FUNDAMENTOS DE LA ESPECTROMETRA DE MASAS Hoy en da, esta tcnica contina teniendo los mismos fundamentos que en su origen, aunque

el espectrmetro de hoy en da poco tenga que ver con su predecesor. La espectrometra de masas se fundamenta en la separacin de partculas moleculares o atmicas por su diferente masa. El proceso de la espectrometra de masas comprende bsicamente cuatro etapas:

Ionizacin de la muestra. Aceleracin de los iones por un campo elctrico. Dispersin de los iones segn su masa/carga. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica.

Esquematizacin del paso de una muestra por los principales componentes de un instrumento de espectroscopia de masas.

IONIZACIN DE LA MUESTRA

La ionizacin de la muestra se consigue por bombardeo mediante electrones (e-) segn el proceso: M + e- M+ + 2eB. Aceleracin de los iones por un campo elctrico

Convertimos una fraccin significativa de los tomos formados en la etapa 1 en un flujo de iones, generalmente positivos y de carga nica. La velocidad que adquieren viene regida por la formula: v = [2eV/m] Donde V es el potencial aplicado, e la carga del electrn y m la masa. Cuando las partculas aceleradas se someten a la accin de un campo magntico (H) describen una trayectoria circular de radio r alrededor de este campo, desarrollando una fuerza centrfuga mv2/r, la cual es igual a la fuerza de atraccin del campo Hev. De esto deducimos que el radio es igual a: r = (2Vm/H2e) C. Dispersin de los iones segn su relacin masa/carga

Basndonos en la ecuacin anterior podemos calcular la relacin m/e que es: m/e = H2.r2/2V Dado que la mayora de los iones formados en la segunda etapa tienen una sola carga y que el resto de parmetros se mantienen constantes, la relacin m/e suele ser la masa del in. La utilidad analtica de un espectrmetro de masas depende de la resolucin del instrumento, o capacidad del mismo para separar dos partculas de diferente masa. D. Deteccin de los iones y produccin de la correspondiente seal elctrica El ordenador al que est conectado el aparato recoge las distintas seales y las reproduce en forma de espectrograma, formato de fcil interpretacin. INSTRUMENTACIN Bsicamente un espectrmetro de masas costa esencialmente de las siguientes partes: *Sistema de entrada de muestras. ionizacin. *Acelerador. *Detector. *Cmara de

*Analizadores.

Sistema de entrada de muestras. En el sistema de entrada de muestras, un micromol o menos de muestra se convierte al estado gaseoso por calentamiento a unos 400C y se introduce lentamente en la cmara de ionizacin. La finalidad del sistema de entrada es permitir la introduccin de una muestra representativa en la fuente de iones con la mnima perdida de vaco. En los espectrmetros de masas ms modernos encontramos diferentes tipos de sistemas de entrada:

Sistemas indirectos de entrada: es el sistema ms clsico y el ms simple, en el cual la muestra se volatiliza externamente y se introduce en la regin de ionizacin que esta a baja presin. El sistema de entrada es normalmente de vidrio para evitar posibles prdidas por adsorcin. Entrada por sonda indirecta: los lquidos y los slidos no voltiles se pueden introducir en la regin de ionizacin mediante un soporte para muestra o sonda, el cual se inserta a travs de un cierre de vaco. El sistema de cierre se utiliza para controlar la cantidad de aire que entra despus de la insercin de la sonda en la regin de ionizacin. Las sondas tambin se usan cuando la cantidad de muestra es limitada ya que se pierde mucha menos cantidad. Sistemas de entrada cromatrogrficos y de electroforesis capilar. Es un tipo de sistema de entrada especial, esta indicado su uso cuando al espectrmetro de masa va acoplado un sistema de cromatrografa de gases o de lquidos de alta eficacia o a columnas de electroforesis capilar que permiten la separacin y determinacin de los componentes de mezclas complejas (Mtodos, 2006) Cmara de ionizacin Las fuentes de iones de los espectrmetros de masas, tienen todas unas caractersticas comunes, pese a la variabilidad de tipos existente y es que todas transforman los componentes de una muestra en iones. En muchos casos el sistema de entrada y la fuente de iones estn combinados en un nico componente. En todos los casos, se obtiene un haz de iones positivos o negativos (normalmente positivos) que posteriormente se acelera hacia el interior del analizador de masas o sistema separador a travs del acelerador.(Skoog, Hiller, Hieman, 2000, 212). La formacin de iones del analito es el punto de arranque de arranque de un anlisis por espectrometra de masas. El aspecto de los espectros de masas para distintas especies moleculares, depende en gran medida del mtodo utilizado para la formacin de los iones. Estos mtodos los podemos dividir en dos categoras:

Fuentes de fase gaseosa: en estas primero se volatiliza la muestra y luego se ioniza.

