUCCIN DE UNA TRQUEA ARTIFICIAL EN HUMANOS

Se trata de un nio britnico que naci con una estenosis congnita de trquea que le impeda respirar normalmente Se le trasplant una trquea creada bioartificalmente utilizando la de un cadver, que fue descelularizada y recelularizada utilizando la metodologa propuesta por Doris Taylor Las clulas madre utilizadas procedan de la mdula sea del propio paciente
153 British Medical Journal 340; 672, 2010
DESARROLLO DE UN LABORATORIO PARA CREAR RGANOS BIOARTIFICIALES

En el Hospital Gregorio Maran de Madrid se ha creado el primer laboratorio del mundo dirigido por el doctor Fernndez Avils destinado a la creacin de rganos bioartificiales con clulas madre humanas. En este laboratorio se ha conseguido ya descelularizar nueve corazones humanos donados El mtodo utilizado ha sido el de Doris Taylor
154
ALTERNATIVAS PARA LA OBTENCIN DE CLULAS MADRE DE TIPO EMBRIONARIO
CONSIDERACIONES BIOLGICAS Y TICAS

155
ALTERNATIVAS AL USO DE CLULAS MADRE EMBRIONARIAS

Para obtener clulas madre embrionarias hay que destruir al embrin del cual se obtienen, lo que indudablemente supone un importante problema tico Por ello, hace unos aos se plante el reto de obtener clulas madre similares a las embrionarias humanas por procedimientos que no requirieran la destruccin de embriones
Best Practical Research Clinical Obstetrics and Gynecology 18; 929-940, 2004
156
Esta inquietud fue recogida por el Consejo Asesor de Biotica del presidente de Estados Unidos, que en 2005 propuso cuatro posibles alternativas
White Paper Alternate Sources of Human Pluripotent Stem Cells. Washington DC. Presidents Councel on Bioethics. 2005 157
1. Embriones en fase de utilizacin muy temprana de desarrollo 2. Estructuras biolgicas no embrionarias generadas por transferencia nuclear somtica alterada (ATN) 3. Estructuras biolgicas obtenidas por transferencia nuclear somtica alterada (ATN) con reprogramacin asistida del ovocito (OAR) 4. De pseudoembriones
158

Posteriormente estas cuatro propuestas se ampliaron a ocho:
5. De clulas madre germinales 6. De ovocitos activados por partenognesis 7. Por fusin de ncleos de clulas somticas adultas con clulas madre embrionarias 8. Por reprogramacin de clulas somticas adultas
159
DE ESTAS POSIBILIDADES LA MS VENTAJOSA, TANTO DESDE UN PUNTO DE VISTA TCNICO COMO TICO, ES LA REPROGRAMACIN DE CLULAS SOMTICAS ADULTAS
160
OBTENCIN DE CLULAS MADRE SIMILARES A LAS CLULAS MADRE EMBRIONARIAS POR REPROGRAMACIN DIRECTA DE CLULAS ADULTAS
161
OBTENCIN DE CLULAS MADRE SIMILARESA LAS CLULAS MADRE EMBRIONARIAS POR REPROGRAMACIN DIRECTA DE CLULAS ADULTAS
REPROGRAMACIN DE CLULAS ADULTAS
Clula adulta
REPROGRAMACIN
Clula pluripotente
Clulas de todo tipo de tejidos
Clula totipotente
Embrin
162
CLULAS MADRE. PASADO Y FUTURO

PASADO FUTURO
James Thomson 1998

Cultivan por primera vez clulas madre embrionarias humanas
Shinya Yamanaka 2006

Obtienen clulas similares a las embrionarias por reprogramacin de clulas adultas. Nacen las clulas iPS
2007 Obtienen clulas iPS humanas
163
REPROGRAMACIN DE CLULAS ADULTAS ANIMALES

CLULAS ADULTAS
Genes codificadores de protenas de transcripcin
Protenas de transcripcin
Genes reprogramadores
CLULAS SIMILARES A LAS EMBRIONARIAS (CLULAS iPS)
CLULAS DE TODO TIPO DE TEJIDOS
K. Takahashi y S. Yamanaka. Cell 126; 652-655, 2006

164
REPROGRAMACIN DE CLULAS SOMTICAS A UN ESTADO PLURIPOTENTE

Clula somtica
Oct4 Sox2 c-Myc Klf4 Proceso de reprogramacin
Clula pluripotente
Fbx15
Reprogramada parcialmente
Oct4
Nanog
Reprogramada totalmente
No expresan Oct4 y Nanog endgenos No generan chimeras Producen teratomas
Expresan Oct4 y Nanog endgenos Modificado de: R. Jaenisch y R. Young Cell 165 132; 567-582, 2008
REPROGRAMACIN DE CLULAS ADULTAS ANIMALES

