Metodos Espectofotometricos U4

Qumica Analtica
Unidad 4 Mtodos espectrofotomtricos
Tercer Cuatrimestre
Divisin: Ciencias de la Salud, Biolgicas y Ambientales
Qumica Analtica
Unidad 4
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Educacin Superior Abierta y a Distancia Ciencias de la Salud, Biolgicas y Ambientales
Qumica Analtica
Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos

Consideraciones especficas de la unidad
En esta unidad al igual que en las anteriores, realizars actividades que consistirn en foros, los cuales te permitirn compartir tus opiniones, reflexiones, experiencias o dudas acerca de los temas de la asignatura, el uso de las bases de datos, tambin te permitir compartir tus trabajos con tus compaeros, as como recibir comentarios especialmente en la adquisicin y aplicacin del conocimiento de titulaciones. La sumativa consisti en entregar la tercera parte del proyecto de investigacin, que consta del desarrollo experimental del mismo. Finalmente se incluir un cuadernillo de ejercicios y prcticas, que en conjunto con las otras actividades, te ayudar a adquirir aptitudes y actitudes de autoformacin, desarrollo y trabajo en grupo, fundamentales para el logro de las competencias y para tu desempeo profesional.
Propsito
En la presente unidad analizars los fundamentos de la espectrofotometra en las regiones visible, ultravioleta (UV) e infrarroja, y su aplicacin en la determinacin de concentraciones de analitos en muestras problema. Emplea la absorcin de radiacin electromagntica para la identificacin y cuantificacin de sustancias, mediante las tcnicas espectrofotomtricas en la regin visible, UV e infrarroja.
Competencia especfica:
Emplea la absorcin de radiacin electromagntica para la identificacin y cuantificacin de sustancias, mediante las tcnicas espectrofotomtricas en la regin visible, UV e infrarroja.
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Presentacin de la unidad
En las primeras tres unidades nos centramos en el estudio de los principales mtodos volumtricos; sin embargo, de manera rutinaria estos anlisis se complementan con los llamados mtodos instrumentales, los cuales ofrecen las ventajas de utilizar pequeas cantidades de muestra, ser rpidos en la mayora de los casos y detectar cantidades pequesimas de la sustancia a determinar. En este caso nos enfocaremos en el anlisis espectrofotomtrico, que corresponde a uno de los principales mtodos pticos, en el que se estudia la interaccin de las sustancias con las radiaciones electromagnticas, especficamente las localizadas en las regiones visible, infrarroja y ultravioleta. Analizars la metodologa necesaria para determinar la concentracin de algunas sustancias, las cuales obedecen a la ley de Lambert-Beer, por medio de la espectrofotometra y sers capaz de resolver problemas a travs de procedimientos grficos.
4.1 Espectrofotometra
En los ltimos aos, la revolucin cientfica y tecnolgica ha planteado nuevos problemas, y con ello, el desarrollo de nuevos mtodos de anlisis en los que se ponen en juego todas las propiedades de la materia para su caracterizacin. De esta manera han surgido una gran variedad de mtodos instrumentales, los cuales se basan en la interaccin materia-energa y que requieren de un aparato para su realizacin. En este caso, la medida puede referirse a la simple percepcin sensorial de una caracterstica, como la formacin de un precipitado, la presencia de un color, etc., o a la cuantificacin de la intensidad de dicha propiedad, con la ayuda de un aparato denominado instrumento analtico (Harris, 2001). Un instrumento analtico bsicamente consta de cuatro componentes (figura 1):
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Figura 1. Componentes bsicos de un instrumento analtico (Hernndez y Gonzlez, 2002).
El proceso de anlisis se inicia con el generador de la seal, el cual, al detectar la presencia del analito produce una seal que pasa directamente al detector. En el detector, la seal es traducida a otra diferente. Por ejemplo, en el caso del pH-metro la actividad de los iones H3O1+ es convertida a un potencial elctrico. Posteriormente, esta seal es transformada por el procesador de seales y enviada al dispositivo de lectura. Finalmente, el dispositivo de lectura torna la seal en una inteligible, como es el movimiento de una aguja, una serie de nmeros, graficas en una pantalla o papel, etc.