Estn generalmente restringidas a compuestos trmicamente estables que tengan puntos de ebullicin menores de unos 500C. En la mayora de los casos, estos requerimientos limitan la utilizacin de las fuentes de fase gaseosa a compuestos con pesos moleculares menores de unos 103 Daltons. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002, 486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 1000 Daltons. Fuentes de desorcin. En estas la muestra en estado slido o lquido, se transforma directamente en iones gaseosos. Son aplicables a muestras no voltiles y trmicamente inestables (Harvey, 2002, 486) Normalmente los espectrmetros de masas estn equipados con accesorios que permiten intercambiar ambos tipos de fuentes. Son aplicables a compuestos que tienen pesos moleculares superiores de 100000 Daltons. Las fuentes de iones se pueden clasificar tambin en fuentes duras y fuentes blandas.

Fuentes duras: comunican suficiente energa a las molculas para que estn en un estado de energa altamente excitado. La relajacin posterior, implica la rotura de las uniones produciendo iones fragmentados. Su espectro da lugar a muchos picos y nos da informacin acerca de la naturaleza de los grupos funcionales e informacin estructural de los analitos. Fuentes blandas: dan lugar a poca fragmentacin y el resultado es un espectro con muy pocos picos dndonos informacin til ya que nos permite la determinacin exacta del peso molecular de la molcula o molculas

TIPOS DE CAMARAS DE IONIZACIN Fuentes De Fase Gaseosa

Impacto de electrones (EI).

Se somete a la muestra a una temperatura suficientemente elevada (normalmente mediante un filamento caliente de wolframio o de renio) como para producir un vapor molecular, el cual posteriormente se ioniza bombardeando las molculas originadas con un haz de electrones de elevada energa. Pese a sus desventajas, esta tcnica es la que se ha usado para determinar la mayora de los espectros que componen las colecciones de espectros (Rouesac, Rouesac, 2003, 78)

Fuentes de ionizacin qumica (CI).

En la ionizacin qumica los tomos gaseosos de la muestra (tanto de un sistema de entrada indirecto como de una sonda caliente) se ionizan al colisionar con los iones producidos al bombardear con electrones un exceso de gas reactivo (normalmente metano). Normalmente se utilizan iones negativos, aunque la

ionizacin qumica de iones negativos se utiliza ocasionalmente en aquellos analitos que contienen tomos muy electrnegativos.

Fuentes de ionizacin por campo (FI).

En las fuentes de ionizacin por campo, los iones se forman bajo la influencia de un campo elctrico elevado (108 V/cm). Estos campos se producen al aplicar elevados potenciales (10 a 20 kV) a emisores especialmente construidos. Que estn formados por numerosas puntas finas cuyos dimetros son menores a 1 m. A menudo estos emisores adquieren la forma de un fino hilo de wolframio en el cual se han formado dendritas o filamentos microscpicos de carbono por pirlisis de benzonitrilo en un campo elctrico elevado. El resultado de este tratamiento es la aparicin de centenares de microagujas de carbn que emergen desde la superficie del hilo. En este caso el analito adquiere poca energa vibracional y rotacional por lo que tiene poca fragmentacin (Rouesaoc, Rouesaoc, 2003, 93-94) Fuentes De Desorcin En las dos ltimas dcadas se han desarrollado numerosos mtodos de ionizacin por desercin para tratar muestras no voltiles o termodinmicamente inestables. Estas tcnicas prescinden de la volatilizacin y de la posterior ionizacin y en su lugar se suministra energa a la muestra slida o lquida de diversas maneras, de modo que se provoca la formacin directa de iones gaseosos. Como consecuencia se obtienen espectros muy simplificados. Fuentes de desorcin por campo (FD). Esta fuente de ionizacin usa un emisor con mltiples puntas, similar al usado en las fuentes de ionizacin por campo. En este caso el electrodo se coloca sobre una sonda que puede retirarse y recubrirse con una disolucin de la muestra, despus de reinsertarla la ionizacin se produce tras proporcionar un potencial elevado a este electrodo. En ocasiones es necesario calentarlo hacindole pasar una corriente pero puede ocurrir una degradacin trmica antes de completarse la degradacin. Desorcin/ionizacin por lser asistida por una matriz (MALDI). Esta tcnica de reciente descubrimiento nos permite calcular pesos moleculares exactos de extractos de biopolmeros polares en un intervalo de masas moleculares de varios cientos de miles de Daltons. En esta tcnica se mezcla una disolucin acuoso/alcohlica de la muestra con un exceso de una sustancia matriz que absorbe la radiacin. La disolucin resultante se evapora en la superficie de una sonda metlica que se utiliza para la introduccin de la muestra. La mezcla slida se expone a la accin de un haz de lser pulsante, provocando la sublimacin del analito a iones que son introducidos en un espectrmetro de tiempo de vuelo para el anlisis de masas (Creel, Howart, 1993, 336-342). Ionizacin por electronebulizacin (ESI/MS). Esta tcnica se ha convertido en una de las ms importantes para el anlisis de biomolculas de pesos superiores a 100.000 Daltons.

Se realiza en condiciones atmosfricas de presin y temperatura. La disolucin de la muestra se bombardea a travs de una aguja capilar de acero inoxidable a un flujo de algunos microlitros por minuto. Las agujas se mantienen a un potencial de varios kV con respecto al electrodo cilndrico que rodea a dicha aguja. La niebla de finas gotitas cargadas resultantes pasa a travs de un capilar de desolvatacin donde se produce la evaporacin del disolvente y de las molculas del analito y donde estas adquieren la carga. Debido a que las gotitas se vuelven ms pequeas por la evaporacin del disolvente, su densidad aumenta producindose la desorcin de los iones en la atmsfera gaseosa. Fuentes de bombardeo con tomos rpidos (FAB). Con este tipo de fuentes, las muestras en un estado condensado, a menudo en una matriz de una disolucin de glicerol, se ionizan por bombardeo con tomos de xenn o argn de elevada energa. Tanto los iones positivos como negativos del analito son expulsados de la superficie de la muestra por un proceso de desorcin. El haz de tomos rpido se obtiene pasar iones acelerados de argn o xenn de una fuente o can de iones a travs de una cmara que contiene tomos de argn o xenn a una presin de unos 10-5 torr. Setos experimentan una reaccin de intercambio de electrones en resonancia con los tomos obtenindose un haz de tomos de alta energa. (Plascencia, 2003, 13) Desorcin por plasma (PD). El deterioro del 252Cf produce dos fragmentos de fisin que viajan en direcciones opuestas. Un fragmento golpea la muestra anulando entre 1-10 iones analticos. El otro fragmento golpea un detector y desencadena la puesta en marcha de la adquisicin de datos. Este mtodo es especialmente interesante para molculas largas de origen biolgico. Espectrometra de masas de iones secundarios (SIMS). Un haz de luz ionizado primitivo como 3He+,16O+, o 40Ar+ es acelerado y enfocado hacia la superficie de la muestra y chisporrotea entrando dentro de la fase gas. Aproximadamente el 1% del material chisporroteado entra en forma ionizada, el cual ya puede ser analizado. SIMS tiene la ventaja que puede ser continuamente chisporroteado desde la superficie y determinar las concentraciones analticas en funcin de la distancia desde la superficie original (perfil de profundidad) Ionizacin por termonebulizacin (TS). La ionizacin por termonebulizacin se usa para elementos reflectantes. Una muestra es depositada encima de una cinta metlica, que puede ser de Pt o Re y una corriente elctrica calienta el metal a altas temperaturas. La cinta es revestida de grafito que reduce la desfragmentacin.

Sistema acelerador.

En el sistema acelerador las partculas ionizadas producidas por el impacto de los electrones son obligados a atravesar una primera ranura aceleradora por una pequea diferencia de potencial. Entre esta primera y una segunda ranura existe

una diferencia de potencial muy elevada que imprime a las partculas su velocidad final. Una tercera ranura acta como colimador del haz de partculas.

Analizadores de masa.

Para la separacin de iones con diferente relacin m/e se dispone de varios dispositivos. Lo ideal es que el analizador fuera capaz de distinguir entre diferencias muy pequeas de masa. Adems, los analizadores deberan de permitir el paso del nmero suficiente para producir corrientes inicas fciles de medir. Al igual que sucede con los monocromadores pticos, a los que los analizadores son anlogos, estas dos propiedades no son compatibles y se debe de llegar a un equilibrio que esta regido por la resolucin del espectrmetro de masa (Skoog D., Holler J., Nieman T., 2000, pg. 412). Existen diferentes tipos de analizadores de masas:

Analizadores de sector magntico: los analizadores de sector magntico utilizan un imn permanente o un electroimn para hacer que el haz procedente de la fuente de iones se desplace con una trayectoria circular de 180, 90 o 60. Estos analizadores tambin son llamados de enfoque simple.

Diagrama esquemtico de un analizador de masas de sector magntico equivalente a los utilizados en espectrometra de masas, recalcar la ubicacin del sector magntico

Espectrmetros de doble enfoque: este trmino se usa en los espectrmetros en los cuales las aberraciones direccionales y las aberraciones de energa de una poblacin de iones se minimizan simultneamente. El doble enfoque se consigue utilizando combinaciones de campos magnticos y electrostticos cuidadosamente seleccionados.

Espectrmetro de masa cuadrupolar: son normalmente menos caros y ms robustos que los de sector magntico, adems tambin ofrecen la ventaja de emplear tiempos de barrido pequeos (<100ms), lo cual es particularmente til para realizar barridos de picos cromatrogrficos en tiempo real. Son, con diferencia los ms utilizados hoy en da (Plasencia, 2003, 15).

Diagrama de un espectrmetro de masa cuadrupolar, que es uno de los tipos de analizadores de masa ms utilizados en espectrometria de masas dado su bajo precio y robustez. Analizadores de masas de tiempo de vuelo (TOF): en estos aparatos se producen los iones positivos peridicamente por bombardeo de la muestra con impulsos de electrones, de iones secundarios o de fotones generados por lser. Los iones producidos de esta forma son acelerados en un tubo analizador libre de campo mediante un campo elctrico pulsante de 103 a 104 V. La separacin de los iones en funcin de la masa se produce durante su recorrido hacia el detector, situado al final del tubo. Estos aparatos presentan ventajas como la robustez, simplicidad, fcil acceso a las fuentes de iones y el virtualmente ilimitado intervalo de masas, pero tienen no obstante una sensibilidad y una resolucin limitadas.

Analizadores de trampa de iones: es un dispositivo en el que los cationes o aniones gaseosos pueden formarse y quedar confinados durante largos periodos de tiempo por la accin de campos elctricos y/o magnticos. Los espectrmetros de trampa de iones son ms robustos, compactos y ms econmicos que los anteriores. Transformada de Fourier (FT): Como sucede con los instrumentos de infrarrojo y de resonancia magntica nuclear, los espectrmetros de masas de transformada de Fourier proporcionan mejores relaciones seal/ruido, velocidades mayores y sensibilidad y resolucin ms elevadas.

La parte fundamental de un instrumento de transformada de Fourier es una trampa de iones en la cual los iones circulan en rbitas bien definidas durante largos periodos. Tales cavidades se construyen aprovechando el fenmeno de resonancia inica ciclotrnica. La resolucin es espectrometra de masas de transformada de Fourier est limitada por la precisin en la medida de la frecuencia ms que por las rendijas o las medidas de campo (Plasencia, 2003, 16-17). Es posible alcanzar una resolucin extremadamente elevada (superior a 106) dado que las medidas de frecuencia se pueden realizar con elevada precisin.

Se muestra un Diagrama de un analizador de masa de transformada de Fourier donde podemos ver sus diferentes elementos, resear la situacin de la bpomba de iones (turbo pump) cuya funcin se seala arriba y que es parte fundamental de este instrumento. Detectores. Los iones procedentes del sistema acelerador llegan al detector el cual generalmente esta constituido por un ctodo emisor que al recibir el impacto producido por las partculas cargadas emite electrones. Estos electrones son acelerados hacia un dnodo el cual emite varios electrones ms al recibir el impacto de cada electrn. Este proceso se repite varias veces hasta obtenerse una cascada de electrones que llega al colector logrndose una corriente fuertemente amplificada, por un procedimiento muy similar al que se utiliza en los tubos fotomultiplicadores. La corriente obtenida puede amplificarse de nuevo por procedimientos electrnicos y se lleva a un sistema registrador. OBTENCIN Y ANLISIS DE UN ESPECTRO DE MASAS Como consecuencia del bombardeo electrnico en la cmara de ionizacin, las molculas se rompen en una serie de fragmentos, siempre que una misma