Estos resultados fueron ampliados y confirmados en un trabajo posterior del grupo de Yamanaka Adems, si las clulas iPS se inyectaban en blastocistos murinos se conseguan quimeras adultas de ratones que eran capaces de transmitir sus caractersticas genticas a la siguiente generacin
K. Okita y col. Nature 448; 313-317, 2007
166
REPROGRAMACIN DE CLULAS ADULTAS ANIMALES Confirman las experiencias realizadas en animales por Takahashi y Yamanaka
M. Wernig y col. Nature; 318-324, 2007
Confirman las anteriores experiencias y adems consiguen producir quimeras que si son inyectadas en blastocistos murinos pueden generar embriones vivos
N. Maherali y col. Cell Stem Cell 1; 55-70, 2007
167
REPROGRAMACIN DE CLULAS ADULTAS HUMANAS
Pero el paso de las experiencias animales a humanos no pareca fcil As, Janet Rossant se preguntaba: Sern eficientes los mismos mgicos factores moleculares para generar clulas iPS humanas? Diversos grupos estn intentndolo, pero trasladar estas pruebas a humanos tiene muchas dificultades
J. Rossant. Nature 448; 260-262, 2007
168
EXPERIENCIAS DE LOS GRUPOS DE SHINYA YAMANAKA Y JAMES THOMSON

169
Thomson pensaba que la posibilidad de reprogramar clulas adultas humanas tardara al menos 20 aos
Citado por: B Goldman Nature Reports Stem Cells DOI: 10.1038/stemcells.2008.67
170

Sin embargo, en noviembre de 2007, 16 meses despus de la publicacin de las experiencias de reprogramacin celular en animales llevadas a cabo por Takahasi y Yamanaka, se consigue, por el propio grupo de Yamanaka y tambin el de Thomson, la reprogramacin de clulas adultas humanas Contrasta esta rapidez con los 17 aos que transcurrieron desde que se obtuvieron clulas 1 madre embrionarias de ratones hasta que se 2 consigui lo mismo en humanos
1. M Evans y col Nature 292; 154-156, 1981 2. JR Martin PNAS 78; 763-7638, 1981 3. JA Thomson y col Science 282; 1145-1147, 1998
171
Por ello, cuando se logr la reprogramacin de clulas adultas humanas: Nosotros no podamos creer que la reprogramacin fuera tan fcil
Citado por: B Goldman Nature Reports Stem Cells DOI: 10.1038/stemcells.2008.67
172

CLULAS DE PIEL HUMANA
GENES REPROGRAMADORES
CLULAS iPS
CLULAS DE TODO TIPO DE TEJIDOS

J. Yu y col. (grupo Thomson). Science 318; 1917-1920, 2007 K. Takahashi y col. (grupo Yamanaka). Cell 131; 861-872, 2007 173
Cuntos genes se requieren para obtener las clulas iPS?
174
Takahasi y Yamanaka partieron de 24 genes reprogramadores

Cell 126; 663-676, 2006
175

Takahashi y col. (grupo Yamanaka): Genes reprogramados: Oct , Sox2, c-Myc y Klf4 Medio para transferirlos: retrovirus Fuente de clulas adultas: prepucio de recin nacido Yu y col. (grupo Thomson): Genes reprogramados: Oct , Sox2, Lin 28 y Nanong Medio para transferirlos: lentivirus Fuente de clulas adultas: fibroblastos fetales y neonatales
176
El Oct4 es altamente especfico para las clulas pluripotentes Los otros tres factores se expresan en otras clulas: Sox2 en clulas madre neurales y clulas progenitoras Klf4 en clulas de piel, estmago, intestino y msculo esqueltico c-Myc se expresa aleatoriamente El nico gen que parece no puede ser reemplazado para la reprogramacin es el Oct4
Nakagawa et al (Yamanaka) 177 Nature Biotechnology 26; 101-106, 2008
En efecto, Kim et al han demostrado que se pueden conseguir clulas iPS reprogramando clulas madre neurales utilizando como factor de trascripcin nicamente el Oct4
Kim et al Cell 136; 411-419, 2009
178

Las clulas iPS generadas muestran expresin gnica y modelos de metilacin muy parecidos a los de las clulas madre embrionarias, crecen internamente mientras expresan telomerasa, tienen un cariotipo normal y forman teratomas si se trasplantan a ratones inmunosuprimidos
Ch.E. Murry y G. Keller. Cell 132; 661-680, 2008
179
SIMILITUD ENTRE LAS CLULAS iPS Y LAS EMBRIONARIAS HUMANAS

