OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTES (BACTERIAS) Y EUCARIOTES (HONGOS Y PARASITOS).

Introduccin:
Gracias al descubrimiento del microscopio en el ao de 1665. Robert Hooke en base a las observaciones realizadas en las lminas del corcho que las asemej a panales de abejas y sus celdas surgi el trmino clula. La clula se la puede definir como la unidad morfolgica y fisiolgica de todo ser vivo. Vista al microscopio se le puede observar tres partes fundamentales que son membrana plasmtica, citoplasma y ncleo. Las clulas adquieren formas y tamaos variables y esto depende del medio en el que se encuentre y la funcin que realicen. Existen clulas aplanadas, cbicas cilndricas, alargadas, ovaladas, redondas, etc. As mismo su tamao es variado por ejemplo: los glbulos rojos miden de 7 a 8 micras, los blancos de 8 a 12 micras, las plaquetas de 2 a 3 micras etc.

Objetivos:
Conocer diversos organismos microbianos denominados Bacterias, Protozoarios, hongos y parsitos que estn formados por una sola o varias clulas y que habitan diversos medios naturales. Visualizar ciertas caractersticas estructurales en ellas.

Materiales:
Laminas con muestras preparadas de bacterias, hongos y parsitos Palitos mondadientes Solucin fisiolgica al 0.85% Solucin Mercuro cromo Solucin de Violeta de genciana Alcohol yodado Lamina portaobjetos Lamina cubreobjeto Aceite de inmersin Depsito para eliminar lminas y laminillas.

Marco Terico:
I. PROCARIOTAS Y EUCARIOTAS

Aunque todas las clulas tienen caractersticas en comn, existen dos (2) tipos bsicos de clulas: Eucariotas y Procariotas

DIFERENCIAS ENTRE CLULAS PROCARIOTAS Y CLULAS EUCARIOTAS

BACTERIAS

Son microorganismos unicelulares, procariotas, que se pueden encontrar prcticamente en cualquier ambiente (suelos, aguas, aire, y como simbiontes, parsitos, o patgenos del hombre, otros animales y plantas. Son los organismos ms pequeos que contienen toda la maquinaria requerida para su crecimiento y autorreplicacin a expensas del material alimenticio. Tamao: 0,2 a 1,2 m de dimetro y de 0,4 a 14 m de longitud.

La mayora de las bacterias se presentan en una de estas tres formas bsicas: cocos,bacilos y espirilos. Cocos: Bacterias de forma ms o menos esfrica. Bacilos: Bacterias de forma cilndrica. Cocobacilos: Ciertas especies se presentan como bacilos pequeos, Redondos difciles de distinguir de los cocos.

Vibriones: Bacterias curvas (en forma de coma). Bacterias en forma de espiral: Muchas bacterias poseen una forma semejante a bacilos largos retorcidos para formar espirales o hlices.. A estas bacterias se los denomina espirilos si son rgidas y espiroquetas cuando son flexibles.

Pared celular

Es un rasgo estructural muy importante. que est constituida por sustancias polimricas complejas conocidas como peptidoglucanos, los cuales son los responsables de su naturaleza rgida. La pared celular les confiere la forma a las bacterias y les proporciona proteccin mecnica, ya que ellas se encuentran en ambientes que pueden tener diferentes concentraciones de soluto. Por la

fuerza de la pared celular, no se hinchan ni lisan. Dentro de las bacterias podemos distinguir dos grandes grupos, las gram positivas y las gram negativas, basados en la diferente coloracin al ser teidas con tincin de Gram, estas diferencias de coloracin en los dos grupos de bacterias son debidas a diferencias en las estructuras de sus paredes celulares.

CARACTERSTICAS GENERALES DE LOS HONGOS Los hongos son un grupo diverso y ampliamente diseminado de eucariotas. Los hongos no contienen clorofila y la mayora de las especies forman una pared celular rgida constituida por polisacridos. La mayora de los hongos tienen hbitats terrestres, viven en el suelo o sobre materia vegetal muerta y juegan un papel primordial en la mineralizacin del carbono orgnico. Muchos hongos son parsitos de plantas y unos pocos son parsitos del hombre y de

los animales. Existen hongos filamentosos (multicelulares), denominados setas y mohos, y hongos unicelulares.

ESTRUCTURA VEGETATIVA La estructura vegetativa de un hongo filamentoso es llamada TALO, este talo est constituido por filamentos, los que usualmente son ramificados. Cada filamento individual es llamado HIFA y el conjunto de hifas se conoce como MICELIO. Las hifas pueden tener o no tener paredes transversales (septos) y as podemos hablar de Hifas septadas las que poseen paredes transversales y de Hifas cenocticas las que no las tienen. Las hifas crecen por elongacin de sus puntas lo que se conoce como crecimiento apical y por produccin de ramificaciones laterales. Las hifas que penetran en el medio donde absorben los nutrientes se conocen colectivamente como Micelio Nutritivo o Vegetativo, mientras que aquellas que se proyectan sobre la superficie del medio constituyen el Micelio Areo, y como este ltimo a menudo produce las esporas o clulas reproductoras se le llama tambin Micelio Reproductivo. Ya dijimos que no todos los hongos son filamentosos; algunas formas acuticas son unicelulares y las levaduras tambin lo son. Algunos hongos patgenos del reino animal pueden crecer en forma unicelular o filamentosa dependiendo de las condiciones ambientales y este fenmeno se conoce como DIMORFISMO.