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Entre los mtodos de anlisis instrumental, los pticos tienen en la actualidad una amplia gama de aplicaciones. Los mtodos pticos son aquellos que implican la medida de la radiacin electromagntica emitida por la materia o que interacciona con ella. La radiacin electromagntica est constituida por ondas que viajan por el espacio a gran velocidad (c = velocidad de la luz). Para analizar una onda, se deben considerar las siguientes propiedades (Hernndez & Gonzlez, 2002): Longitud de onda (): se refiere a la distancia entre dos puntos iguales de ondas sucesivas. Las unidades utilizadas son el centmetro, angstrom, nanmetro y micrmetro. 1 angstrom () = 10-10 metros 1 nanmetro (nm) = 10-9 metros 1 micrmetro (m) = 10-6 metros Frecuencia ( ): se refiere al nmero de ondas que pasan por un punto en una unidad de tiempo. Su unidad es el segundo recproco (s1-) o hertz (Hz). Nmero de onda (): es el inverso de la longitud de onda, su unidad es el cm-1. La relacin que se establece entre la frecuencia y la longitud de onda es:
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Estos parmetros se relacionan de la siguiente forma:
Aunque, para describir cuantitativamente a las radiaciones, es necesario considerarlas no slo como onda sino tambin como una partcula (fotn). La cual establece que la energa de un fotn es proporcional a la frecuencia de la radiacin (relacin de Einstein-Planck):
En la que es la constante de Planck (6.63x10-34 Joules x segundo), y nos seala que la energa de un fotn depende nicamente de su longitud de onda. Las cantidades de c y van a depender del medio en el que se transmite la radiacin. Por ejemplo, en el vaco c = 2.998x1010 centmetros por segundo. En todo momento estamos en contacto con las radiaciones electromagnticas: comunicarnos con nuestros amigos por medio del celular, calentar la comida en el microondas, observar todo lo que nos rodea, el calor del sol en nuestra piel o escuchar la radio, son situaciones en las que las radiaciones juegan un papel importante y afectan de alguna forma nuestras vidas. Hoy da nos podemos comunicar o enviar y recibir informacin a la velocidad de la luz, de esta y otras formas, la ciencia y la tecnologa han aprovechado las caractersticas de las radiaciones (figura 3).
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Figura 3. Radiaciones electromagnticas relacionadas con actividades humanas.
En la figura 4 se aprecia el espectro electromagntico, que est constituido de varias regiones las cuales de forma natural no presentan separaciones rgidas, y por lo tanto, al momento de pasar de una zona a otra no ofrecen discontinuidades en su comportamiento (Skoog D. A., 2005).
Figura 4. Espectro electromagntico.
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Como podrs notar, la regin visible a la que corresponde la visin humana es apenas una pequea porcin del espectro. Cada una de las radiaciones se diferencia de otra tan slo en la energa (frecuencia) de sus fotones. Los cientficos utilizan la interaccin de las radiaciones electromagnticas con la materia para obtener informacin sobre una determinada sustancia. La muestra se estimula al aplicar sobre ella energa en forma de calor, energa elctrica, luz, partculas o una reaccin qumica (Skoog D. A., 2008). Se dice que un analito se encuentra en su estado basal (estado de energa ms bajo) antes de la aplicacin de un estmulo. Una vez que se imprime el estmulo, el analito experimenta una transicin a un estado de mayor energa o estado excitado. Las radiaciones emitidas al momento de que la especie regresa a su estado fundamental se utilizan para obtener informacin del analito. El paso de luz a travs de un medio transparente experimenta una absorcin parcial de la misma, lo que causa una modificacin de su estado basal. Esta modificacin puede ser causa de: 1. Transicin de un electrn a un nivel de energa superior. 2. Cambio en el modo de vibracin de la molcula. 3. Alteracin en su modo de rotacin. Cada transicin requiere de una cantidad de energa definida. Supongamos que una radiacin se hace pasar a travs de una muestra de (b) cm de espesor y que contiene una especie capaz de absorber radiacin, cuya concentracin es (c). Esto trae como consecuencia que la intensidad se vea disminuida en su potencia, de I0 I. La cantidad de luz que atraviesa la disolucin se conoce como transmitancia (T), la cual se puede expresar de la siguiente manera:
I0= intensidad inicial I= intensidad final T= transmitancia Por lo tanto, existir una cantidad de luz retenida por la sustancia, la cual se conoce como absorbancia (A), y esta dada por la siguiente ecuacin:
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Lo que nos seala que la absorbancia es directamente proporcional a la trayectoria de la radiacin a travs de la disolucin y a la concentracin de la muestra:
En la que: a = constante de proporcionalidad (absortividad) b = espesor del medio (denominado celda) c = concentracin molar Cuando la concentracin esta expresada en moles por litro (M) y la trayectoria en cm, la absortividad se denomina como coeficiente de absortividad molar ().