Biolgicamente no hay diferencias entre las clulas iPS y las embrionarias humanas, aunque para confirmarlo totalmente habra que producir embriones humanos por clonacin a partir de las clulas iPS y comprobar la similitud biolgica de sus clulas embrionarias con las de embriones obtenidos por fecundacin in vitro o transferencia nuclear somtica, lo cual ticamente no es posible llevar a cabo
180
INTERS POR LA REPROGRAMACIN CELULAR

Como consecuencia del inters clnico y experimental que tienen las clulas iPS, numerosos laboratorios han iniciado trabajos destinados a obtenerla. En efecto, segn comenta Melina Fan, directora ejecutiva de Addgene, de Cambridge (Massachusetts), que distribuye los vectores virales utilizados por Yamanaka y Thomson, con fecha 17 de abril de 2008, haban recibido 704 peticiones, de 178 laboratorios pertenecientes a 142 instituciones el vector viral utilizado por Thomson y 514 de 131 laboratorios pertenecientes a 113 instituciones del vector utilizado por Yamanaka para la transferencia de los factores de trascripcin a clulas humanas, as como ms de 1500 peticiones procedentes de 232 laboratorios pertenecientes a 215 instituciones del vector utilizado para la transferencia a clulas murinas
Nature Reports Stem Cells DOI: 10.1038/stemcells.2008.67
181
IMPORTANCIA DE LA REPROGRAMACIN CELULAR

La revista Science calific la reprogramacin celular como el descubrimiento cientfico del ao 2008 por la utilidad que puede tener en la investigacin de graves enfermedades y por su probable utilizacin dentro del campo de la medicina regenerativa y reparadora
Science 322; 1767-1773, 2008
182
INCONVENIENTES TCNICOS
Posibilidad de transmisin de enfermedades virales Posibilidad, aunque menor, de producir tumores Posibles problemas gnicos debido a la introduccin del ADN de los genes reprogramadores en las clulas receptoras Lo que puede facilitar una integracin genmica aleatoria y riesgo de ocasionar mutagnesis
MF Pera y K Hasegawa Nature Biotechnology 26; 59-60, 2008 MF Pera Nature 471; 46-47, 2011
183
INCONVENIENTES TCNICOS
Adems, aunque los genes reprogramadores son generalmente silenciados despus de la reprogramacin, la activacin epigentica del Oct-4 y Sox2 podra inducir efectos no deseados en las clulas iPS transferidas
MF Pera y K Hasegawa Nature Biotechnology 26; 59-60, 2008
184
PROBLEMAS A RESOLVER
Tcnicos: Sustituir los vectores virales Sustituir el oncogn c-Myc Biolgicos: Conocer mejor los mecanismos de la reprogramacin celular, especialmente si es debida a modificaciones epigenticas o a modificaciones genticas todava no identificadas
J. Cibelli. Science 318; 1879, 2007
185
PROBLEMAS RESUELTOS
El mismo grupo de Yamanaka, en el reducido tiempo de tres meses, consigue reprogramar hepatocitos y clulas de epitelio de mucosa gstrica sin utilizar el c-Myc, tanto en humanos como en ratones, sin que se generaran tumores
N. Nakagama y col. Nature Biothecnology 26; 101-106, 2008 186
PROBLEMAS RESUELTOS
Otros autores tambin consiguen generar clulas sin utilizar el c-Myc Wernig M y col Cell Stem Cell 2; 10-12, 2008 T Brambrink y col Cell Stem Cell 2; 151-159, 2008
187
PROBLEMAS RESUELTOS
Con relacin a la utilizacin de vectores virales Aoki y colaboradores comprueban que al reprogramar clulas de estmago e hgado murinas, utilizando retrovirus estos no penetran en la clula adulta a reprogramar y por tanto no alteran su genoma
T. Aoki y col. Science: DOI 10.1126 / science 1154884 (14 2 2008)
188
PROBLEMAS RESUELTOS
Consiguen introducir los factores de trascripcin utilizando vectores virales que no llegan a integrarse en el genoma de las clulas receptoras Con este sistema evitar la formacin de tumores y las alteraciones gnicas del genoma de las clulas receptoras De las clulas iPS consiguen derivar clulas de msculo, sistema nervioso, corazn y pulmn Esta tcnica permite pensar en utilizar las clulas iPS en ensayos clnicos con humanos
M Stadtfeld y col. Science: DOI 10.1126 / science 1162494
189
OBTENCIN DE CLULAS iPS SIN INTEGRACIN DEL GENOMA VIRAL