Las levaduras son hongos unicelulares de forma oval o esfrica con un dimetro de aproximadamente 3 a 5 m. El crecimiento de las levaduras ocurre por un proceso de gemacin en la que la clula madre emite un brote y duplica su ncleo, uno de los ncleos pasa al brote y posteriormente la clula hija, madura y se separa de la madre. Algunas veces la clula madre y su progenie permanecen adheridas formando los pseudomicelios.

IDENTIFICACIN

La identificacin de los hongos filamentosos est basada principalmente en sus rasgos estructurales y morfolgicos. Algunos hongos tienen una apariencia tan caracterstica que pueden ser identificados fcilmente, pero en la mayora de los casos se requiere observar una preparacin del hongo al microscopio y estudiar sus caractersticas tales como: Morfologa de las hifas. Presencia o ausencia de septos. Ramificaciones. Tipo de esporas. Tambin se estudian macroscpicamente las caractersticas de las colonias.

DEFINICIN DE VIRUS Los virus son entidades estrictamente intracelulares, con una fase infecciosa que se caracterizan por: a. Poseer un slo tipo de cido nucleico. b. Multiplicarse a partir de su material gentico. c. Ser incapaces de crecer en medios inanimados y de sufrir fisin binaria. d. Carecer de sistemas enzimticos productores de energa y de materia prima para la fabricacin de los componentes del virus.

Con base en estas caractersticas se puede concluir que los virus necesitan una clula viva, la que le va a suministrar la materia prima, la maquinaria biosinttica y la energa para que el virus pueda replicarse.

ESTRUCTURA DE LOS VIRUS Los virus constan esencialmente de una estructura proteica que encierra al cido nucleico, bien sea del tipo ADN o ARN. Algunos virus contienen adems lpidos y glicoprotenas y otros pueden contener ciertas enzimas no proporcionadas por la clula husped. La mayora de los virus caen dentro de la escala de tamao comprendido entre 10-200 nanmetros, por lo que no pueden ser observados con el microscopio de luz ordinario sino con la ayuda del microscopio electrnico.

II. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

TINCIN GRAM

La tincin de Gram es un tipo de tincin diferencial empleado en microbiologa para la visualizacin de bacterias en muestras clnicas. Debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram, que desarroll la tcnica en 1844. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfologa celular bacteriana como tambin para primer paso en la diferenciacin bacteriana, considerandose Bacteria Gram-positivas a las bacterias que se visualizan de color violeta y Bacteria Gram-negativa a las que se visualizan de color rosa Protocolo Hay seis pasos a seguir para lograr la coloracin, ya que contamos con la bacteria diluida en una gota de agua y fijada con un calor leve. Fijar las clulas con calor Agregar Azul Violeta (Cristal Violeta) y esperar 30 segundos. (Moradas/Gram Positiva). Enjuagar con agua. Agregar Lugol y esperar 30 segundos. Enjuagar con agua.

Agregar alcohol y acetona. Enjuagar con agua. Agregar Safranina y esperar 1 minuto. (Rosadas/Gram Negativa). Enjuagar con agua.

Explicacin El primer paso en cualquier tincin debe ser siempre la fijacin con calor. Luego, al agregar el cristal violeta, este ingresa a todas las clulas bacterianas (tanto Gram positivas como Gram negativas). El Lugol est formado por I2 en equilibrio con KI, el cual est presente para solubilizar el I2. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en solucin acuosa con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloracin, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos Gram-positivos no se decoloran, mientras que los Gram-negativos s lo hacen Para poner de manifiesto las clulas gramnegativas se utiliza una coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la coloracin de contraste las clulas gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules. La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la tcnica. Sirve para hacer una tincin de contraste que pone de manifiesto las bacterias Gram-negativas. Al trmino del protocolo, las Gram-positivas se vern azl-violceas y las Gram-negatvas, se vern rosas (si no se hizo la tincin de contraste) o rojas (si se us, por ejemplo, safranina)

Observaciones Siempre que se realice el protocolo, es fundamental realizar el tratamiento con cristal violeta antes de hacer el tratamiento con yodo. El yodo, en ausencia del cristal violeta, tiene poca afinidad por las clulas, por lo cual se pierde en los sucesivos lavados El proceso de decoloracin no debe ser extenso, y debe respetarse el protocolo en cuanto al tiempo designado para los mismo. As mismo, debe utilizarse poca agua para evitar la prdida de tincin de las Gram-negativas Al trabajar con cultivos de ms de 24 horas, no se puede garantizar la integridad de la pared celular de los mismos, y entonces el complejo cristal violeta/yodo puede no ser retenido. Utilidades

En el anlisis de muestras clnicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones: Identificacin preliminar de la bacteria causal de la infeccin

Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos bacterianos identificados en la tincin de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor nmero de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados as como la atmsfera de incubacin. A partir de la tincin de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los cocos son de forma esfrica. Pueden aparecer aislados despus de la divisin celular (Micrococos), aparecer por pares (Diplococos), formar cadenas (Estreptococos), o agruparse de manera irregular (Estafilococos). Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (Estreptobacilos) o en empalizada. Tambin pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos si son de forma rgida o espiroquetas si son blandas y onduladas. Si por el contrario, poseen forma de "coma", o curvados, entonces se los designa vibriones. El fundamento de la tcnica se basa en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas La pared celular de las bacterias Gram-positivas posee una gruesa capa de peptidoglucano, adems de dos clases de cidos teicoicos: Anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmtica, se encuentra el cido lipoteicoico, y ms en la superficie, el cido teicoico que est anclado solamente en el peptidoglucano (tambin conocido como murena) Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las Gram-negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmtica exterior (de composicin distinta a la interna) por medio de lipoprotenas Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tien diferencialmente debido a estas direrencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las Gram-positivas lo poseen en mucha mayor proporcin que las Gram-negativas La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloracin, se debe a que la membrana externa de las Gram-negativas es soluble en solventes orgnicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglicano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se form previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdindose la coloracin azul-violcea. Pero por el contrario, las Grampositivas, al poseer una pared celular ms resistente y con mayor proporcin de peptidoglicanos, no son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando los poros

cerrndolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo la coloracin azul-violcea.

Resultado:
MUESTRA 1: AGUA ESTANCADA

Aumento:..

MUESTRA 1: AGUA SERVIDA

Aumento:..

MUESTRA 1: HONGO

Aumento:..

ASPERGILLUS (HONGO)

PENICILLUM (HONGO )

Cuestionario:
1. Que son organismos Procariotes y Eucariotes.

CELULAS EUCARIOTAS Tienen su nucleo definido, en ste, la clula guarda su informacin gentica. Una clula eucariota tiene citoplasma y organelos celulares. Realizan un metabolismo aerobio (Con ayuda de oxigeno). CELULAS PROCARIOTAS No tienen ncleo definido, la informacin gentica de la clula est dispersa en el citoplasma. 2. Que formas bacterianas conoce, explique. * Coco (del griego kkkos, grano): de forma esfrica. o Diplococo: cocos en grupos de dos. o Tetracoco: cocos en grupos de cuatro. o Estreptococo: cocos en cadenas. o Estafilococo: cocos en agrupaciones irregulares o en racimo. * Bacilo (del latn baculus, varilla): en forma de bastoncillo. * Formas helicoidales: o Vibrio: ligeramente curvados y en forma de coma, juda o cacahuete. o Espirilo: en forma helicoidal rgida o en forma de tirabuzn. o Espiroqueta: en forma de tirabuzn (helicoidal flexible).

3. Cules son las dos formas tpicas de los hongos

Levaduras: Aparecen como colonias opacas, cremosas o pastosas y su Talo es unicelular. Son de forma esfrica o elpsoidal y se reproducen por gemacin (reproduccin asexual). La clula madre emite brotes nicos o mltiples que formarn las clulas hijas (blastosporas). Cuando la clula hija tiene su propio ncleo y sus orgnulos citoplasmticos se forma una pared en el punto de unin con la madre que las separa. Se independiza (aunque no siempre: cadenas de clulas, pseudohifas) y comienza su crecimiento hasta alcanzar su tamao normal. Estas disposiciones recuerdan a las de los hongos filamentosos, pero se diferencian en que no estn tabicadas (son simples estrechamientos).

Hongos filamentosos: Producen colonias velludas, algodonosas o pulverulentas y su Talo est formado por una parte vegetativa o micelio, compuesto por hifas, y una parte reproductora. Las hifas son tubos que contienen ncleos y citoplasma y pueden tener septos o tabiques (hifas tabicadas), con poros en esos tabiques que permiten el paso de material citoplasmtico entre las clulas, o no (hifas no tabicadas). Se reproducen por esporas cuando se encuentran en un sustrato apropiado. Con el crecimiento, el conjunto de hifas entrelazadas forma el micelio, con una parte que penetra en el sustrato para obtener los nutrientes (micelio vegetativo) y otra que crece sobre el sustrato y produce las esporas (micelio areo o reproductor). Lla forma en que se producen las esporas (esporulacin), su estructura, tamao y forma, as como los de las hifas y de los rganos productores de esporas, son las caractersticas bsicas que se utilizan para la identificacin de estos hongos.

4. Enumere enfermedades producidas en el hombre por bacterias y hongos

Bacterias:

staphylococcus aureus: Gastroenteritis staphylococus epidermidis: Endocarditis bacillus anthracis: Antrax clostridium difficile: Colitis pseudomembranosa listeria monocytogenes: Meningitis y sepsis en recien nacidos.

Hongos

Histoplasma capsulatum: histoplasmosis coccidioides immitis: coccidioidomicosis Candida albicans: candidosis diseminada. Aspergillus fumigatus: aspergilosis