Universidad del valle Facultad de ciencias Departamento de biologa Seccin de gentica

CARACTERIZACIN FENOTPICA Y CICLO DE VIDA DE DROSOPHILA MELANOGASTER

INTRODUCCIN: La mosca de la fruta (Drosophila melanogaster) es un insecto holometbolo (metamorfosis compleja), perteneciente al orden Diptera y a la familia Drosophilidae, que durante su ciclo biolgico atraviesa por etapas de huevo, larva, pupa y adulto. Es muy abundante en estado silvestre, encontrndose en grandes cantidades cerca de los racimos de banano y en general cerca de frutas en descomposicin, razn por la que se le conoce como mosca de la fruta o moca del vinagre. Ha sido introducida a todos los continentes del mundo con excepcin de Antrctica. En los continentes donde se encuentra, su rango est limitado solo por montaas, desiertos y grandes altitudes. Su rango natural se encuentra en las zonas tropicales del viejo mundo y ha sido introducida artificialmente a todas las zonas tropicales (pues requiere humedad) donde se encuentra actualmente. Es un organismo modelo en gentica y ha sido ampliamente usada como material experimental desde que fue utilizada por W.E. Castle, en 1906, y sent las bases para las cruzas llevadas a cabo por T. H. Morgan y sus colaboradores en 1909, pues posee un ciclo biolgico corto (lo que permite obtener resultados de varias generaciones en poco tiempo, produce una progenie numerosa (lo que permite tener un tamao muestral n lo suficientemente grande para que sea estadsticamente significativo), posee una diversidad fenotpica alta (permitiendo hacer diferentes inferencias y ms variables pueden ser estudiadas y evaluadas) y de fcil identificacin y sexado (lo que permite tener un trabajo ms preciso y sencillo), es de fcil crianza y con un costo de manejo bajo (para el mantenimiento de suficientes individuos de estudio). Ciclo de Vida: A 20C la duracin del periodo huevo a larva es de 8 das, donde se desarrollan las 4 fases: huevo, pupa, larva y adulto. Huevo: Las hembras adultas son capaces de poner huevos dos das despus de emerger del estado de pupa, y la puesta va en aumento durante una semana hasta alcanzar de 50 a 75 huevecillos por da. La ovoposicin se lleva a cabo en la superficie del alimento (sea la fruta en condiciones naturales, o el medio de Huevo de Drosophila cultivo experimentalmente) y el huevo es ovoide, con pequeas proyecciones que melanogaster. Tomado de emergen del extremo, stas son aplanadas y son bsicamente para fijacin del en.wikivisual.com/index.php /Drosophila huevo en el medio y evitar penetraciones muy profundas en el mismo que perjudiquen los dems estadios. Los huevos pueden ser vistos a ojo desnudo (miden aproximadamente 0,5 mm) sobre la superficie del alimento durante aproximadamente 2 das, tiempo que dura este estado a 20C, despus del cual emerge la larva.

Larva: La larva es banca, segmentada, vermiforme y mide entre 4 y 5 milmetros. Pasa por tres estados larvarios: el primero dura aproximadamente un da y la larva tiene metabolismo aerbico, finalizando en una muda de piel y partes orales, dando paso al segundo estado anaerbico que tambin dura aproximadamente un da, se caracteriza porque las larvas hacen cavernas dentro del medio de cultivo y finaliza con una muda como el primer estadio. El tercer y ltimo estadio larvario Foto por Jim Kalisch, UNL Entomology dura dos das aproximadamente y se caracteriza porque la larva cambia nuevamente a metabolismo aerbico, deja de ser traslucida, aumenta de volumen y se vuelve ms lenta y termina en la pupacin. Pupa: La pupa mide alrededor de los 3 milmetros e inicia con un color similar al ltimo estado larvario, pues el animal enpupa dentro de su ltima piel del estadio larvario. Paulatinamente la pupa se endurece y oscurece hasta llegar a un marrn o marrn claro. Durante esta fase, que dura aproximadamente 6 das, ocurre una reorganizacin del animal y las estructuras larvarias son rediseadas a partir de tejidos embrionarios denominados discos imaginales. Al finalizar este estadio, la forma corporal y estructuras son las del imago (adulto).