El coeficiente de absortividad molar o coeficiente de extincin molar es caracterstico de cada una de las sustancias, ya que nos indica la cantidad de luz que absorbe a una determinada longitud de onda. Las unidades de son M1-cm-1; por lo que el producto de bc ser adimensional y por ende, la absorbancia. Esta ecuacin nos muestra que la absorbancia de la disolucin est directamente relacionada con la concentracin de la sustancia, es decir, se incrementa al aumentar la concentracin, tal y como se muestra en la siguiente grfica (figura 5).
Figura 5.Grfica que muestra la proporcionalidad de la absorbancia con la concentracin.
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Esta expresin se conoce como ley de absorcin o ley de LambertBeer, la cual establece que: Cuando la radiacin monocromtica atraviesa un medio que contiene una sustancia absorbente, la velocidad de disminucin de intensidad con la concentracin de la especie absorbente, es directamente proporcional a la intensidad de la radiacin (Skoog D. A., 2008). La ley de Lambert-Beer es vlida para la mayora de las sustancias, siempre y cuando se encuentren diluidas (0.01M). Para determinar la absorbancia de una muestra se utiliza un aparato analtico denominado espectrofotmetro, cuyo funcionamiento, de manera general es: La luz parte de una fuente (lmpara) y pasa a travs de un monocromador (rejilla), el cual selecciona una determinada longitud de onda. La luz monocromtica atraviesa la muestra a analizar y finalmente, el detector transforma la seal en una lectura tangible.
Figura 6. Principales componentes de un espectrofotmetro.
La espectrofotometra es una tcnica analtica que nos permite determinar la concentracin de una sustancia en disolucin, se basa en la absorcin de las radiaciones por parte de las molculas y esta cantidad de radiacin absorbida, depende directamente de la concentracin de la sustancia; por lo tanto, a mayor concentracin del analito mayor absorcin de la radiacin. En el mercado existen una gran variedad de modelos y marcas de espectrofotmetros, la eleccin de alguno de ellos obedece a las necesidades del laboratorio (figura 7). Sin embargo, todos los espectrofotmetros funcionan bajo los mismos principios.
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Figura 7. Espectrofotmetro UV-visible.
Los estudios espectrofotomtricos dependen de la naturaleza de la muestra, bsicamente. Para ello existen lo basados en la luz visible, ultravioleta (UV) e infrarroja. Ahora, veamos en que consiste cada una de estas metodologas y su utilidad en la determinacin de la concentracin de un analito. Actividad 1. Dudas sobre qumica. Este foro tiene la finalidad de que compartas tus dudas de la asignatura de manera general y estar abierto a partir de esta unidad. 1. Participa en el foro de dudas de la siguiente forma: 2. Expresa las dudas que te hayan surgido en la presente unidad, acerca de los temas relacionados con la asignatura. 3. Comparte, en todo momento, tus inquietudes relacionadas con la materia. 4. Comenta por lo menos dos de las aportaciones hechas por otros de tus compaeros y a partir de sus respuestas busca mejorar, complementar o corregir su contribucin. Tu Facilitador(a) retroalimentar tu participacin.
Actividad 2. Importancia de la espectrofotometra. Esta actividad te permitir conocer la importancia de la espectrofotometra adems de sus aplicaciones en tu futura profesin. 1. Ingresa al foro Importancia de la espectofotometra. 2. Elige la entrada correspondiente a tu futura profesin. 3. Investiga y responde los siguientes cuestionamientos: Qu importancia tiene la espectrofotometra como mtodo instrumental? Qu aplicaciones tiene dentro de tu campo profesional o de carrera? 11
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Qu tipo de espectrofotometra (visible, UV, infrarroja, etc.) es utilizada en tu rea de trabajo? Por qu? 4. Intercambia opiniones con tus compaeros y recuerda ser respetuoso con tus comentarios. Tu Facilitador(a) retroalimentar tu participacin. 5. Revisa la Rbrica de foro que se encuentra en Material de apoyo para que conozcas los parmetros de evaluacin.