Generan clulas iPS a partir de: Hepatocitos de ratn utilizando adenovirus para transferir factores reprogramadores
Stadtfeld et al Science 322; 945-949, 2008
Fibroblastos de embriones de ratn utilizando plsmidos

Okita et al (Yamanaka) Science 322; 949-953, 2008 Kaji et al 190 Nature DOI: 10.1038/nature 07864, 2009
GENERACIN DE CLULAS iPS UTILIZANDO COMPUESTOS QUMICOS
Utilizan productos qumicos que pueden reemplazar uno o dos genes reprogramados
Huangfu et al Nature Biotechnology 26; 1269-1275, 2008 Shi et al
Cell Stem Cell 2; 525-528, 2008
191
GENERACIN DE CLULAS iPS UTILIZANDO PEQUEAS MOLCULAS

Pequeas molculas que inhiben el cido valprico inducen reprogramacin utilizando solo Oct4 y Sox2 Otra molcula, el kenpaulln, puede sustituir el Klf4
PNAS 106; 8912-8917, 2009
192
FACTORES DE REPROGRAMACIN
Produccin de clulas iPS utilizando: Vectores episomales que no se integran en el genoma de la clula generada. Los restos genmicos episomales que queden se eliminan y as la clula iPS generada queda libre se secuencias transgnicas extraas
Yu et al (Thomson)
Science 324; 797-801, 2009
Utilizan doxyciclina para potenciar la accin de los vectores vricos (lentivirus) y posteriormente la recombinasa Cr/LoxP para eliminar los restos trangnicos que se hayan podido insertar
Soldner et al Cell 136; 964-977, 2009
Utilizan plsmidos del tipo piggy Bac

Woltjen et al 193 Nature DOI: 10.1038/nature 07863.2009
OBTENCIN DE CLULAS iPS SIN INTEGRACIN DEL GENOMA VIRAL

Posibilidad de crear clulas iPS utilizando un nico vector policistrnico no vrico obtenido a partir de un plasmido que favorece la expresin de Oct4, Sox2, Klf4 y c-Myc, que evita la insercin del genoma vrico en las clulas generadas
Gonzalez et al PNAS 106; 8918-8922, 2009
194
ALTERNATIVA A LA UTILIZACIN DE VECTORES VIRALES

Prime Gen, una empresa californiana de biotecnologa, conjuntamente con Unidyn, fabricante de nanotubos (cilindros de molculas de carbono de pocos nanometros de dimetro) ha anunciado que se pueden sustituir los vectores virales necesarios para la reprogramacin celular, por nanotubos de carbono, tras demostrar que con ellos se pueden introducir protenas complejas (hasta una docena) en clulas testiculares y de retina
D Cyranoski y M Baker Nature 452;132-136, 2008
195
ALTERNATIVA A LA UTILIZACIN DE VECTORES VIRALES

Sin embargo, existen justificados reticencias entre los expertos, sobre la bondad de estas experiencias pues las mismas aun no han sido publicadas en una revista cientfica de garanta Adems algunos autores indican que su introduccin en las clulas puede tener efectos txicos para ellas, incluso puede ocasionar su muerte Por ello, los propios fabricantes admiten la existencia de algunos problemas que hay que resolver antes de pasar a su utilizacin clnica
D Cyranoski y M Baker 196 Nature 452;132-136, 2008
ALTERNATIVAS A LA UTILIZACIN DE VECTORES VIRALES

Otra posibilidad es reemplazar los vectores virales introduciendo directamente los factores reprogramadores con ciertos aminocidos unidos a ellos, lo que les permite penetrar las membranas celulares Tambin utilizando pequeas molculas no proticas que remeden la actividad de los factores de trascripcin y que puedan penetrar las membranas celulares
B Goldman Nature Reports Stem Cells DOI: 101038/stemcells.2008.67 1st May 2008
197
MEJORAS DE LA TCNICA MEJORAS DE LA TCNICA DE DE OBTENCIN DE CLULAS iPS OBTENCIN DE CLULAS

Tambin el equipo de R Jaenisch del Instituto Tecnolgico de Massachusetts utiliza la doxicilina para mejorar la tcnica de reprogramacin de clulas adultas y conseguir clulas iPS de segunda generacin Las clulas obtenidas tienen una gran homogeneidad gentica lo que favorece su posible uso clnico
Cell Stem Cell 3; 346-353, 2008
198
REPROGRAMACIN DIRECTA DE CLULAS ADULTAS