Adulto: La fase reproductiva del ciclo se inicia en este ltimo estadio, que inicia cuando el animal hace su salida por el extremo anterior de la pupa, con un color ms claro de lo normal, pero en pocas horas obtienen el color caracterstico de una mosca adulta. Seis horas despus de su eclosin, las moscas pueden empezar a aparearse y dos das despus de emergida, la hembra puede comenzar la ovoposicin y su vida media es de alrededor de 40 das.

Foto por Christen Mirth, University of Washington

Tomado de Dang et al. 1998

Laboratorio 1: Caracterizacin fenotp ica y ciclo de vida de Drosophila melanogaster Laboratorio de Gentica General

Tomado de FlyM ove: http://flymove.uni-muenster.de/

A pesar de la relacin directamente proporcional entre velocidad del ciclo y el aumento de la temperatura, cuando se supera el umbral de los 30C, las moscas se vuelven estriles y en muchas ocasiones mueren. Algo similar sucede al bajar las temperaturas, pues disminuye el ciclo hasta el umbral de los 4C

Caractersticas fenotpicas y mutaciones: Con lupa o microscopio estereoscpico (e incluso a simple vista), la mosca de la fruta tiene caractersticas fcilmente identificables entre las que se encuentran el color, la textura y el tamao de los ojos; la longitud, curvatura y disposicin de las alas; tamao y color del cuerpo; venaciones alares, entre otros. En estado silvestre Drosophila melanogaster es una mosca con una longitud entre 2-3mm, poseen ojos de color rojo brillante, un cuerpo de color amarillo marrn y tienen anillos negros que atraviesan su abdomen. El dimorfismo sexual es evidente, las hembras son un poco ms grandes, con un abdomen amplio, pero terminado en punta, mientras que el abdomen en los machos es un poco ms estrecho, redondeado y oscuro debido a la fusin de los tres ltimos segmentos abdominales. De igual forma, los machos poseen estructuras nicas tales como los peines sexuales y claspers, con los que fcilmente pueden separarse los sexos. Todas las caractersticas anteriormente mencionadas se encuentran en moscas en estado silvestre, pero es posible (tanto natural como artificialmente), encontrar variantes fenotpicas, principalmente atribuibles a mutaciones, las cuales (en conjunto con las caractersticas morfolgicas tradicionales) sern objeto de la presente prctica.

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OBJETIVOS: 1. Reconocer la importancia del uso de la mosca Drosophila melanogaster para experimentos en gentica. 2. Conocer las diferentes etapas del ciclo de vida de la mosca de la fruta Drosophila melanogaster. 3. Conocer y diferenciar las principales caractersticas sexuales que sirven para el sexado rpido de machos y hembras. 4. Comparar la cepa silvestre de Drosophila melanogaster con varias cepas mutantes y aprender su correcta identificacin. MATERIALES Y METODOS: En el laboratorio se les suministrar un microscopio estereoscpico, torundas de algodn, ter y especmenes silvestres y mutantes de Drosophila melanogaster, as como algunos medios de cultivo con larvas y huevos (los estudiantes deben traer embudos plsticos).

Ciclo de vida en D. melanogaster: Tome un medio con huevos y cuidadosamente retire uno y pngalo bajo el estereoscopio. Realice esquemas y descripciones de cada detalle del mismo. Posteriormente, retire una larva del medio y proceda de igual manera que con el huevo. Al finalizar los esquemas y descripciones de las larvas, proceda cuidadosamente, a retirar una pupa de la pared del frasco y realice los esquemas y descripciones pertinentes.

