LIMPIEZA Y DESINFECCION EN EL LABORATORIO FISICOQUIMICO Y EN EL LABORATORIO MICROBIOLOGICO

KAREN DANEY REAL ACUA INGRID MELISSA ROMERO CUELLAR PAULA ANGELICA ALBARRACIN PEALOZA PAOLA ANDREA RONCANCIO FERNNDEZ

SENA CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL QUMICA APLICADA A LA INDUSTRA Bogot D.C. 2013

LIMPIEZA Y DESINFECCIN EN EL LABORATORIO FISICOQUIMICO Y MICROBIOLOGICO

KAREN DANEY REAL ACUA INGRID MELISSA ROMERO CUELLAR PAULA ANGELICA ALBARRACIN PEALOZA PAOLA ANDREA RONCANCIO FERNNDEZ

Limpieza y desinfeccin en laboratorio fisicoqumico y microbiolgico

Instructor JUAN PABLO MEDINA

SENA CENTRO DE GESTIN INDUSTRIAL Bogot D.C. Enero 28 de 2013

TABLA DE CONTENIDO

BIBLIOGRAFIA.................................................................................................... 35 GLOSARIO......................................................................................................... 32 INTRODUCCION................................................................................................... 4 MARCO TEORICO................................................................................................. 6 MATERIALES LABORATORIO FISICO-QUIMICO....................................................20 MATERIALES LABORATORIO MICROBIOLOGICO.................................................22 OBJETIVO GENERAL............................................................................................. 5 PROCEDIMIENTO LABORATORIO MICROBIOLOGICO..........................................28 PROCEDIMIENTO LIMPIEZA LABORATORIO FISICO-QUIMICO..............................23

INTRODUCCION La limpieza y la desinfeccin son procedimientos de gran importancia, ya que permiten controlar la presencia de microorganismos sobre las superficies. La limpieza se define como el proceso de remover fsicamente el sucio, el polvo, la grasa, y otros contaminantes de las superficies, equipos, reas, etc. La desinfeccin es un proceso que implica la destruccin de microorganismos perjudiciales (formas vegetativas), a travs del uso de sustancias qumicas o agentes fsicos aplicados sobre superficies inertes. La limpieza debe ser un paso previo a la desinfeccin ya que con este proceso, adems de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las soluciones desinfectantes acten eficientemente. En un laboratorio microbiolgico se debe tener control sobre todos los microorganismos de superficies, personal y aire ya que bacterias podran interferir y afectar los procedimientos de fabricacin de productos. En este protocolo se especificara el procedimiento de limpieza y desinfeccin de las reas del laboratorio microbiolgico.

OBJETIVO GENERAL

Encontrar el mejor mtodo de desinfeccin y limpieza en laboratorios Fisicoqumicos de tal manera que sea el ms apropiado en menor tiempo posible. Conocer el proceso y comprender la importancia de la limpieza y desinfeccin del laboratorio de microbiologa para mantener un espacio adecuado para el trabajo; esttico y que no afecte a la salud ni al ambiente.

MARCO TEORICO Desinfeccin y limpieza de Laboratorios: La desinfeccin de instrumentos y superficies de los puestos de trabajo, bsicamente en el laboratorio donde se manipulan muestras biolgicas, constituye la forma ms adecuada de evitar el posible contagio. Esto se consigue con una correcta utilizacin de desinfectantes. Para el empleo de estos productos es necesario conocer los riesgos ligados a su utilizacin y los consejos de prudencia que deben estar indicados en la etiqueta y en la ficha de datos de seguridad. En general, el producto debe poderse aplicar de tal manera que no presente ningn riesgo de toxicidad aguda o crnica para los animales y el hombre. Debe tenerse en cuenta que, por su propia funcin, destruccin de microorganismos, la mayora de desinfectantes tienen unas caractersticas de toxicidad importantes. La primera accin preventiva en cuanto a su uso es comprobar que estn adecuadamente etiquetados segn la normativa vigente, (Reales Decretos 1078/1993, preparados, y 363/1995, substancias, y siguientes, transposicin de las correspondientes Directivas de la Unin Europea), tanto si se han adquirido comercialmente como si se han preparado en el propio laboratorio. Al adquirir productos qumicos debe exigirse siempre con la primera entrega la ficha datos de seguridad correspondiente. Relacin de desinfectantes qumicos de uso ms corriente cido peractico

Las soluciones de cido peractico (peroxiactico) al 35%, que pueden ser diluidas hasta un mnimo del 0,2%, se emplean como sustitutas del glutaraldehdo, que es el desinfectante ms ampliamente usado. El cido peractico es una substancia corrosiva y comburente, que a concentraciones superiores al 10% tiene asignadas las frases R: 7-10-20/21/22-35 y S: 3/7-14-36/37/ 39-45. NOTA: Para el significado de las frases R y S consultarla NTP-332. Agua oxigenada (perxido de hidrgeno)

Se emplea en soluciones acuosas en concentraciones del orden del 35% o tambin, cuando se trata de procedimientos que implican la generacin de fase vapor, a concentraciones ambientales no inferiores a 2 mg/L. Se usa muchas veces como sustituto del glutaraldehdo.El perxido de hidrgeno es un compuesto que, a concentraciones superiores al 20%, es corrosivo y comburente. La American Conference of Governmental Industrial Hygienists (ACGIH) establece para el perxido de hidrgeno un TLV-TWA (valor lmite ambiental para exposiciones de 8 horas/da y 40 horas a la semana) de 1 ppm (1,4 mg/m3). Las frases asignadas son R: 8-34 y S: 3-28-36/39. Alcohol etlico (etanol)

Es el desinfectante de uso tpico ms conocido y universalmente aplicado, especialmente para desinfeccin de la piel. Se emplea a diferentes concentraciones en agua. Es poco eficaz frente a ciertos tipos de virus y la mayora de esporas. Tiene un valor TLV-TWA de 1.000 ppm (1.880 mg/m3). Es una substancia inflamable; tiene asignadas las frases R: 11 y S: 7-16. Alcohol isoproplico (isopropanol)

