IDENTIFICACION DE LOS CROMOSOMAS POLITENICO EN LAS GLANDULAS SALIVALES DE LA FASE LARVARIA DE DROSOPHILA MELANOGASTER

Del Castillo Falcn Victor Manuel, Jimnez Pedraza Montserrat, Romero Rosales Ma. Guadalupe, Romo Bonilla Jorge Armando, Valdez Hernndez Marysol. Profesor: Hctor Martin Abundis Manzano.
Facultad de Ciencias, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Apartado Postal 21630. Coyoacn; Mxico DF, 04000.

INTRODUCCION Las clulas de las glndulas salivares de los insectos del orden de los Dpteros presentan ncleos que se hallan en una interfase permanente. Durante el crecimiento y desarrollo de las larvas de estos insectos, la divisin celular se detiene en algunos tejidos pero las clulas continan su crecimiento por incremento de volumen. Este proceso ocurre, por ejemplo, en los tubos de Malpighi, en las clulas nutricias de los ovarios, en el epitelio intestinal y en las clulas de las glndulas salivares. En las clulas de tejidos mencionados, los cromosomas sufren rondas repetidas de duplicaciones pero sin separarse, proceso conocido como endomitosis. Esto lleva a la produccin de cromosomas constituidos por varios cientos o an miles de hebras. Durante este proceso de politenizacin o politenia, los cromosomas incrementan tanto su longitud como su dimetro. De hecho, la
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longitud de los cromosomas de Drosophila en una metafase es del orden de 7,5 mientras que el largo total de los cromosomas en un ncleo de las glndulas salivares es de alrededor de 2.000; tienen 1.000 molculas de DNA. Adems del cambio en el tamao, los cromosomas politnicos presentan otras dos caractersticas. En primer lugar, los cromosomas homlogos estn asociados entre s en toda su extensin. Esta condicin, denominada apareamiento somtico es propia de la mitosis de la mayora de los Dpteros. La otra caracterstica peculiar es que los cromosomas muestran un patrn particular de bandeo transversal que consiste en zonas ms oscuras, llamadas bandas, que alternan con zonas claras, llamadas interbandas. Cuando se observan al microscopio ptico se identifican como bandas oscuras y claras transversales alternantes.4

Aunque la mayora de las bandas son continuas a travs del cromosoma, otras aparecen como una serie de puntos. ste bandeo es reproducible de ncleo a ncleo, formando un patrn constante de tal manera que los cromosomas pueden ser identificados y mapeados en toda su longitud. Hay aproximadamente 5000 bandas y 5000 interbandas en total en el genoma de Drosophila melanogaster. Debido a que el patrn de bandeo que presentan los cromosomas politnicos es un reflejo constante de las secuencias de ADN, las bandas sirven como marcadores para localizar varias caractersticas genticas (lugar de los genes, o cambios en el genoma debido a reordenamientos cromosmicos, por ejemplo deleciones, duplicaciones de bandas y translocaciones) y se han utilizado en diversos estudios genticos y evolutivos. En D. melanogaster el patrn de bandeo no se distingue en aquellas regiones heterocromticas presentes en regin centromrica de todos sus cromosomas (n=4). Las regiones heterocromticas estn asociadas formando un cromocentro. Ya que dos miembros del complemento haploide de esta especie son metacntricos (los cromosomas II y III) y dos son acrocntricos (cromosoma sexual X o Y y el cromosoma IV), los cromosomas politnicos en esta especie aparecen como cinco brazos
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desiguales que irradian del cromocentro: un brazo correspondiente al cromosoma X, los dos brazos del cromosoma II y los dos brazos del cromosoma III (3L y 3R). En algunos casos se puede visualizar un sexto brazo muy pequeo que representa el cromosoma IV. Fueron observados por 1ra vez por Balbiani en 1881 hasta que en 1930 se descubri su importancia citogentica.

Cromosoma politnicos de Drosophila melanogaster. La imagen fue obtenida mediante contraste de fase. El cromocentro se halla en el ngulo superior derecho. La flecha seala el extremo del cromosoma X. La imagen ampliada (B) muestra las bandas y las interbandas con mayor detalle.