Morfologa y dimorfismo sexual en D. melanogaster: Retire algunas de las moscas del cultivo y traspselas, con ayuda de un embudo, a un frasco de vidrio vacio. Una vez separadas, anestesie las moscas aadiendo algunas gotas de ter etlico (aproximadamente 0.5cm 2) en el tapn del medio hasta adormecerlas (tenga cuidado, pues una exposicin prolongada matar las moscas). Una vez dormidas retire el tapn y proceda cuidadosamente a observar bajo el microscopio estereoscpico, las moscas silvestres que se le proveen. Realice esquemas de cada seccin del cuerpo del insecto en los formatos que se le proveen o en las hojas que usted elija y rotule sus partes incluyendo: Cabeza: Antena, aristas, proboscis, ojos compuestos, ocelos y setas. Trax: Protrax (que comprende el primer par de patas con su coxa, trocanter, femur, tibia y tarsos), se debe prestar especial atencin al peine sexual, mesotrax (del final del protrax hasta el segundo par de patas, incluyendo las alas; esquematice con especial cuidado la venacin alar de la mosca) y metatrax (hasta el tercer par de patas; esquematice los alteres o balancines). Abdomen: esquematice los segmentos e identifique la regin genital. Con los caracteres dimrficos (Segmentos abdominales fusionados en machos, forma del abdomen, peine sexual, color y claspers) diferencie sexualmente a las moscas y haga un conteo de los machos y las hembras que le fueron entregados.

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Identificacin y diferenciacin de los mutantes de D. melanogaster: Una vez la morfologa silvestre sea clara, tome uno por uno, cada mutante de Drosophila y, siguiendo el mismo procedimiento de manipulacin de los animales, haga una descripcin detallada de las caractersticas que las diferencian del fenotipo silvestre. Use los anexos u hojas propias. Cada mutante les ser suministrada con un nmero, por lo que debern identificar cada una haciendo uso del anexo 1. En el caso de las mutaciones Curly (Cy), dumpy (dp), vestigial (vg), crossveinless (cv), forked (f) y Lobe (L), incluya adems de la descripcin, un esquema donde se identifique claramente las diferencias con silvestre (+/+).

Evaluacin de la prctica Esta prctica ser evaluada a partir de este pre-informe que deber entregar al final de la prctica y un ensayo sobre la importancia de los organismos modelo para la investigacin en biologa y especficamente gentica. Este ltimo deber incluir ejemplos de otros organismos modelos importantes adems de Drosophila con las razones para su importancia. Debern entregarlo 8 das despus de la prctica. La nota final del laboratorio ser el promedio entre los dos componentes mencionados. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS: Ashburner, M. & J. Roote. 2007. Maintenance of a Drosophila Laboratory: General Procedures. Cold Spring Harbor Protocols. Ashburner, M. & J.N. Thompson. 1978. The laboratory culture of Drosophila. In: The genetics and biology of Drosophila. (Ashburner M, Wright TRF (eds.)). Academic Press. volume 2A: pp. 1 81. Ashburner, M., Golic KG, Hawley RS (2005). Drosophila: A Laboratory Handbook. (2nd ed. ed.). Cold Spring Harbor Laboratory Press. pp. 1624. Bodenstein, D. & M. Demerec. 1950. Biology of Drosophila. New York: John Wiley and Sons, Inc.. Chiang, H.C. & A.C, Hodson. 1950. An analytical study of population growth in Drosophila melanogaster. Ecological Monographs 20: 173206. Dang, K.D., Dutt, P.B. & D.R. Forsdyke. 1998. Chargaff difference analysis of the bithorax complex of Drosophila melanogaster. Biochemistry and Cell Biology 76: 129-137. Klug, W.S., Cummings, M.R & C.A Spencer. 2006. Conceptos de Gentica. Octava Edicin. Pearson Educacin, S.A. Madrid. Patterson, J. & W. Stone. 1952. Evolution in the Genus Drosophila. New York: Macmillan Co.. Ramos, P., Abundis, H.M, Gaytn, J.C., Ordaz, M.G., Orozco, P.G., Maldonado, J., Hernendez, J., Gonzlez, E., Reyes, P., Galicia, E.M. & J.A. Muoz. 1993. Manual de laboratorio de gentica para Drosophila melanogaster. McGraw Hill. Mxico.