Es utilizado tambin como antisptico de uso tpico en concentraciones del 70% en agua, con una efectividad equivalente a la del etanol. El TLV-TWA es de 400 ppm (983 mg/m3) y el TLV-STEL (valor lmite umbral para exposiciones de corta duracin) de 500 ppm (1230 mg/m3). Es una substancia inflamable y tiene asignadas las frases R: 11 y S: 7-16. Aldehdos

La actividad de los aldehdos, bsicamente formaldehdo y glutaraldehdo, est ligada a la desnaturalizacin de las protenas y de los cidos nuclicos por reduccin qumica. Los aldehdos destruyen muy bien las bacterias, los hongos microscpicos y tienen tambin una excelente accin virucida. Se emplean para desinfectar superficies, aparatos e instrumentos. Formol-formaldehdo

El formol o formalina es la disolucin de formaldehdo en agua en una proporcin de alrededor de un 37% en peso, conteniendo as mismo entre un 10 y un 15% de metanol para evitar su polimerizacin. Las soluciones de formol que contienen concentraciones de formaldehdo iguales o superiores al 5% constituyen un eficaz desinfectante lquido de uso muy extendido.
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El formaldehdo debe considerarse como un producto especialmente peligroso, ya que, adems de su accin irritante (la irritacin ocular en el hombre se presenta a concentraciones entre 0,1 y 1 ppm) y alrgena (el formol es responsable adems de sensibilizaciones cutneas), est clasificado por la International Agency for Research on Cancer (IARC) en el grupo 2A (substancia probablemente cancergena). La ACGIH ha fijado un TLV-C (valor techo no sobrepasable en ningn instante) de 0,3 ppm (0,37 mg/m3) y lo incluye en el grupo A2 (carcingenos con sospecha de serio en el humano). Es una substancia considerada txica, por lo que la exposicin debe reducirse al mximo; tiene asignadas las frases R: 23/24/25-34-40-43 y S: 26-36/37-45-51. Glutaraldehdo

La solucin de glutaraldehdo al 2% aplicada durante 30 minutos es efectiva como desinfectante y, en aplicaciones de 10 a 12 horas, se puede utilizar como esterilizante. La ACGIH establece un valor TLV-C para el glutaraldehdo de 0,2 ppm (0,82 mg/m3). La solucin de esta substancia entre el 2 y el 10% est clasificada como nociva y peligrosa para el medio ambiente y tiene asignadas las frases R: 20/22-37/38-41-42/43-50 y S: 26-36/37/39-45-61. En la prctica diaria, el glutaraldehdo no es un producto que presente una especial peligrosidad, ya que tiene una tensin de vapor muy baja (es poco voltil) y, por ello, raramente se encuentra en forma de vapor en el aire, a no ser que se calienten las soluciones que se empleen del mismo que, por otro lado, suelen ser siempre bastante diluidas; sin embargo se pueden generar aerosoles por agitacin o manipulaciones bruscas al sumergir o sacar material del lquido. El formol y el glutaraldehdo se pueden emplear solos o bien asociados a un detergente, siendo esta ltima combinacin especialmente efectiva frente a los polivirus. Tambin se emplean mezclados con fenol y fenolatos. Alcohol isoproplico (isopropanol)

Es utilizado tambin como antisptico de uso tpico en concentraciones del 70% en agua, con una efectividad equivalente a la del etanol. El TLV-TWA es de 400 ppm (983 mg/m3) y el TLV-STEL (valor lmite umbral para exposiciones de corta duracin) de 500 ppm (1230 mg/m3). Es una substancia inflamable y tiene asignadas las frases R: 11 y S: 7-16. Aldehdos

La actividad de los aldehdos, bsicamente formaldehdo y glutaraldehdo, est ligada a la desnaturalizacin de las protenas y de los cidos nuclicos por reduccin qumica. Los aldehdos destruyen muy bien las bacterias, los hongos microscpicos y tienen tambin una excelente accin virucida. Se emplean para desinfectar superficies, aparatos e instrumentos. Formol-formaldehdo

El formol o formalina es la disolucin de formaldehdo en agua en una proporcin de alrededor de un 37% en peso, conteniendo asimismo entre un 10 y un 15% de metanol para evitar su polimerizacin. Las soluciones de formol que contienen concentraciones de formaldehdo iguales o superiores al 5% constituyen un eficaz desinfectante lquido de uso muy extendido. El formaldehdo debe considerarse como un producto especialmente peligroso, ya que, adems de su accin irritante (la irritacin ocular en el hombre se presenta a concentraciones entre 0,1 y 1 ppm) y alrgena (el formol es responsable adems de sensibilizaciones cutneas), est clasificado por la International Agency for Research on Cancer (IARC) en el grupo 2A (substancia probablemente cancergena). La ACGIH ha fijado un TLV-C (valor techo no sobrepasable en ningn instante) de 0,3 ppm (0,37 mg/m3) y lo incluye en el grupo A2 (carcingenos con sospecha de serio en el humano). Es una substancia considerada txica, por lo que la exposicin debe reducirse al mximo; tiene asignadas las frases R: 23/24/25-34-40-43 y S: 26-36/37-45-51. Glutaraldehdo

La solucin de glutaraldehdo al 2% aplicada durante 30 minutos es efectiva como desinfectante y, en aplicaciones de 10 a 12 horas, se puede utilizar como esterilizante. La ACGIH establece un valor TLV-C para el glutaraldehdo de 0,2 ppm (0,82 mg/m3). La solucin de esta substancia entre el 2 y el 10% est clasificada como nociva y peligrosa para el medio ambiente y tiene asignadas las frases R: 20/22-37/38-41-42/43-50 y S: 26-36/37/39-45-61. En la prctica diaria, el glutaraldehdo no es un producto que presente una especial peligrosidad, ya que tiene una tensin de vapor muy baja (es poco voltil) y, por ello, raramente se encuentra en forma de vapor en el aire, a no ser que se calienten las soluciones que se empleen del mismo que, por otro lado, suelen ser siempre bastante diluidas; sin embargo se pueden generar aerosoles por agitacin o manipulaciones bruscas al sumergir o sacar material del lquido.