4.1.1. Espectrofotometra visible

Como mencionamos anteriormente, el espectro electromagntico est constituido por varias regiones las cuales varan en cuanto a su longitud de onda. El espectro visible es una pequea seccin del espectro que abarca desde los 380 hasta los 750 nm (figura 8).
Figura 8. Espectro de luz visible.
En estas longitudes de onda, existen una gran cantidad de sustancias coloridas (cromforas) que absorben la luz y por ello podemos determinar su concentracin en diversas muestras. Es importante tener clara la relacin entre la luz absorbida y el color percibido. El color que percibimos en todos los objetos, resulta de la suma de todos los colores que no absorbe el material. Si un objeto absorbe todo tipo de luz visible, ser un cuerpo negro. Si no absorbe luz visible, lo percibimos como blanco o incoloro (Skoog D. A., 2008). En caso de que absorba color rojo, lo percibiremos como verde, su color complementario (figura 9).
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absorbida (nm) 380-420 420-440 440-470 470-500 500-520 520-550 550-580 580-620 620-680 680-780
Color absorbido Violeta Azul-violeta Azul Verde-azulado Verde Amarillo-verdoso Amarillo Anaranjado Rojo Prpura
Color observado (complementario) Amarilloverdoso Amarillo Anaranjado Rojo Prpura Violeta Azul-violeta Azul Verde-azulado Verde
Figura 9. Complementariedad de los colores del espectro visible.
Por ello, cada uno de los analitos de acuerdo al color que presentan, absorben mejor la luz en determinadas zonas del espectro visible. La determinacin de la absorbancia se lleva a cabo, como mencionamos, en los espectrofotmetros, los cuales de manera general operan de la siguiente manera: El primer paso es seleccionar la longitud de onda que se va a utilizar en la determinacin. Posteriormente, se determina la absorbancia del disolvente (conocido como blanco) con el cual se ajusta a cero el valor de absorbancia (A) y a 100% el de transmitancia (T); con ello eliminamos la posible interferencia del disolvente. Enseguida se colocan las muestras problema, una a una, para determinar su valor de absorbancia (figura 10).
Figura 10. Lectura del blanco y muestras problema en el espectrofotmetro.
Por lo general, para determinar la concentracin de un analito en una muestra problema se realiza una curva de calibracin, la cual se prepara haciendo diluciones de la sustancia 13
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a determinar en estado puro. A cada una de estas diluciones se les determina su absorbancia a la longitud de onda de mxima absorcin (mxima). Finalmente, se grafican los valores de absorbancia (A) y de concentracin (C), considerando los valores de absorbancia para el eje de las abcisas (eje y) y los de concentracin en las ordenadas (eje x), tal y como se muestra en la figura 11 sobre la curva de calibracin para la cuantificacin del plomo (Hernndez y Gonzlez, 2002).
Figura 11. Curva de calibracin para la cuantificacin de plomo.
La expresin de la ley de Lambert-Beer, A = bc, nos permitir calcular el valor del coeficiente de extincin molar, el cual corresponde a la pendiente de la recta (Harris, 2001). Una vez construida la curva de calibracin, se determina la absorbancia de las muestras problema y sus valores se extrapolan en la grfica; de esta manera se determina la concentracin de las muestras problema. Sin embargo, para realizar un anlisis espectrofotomtrico es necesario conocer el espectro de absorcin de la muestra que se quiere determinar. Esto se realiza para definir cul es la longitud de onda ptima que causar la absorcin mxima de la especie a ser determinada, y de esta manera obtener la mejor sensibilidad en su cuantificacin. El espectro de absorcin se obtiene variando la longitud de onda de la radiacin que incide sobre la muestra y midiendo la cantidad de radiacin absorbida en un espectrofotmetro (Skoog D. A., 2008). Los datos se grafican y se obtiene la curva de mxima absorcin (figura 12).
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Figura 12. Curva de mxima absorcin del metamizol.
En la grfica podemos apreciar que la mxima absorcin del metamizol es a 271 nm, dando su mximo de absorbancia en este punto. De esta manera, es que se determina la longitud de onda ptima para realizar un anlisis cuantitativo en la espectrofotometra visible. Ahora veamos cmo se realiza la determinacin de la concentracin de un analito a partir de los datos de absorbancia o transmitancia, en un ejercicio prctico. