Estndarizacin para Anlisis de datos - Calibracin

ChemStation Entrenamiento
En esta presentacin se pueden aprender los conceptos bsicos acerca de las caractersticas de la calibracin de la ChemStation.

Construyendo una tabla de calibracin

1. Inyecte un estandar

2. Configure adecuadamente los integracin para el estndar bajo.

eventos

de

3. Comience una nueva tabla de calibracin con nivel uno, el nivel ms bajo. Rellene el cuadro de dilogo. 4. Integre cada nivel adicional y agregar a la tabla de calibracin 5. Examine la curva de calibracin y gurdela en el mtodo.

Con el fin de crear una tabla de calibracin, en primer lugar, inyecte el estndar. Cargue las seales para el estndar bajo e integre las seales cromatogrficas usando los eventos de integracin apropiados. Introduzca los ajustes de calibracin tales como las unidades de cantidad y establezca los picos de referencia. Cree una nueva tabla de calibracin. Rellene la cantidad para cada estndar y el nombre del estndar o estndar interno. Repita este proceso con cada nivel. Examine la curva de calibracin y guarde la tabla de calibracin como parte de su mtodo.

Ejemplo de calibracin
DAD1 A, Sig=254,4 Ref =550,100 (DEMO\005-0101.D) mAU 100
0.747 1.021

80

60
2.565

Standard

ISTD
5.837

40

20

0 1 2 3 4 5 6 min

3 niveles
ng/L 1. Estndard 2. Estndard 3. Estndard 30.0 50.0 75.0 ISTD ISTD ISTD ng/L 50.0 50.0 50.0

Una serie de diapositivas, te llevar a travs de un procedimiento sistemtico para construir una tabla de calibracin. El ejemplo es para un clculo de estndar interno. La curva de calibracin se construir con tres niveles de estndares. El estndar y estndar interno estn identificados en el cromatograma

Detalles de la seal

Definir las seales para ser evaluados durante un mtodo.

En primer lugar, fije los detalles de la seal.. Ubicndolos en el men de calibracin. El cuadro de dilogo informacin de la seal define cuales seales se evaluarn durante un mtodo que se est ejecutando. Las seales que no aparezcan listadas en el cuadro de dialogo no se integraran ni aparecern en el informe si no pueden encontrarse todas las seales definidas. Cuando no se puede encontrar las seales definidas, el sistema carga todas las seales disponibles. Add to Method (Aadir al mtodo). La seal se copia en la tabla de la seal del

mtodo que comprende una lista de seales que sern procesadas por el mtodo. Despus que la seal se copia en la lista, puede editar los tiempos de inicio y fin. La seal es procesada solamente entre estos lmites. Available Signals Combo Box (Cuadro combinado de seales disponibles). Este cuadro muestra la descripcin de las seales disponibles que pueden procesarse en el mtodo. La lista de seales disponibles comprende las seales actualmente activadas para los detectores configurados y las seales adquiridas del archivo de datos cargados. Si esta lista contiene la descripcin contradictoria

de dos seales en el mismo canal de detector, por ejemplo:

DAD1 A, Sig = 330, 0 Ref = off DAD1 A, Sig = 330, 0 Ref = 550, 20

se mostrar un mensaje. Esto es una indicacin de que existe un desajuste entre las seales para la adquisicin de datos y el archivo de datos actualmente cargados. Method Signal Table Editor (Tabla para editar las seales del mtodo) Muestra una descripcin de las seales que se procesarn en el mtodo. El editor de la tabla tambin muestra el inicio, final y columnas de

retraso. Slo las seales contenidas en esta tabla se evaluarn durante la ejecucin de un mtodo. Si usted establece el inicio, fin y los tiempos de retardo en 0.00, todos los datos para la seal seleccionadas sern procesadas. Start and End (Inicio y final). Puede utilizar los parmetros inicio y fin para definir el rango de evaluacin de la seal.

Delay (Retraso) Puede utilizar la opcin Delay (demora) para compensar el retraso de la seal del detector.

Por ejemplo, si usted adquiere las seales de dos detectores en serie hay un retraso en una seal. Si se especifica un valor de retraso, se puede compensar el retraso de la seal del detector. Esta informacin ese utiliza para correlacionar picos donde la ChemStation agrupa picos juntos en varias seales de un compuesto. En la identificacin de picos, el software agrupa los picos con el mismo tiempo de retencin para un compuesto de grupos de a, sin embargo, utilizando un retraso es posible agrupar picos con tiempos de retencin diferentes.

Align (Alinear)

Este elemento es utilizado por el LC/MSD o cualquier detector en serie. Alinear permite al usuario alinear picos cromatogrficos en cromatografa de lquidos con picos cromatogrficos de Espectroscopia de Masas.

Calibration Settings Ajustes de calibracin

El cuadro de dilogo Ajustes de calibracin (Calibration Settings dialog box) ajusta varios parmetros relacionados con la actual tabla de calibracin. Valores por defecto son previstos con todos los elementos y no deben cambiarse a menos que usted comprenda bien el funcionamiento de calibracin.

Title (Ttulo) Le permite introducir un ttulo que aparecer en la parte superior de todos los anuncios de la tabla de calibracin, por ejemplo, calibracin por defecto.

Use Sample Data (Uso de los datos de muestra)

Los datos de la muestra pueden tener uno de los siguientes orgenes:

From Sample Defaults Below (Predeterminados del ejemplo a continuacin ) Estos valores se muestran y se encuentra en la seccin muestra por defecto de este cuadro de dilogo.
From Data File (Del archivo de datos ) Si selecciona la opcin de archivo de datos, no podr establecer los valores predeterminados de la muestra en este cuadro de dilogo.

Podr utilizar la informacin proporcionada con cada muestra en el panel informacin de la muestra o la tabla de secuencia. Amount (Cantidad) La cantidad es necesaria para calcular un reporte de ESTD % o ISTD %. En este tipo de informes, los resultados se calculan como un porcentaje de la muestra original.

Amount Units (Unidades de cantidad) Las unidades en que se miden todas las cantidades de la muestra, por ejemplo, ng/l.

Multiplier (Multiplicador) Un nmero por el cual se multiplican los resultados calculados antes de imprimir el informe. El multiplicador puede utilizarse para cambiar la escala de los resultados o corregir por cambios en la composicin de la muestra durante el trabajo de pre-anlisis. El multiplicador puede utilizarse tambin para cualquier otro fin, el cual requiere el uso de un factor constante.

Sample ISTD (Muestra de Estndar interno) La muestra ISTD especifica las cantidades conocidas de estndar interno en la muestra desconocida. Se pueden utilizar hasta 99 muestras de ISTD.

I # (Nmero de Estndar Interno ) Identifica el compuesto estndar interno. Este I# corresponde al I# en la tabla de calibracin (1-99). ISTD Amount (Cantidad de estndar interno) La cantidad para cada compuesto estndar interno. La cantidad que se especifica aqu se utiliza como predeterminado si no sale ninguna informacin de la muestra. Default RT Windows (Ventanas predefinidas RT) Las ventanas (intervalos) de los tiempos de retencin son utilizados por el software ChemStation para identificar picos en los resultados de la integracin. Especificando una

ventana en lugar de un tiempo de retencin especfico, la ChemStation puede compensar leves cambios de tiempos de retencin de una corrida a otra. Las ventanas usadas son una suma de una parte absoluta en minutos y una parte proporcional en % de los tiempos de retencin esperados. La parte del porcentaje compensa las variaciones en el tiempo de retencin que son proporcionales al tiempo de retencin previsto. La parte absoluta compensa las variaciones que son independientes del tiempo de retencin.

Picos de referencia Los picos de referencia se utilizan para corregir cambios de tiempo de retencin que se aplican a un cromatograma completo. Para ello el software de la ChemStation identifica todos los picos de referencia, encuentra el cambio en el pico de referencia y aplica este cambio a los otros picos
Nota: Cuando un pico de referencia se identifica en la tabla de calibracin, entonces la ventana de pico de referencia se centra en el tiempo de retencin previsto de ese pico. El pico ms grande que aparece en esa ventana se identifica como el pico de referencia real.

Other Peaks (Otros picos) El cambio de tiempo de retencin de los picos de referencia se aplica primero a los tiempos de retencin esperados de los otros picos en la tabla de calibracin. La ventana de otro pico se centra en el tiempo de retencin esperado. Para picos de ISTD, se elege el pico ms grande que aparece en la ventana de picos. Para el resto de los picos, el pico ms cercano al centro de esta ventana de tiempo de retencin es elegido.
Calculate Uncalibrated Peaks (Calculo de picos no calibrados) Esta opcin le permite definir el factor de respuesta para los picos de compuestos no identificados en

cada seal individual. Default Calibration Curve (Curva de calibracin por defecto). Esta funcin se utiliza para calibraciones de niveles mltiple. Una curva de regresin se calcula basndose en los puntos de calibracin dado y los parmetros de ajuste y origen. Tenga en cuenta que se puede especificar un ajuste y origen tratamiento para cada curva de calibracin. Curve Type ( Tipos de curva) Hay varios posibles clculos de ajuste de curva para uso con mltiples niveles de calibracin.

Por segmentos Lineal Cuadrtica Cbicas Exponencial Energtica Promedio Rsp/Amt

Origin (Origen)

Hay varias formas de tratar el origen cuando se traza la curva de respuesta, puede ignorar el origen, incluir el origen, forzar al origen o conectar al origen. Los valores predeterminados son lineales y son de origen.

Weight (Peso) Cuando se genera la curva de calibracin, se puede especificar la relativa ponderacin (o importancia), de los distintos puntos de calibracin. Las opciones de ponderacin son los siguientes:
Equal Todos los puntos de calibracin tienen igual peso en la curva.

Cargue la seal (s) para el estndar de bajo nivel e integre

Para crear la tabla de calibracin, primero introduzca el estndar de bajo nivel e integre. El estndar de bajo nivel suele ser el ms difcil de integrar, por lo tanto, los eventos de integracin para este estndar pueden ser adecuados para estndares ms concentrados. Asegrese de que se integren todos los picos necesarios y que los nombres se colocan apropiadamente.

Creando una tabla de calibracin: Nivel Uno

Una vez que ha integrado la seal para el nivel ms bajo, vaya al men de calibracin y seleccione nueva tabla de calibracin... Este men le crear una tabla de calibracin desde el archivo de datos actualmente cargados. Una tabla de calibracin existente se eliminar. Especificar el nivel de calibracin inicial. El valor predeterminado es uno. Puede especificar una cantidad predeterminada para todos los picos. Seleccione calcular seales separadamente para asegurar que, en los reportes del clculo de % normalizado, las cantidades de los porcentajes

de las seales reportados separadamente suman 100% para cada seal. Cuando esta opcin est deseleccionada, el % de la cantidad de todas las seales suma hasta un 100%.
Calcular las seales por separado es un prerrequisito para la clasificacin de cada seal en la tabla de calibracin.

Tabla de Calibracin Generalidades:

Fill in: Nombre del componente Grupo Cantidad Verifique si es: Pico de Referencia ISTD Indique #

Aparece la tabla de calibracin. En este punto, debe llenar en informacin datos como las concentraciones de los estndares y los nombres de los picos a calibrar.

# de Componente La ChemStation asigna un nmero nico de componente para cada compuesto en la corrida de calibracin en el orden de elucin. Los nmeros de componentes se reasignan cada vez que se realizan inserciones o eliminaciones. Si aades seales paralelas a los datos de calibracin al mismo tiempo, utilizando la nueva tabla u la opcin de aadir picos en el cuadro

de dilogo calibrar/recalibrar, los picos paralelos sern automticamente agrupan a un compuesto. Para ver todos los picos de un compuesto, utilice el cuadro de dilogo de datos compuesto. Para ver los picos de un compuesto, utilice el cuadro de dilogo detalles de un compuesto.
RT El tiempo de retencin del pico principal del compuesto en la corrida de calibracin aparece en la columna de RT.

Seal Indica a qu seal pertenece el pico calibrado. Compuesto Nombre del compuesto. Lvl El nivel de calibracin es un punto sobre una curva de calibracin. Una cantidad y una respuesta correspondiente a esa cantidad definen el nivel. La cantidad corresponde a una muestra de calibracin que contenga una concentracin particular de componentes.

Todos los picos que pertenecen a una muestra de calibracin particular (mezcla) tienen el mismo nmero de nivel. Amt La cantidad del compuesto en la muestra de calibracin. Las entradas de la Amt para un pico del estndar interno generalmente son los mismos en todos los niveles.

Area (o altura)
El rea del Pico calculado por el integrador. Esto es un valor fijo y no se puede editar. AMT/zona (o Amt/altura).

Amt/rea (Amt/altura) Cantidad, rea o altura y el factor de respuesta son interdependientes, segn la siguiente frmula: Factor de respuesta = Cantidad/ (rea o altura) En consecuencia, el factor de respuesta aparece como Amt/rea o Amt/altura. Esta columna se ajusta automticamente dependiendo de la opcin elegida en el cuadro de dilogo reporte especfico. La ChemStation calcula el factor de respuesta de los resultados de la corrida de calibracin y de la cantidad introducida. Si se modifica el factor de respuesta manualmente, el nmero que usted escriba se ajustar ligeramente segn la zona,

La cual tiene un valor corregido. La relacin se calcula con una precisin de seis lugares decimales.

Referencia (Ref) Identifica un pico como un pico de referencia de tiempo. Los picos de referencia corrigen las de corrida en corrida las variaciones en los tiempos de retencin debido a la tcnica de inyeccin, temperatura y flujo. Estndar Interno (IEST) Identifica un compuesto que se utiliza como estndar interno. Un estndar interno (ISTD) es

asignado a un grupo de picos introduciendo el mismo I # nmero para esos picos. Identificador del componente IEST (I #) Identificador del componente ISTD. El software cuenta con un nmero entre 1 y 99. Los compuestos no identificados como de referencia estn vinculados a su correspondiente ISTD ingresando el identificador ISTD en la columna I#. Esto hace posible utilizar mltiples ISTD al mismo tiempo.

Cargue la seal- Aada el Nivel 2

Para aadir el segundo nivel a la tabla de calibracin, primero carga la seal para el segundo estndar e integrarlo. Ir al men de calibracin y seleccione Agregar nivel... Introduzca el nmero de nivel y la cantidad predeterminada si as lo desean. En este caso, el nmero de nivel es dos. Despus seleccione OK en el panel. Cuando reaparece la tabla de calibracin, necesita llenar solamente en las cantidades para el segundo nivel, luego OK en la tabla. Repita el proceso con todos los otros niveles.

Inserte Etiquetas

Repita el proceso de agregar nivel hasta que todas las normas se han aadido a la tabla. Tenga en cuenta que la exhibicin de la curva de calibracin se actualiza automticamente cada nuevo nivel se aade a la tabla de calibracin.

Opciones de la tabla de calibracion

Compound, Amt, Area, Rsp Factor, Ref, ISTD#

Compound, Grp, Amt, Low Limit High Limit

Compound, Amt, Area, Def, Curve Type, Origin Compound, Area, Rsp%, Def, +-, Pk Usage

El men de opciones de tabla de calibracin contiene cuatro diferentes diseos de tablas de calibracin predefinidos. En resumen este esquema predeterminado contiene: el tiempo de retencin, seal, nombre, nivel #, cantidad, rea e informacin de la ISTD para cada pico. Puede cambiar este esquema predeterminado utilizando las opciones de editar... del Detalle de compuestos Utilice este diseo de la tabla de calibracin para obtener un resumen en su compuesto de informacin. La disposicin predeterminada contiene el nombre del compuesto, compuesto

del grupo #, # nivel, cantidad y lmites de cantidad. En algunas revisiones, las muestras de control se especifican aqu. Detalles de picos Utilice este diseo de la tabla de calibracin para obtener un resumen sobre los detalles de su pico. El diseo predeterminado contiene el tiempo de retencin previsto, la seal, nombre compuesto, # nivel, cantidad, zona o altura e informacin de la curva de calibracin. Detalles de identificacin Esta tabla muestra la informacin importante para la identificacin de pico. La disposicin

predeterminada contiene el tiempo de retencin previsto, ventana de tiempo de retencin, seal, nombre compuesto, rea o altura, % de respuesta, tolerancia de calificador y pico usado. Utilizar esta disposicin si desea definir calificadores de pico.

Definicin de compuestos

Use Low and High Limits as qualifiers to confirm peak identification.

La tabla de datos compuesto muestra todos los picos y permite especificar lmites de cantidad. Cantidad Limite bajo y alto Especifica un lmite superior e inferior para la cantidad de compuesto. Si la cantidad calculada est fuera de los lmites, aparece una advertencia en el informe. Los lmites de cantidad pueden utilizarse para confirmar la identificacin de picos. Compuestos que estn fuera de los lmites de cantidad no se utilizan para recalibrar la tabla de calibracin. Las cantidades mnimas y mximas no consideran un valor multiplicador que haya especificado. Si se seleccionan las casillas de verificacin, se aplica el lmite.

Descricion de picos
Check Def to apply the default curve type and origin from the Calibration Settings dialog box.

Curve Types Piece wise Exponent Linear Quadratic Log Cubic Power Average Rsp/Amt

Origin Ignore Include Force Connect straight segment

La opcin detalles de tabla de calibracin de picos contiene informacin sobre la curva de calibracin. Usted puede elegir entre varios clculos el que mejor se ajuste para su uso con varios niveles de calibracin incluyendo: por segmentos, lineal, logartmica, energtica, exponencial, cuadrtica, cbica y promedio rsp/AMT. Si se selecciona la columna Def, se utilizar el tipo predeterminado calibracin curva y origen tratamiento desde el cuadro de dilogo calibration setting. Cuando se cambia la curva de calibracin por defecto en los ajustes de calibracin, la tabla de calibracin se actualiza automticamente con los nuevos valores.

Hay cuatro maneras para tratar el origen cuando se traza la curva de calibracin. Puede ignorar el origen, incluir el origen, forzar al origen o conectar un segmento recto al origen. Los valores predeterminados son lineales e incluyendo el origen.

Opciones para editar la Tabla de Calibracin

Defina las columnas incluidas en su tabla de calibracin

La pantalla de opciones de tabla de calibracin permite definir las columnas incluidas en el cuadro de dilogo Tabla de calibracin. El cuadro de dilogo de opciones consta de dos listas: Columns not shown despliega las columnas que pueden aadirse a la visualizacin de la tabla de calibracin. Columns shown despliega las columnas que se muestran en la tabla de calibracin. Para aadir una columna a la tabla de calibracin simplemente resalte el nombre de la columna. Haga clic en el botn de flecha derecha. Asimismo, para eliminar una columna, resltelo y haga clic en la flecha izquierda. Para la revisin A.05.01 y >, usted puede agregar el Control muestra lmites a su tabla de calibracin seleccionando Are Ctrl. Smpl. Limits set a las columnas que se muestran en la lista.

Una vez agregado, puede hacer doble clic en el pico de inters y definir los lmites de la muestra de control. Muestras de control pueden evaluarse durante el funcionamiento de la secuencia. Para las revisiones anteriores, consulte la vista de detalles de pico.

Herramientas de cuantificacin
Calibration Task Tool Recalibrate with Current Chromatogram New Calibration Table Add New Level Signal Details

Add New Peaks

Select Calibrated peak(s) from Chromatogram and delete from calibration table. Select peak(s) from chromatogram and add to calibration table

Edit Calibration Table Options Select compounds from chromatogram and recalibrate

Cuando se selecciona la herramienta de tarea de calibracin, la barra de herramientas contiene muchas herramientas para ayudarle a construir su tabla de calibracin fcilmente sin tener acceso a los mens en cascada.

Guarde la tabla de Calibracin como parte del Mtodo

Save Table to Method

Cuando ests satisfecho con la tabla de calibracin y el tratamiento de la curva y origen recuerda guardar la tabla como parte de su mtodo.

Opciones de la seal

Customized display on screen and in reports

Include Se puede incluir mostrar o imprimir un cromatograma segn las opciones de inclusin que seleccione. Coloque una marca de verificacin en la casilla correspondiente para identificar los elementos que desea incluir en el informe. Peak Labels Font (Etiquetas de picos) Puede cambiar los atributos de la fuente actual (tamao, estilo, color, opciones de subrayado y rotacin) para las etiquetas de pico en el cromatograma haciendo clic en la fuente....

Ranges (Rangos) Para imprimir/desplegar el cromatograma completo seleccione la opcin Full. El rango completo de tiempos de retencin y respuesta es graficado. Para imprimir o mostrar slo una parte del cromatograma, seleccione la opcin de Use Ranges. La opcin Autoscale ampliar la gama de respuesta a la altura del segundo pico ms alto.

Multi-Cromatogramas Puede seleccionar un formato Separated o Overlaid (separado o superpuesto) del cuadro de lista desplegable que se utiliza para impresin/Mostrar ms de un cromatograma.

Todos los cromatogramas pueden mostrarse usando la misma escala y-x , All the Same Scale y tener todos la misma escala, o teniendo cada cromatograma su propia auto escala, Each in Full Scale.

Anotaciones
The Annotation sidebar can be activated within all toolsets Use it for a customized chromatogram in slides or publications Selectable fonts and colors Easy placing and moving of annotations

La funcin de anotar permite aadir anotaciones a una ventana activa. Tambin puede editar o eliminar una anotacin existente. Antes de aadir una anotacin, asegrese de que est cargado un cromatograma, y que la ventana est activa. Seleccione New Annotation en el men Grapics y haga clic en el cursor en la ventana activa en la posicin deseada la anotacin para empezar. Ahora ver que aparece el cuadro de dilogo Text annotation. Escriba la nueva anotacin en el campo. Puede utilizar el botn de Options para especificar la fuente, tamao de fuente, color y etc. de la anotacin.

Manipulacin de la seal

Overlay, subtract and align signals

Utilice la herramienta de seal colocada para trabajar grficamente con el cromatograma. Este conjunto de herramientas no tiene elementos de men correspondiente. Se pueden realizar tareas como alinear el eje x de mltiples seales. Esto puede ser til cuando usted ha adquirido datos en un detector de arreglo de diodos y un detector de fluorescencia. Otras opciones incluyen un recubrimiento 3D de seales, espejo de seales y restando las seales.

Calibracin