El formol y el glutaraldehdo se pueden emplear solos o bien asociados a un detergente, siendo esta ltima combinacin especialmente efectiva frente a los polivirus. Tambin se emplean mezclados con fenol y fenolatos. Compuestos de amonio cauternario

Este conjunto de compuestos (conocidos como "quats") representan una familia de compuestos antimicrobianos en los cuales las cuatro valencias del tomo de nitrgeno estn ocupadas por grupos tipo alquilo de complejidad variable. Son solubles en agua y en alcohol y poseen propiedades tensoactivas. Los compuestos de amonio cuaternario actan a nivel de la superficie celular, incrementando la permeabilidad de la membrana con la consecuente prdida de los componentes citoplasmticos. El espectro de actividad de estos productos es bastante elevado frente a bacterias y hongos, pero escaso frente a virus y esporas. Es necesario remarcar que hay microorganismos, como pseudomonas, que en algunos amonios cuaternarios encuentran un medio de cultivo en el que se multiplican perfectamente. Esta bacteria puede crecer, por ejemplo, en cloruro de benzalconio que, utilizado como desinfectante de superficies, ha sido la causa de inesperadas infecciones en hospitales. Los compuestos de amonio cuaternario son inactivos frente a las aguas duras, por lo que no deben utilizarse para desinfectar el agua de los sifones de vaciado, rica en sales. Compuestos fenlicos

Diferentes compuestos fenlicos constituyen la base de muchos desinfectantes corrientes, emplendose a veces para sustituir a los hipocloritos. Los aril-fenol halogenados o no halogenados tienen una muy buena actividad bactericida, pero su actividad fungicida es muy discreta y su accin virucida es discutida. El fenol y sus derivados son irritantes de la piel y mucosas respiratorias y oculares. Tienen efecto alergnico y fotosensibilizante. El TLV-TWA establecido para el fenol es de 5 ppm (19 mg/m3). Las soluciones de concentraciones superiores al 5% se clasifican como txicas y tienen asignadas las frases R: 24/25-34 y S: 28-45. Yodo y Yodforos

La accin de estos desinfectantes es parecida a la del hipoclorito. Las superficies limpias pueden tratarse adecuadamente con soluciones que contengan 75 ppm de
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yodo libre. En presencia de una cantidad apreciable de material proteico, su eficacia no es tan buena. Los yodforos pueden diluirse en alcohol etlico para el lavado de manos o como esporicida. La ACGIH establece para el yodo un TLV-C de 0,1 ppm (1,0 mg/m3). Se considera una substancia nociva y tiene asignadas las frases R: 20/21 y S: 23-25. Povidona-Yodada (complejo de Polivinipirrolidona con yodo)

Es el yodforo mejor conocido. Se compone de un polmero de 1- vinil - 2 pirrolidona con yodo, con un 9-12 % de yodo disponible. Se utiliza en forma de solucin, es de color amarillo pardo y olor caracterstico. Es de uso teraputico en aplicaciones tpicas como desinfectante. Comercialmente se conoce bajo distintos nombres: Topionic, Betadine e lsodine, entre otros. 1 Limpieza es el conjunto de operaciones que permiten eliminar la suciedad visible o microscpica de una superficie. Una limpieza regular y peridica tiene adems un efecto higienizante ya que reduce la presencia de microorganismos patgenos, disminuyendo a su vez la necesidad de desinfectar. Se entiende por suciedad las impurezas indeseables, ya sea porque facilitan el desarrollo de microorganismos patgenos, deterioran los materiales o afectan la esttica. (Bellon-Fontaine, 2002). Los mtodos para eliminar la suciedad se clasifican en fsicos y qumicos: Mtodos fsicos: Consisten en el arrastre de las impurezas ya sea con agua o con aire (ej. Mangueras a presin, vapor), arena, cepillado, rascado, barrido o aspiracin. Con estos mtodos es importante tener en cuenta que pueden producir a su vez contaminaciones. Por ejemplo, la limpieza a alta presin o el barrido en seco produce aerosoles que pueden mantener los grmenes en suspensin en el aire durante cierto tiempo. Mtodos qumicos: Consisten en la aplicacin de productos de limpieza que reaccionan con los componentes de la suciedad facilitando su dilucin o dispersin. (Bellon-Fontaine, 2002). PRINCIPIOS DE LA LIMPIEZA QUMICA No existe un nico agente que remueva todo tipo de suciedad.
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(insht)

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La suciedad incluye distintas sustancias ej. Algunas son hidrosolubles, otras insolubles, algunas orgnicas y otras inorgnicas. (ESCOBAR, J. 2000) Un producto de limpieza debe tener las siguientes propiedades: Emulsionar y saponificar las grasas. Surfactar, dispersar y suspender la suciedad. Disolver las protenas. Tener agentes suavizantes del agua.

Los principales componentes de los productos de limpieza son: Alcalinos: Compuestos custicos (pH mayor de 7) utilizados para la limpieza de azcares solubles, hidratos de carbono y protenas. En general son sustancias corrosivas; los de accin ms fuerte se utilizan para eliminar suciedades incrustadas como las que se encuentran en los hornos y tambin pueden remover grasas. Los de accin media se utilizan diluidos para limpiar suciedades livianas. Entre ellos se encuentran el amoniaco, la sosa, la potasa o el bicarbonato sdico. cidos: (pH menor de 7) Se utilizan para remover materiales incrustados en superficies, como xidos metlicos o sales minerales. Se utilizan en limpiezas especficas; no pueden ser utilizados como detergentes multiuso. Entre los ms utilizados se encuentran el acido clorhdrico, ntrico, fosfrico, actico, peractico y ctrico. Desengrasantes: Son productos que disuelven restos de grasas y aceites, tanto naturales, como derivados del petrleo, como aceites lubricantes. Contienen alcohol o ter: dietilenglicol, butoxietanol, propanol, propanol, tolueno, benceno, xileno, tricloroetileno, acido ctrico. Secuestrantes: Son productos que impiden que los minerales cristalicen, precipiten o se incrusten en los materiales con los que contactan. Los ms utilizados son EDTA, polifosfatos, gluconatos, citratos y zeolitas. Tensoactivos: Se conocen como agentes humedecedores, desagregan la suciedad de las superficies y la mantienen en suspensin, facilitando su dilucin en agua. (HAYES, 2002) Existen cientos de sustancias tensoactivas diferentes, que se agrupan en cuatro familias:
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Aninicos

cidos carboxlicos saturados (sales de cidos grasos animales y vegetales). Alquil aril sulfonatos. Alquil sulfonatos. Sales de amonio cuaternario. Alquil imidazolinas. Amidas etoxiladas. Alcoholes grasos etoxilados (alkylfenoles etoxilados): derivados de octilfenol, nonilfenol y dinonilfenol. Alcoholes: alcoholes primarios con cadenas de 8 a 18 tomos de carbono. steres de cidos grasos y poliglicoles. Acil-aminocidos y derivados. N-alquil-aminocidos.

Catinicos

No inicos

Anfteros

Tabla 1. Clases de sustancias tenso activas. Tomado de: www.istas.net

Se pueden seguir los siguientes criterios a la hora de elegir un producto de limpieza:

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DISPONIBILIDAD DE El primer criterio para decidirnos por un producto INFORMACIN debera ser la informacin que tengamos sobre su: composicin, uso y aplicaciones, ficha de seguridad. Si no tenemos informacin adecuada no debemos utilizarlo. SENCILLEZ EN LA La mayor parte de acciones limpiadoras y FORMULACIN desinfectantes pueden realizarse con unos pocos principios activos de diversas sustancias. Desde la perspectiva del riesgo por exposicin, siempre resulta ms adecuado trabajar con una sustancia, de la que se conoce o se puede conocer sus efectos, que una mezcla de la que resultara muy difcil conocer bien sus posibles efectos. AUSENCIA CLORO DE El uso del cloro en actividades de limpieza y desinfeccin obedece fundamentalmente a su alta capacidad de oxidacin. Debido a su gran reactividad es un potente txico que contamina el medio ambiente al dispersarse a travs de las aguas residuales. La mayor parte de las sustancias usadas en la limpieza y desinfeccin son irritantes y tienen un cierto riesgo de afecciones drmicas y quemaduras. Debemos tener en cuenta estos riesgos para protegernos y adems evitar otros riesgos mayores, como los efectos crnicos: cncer, daos reproductivos, daos al sistema nervioso central, disrupcin endocrina, asma, entre otros.

RIESGO TXICO

CONSIDERACIONES Si bien prcticamente todos los productos qumicos DE PELIGROSIDAD usados para la limpieza y desinfeccin son peligrosos, deberemos conocer las caractersticas de cada uno para poder optar por aquellas sustancias menos peligrosas. Criterios para elegir un producto de limpieza. Tomado de www.istas.net

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TIPOS DE LIMPIEZA 1. Limpieza de instrumentos y equipos 2. Limpieza de las superficies ambientales tales como pisos, paredes y mobiliario.

FACTORES IMPLICADOS EN LA LIMPIEZA Energa qumica: accin del detergente. Energa trmica: accin de la temperatura. Energa mecnica: accin de friccin.

METODOS DE LIMPIEZA Debe haber normas escritas para la limpieza; en cualquier sector la limpieza debe efectuarse con un orden: Iniciarla desde las zonas menos sucias, progresando a las ms sucias. Iniciarla desde las zonas ms altas progresando a las ms bajas. Las superficies ms altas deben limpiarse con un fregadero especial impregnado con un agente de limpieza evitando dispersar el polvo.

FRECUENCIA MINIMA DE LIMPIEZA La frecuencia con que debe efectuarse la limpieza de cada rea debe de ser planeada de acuerdo a las necesidades del sector. Debe quedar consignada por escrito y controlarse su cumplimiento. Los laboratorios requieren limpieza diaria. Los pisos se limpiarn con una solucin de detergente desinfectante. (ESCOBAR, J 2000)

LIMPIEZA DEL PISO

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No se debe barrer ya que se diseminan microorganismos en el aire. La utilizacin de trapos y lampazos humedecidos con productos de limpieza reduce la contaminacin microbiana y es el mtodo ms comn y recomendado.

La desinfeccin es un proceso que implica la destruccin de microorganismos perjudiciales (formas vegetativas), a travs del uso de sustancias qumicas o agentes fsicos aplicados sobre superficies inertes.

ROTACIN DE DESINFECTANTES La rotacin con dos o tres desinfectantes es la mejor medida para prevenir la aparicin de fenmenos de resistencia y adaptacin. La limpieza y la desinfeccin son etapas fundamentales en la higienizacin de superficies industriales pero no siempre se consigue el resultado perseguido. Tras un tratamiento continuado suele apreciarse que las superficies no solo no se desinfectan bien, sino que en ocasiones se da un incremento del nmero de bacterias. Cuando ello ocurre se define una situacin de riesgo que puede ser especialmente importante si entre los microorganismos que permanecen se encuentran bacterias patgenas. Entre los desinfectantes ms utilizados podemos citar los alcoholes, los compuestos de amonio cuaternario, y los compuestos clorados, etc. EFECTOS DEL MAL USO DE LOS DESINFECTANTES El poder desinfectante de un producto difiere entre cepas adaptadas y persistentes en las superficies, con respecto a las no adaptadas. En consecuencia, aunque los tiempos de contacto sean breves, los desinfectantes a concentraciones subletales o a tiempos insuficientes provocan cambios en las estructuras celulares que conllevan respuestas de tipo adaptativo. Por tanto, en la medida que el tratamiento de higienizacin sea insuficiente en tiempo por las prisas en terminar con la limpieza, o cuando la dosificacin de los productos a emplear sea tambin insuficiente, por un intento de reducir costos o porque los
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equipos empleados no sean los adecuados, no slo se dar una reduccin en la eficacia desinfectante, sino que adems se facilitar la adaptacin de los microorganismos a situaciones que incrementarn el peligro de la presencia de patgenos. (MCDONNELL, G. 1999) La nica recomendacin posible es un buen empleo de los desinfectantes, a concentraciones adecuadas y en las condiciones que indique el fabricante. En este sentido, es igualmente recomendable no diluir excesivamente los productos qumicos y dejarlos actuar el tiempo necesario, as como no utilizar siempre el desinfectante, sino ir cambiando peridicamente con el fin de evitar que se produzcan fenmenos adaptativos cruzados entre sustancias que, siendo diferentes, tengan el mismo principio de accin. (Mc DONNELL. G. 1999). 2 La limpieza debe ser un paso previo a la desinfeccin ya que con este proceso, adems de eliminar muchas sustancias que pueden servir como nutrientes para los microorganismos, se eliminan sustancias que pueden impedir que las soluciones desinfectantes acten eficientemente. En el Laboratorio de Microbiologa estos procesos deben realizarse de rutina, ya que el trabajar con microorganismos exige que se tomen medidas para evitar la contaminacin del ambiente, del material de trabajo y del personal. Si hablamos de empresas en donde se elaboran productos farmacuticos, cosmticos o alimenticios; la limpieza y la desinfeccin tienen como finalidad eliminar los desechos y materiales que se han depositado sobre las superficies y reducir o eliminar los microorganismos presentes en los equipos, pisos o techos de la misma. Por tal razn, la limpieza y la desinfeccin no deben considerarse como el ltimo paso en la manufactura de un producto, sino como el primer paso en la elaboracin del siguiente lote. En las farmacias la limpieza y desinfeccin tambin se emplea con mucha frecuencia, sobre todos en las reas destinadas a la preparacin de frmulas extemporneas, donde la presencia de microorganismos puede influir en la calidad del producto. En las instituciones de salud como clnicas, hospitales, etc. la limpieza y la desinfeccin buscan disminuir la transmisin de microorganismos patgenos que pudieran causar alguna enfermedad. CONTROL MICROBIOLGICO DEL AIRE
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(Estudiantes)

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Existen diferentes mtodos que permiten evaluar la calidad microbiolgica del aire. Uno de los ms utilizados es el mtodo de sedimentacin en placas de agar, que consiste en exponer placas con un medio nutritivo slido al ambiente durante un periodo determinado, incubar las placas y hacer el recuento de las colonias obtenidas. El tiempo de exposicin depende del ambiente a evaluar, mientras mayor sea la contaminacin menor ser el tiempo de exposicin de las mismas. Normalmente se utilizan placas de 9 cm de dimetro. Con este mtodo se detectan los microorganismos que caen sobre la superficie de la placa, lo cual simula lo que ocurre normalmente cuando estamos trabajando en el laboratorio. Como las condiciones ambientales influyen en la sedimentacin de los microorganismos es necesario que, cuando se realiza este mtodo, las placas se expongan siempre en el mismo lugar y bajo las mismas condiciones para poder comparar los resultados obtenidos. CONTROL MICROBIOLGICO DE SUPERFICIES El control microbiolgico de superficie nos proporciona informacin sobre la cantidad de microorganismos presentes sobre una superficie, la cual puede ser un equipo, mesn, ropa, etc. Esta evaluacin generalmente se hace utilizando: Placas de contacto (RODAC) Las placas de contacto o RODAC (Replicate Organism Direct Agar Contact) son placas de 55-60 mm de dimetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una superficie convexa, que sobresale del borde de la placa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente. Placa Rodac Generalmente se utilizan para determinar la calidad microbiolgica de superficies planas. Para tomar la muestra se abre la placa y se presiona sobre la superficie a ensayar, sin deslizarla. Se tapa la placa y se incuba bajo las condiciones adecuadas. Se cuenta el nmero de colonias y se calcula el nmero de ufc/rea de la placa, la cual est entre 24 y 30 cm, dependiendo del dimetro de la misma. NOTA: Es necesario desinfectar la superficie evaluada luego de tomar la muestra, ya que podran quedar restos del medio de cultivo que favorecen el crecimiento de los microorganismos.
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 Mtodo del Hisopo Se recomienda para tomar muestras de superficies irregulares donde no se pueden utilizar placas RODAC. Se debe definir el rea donde se va a tomar la muestra, generalmente se usa una plantilla con un rea entre 24 y 30 cm. El hisopo estril se humedece en un diluente y se frota sobre la superficie a evaluar, en por lo menos dos direcciones distintas, rotndolo ligeramente. Luego la punta del hisopo se coloca en el diluente y se toman alcuotas para sembrarlas en placas con agar. Se incuba y se cuenta el nmero de colonias. Se calcula el nmero de ufc/rea.

CONTROL MICROBIOLGICO DEL PERSONAL Para evaluar al personal se pueden utilizar placas RODAC, las cuales se presionan sobre su vestimenta. Cuando queremos detectar la presencia de microorganismos en las manos del personal se pueden usar placas con medio de cultivo (Touch plates), el personal toca el agar de dichas placas con la punta de los de dos, luego se incuban por el tiempo y bajo las condiciones adecuadas. Al final del periodo de incubacin se cuentan las colonias. NOTA: El personal debe lavarse y desinfectarse las manos luego de tocar las placas, ya que podran quedar restos del medio de cultivo en los dedos y favorecer el crecimiento de los microorganismos. 3

(Universidad central de Venezuela)

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MATERIALES LABORATORIO FISICO-QUIMICO

ELEMENTO A DESINFECTAR Agua potable Desinfeccin de manos Desinfeccin inoxidable de mesas e instrumental de acero

PARTES POR MILLN(PPM) 0.2 50 200 500 5000

Desinfeccin de pisos, mesones en baldosn, ropa, tiles de aseo y material plstico Desinfeccin de material orgnico

Para la eleccin de los detergentes y desinfectantes se ha priorizado que cumplan los siguientes requisitos: - Anulacin de la contaminacin residual despus de su aplicacin. - Rpida biodegradabilidad. - Baja toxicidad.
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- Rpida y fcil eliminacin de las superficies sobre las que sean aplicados. No obstante, estas prioridades estn supeditadas al objetivo final de la eleccin, que es el de la conservacin de todas las superficies de los laboratorios, sobre todo las de trabajo, limpias y desinfectadas. Aunque en el mercado no existen productos detergentes ni desinfectantes de carcter especfico para su utilizacin en unidades de transformacin ecolgica se ha optado por seguir utilizando los actuales e introducir variaciones en su aplicacin. Para la ejecucin de esta prueba se deben utilizar los siguientes materiales y equipos: Detergente: Jabn lquido multiusos para vidriera. Jabn en polvo para pisos y mesones. Desinfectante: Hipoclorito de sodio (200 300 ppm para mesones y 600 ppm para pisos). Alcohol al 78%. Ajax en polvo. Agua. Cepillos para piso, escoba y trapero de uso exclusivo para el laboratorio. Esponjillas y escobillones. Toallas desechables. Dulce abrigo de color blanco. Horno esterilizador. Autoclave. - Se debern realizar los lavados especficos segn el tipo de prctica realizada y desinfeccin del rea trabajada. - Para la manipulacin de estos reactivos es recomendable utilizar los elementos de proteccin necesarios como guantes, blusa de laboratorio, tapabocas, mascarillas, etc. Para la manipulacin de material sometido al calor (autoclave y horno) se deben utilizar guantes de fibra espectral de resistencia calrica.

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- Para la realizacin de los procedimientos de limpieza y desinfeccin del laboratorio se debe usar guantes y mascarilla. - Todos los elementos, equipos y materiales de laboratorio se debern mantener organizados, tanto en el rea de lavado como en las reas de fisicoqumicos y derivados.4

MATERIALES LABORATORIO MICROBIOLOGICO

Toalla desechable Solucin desinfectante (compuesto de amonio cuaternario) Agar nutritivo Placa de contacto RODAC5

(Laboratorios UNAL) (Universidad central de Venezuela)

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PROCEDIMIENTO LIMPIEZA LABORATORIO FISICO-QUIMICO

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DESARROLLO DEL CONTENIDO Procedimientos de Limpieza y desinfeccin particulares a cada laboratorio Ejemplo: Laboratorio de Leches Sede Palmira

Procedimiento para limpieza y desinfeccin de pisos. Alzar las sillas de laboratorio. Recoger todos los objetos que obstaculicen la realizacin adecuada del procedimiento. Barrer bien. Preparar en cinco (5) litros de agua 50 ml de detergente industrial y refregar. Preparar 5 litros de hipoclorito de sodio a 600 ppm: 41 ml de hipoclorito de sodio al 6% se diluyen en 5 litros de agua potable. Enjuagar con suficiente agua y secar con el trapero limpio. Este procedimiento se debe realizar dos veces por semana o cuando se requiera.

Procedimiento para limpieza de mesones. Retirar todos los objetos que se encuentren encima Lavar con jabn Dersa y refregar adecuadamente con esponjilla. Secar con un pao hmedo. Desinfectar con una gasa embebida de alcohol al 78% (si la prctica requiere). Desinfectar con hipoclorito de sodio a 200 300 ppm: 10,9 ml de hipoclorito de sodio al 6% se diluyen en 4 litros de agua potable. Secar con pao hmedo. Procedimiento para limpieza de vidrios. Para la parte externa del laboratorio preparar una solucin de jabn con 5 litros de agua y 50 ml de jabn lquido multiusos. Para la parte interna utilizar alcohol industrial y limpiar con toallas de papel. La limpieza de vidrios debe realizarse diariamente en las zonas crticas como en el rea de lavado, y de manera general mensualmente.
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Los vidrios ubicados detrs de las incubadoras y el horno, en donde el acceso por la parte interna es difcil, debern barrerse con una escoba, mantenerlos sin polvo y lavarlos cada dos meses mediante el procedimiento para el lavado externo

Limpieza de equipos. Procedimiento para limpieza de hornos. Sacar todas las parrillas, lavarlas con jabn lavaloza Dersa. Limpiar el horno con una solucin de jabn lquido al 1% (1 litro de agua y 10 ml del producto). Secar el horno con un pao limpio y hmedo. Este procedimiento se realizar una vez por semestre o cuando se requiera.

Procedimiento para limpieza de autoclave. Lavarlo con jabn lavaloza Dersa o Ajax y refregar con esponjillas de brillo. Enjuagarlo con agua potable. Este procedimiento se debe realizar una vez por semestre o cuando se requiera. Para funcionamiento del autoclave se debe utilizar agua destilada y as evitar la aparicin de depsitos de sales.

Procedimiento para limpieza de incubadoras. Las cajas de Petri deben ser retiradas de las incubadoras por el auxiliar de laboratorio. Sacar todas las parrillas, lavarlas con jabn Dersa y refregarlas con esponjilla suave. Limpiarlas por dentro y por fuera con vinagre. Pasar una gasa con alcohol al 78% para desinfectarlas. Este procedimiento se realizar cada vez que se utilicen.