OBJETIVOS Conocer y practicar las tcnicas ms usuales en la citogentica, utilizando material biolgico. Conocer e identificar la existencia de cromosomas politnicos en clulas glandulares salivales de Drosophila Melanogaster as como conocer su importancia en el campo de la gentica.

MATERIAL Y METODO Material biolgico Proporcionado por el maestro. - Cultivos de una cepa silvestre de Drosophila melanogaster con larvas de tercer estadio. Equipo - Microscopio estereoscopio - Microscopio ptico. - 1 platina de vidrio. - Portaobjetos - Cubreobjetos - 1 vaso de precipitado de 50 ml. - Reactivo de Aceto orceina - Pipeta Pasteur METODOS 1. Se saco con una aguja de diseccin una larva de tercer estadio de Drosophila , la cual se reconoci por ser proporcionalmente ms grande que las de 1 y 2 estadios. Generalmente estas larvas se encuentran en las paredes del frasco de cultivo. Se eligi a una que se encontraba activa. 2. Se coloco la larva en una platina de vidrio, se le aadi una mnima cantidad de agua, esto para no dejar que se seque la larva y as poder realizar la diseccin. 3. La diseccin comenz localizando primero las mandbulas las cuales se distinguen claramente por su forma y color negro, Fig. 1. Colocamos la punta de
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una de las agujas en las mandbulas y la punta de la otra aguja en la regin media del cuerpo de la larva. Se jalaron en sentido opuesto las 2 agujas al mismo tiempo, para poder desgarras as a la larva. Separamos las glndulas salivales del resto de los rganos por la forma caracterstica de sacos alargados que aparentan estar formados por una red. Las glndulas generalmente se quedan adheridas a la regin mandibular. Las glndulas salivales estn rodeadas por tejido adiposo opaco, se quito la mayor cantidad de este tejido con ayuda de las agujas con el fin de que la preparacin quedara mas limpia. Las glndulas salivales son rganos pares localizados cerca de extremo anterior de larva. Las glndulas salivales generalmente tienen un cuerpo graso largo, del gado, unido a ellas. Una vez separadas las glndulas salivales, se transportaron con las agujas a un portaobjetos y se les agrego unas gotitas de Aceto orceina. Se observaron las clulas de las glndulas con un ncleo claramente definido.

10. Para poder apreciar los cromosomas politnicos, se realizo un aplastado de las clulas colocando suavemente el dedo pulgar sobre el cubreobjetos y se presion lo ms fuertemente posible. 11. Y se observaron los cromosomas en el microscopio ptico a 40 X y con ayuda del aceite de inmersin se pudieron apreciar a 100X.

Fig. 2. Tincin de las glndulas salivales con reactivo de aceto orceina Clulas de las glndulas salivales con ncleo claramente definido

Fig. 1. Vista esquemtica de la estructura de una larva de Drosophila melanogaster donde puede observarse la localizacin de las glndulas salivales.

Fig. 2. Observacin de los cromosomas politnicos a travs del microscopio ptico.

RESULTADOS En esta seccin se dan a conocer los resultados obtenidos en esta prctica. Imagen donde se aprecian las clulas de las glndulas salivares con su ncleo claramente definido

En esta imagen apreciamos los cromosomas politnicos obtenidas de las glndulas salivales de larvas de Drosophila, vistas al microscopio ptico (100x) se observan zonas cromticas obscuras correspondientes a las bandas y zonas claras correspondientes a las interbandas de los cromosomas. Se utilizo aceite de inmersin para tener una mayor nitidez de las estructuras

principales observar.