En el Instituto Mdico Horward Hughes en colaboracin con el Instituto de Clulas Madre de la Universidad de Harvard, el equipo dirigido por D Melton ha conseguido reprogramar clulas adultas de ratn (clulas exocrinas del pncreas) en clulas beta productoras de insulina Con esta tcnica se evita el paso intermedio de convertir la clula adulta en una clula pluripotencial Los factores de trascripcin que utilizan son el Ngn3, Pdx1 y Mafa
Nature DOI: 10.1038/nature 07314
199
VENTAJAS E INCONVENIENTES DEL USO DE LAS CLULAS iPS
200
VENTAJAS TCNICAS
No inducen rechazo inmunolgico Lo que abre la posibilidad de crear frmacos especficos para un paciente determinado No requiere la utilizacin de ovocitos humanos Facilidad tcnica Coste reducido
201
POSIBLES UTILIZACIONES DE LAS CLULAS iPS
202
POSIBLE UTILIDAD DE LAS CLULAS iPS

Podran tener tres posibles aplicaciones
Para estudios experimentales sobre la diferenciacin celular y para valorar posibles diferencias entre clulas normales y patolgicas Para estudios farmacolgicos, que ahora solo es posible realizar en animales Para su uso en la medicina regenerativa
203
UTILIDAD EXPERIMENTAL DE LAS CLULAS iPS

Las clulas iPS podran suplir mucha de la informacin que ahora proporcionan las clulas madre embrionarias en investigacin y en medicina
MF Pera Nature 451; 135-136, 2008
204
OTRAS APLICACIONES DE LAS CLULAS iPS

Las clulas iPS pueden ser el ms prctico y eficiente camino para producir grandes bancos de clulas humanas pluripotentes de los haplotipos deseados Esto evitara el uso y destruccin de miles de embriones
MF Pera y K Hasegawa Nature Biotechnology 26; 59-60, 2008
205
NUEVAS POSIBILIDADES DE REPROGRAMACIN DE CLULAS ADULTAS
206
PUEDEN LAS CLULAS iPS HACER INNECESARIO EL USO DE CLULAS MADRE EMBRIONARIAS?
Sera un importante error llegar a la conclusin de que la obtencin de las clulas iPS evita la necesidad de usar clulas madre embrionarias
I Hyun y col. Cell Stem Cell 1; 367-368, 2007
D Melton: Es prematuro afirmar esto GQ Daley: En el momento actual no estamos seguros de que las clulas iPS sean absolutamente equivalentes a las clulas madre embrionarias K Egan: Para estar seguro de la utilidad de las clulas iPS se necesita hacer un gran nmero de experiencias con clulas iPS de diferentes individuos y compararlos con clulas madre embrionarias
C Holden y G Vogel Science319; 560-563, 2008
207
La investigacin con clulas iPS debera continuar junto con la investigacin con clulas madre embrionarias
I-Hyun Park. Hastings Center Report 38; 20-22, 2008 BM Kuehn JAMA 299; 26, 2008
208
Sin embargo, la gran mayora de investigadores que trabajan en este campo creen que las clulas iPS sustituirn con ventaja a las clulas madre embrionarias, tanto con fines experimentales como teraputicos
209
CONSECUENCIAS DEL DESCUBRIMIENTO DE LAS CLULAS iPS

Por ello, Ian Wilmut el creador de la oveja Dolly, manifiestaba recientemente que iba a abandonar la clonacin para utilizar las clulas iPS
R Highfield Daily Telegraph (http://www.telegraph.co.uk) 16-XI-2007
Y el propio James Thomson comentaba (Gina Kolata. The New York Times, 22/11/2007) que probablemente dentro de una dcada la guerra de las clulas madre embrionarias ser solo una nota al pie de una pgina curiosa de la historia de la ciencia
210
EXPERIENCIAS PRECLNICAS
211
EXPERIENCIAS PRE CLNICAS EN ANIMALES
212
EXPERIENCIAS PRECLNICAS EN RATONES CON ANEMIA FALCIFORME

Se obtienen clulas somticas de ratones con anemia falciforme y tras ser corregida la anomala gentica por terapia gnica molecular se generan clulas iPS A partir de ellas se generan clulas madre hematopoyticas normales que se pueden reinyectar en ratones con anemia falciforme, consiguiendo mejorar sensiblemente su cuadro clnico
Hanna J et al
213 Science 318; 1920-1923, 2007
EXPERIENCIAS PRECLNICAS EN RATONES CON PARKINSON Demuestran que clulas iPS se pueden diferenciar en clulas madre precursoras neurales que en cultivo puede generar clulas neurales o de gla Si las clulas generadas se transfieren al cerebro de fetos de ratones, migran a distintas regiones y se diferencian en gla y neuronas Tambin las clulas iPS se diferencian a neuronas dopaminrgicas Cuando las neuronas dopaminrgicas se trasplantan a cerebro de ratas con Parkinson se consigue mejorar sus sntomas clnicos Estos resultados demuestran el potencial teraputico de clulas iPS procedentes de fibroblastos para el reemplazo de clulas neuronales patolgicas en un modelo animal
M Wernig y col PNAS 105; 5856-5861, 2008 214
EXPERIENCIAS PRECLNICAS EN RATONES CON HEMOFILIA A