molcula se rompa en las mismas condiciones nos dar el mismo tipo y nmero de fragmentos y constituyen la fragmentacin patrn. Gracias a esto se pueden determinar que es la muestra por comparacin y por otra parte, la intensidad relativa de los distintos picos, permite deducir la proporcin en que cada componente se encuentra en la muestra. El pico del espectrograma que aparece con valor ms elevado de m/e corresponde a la molcula ionizada sin fragmentar y recibe el nombre de masa patrn. Esta masa patrn nos permite determinar con rapidez y precisin la masa molecular, siempre que se opere con una tensin de ionizacin no excesivamente elevada, la cual producira la fragmentacin total de la molcula (Rouessac, Rouessac, 2003, 312) El pico mayor del espectrograma de masa se llama pico base. Normalmente la altura de este pico se toma como valor cien. Las intensidades de los dems picos se expresan en porcentajes de la intensidad del pico base.

APLICACIONES Las aplicaciones son muchas y abarcan tantos campos que resulta complicado citarlas todas, a continuacin veremos las ms caractersticas:

Elucidacin de la estructura de molculas orgnicas y biolgicas. Determinacin del peso molecular de pptidos, protenas y oligonucleicos. Identificacin de los compuestos de cromatogramas en capa fina y papel. Determinacin de secuencias de aminocidos en muestras de polipptidos y protenas. Deteccin e identificacin de especies separadas por cromatrografa y electroforesis capilar.

Identificacin de drogas de abuso y sus metabolitos en sangre, orina y

saliva.

Control de gases en enfermos respiratorios durante los procesos quirrgicos. Pruebas para confirmar la presencia de drogas en sangre de caballos de carreras y en atletas olmpicos. Datacin de ejemplares en arqueologa. Anlisis de partculas en aerosoles. Determinacin de residuos de pesticidas en alimentos. Control de compuestos orgnicos voltiles en el agua de suministro Vamos a ver ahora de un modo ms extenso las principales aplicaciones de esta tcnica.

Aplicaciones cualitativas

Determinacin del peso molecular de todas las sustancias que pueden volatilizarse por la posicin del pico correspondiente a la masa patrn. Determinacin de la formula molecular. Si el instrumento es de gran resolucin bastar la determinacin precisa de su masa molecular para poder atribuirle una frmula emprica. Otras veces puede determinarse por la relacin entre las alturas del pico correspondiente a la masa patrn y la de los picos de los istopos. Existe una tercera forma que sera con la regla del nitrgeno, segn la cual todas las sustancias orgnicas con peso molecular par deben de contener un nmero par o ningn tomo de N y los de nmero impar deben de contener un nmero impar. Por el contrario los fragmentos moleculares por rotura de enlace, tienen una masa impar si contienen cero o nmero par de tomos de N y masa par si el nmero de tomos de N es impar. Identificacin de compuestos por su fragmentacin patrn: la fragmentacin de la mayor parte de las molculas produce un gran nmero de picos que permiten la identificacin de numerosos compuestos y el reconocimiento de ciertos grupos funcionales de ellos. Se han descrito una serie de reglas generales que rigen los procesos de fragmentacin, los cuales son de gran utilidad para la determinacin de los espectros. Identificacin de productos de reaccin o de productos metablicos: se usa en cintica qumica y en farmacologa pudindose llegar a identificar impurezas y metabolitos a concentraciones de pocas partes por milln. Caracterizacin y anlisis de polmeros: el polmero se piroliza en condiciones controladas y los productos voltiles se hacen pasar a un espectrmetro para su anlisis. Anlisis de sangre: gracias ala rapidez del mtodo, se puede emplear incluso como control durante un proceso quirrgico. As se puede determinar a gran velocidad las concentraciones hemticas de monxido y dixido de carbono, oxgeno, nitrgeno, gases anestsicos (como el NO). Estudiar la abundancia de istopos: Esta fue la finalidad con la que fue creada la tcnica y en la actualidad se usa para anlisis por dilucin de istopos, estudios con trazadores isotrpicos, estudiar la edad de las muestra por su

proporcin de istopos con la ventaja frente a los radiactivos que se pueden medir los istopos no radiactivos.

Aplicaciones cuantitativas

Para la determinacin cuantitativa de los componentes de una mezcla es conveniente que cada uno de ellos presente por lo menos un pico que difiera claramente de los dems. La calibracin se realiza por comparacin de los picos con patrones adecuados. Las alturas de los picos son directamente proporcionales a las presiones parciales de los componentes volatilizados en la muestra. Las aplicaciones cuantitativas de la espectrometra de masas para analisis cuantitativo son de dos tipos:

Determinacin cuantitativa de especies moleculares o tipos de especies moleculares en muestras orgnicas, biolgicas y ocasionalmente inorgnicas: normalmente tales analisis se llevan a cabo haciendo pasar la muestra a travs de una columna cromatrogrfica o de electroforesis capilar y posteriormente por el espectrmetro. Determinacin de la concentracin de elementos en muestras inorgnicas y, en menor medida, de muestras orgnicas y biolgicas: las concentraciones de analito en este caso se obtienen directamente a partir de las alturas de los picos de los espectros de masas. Se crean curvas de calibrado que nos permiten el analisis cuantitativo gracias a la existencia de picos nicos para cada componente y cada valor de m/z.

GLOSARIO

Relacin masa/carga: Esta expresin, abreviada m/z, es la relacin del nmero de masa (m) de una partcula dada entre el nmero (z) de unidades cargadas electrostticamente (e) que posee la partcula. As, m/z es una relacin adimensional que es el parmetro medido por el analizador de masas. La masa de una partcula dada es igual a la suma de sus masas atmicas (en Daltons) de todos los elementos que componen la partcula. El smbolo para las unidad de masa es u, y corresponde a 1/12 de la masa del 12C, al que se la ha asignado un valor de 12.000000 por convencin.

Iones doblemente cargados:Es posible para una molcula perder dos electrones durante el proceso de ionizacin. Estos iones que estn doblemente cargados producirn un pico en el espectro de masas en un valor m/z numricamente igual a la mitad de la masa molecular del ion. Los iones

doblemente cargados son insignificantes en el espectro de masa para la mayora de los compuestos. Sin embargo, para aquellas molculas que los produzcan en forma estable, los picos correspondientes en el espectro de masas pueden ser usados en la interpretacin de datos. Ion molecular: El ion molecular resulta de la ionizacin de la molcula a analizar. Este ion representa la molcula intacta y es el ltimo precursor de todos los iones fragmentados que componen el espectro de masas. El pico del ion molecular aparece a un valor m/z numricamente igual al peso molecular del compuesto. Pico base: Es el pico ms intenso en el espectro de masas. Es usado como base para normalizar las intensidades de los otros picos. Al pico base se le asigna una intensidad relativa de 100%. Intensidad relativa: La intensidad relativa de un pico representa su intensidad en comparacin con el pico base. Se representa como % respecto al pico base que es 100%. Por convencin, este dato se indica en la izquierda del espectro de masas. Porcentaje total de ionizacin: Este trmino expresa la abundancia de un ion individual comparado con la suma de las abundancias de todos los iones en un rango de masa especifico. La escala de porcentaje total de ionizacin esta representada a la derecha del espectro de masas con el smbolo (%Sn), este dato puede ser utilizado para comparar diferentes espectros de masas de diferentes compuestos. Espectro de masas: Un espectro de masas es una grfica de intensidad relativa del ion como funcin de la relacin masa/carga (m/z). El espectro de masas es frecuentemente representado como un histograma simple. Esta forma de registro de iones y sus intensidades sirven para establecer el peso molecular y estructura del compuesto a ser analizado. Debido a que ocurre la fragmentacin del analito, las fracciones del ion aparecen en el espectro a valores m/z menores que la molcula completa ionizada (ion molecular) a partir de es tos datos se deduce la estructura y peso molecular de la molcula completa. Notas: 1. La electroforesis es un mtodo de laboratorio en el que se utiliza una corriente elctrica controlada con la finalidad de separar biomoleculas segn su tamao y carga elctrica a travs de una matriz gelatinosa formada por capilares muy finos. 2 Lo contrario a la adsorcin; la eliminacin de materia desde un medio adsorbente, usualmente para recuperar material.3 Descomposicin trmica de materiales que contengan carbono en ausencia de oxgeno. 4 Un monocromador es un sistema con un elemento dispersivo (prisma o red de difraccin) cuya funcin es la de separar angularmente las distintas longitudes de onda de un haz de luz policromtico. 5 Pequeas sustancias coloidales (nanocoloides) cuyas partculas son neutras y biolgicamente inertes, con tamao alrededor de los 50 nanmetros. Los nanocoloides se marcan con 99mTc, radionclido que presenta grandes ventajas prcticas como son su alta disponibilidad y su facil deteccin. Estos preparados son estables in vivo y su mecanismo de accin es fsico

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