que

se

queran

Fig 3.- Aplastamiento de las clulas de la glndula salival de larva drosophila

DISCUSION Painter uso por primera vez los cromosomas de las glndulas salivales de Drosophilas, los cuales presentan un tamao gigante, es por eso que tambin se les denomina Cromosomas Gigantes ya que van desde 150 a 200 veces mas que el tamao de un cromosoma comn. El tamao de este cromosoma se debe el tipo de crecimiento de los tejidos glandulares los cuales crecen por agrandecimiento en vez de por duplicacin de clulas individuales. Conforme la larva se desarrolla, los cromosomas se duplican al menos unas 9 veces, dando origen a una cadena politenica de alrededor de 1000 molculas de doble hlice de DNA.
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Los cromosomas gigantes son estructuras similares a cables con muchas cadenas de DNA. Una caracterstica de los cromosomas gigantes es su continuo estado de sinapsis somtica. Estos cromosomas constan ms de un milln de capas de la misma cromatida y aparecen como bandas oscuras que se alternan con regiones interbandas mas claras. Las bandas oscuras se llaman crommeros. Tambin se observaron regiones ensanchadas y difusas que se conocen como puffs cromosmicos. Las bandas oscuras se debe al apretado enrollamiento de la fibra; las regiones claras entre bandas se deben a un enrollamiento mas laxo. Una de las tcnicas as utilizadas para la observacin microscpica de los cromosomas gigantes es el frotis con acetoorceina (fue aplicado por primera vez por J. Belling). Esta tcnica permite fijar, teir y esparcir cromosomas completos en un portaobjetos en una sola operacin y proporciona una forma de comparar cromosomas individuales dentro de un conjunto de cromosomas. CONCLUSION Se logro conocer y llevar a cabo la tcnica citogentica mas empleada en el reconocimiento de cromosomas politnicos o cromosomas gigantes, que por lo general se pudieron observar de

una manera relativamente fcil y sencilla al microscopio. Con este procedimiento que incluye la adicin de aceto orceina se pudieron observar e identificar cromosomas gigantes en clulas de glndulas salivales de Drosophila. La presencia de estos cromosomas se da como consecuencia de mltiples replicaciones de material cromosmico que no se separa, dando lugar a cromosomas gigantes. Los cromosomas politnicos tienen principales usos: La localizacin de genes. La identificacin de cambios estructurales en los cromosomas.

homlogos se hallan asociados como en la profase meitica; este fenmeno se le llama apareamiento somtico y se considera que los cromosomas se hallan en la interfase permanente

c) Explique brevemente la forma en la que se generan los cromosomas Politnicos.

a) En qu tipos de organismos se pueden observar los cromosomas politnicos?

Son cromosomas que se replican varias veces sin que se produzca una separacin realde las cromtidas con lo que el cromosoma se alarga y se hace ms grueso. Este cromosoma queda unido por el cromocentro, que es la zona de fusin de las regiones heterocromatnicas situadas alrededor de los centrmeros de los pares cromosmicos d) Qu es un Puff y un anillo de Balbiani, existe alguna diferencia? Cada fenmeno de desespiralizacin da lugar a lo que denominamos puffs debido a su apariencia. Los puffs son manifestaciones visibles de actividad gnica (de trascripcin que da lugar a RNA). Tambin hay regiones distendidas llamadas anillos de balbiani que corresponden a regiones de sntesis de ARN y se piensa que los genes activos estn presentes en las bandas distendidas. e) En Gentica Qu utilidad tiene los cromosomas politnicos?

En distintos tejidos de larvas de algunas moscas (glndulas salivales, tubo digestivo, recto y tmulos excretores de Malpighi) y en algunas especies de protozoos y de vegetales.

b) Cul es su funcin?

Cuando un cromosoma se convierte en politnico, el ADN se replica por endocitosis, las cromtidas hijas no se separan y quedan alineados lado con lado. Un cromosoma politnico (gigante) en drosophila tiene alrededor de 1,000 fibras de ADN. Las clulas politnicas son incapaces de dividirse por mitosis y tienden a morir. Otra caracterstica es que los pares
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Los cromosomas politnicos son estructuras muy grandes que facilitan el aprendizaje de la organizacin gentica y sus relaciones con la funcin gentica. A medida que progresa el desarrollo de drosophila revela actividad gnica diferencial donde se observa un caracterstico patron de formacin de puffs que se relaciona con la activacin gnica. BIBLIOGRAFIA

W. Kulg et al. Conceptos de gentica. Ed prentice hall 5 ed. Madrid 1999. pp. 43-45. http://www.cienciaybiologia.com/ bgeneral/organizacion-materialgenetico.htm http://www.uniovi.es/esr/pp/tch2. pdf http://www.agro.uchile.cl/docenci a/dpan/genetica/clase6/6Sexta.p df

BIBLIOGRAFIA