Procedimiento para limpieza de neveras.

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 Desocupar completamente las neveras y descartar reactivos y soluciones preparados. Sacar todas las parrillas, cubetas y cajones; lavarlos con jabn suave y refregarlos con esponjilla suave. Secar todas las partes lavadas. Lavar la parte interna de cada nevera con jabn suave y refregar con esponjilla suave. Secar con un pao absorbente. Finalmente pasar una gasa o pao con alcohol al 78% para desinfectar. Este procedimiento se realizar una vez por semestre.

Procedimiento para limpieza de cabina de flujo laminar. Limpiar con solucin de jabn lquido multiusos al 1%. Limpiar con pao hmedo tanto las partes metlicas como acrlicas. Desinfectar con hipoclorito de sodio al 2%. Este procedimiento se realizar cada vez que se utilice la cabina.

Procedimiento para limpieza de canecas de basura. Preparar en 5 litros de agua 50 ml de detergente industrial y 20 ml de hipoclorito de sodio y refregar. Enjuagar y escurrir. Colocar bolsas plsticas nuevas. Este procedimiento debe realizarse dos veces por semana o cuando se requiera.

Procedimiento para lavado y desinfeccin de material de laboratorio. Preparar una solucin de jabn lquido multiusos al 1% en agua caliente. Colocar el material a lavar por 1 o 2 horas en el caso de vidriera (pipetas, butirmetros, tubos de ensayo, etc.). Refregar todo el material usando cepillos, escobillones o esponjillas. Enjuagar con abundante agua para eliminar residuos de detergente.

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 Colocar el material en solucin desinfectante por 5 minutos para material de microbiologa. Enjuagar el desinfectante con agua destilada. Secar el material en el horno por 10 minutos a 180 C. Procedimiento para esterilizacin de material de laboratorio. Una vez limpio y seco el material de laboratorio como cajas de Petri, pipetas, morteros, esptulas y cuchillos, empacarlos en papel Kraft y llevar al horno a 180C por 2 horas.6

(Laboratorios UNAL)

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PROCEDIMIENTO LABORATORIO MICROBIOLOGICO Limpieza del personal Para evaluar al personal se pueden utilizar placas RODAC, las cuales se presionan sobre su vestimenta. Cuando queremos detectar la presencia de microorganismos en las manos del personal se pueden usar placas con medio de cultivo (Touch plates), el personal toca el agar de dichas placas con la punta de los dedos, luego se incuban por el tiempo y bajo las condiciones adecuadas. Al final del periodo de incubacin se cuentan las colonias. NOTA: El personal debe lavarse y desinfectarse las manos luego de tocar las placas, ya que podran quedar restos del medio de cultivo en los dedos y favorecer el crecimiento de los microorganismos. Actividad de limpieza y desinfeccin 1. Verificar que sobre el mesn de trabajo no exista sucio, polvo, etc. 1. Impregnar una toalla desechable con solucin desinfectante (compuesto de amonio cuaternario). 2. Pasar la toalla con el desinfectante sobre la superficie sobre el mesn de trabajo haciendo trazos paralelos de atrs hacia delante.

3. Dejar secar la solucin desinfectante antes de comenzar a trabajar. 4. Repetir el procedimiento al finalizar el trabajo prctico.

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Actividad de control microbiolgico del aire 1. Marcar con el nmero de su equipo la tapa de la placa con agar nutritivo que le suministre el profesor y, de acuerdo a su nmero, exponer la placa en el lugar y durante el tiempo sealado en la siguiente tabla: Equipo # 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 Tiempo y lugar de exposicin de la placa 10 minutos sobre el mesn de trabajo 20 minutos sobre el mesn de trabajo 30 minutos sobre el mesn de trabajo 10 minutos sobre el mesn de la cabina del laboratorio 20 minutos sobre el mesn de la cabina del laboratorio 30 minutos sobre el mesn de la cabina del laboratorio 10 minutos en el pasillo 20 minutos en el pasillo 30 minutos en el pasillo 10 minutos en el rea de los baos de mara 20 minutos en el rea de los baos de mara 30 minutos en el rea de los baos de mara 10 minutos en el bao de caballeros 20 minutos en el bao de caballeros 30 minutos en el bao de caballeros 10 minutos en el rea asptica 20 minutos en el rea asptica 30 minutos en el rea asptica

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19 20

10 minutos en el bao de damas 20 minutos en el bao de damas

2. Incubar la placa a 32,5 2,5C en posicin invertida durante 48 horas. 3. Contar el nmero de colonias en la placa. 4. Calcular el nmero de microorganismos que caen por cm minuto. durante 1

CLCULO DEL NMERO DE MICROORGANISMOS POR CM Para calcular la cantidad de microorganismos que cayeron en la placa por unidad de tiempo: Contar el nmero de colonias en la placa. Este nmero se expresa como ufc (unidades formadoras de colonias), ya que varios microorganismos podran estar juntos y al multiplicarse slo se ver una colonia. Calcular el rea de la placa (A). A = r Para una placa de 9 cm de dimetro el rea es A = 3,14 x 4,5 cm= 63,62 cm Calcular el nmero de microorganismos que caen en el rea por unidad de tiempo. Se puede expresar en: ufc/ placa/ min ufc/ cm/ min o ufc/ rea total/ min. Ejemplo Se expone una placa de 9 cm de dimetro en un rea durante 30 minutos. Se incuba 24 horas a 32,5 +/- 2C y se cuentan 25 colonias. Calcular el nmero de ufc/ placa/ min y ufc/ cm / min
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25 ufc ---------30 min X --------- 1 min X = 0,833 ufc/ placa/ min

Si deseamos expresar los valores en ufc/ cm/ min 0,833ufc -------- 63, 62 cm X -------1 cm X =0, 0131 ufc/ cm/ min