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REFERENCIAS ELECTRNICAS TILES:

Berkeley Drosophila Genome Project (BDGP): http://www.fruitfly.org/DGC/index.html. Consultado en Febrero de 2009. Bloomington Drosophila Stock Center: http://flystocks.bio.indiana.edu/ . Consultado en Febrero de 2009. Brody, T.B. 2008. Meet the Interactive Fly; The Interactive Fly (edicin 53): http://www.sdbonline.org/fly/aimain/1aaintro.htm. Consultado en Febrero de 2009. Drosophila Genetic Resource Center: http://www.dgrc.kit.ac.jp/en/index.html. Consultado en Febrero de 2009. Drosophila Genomics Resource Center: http://dgrc.cgb.indiana.edu/. Consultado en Febrero de 2009. Ensembl Fruitfly Site: http://www.ensembl.org/Drosophila_melanoga ster/index.html. Consultado en Febrero de 2009. Inside the F ly Lab: http://www.thir teen.org/cur ious/episodes/inside-the-fly-lab/. Consultado en Febrero de 2009. Katrin Weigmann, Rober t Klapper, Thomas Strasser, Christof Ricker t, Gerd Technau, Herbert Jckle, Wilfried Janning and Christian Klmbt. FlyMove a new way to look at development of Drosophila.Trends Genet. In press: http://flymove.uni-muenster.de. Consultado en Febrero de 2009. Manning, G. A quick and simple introduction to Drosophila melanogaster: http://ceolas.org/VL/fly/intro.html. Consultado en Febrero de 2009. Miller, C. Drosophila melanogaster (On-line), Animal Diversity Web: http://animaldiversity.ummz.umich.edu/site/accounts/information/Drosophila_melanogaster.html. Consultado en Febrero de 2009. National Human Genome Research Institute. Base de datos de D. melanogaster: http://flybase.bio.indiana.edu/. Consultado en Febrero de 2009. Navarro, B. J. & Elland, C.(Eds.). 2006. Studying Drosophila: Flies in Space. NASA: http://quest.nasa.gov/projects/flies/species.html. Consultado en Febrero de 2009. Professor Doktor. The humble fruit fly, Drosophila melanogaster: http://scitechlab.wordpress.com/2008/11/02/the-humblefruit- fly-drosophila- melanogaster/. Consultado en Febrero de 2009.

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LABORATORIO DE GENTICA GENERAL ESQUEMAS Y DESCRIPCIONES LABORATORIO 1 ANEXO 1 1. Ciclo de Vida: Esquema Huevo: Descripcin

Larva:

Pupa:

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2. Morfologa y Dimorfismo sexual. En los caos de dimorfismo sexual no olvide incluir esquema de macho y hembra: Esquema Descripcin Cabeza:

Trax:

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Esquema Venacin Alar:

Descripcin

Peine sexual:

Abdomen:

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Esquema Claspers:

Descripcin

3. Identificacin de mutantes. Incluya descripcin y el numero de la mutante correspondiente: Mutante Ebony (e):

Yellow (y):

Black (b):

Sepia (se):

White (w):

Bermelln (v):

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Mutante

Dumpy (dp):

Curly (Cy):

Vestigial (vg):

Forked (f):

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Mutante Bar (B):

Lobe (L):

Crossveinless (cv):

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LABORATORIO DE GENTICA GENERAL MUTANTES EN D. melanogaster LABORATORIO 1 ANEXO 1

1. PRINCIPALES TIPOS DE MUTANTES DE Drosophila melanogaster

Smbolo + e y se w v dp Cy D vg Ac b B ey f L Pm pr m

Nombre Silvestre Ebony Yellow Sepia White Bermelln Dumpy Curly Dichaeta Vestigial Aqueta Black Barra (Bar) Eyeless Forked Lobe Plum Purple Miniature

Principales Caractersticas Cuerpo claro, alas largas, ojos rojos Cuerpo de color oscuro, alas largas y ojos rojos Cuerpo color amarillo, pelos y venas de las alas amarillos Color de ojos caf Color de ojos blanco Color de ojos anaranjado Alas truncadas y reducidas a los 2/3 de longitud de las alas tipo silvestre Alas curvas hacia arriba Alas abiertas Alas muy reducidas Cerdas del dorso ausentes y en general setas disminuidas o ausentes Cuerpo con pigmento muy negro al igual que las venas alares Ojo muy estrecho, restringido a una franja o barra Ojos muy reducidos o ausentes Las setas o cerdas acortadas, retorcidas y dobladas con extremos bifurcados Ojo lobulado, ligeramente ms pequeo y con indentacin en el borde anterior. Ojo color rub a uva con manchas oscuras Ojo e jvenes de color rub y se oscurece con la edad a prpura. Tamao corporal y alar menor al + y estas ltimas grises y menos transparentes

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