Se producen clulas iPS a partir de fibroblastos de la cola de ratones que posteriormente se diferencian a clulas endoteliales y clulas progenitoras endoteliales. Se comprueba que estas clulas producen factor VIII Las clulas endoteliales o sus progenitoras producidas se inyectan a ratones con hemofilia A Se comprueba que el factor VIII se incrementa hasta un nivel de 8% a 12% Comprobndose adems que los ratones transplantados sobreviven mucho mas tiempo que los a ratones del grupo control
Xu D, et al. PNAS 106; 808-813, 2009
215
EXPERIENCIAS PRE CLNICAS EN HUMANOS

216
EXPERIENCIAS PRECLNICAS EN HUMANOS CON INFARTO DE MIOCARDIO

A partir de fibroblastos humanos se producen clulas iPS Estas se insertan en mrulas de ratones De las quimeras producidas, se produce parenquima cardiaco normal, que se puede transferir a corazones de ratones enfermos, consiguiendo la mejora funcional de los mismos Esto demuestra que las clulas iPS pueden ser tiles en el tratamiento de la enfermedad cardiaca
Nelson et al
Circulation 120; 408-416, 2009
217
LNEAS CELULARES OBTENIDAS DE CELULAS iPS DERIVADAS DE PACIENTES CON DISTINTAS PATOLOGAS
218
LNEAS CELULARES OBTENIDAS DE CELULAS IPS DERIVADAS DE PACIENTES CON DISTINTAS PATOLOGAS
La posibilidad de generar clulas iPS a partir de clulas somticas, generalmente fibroblastos, ha abierto un nuevo y til camino para estudiar la patogenia de graves enfermedades, as como para ensayar nuevas posibilidades teraputicas para ellas
219
CLULAS iPS OBTENIDAS DE CLULAS ADULTAS DE DISTINTAS PATOLOGAS

Tipo de enfermedad Primer autor Revista Nombre de enfermedad Causa gentica Tipo de clulas obtenidas Se han evaluado frmacos ND S
Neurolgica Neurolgica
Soldner, F Nguyen, HN
Cell 136; 964-977, 2009 Cell Stem Cell 8; 367-280, 2011
Enfermedad de Parkinson Enfermedad de Parkinson
Polignica Polignica (con mutacin LRRK2) Polignica
Neuronas dopaminrgicas Neuronas dopaminrgicas
Neurolgica
Dimos, JT
Science 321; 1218-1221, 2008
Esclerosis lateral amiotrfica Atrofia espinal muscular Disautonomia familiar Sndrome de RETT Enfermedad de Huntington
Neuronas motoras
ND
Neurolgica Neurolgica Neurolgica Neurolgica
Ebert, AD Lee, G Marchetto, MC Park, I
Nature 457; 277-280, 2009 Nature 461; 402-406, 2009 Cell 143, 527-539, 2010 Cell 134; 877-886, 2008
Monognica Monognica Monognica Monognica
Neuronas motoras Clulas de la cresta neural Neuronas ND
S S S ND
Neurolgica Neurolgica Neurolgica
Ku, S Quiang, L Brennand, KJ
Cell Stem Cell 7; 631-637, 2010 Cell 146; 359-371, 2011 Nature 473; 221-225, 2011
Ataxia de Friedreich Alzheimer Esquizofrenia
Monognica Polignica Polignica
ND Neuronas Neuronas glutaminrgicas
ND No S

Tipo de enfermedad
Sangre Sangre Sangre Cardiaca y muscular Cardiaca y muscular Cardiaca y muscular Cardiaca y muscular Cardiaca y muscular
Primer autor
Raya, A Urbach, A Zhaohui, Y Moretti, A Itzhaki, I Carvajal -Vergara, X Yazawa, M Zhang, J
Revista
Nombre de enfermedad
Anemia de Fanconi Sndrome X frgil Trastornos Mieloproliferativos Sndrome de QT 1 largo Sndrome de QT 2 largo Sndrome LEOPARD Sndrome Timothy Progeria de Hutchinson Gilford Progeria de Hutchinson Gilford Distrofia muscular de Duchenne
Causa gentica
Monognica Monognica Polignica Monognico Monognico Monognico Monognico Monognico
Tipo de clulas obtenidas

Clulas sanguneas ND Hematopoyticas Cardiomiocitos Cardiomiocitos Cardiomiocitos Cardiomiocitos Clulas musculares lisas, clulas madre mesenquimales Clulas musculares lisas ND
Se han evaluado frmacos

ND ND No S S ND S ND
Nature 460; 53-59, 2009 Cell Stem Cell 6; 407-411, 2010 Blood 114; 5473-5480 N Engl. Med 363; 1397-1409, 2010 Nature 471, 225-229, 2011 Nature 465; 808-812, 2010 Nature 471; 230-234, 2011 Cell Stem Cell 8; 31-45, 2011
Cardiaca y muscular Cardiaca y muscular
Liu, GH
Nature doi:10.1034/nature09879 Cell 134; 877-886, 2008
Monognico
ND
Park, IH
Monognico
ND

Tipo de enfermedad Primer autor Revista Nombre de enfermedad Causa gentica Tipo de clulas obtenidas Clulas Productoras de insulina y glucagn hepatocitos Se han evaluado frmacos ND
Pancretica
Maehr, ST
Procl Natl Acad Sci
Diabetes tipo 1
Polignica
Heptica
Rashid, ST
J. Clin. Invest. 120; 3127-3136, 2010
Deficiencia de A1 antitripsina
Monognica
Otras
Agarwal, S
Nature 464; 292 298, 2010 J. Biol. Chem 285; 40303-40311, 2010
Disqueratosis
Monognica
iPS
No
Otras
Yang, J
Sndrome de Prader-Willi
Monognica
Neuronas
ND
Otras
Chamberlain, SJ
Proc. Natl Acad. Sci USA 107; 17668 17673, 2010 Cell 134; 877-886, 2008
Sndrome de Angelman y Prader-Willi Sndrome de Down
Monognica
Neuronas
ND
Otras
Park, IH
Monognica
ND
ND
EXPERIENCIAS CLNICAS EN HUMANOS
223
POSIBILIDAD DE PRODUCIR SERES VIVOS A PARTIR DE CELULAS iPS

224
POSIBILIDAD DE PRODUCIR SERES VIVOS A PARTIR DE CELULAS IPS
A partir de clulas iPS, adems de poder obtenerse lneas celulares de distintas patologas, tambin se han podido derivar clulas germinales que en teora podran servir para producir seres humanos vivos
Kee K, et al. Nature 2009; 462: 222-225 Editorial. Nature 2008; 452:913
225
Pero las experiencias ms excitantes en este terreno han sido realizadas por dos grupo de investigadores chinos que han logrado producir ratones vivos a partir de clulas iPS
226
El primero de ellos lo consigui a partir de la produccin de blastocistos tetraploides a los que se haban previamente transferido las clulas iPS
Kang L, et al. Cell Stem Cell 2009; 5: 135-138
227

Pero ms interesante aun han sido las experiencias de Zhao y col que han logrado producir 31 ratones vivos a partir de 37 lneas de clulas iPS generadas de fibroblastos de piel. La tcnica utilizada ha sido similar a la de Kang por medio de la cual tras inyectar las clulas iPS en blastocistos normales estos fueron transferidos a hembras que quedaron preadas. Los ratones generados tenan entre un 5% a 80% de quimerismo. Pero lo ms interesante de estas experiencias es que a partir de los ratones producidos se pudo producir una segunda generacin de ratones vivos que tenan las caractersticas genticas del ratn del cual se haban derivado las clulas iPS
Zhao X, et al. Nature 2009; 461:86-90
228

El ltimo grupo en conseguir animales vivos a partir de clulas iPS ha sido el de Boland y col que utilizando una tcnica similar a la de Zhao, han logrado tambin que los embriones generados tuvieran caractersticas genticas similares a la de los ratones de los que se haban derivado las clulas iPS
Boland M, et al. Nature 2009; 461 91-94

229
OTROS POSIBLES USOS ABERRANTES DERIVADOS DE LA UTILIZACIN DE CLULAS GERMINALES OBTENIDAS A PARTIR DE CLULAS iPS
Fibroblastos donados por un varn Mujer utilizada con fines reproductores
Clulas iPS
Hombre utilizado con fines reproductores
Ovocito
Espermatozoides
Ovocitos
Esperma
Fertilizacin heterosexual
Fertilizacin entre ambos gametos de un mismo individuo Madre subrogada
Fertilizacin heterosexual
Modificado de Power and Rask Annals Internal Medicine 155; 114-121, 2011
VALORACIN TICA DEL ESQUEMA ANTERIOR

Adems de otras dificultades ticas la posibilidad de generar embriones humanos a partir de las clulas germinales derivadas de clulas iPS obtenidas de clulas somticas adultas abre la puerta a producir seres humanos vivos con dos padres y una madre
231
BREVE CONSIDERACIN ETICA
232
BREVE CONSIDERACIN ETICA

No cabe duda que una de las caractersticas ms positivas de las clulas iPS es que no se requiere utilizar clulas madre embrionarias para obtenerlas Sin embargo, al poder derivar de ellas, animales vivos, se abre la posibilidad de poder clonar seres humanos sin tener que recurrir a la transferencia nuclear somtica
233
BREVE CONSIDERACIN ETICA Esto presupone que la responsabilidad tica ultima del uso de las clulas iPs queda en mano de los propios investigadores, firmas comerciales y la sociedad en general
234
MOTIVACIN TICA DE LAS EXPERIENCIAS DE YAMANAKA

235
MOTIVACIN TICA DE YAMANAKA PARA SUS INVESTIGACIONES

Cuando vi el embrin, rpidamente me di cuenta de que no haba diferencia entre l y mis hijas Pens que no podemos permitirnos destruir embriones para nuestras investigaciones Tiene que haber otro camino
M Fackler The New York Times 11-XI-2007
236
237

Celulas Madre y Reprogramacion Celular2013

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Celulas Madre y Reprogramacion Celular2013

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CLONACIN, CLULAS MADRE Y REPROGRAMACIN CELULAR

JUSTO AZNAR DIRECTOR DEL INSTITUTO DE CIENCIAS DE LA VIDA NOVIEMBRE 2011 1

EN QUE CONSISTE LA CLONACIN DE EMBRIONES REALIZADA POR TRANSFERENCIA NUCLEAR SOMTICA?

TRANSFERENCIA NUCLEAR SOMTICA

Clulas madre embrionarias Masa granulosa interna

Embrin de dos clulas

Embrin de 64 a 200 clulas (blastocisto)

CLONACIN REPRODUCTIVA Y TERAPUTICA

obtencin de clulas madre

resto del embrin que se destruye

ES ADECUADO EL TRMINO CLONACIN TERAPUTICA? NO SE DEBERA LLAMAR CLONACIN EXPERIMENTAL?

Heidi Ledford. Nature 445; 800-802, 2007

TIENE PROBLEMAS LA TCNICA?

INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

2. Chen Y. Cell Res 13; 251, 2003

5. Hwang WS et al. Science 308; 1777, 2005

No consiguieron obtener clulas madre de los blastocistos clonados

INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

INTENTOS DE CLONACIN HUMANA

Se han obtenido lneas celulares?

AJ French. Stem Cells 26; 485-493, 2008

SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS?

SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES DE PACIENTES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS?

SE HA CONSEGUIDO DERIVAR LNEAS CELULARES DE PACIENTES A PARTIR DE EMBRIONES HUMANOS CLONADOS?

REFLEXIN TICA SOBRE LA CLONACIN

HIBRIDACIN HOMBRE ANIMAL

HIBRIDACIN HOMBRE-ANIMAL TIPOS

CBRIDOS DE HOMBRE Y ANIMAL

Ncleo clula adulta

Clulas madre hbridas

Masa granulosa interna

Podramos llegar a ser as?

ES POSIBLE LA PRODUCCIN DE CBRIDOS?

QUE SON LAS CLULAS MADRE?

TIPOS DE CLULAS MADRE

Clulas madre embrionarias Clulas madre de tejidos adultos

Textos de: R. Jaenisch y R. Young. Cell 132; 567-582, 2008

CLULAS MADRE EMBRIONARIAS

DE DNDE SE PUEDEN OBTENER LAS CLULAS MADRE EMBRIONARIAS?

FUNDAMENTO DE LA POLMICA TICA

Porque para obtenerlas hay que destruir ineludiblemente un embrin humano

ser humano adulto

EXPERIENCIAS PRECLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS

EXPERIENCIAS PRECLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS

M.A. Laflamme y col. Nature Biotechnology 25; 1015 1024, 2007

EXPERIENCIAS PRECLNICAS CON CLULAS MADRE EMBRIONARIAS HUMANAS

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ENSAYOS CLNICOS CON CLULAS MADRE

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Titulo del ensayo

Situacion en la que se encuentra

Tipo de clulas utilizado

Objetivo del ensayo

Es un ensayo realizado con celulas madre embrionarias y fin terapeuticos?

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