Es importante asegurarse al momento de comparar los resultados, que stos estn expresados en los mismos parmetros Actividad de control microbiolgico de superficies 1. Seleccionar para el muestreo una seccin del mesn, del piso, pared, etc. que tenga una superficie de 25 cm, segn lo indique el profesor. 2. Identificar la placa con los datos necesarios. 3. Retirar la tapa de la placa RODAC y presionar suavemente la superficie del agar sobre el rea de muestreo elegida. 4. Tapar la placa e Incubar durante 24-48 horas a 32,5 2,5C. 5. Limpiar con solucin desinfectante el rea muestreada, para eliminar los residuos de agar. Nota: La superficie delimitada por las placas es de 25 cm, por lo que el resultado se expresa en ufc/25 cm / placa rodac.7

(Universidad central de Venezuela)

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GLOSARIO

Agar nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos. Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria. Asepsia: Mtodo para prevenir las infecciones por la destruccin o evitando los agentes infectivos, en especial por medios fsicos. Asptico: Ausente de grmenes patgenos. Bactericida: Se denomina as a un producto que tiene la propiedad de matar las bacterias en unas condiciones de empleo definidas.

Bacteriosttico: Es un producto que posee la propiedad de inhibir momentneamente la multiplicacin de las bacterias en unas condiciones de empleo definidas. Descontaminacin: Es una accin que tiene por fin eliminar, matar o inhibir los microorganismos indeseables en funcin de los objetivos fijados. Slo son destruidos los microorganismos presentes durante esta operacin. La descontaminacin es parcialmente bacteriosttica, es decir, que los procedimientos utilizados por la descontaminacin slo pueden inhibir momentneamente la multiplicacin de una fraccin de la poblacin bacteriana en unas condiciones bien definidas. Desengrasante: Que quita la grasa. Desinfeccin: Destruccin de los microorganismos patgenos en todos los ambientes, materias o partes en que pueden ser nocivos, por los distintos medios mecnicos, fsicos o qumicos (desinfectantes) contrarios a su vida o desarrollo. Desinfectante: Sustancia qumica que reduce el nmero de bacterias nocivas o patgenas hasta un nivel seguro para la vida humana, animal o vegetal.
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Detergente: Sustancia qumica que se utiliza para eliminar la suciedad y la grasa o el material orgnico de una superficie antes de desinfectarla. Esterilidad: Ausencia absoluta de microorganismos. Este estado debe ser mantenido hasta que el producto, el local o el fluido sean utilizados. La esterilidad es una nocin relativa. Se debe considerar siempre en referencia con los mtodos utilizados para controlarla: tipo de muestra, naturaleza del medio de cultivo, condiciones de estos cultivos, tales como temperatura y duracin de la incubacin, pH, potencial de oxidacin/reduccin, etc. Bacteria: Microorganismo vegetal unicelular, de forma alargada (bacilo) o esfrica (coco). Cepa: Conjunto de microorganismos derivados de las mltiples divisiones de una clula inicial. Colonia: En biologa, asociacin de organismos que proceden de un mismo progenitor y estn claramente unidos entre s. Desinfeccin: Accin y efecto de quitar los grmenes de algo. Friccin: Fuerza que se opone al movimiento de un cuerpo cuando su superficie roza contra otra. Grasa: steres glicricos de cidos grasos con nmero par de tomos de carbono (pralte. cidos palmtico, esterico y oleico). Higiene: Limpieza del cuerpo y de los objetos que rodean a las personas para mejorar la salud y prevenir enfermedades o infecciones. Hisopo: Un hisopo o cotonete es un instrumento utilizado para recoger muestras, para su posterior estudio, normalmente en medicina se usa para saber que germen afecta a una infeccin. Tiene forma de bastoncillo acabado en una punta de algodn. Incubacin: Periodo en el que un cultivo microbiolgico se encuentra en un equipo cerrado que permite controlar la temperatura, humedad y otras condiciones necesarias para su desarrollo. Laboratorio microbiolgico: Centro que recibe indicaciones mdicas, toma y recibe muestras biolgicas a las que realiza investigaciones microbiolgicas mediante exmenes microscpicos directos y por cultivos, con el objetivo de identificar a los agentes causales de las infecciones estudiadas, precisar su
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cuanta en los casos que as se requiera o demostrar la presencia de anticuerpos evocadores de la presencia del agente etiolgico en cuestin. Limpieza: Es la eliminacin de restos de alimentos, grasa o suciedad mediante el uso de agua, jabn o detergente. Medio de cultivo: Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Microbiologa: Ciencia que estudia los microbios (o microorganismos) y sus actividades. Microorganismo: Organismo vivo unicelular, animal o vegetal, especialmente el que puede producir enfermedades; no se puede ver sin la ayuda del microscopio. Patgeno: Dcese del productor o causante de una enfermedad. Placa de contacto RODAC: Son placas de 55-60 mm de dimetro llenas con medio de cultivo hasta obtener una superficie convexa, que sobresale del borde de la placa. Estas placas pueden preparase en el laboratorio o adquirirse comercialmente. Sedimentacin: Formacin de sedimento en el fondo de un lquido. Solucin: Combinacin de un slido o de un producto concentrado con agua, para obtener una distribucin homognea de cada uno de los componentes. Suciedad: Conjunto de manchas, de polvo o de impurezas que hay en una cosa o en un lugar.

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BIBLIOGRAFIA

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NTP 429: Desinfectantes: caractersticas y usos ms corrientes

American conference of governmental industrial hygienists

Committee Activities and Reports. Guidelines for the assessment of bioaerosols in the indoor environment. ACGIH, Cincinnati, Oh. USA, 1989.

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International Agency For Research On Cancer (IARC)

IARC Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk to Humans. (Volume 62)

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IARC, Geneva, 1995

Manual de limpieza y desinfeccin

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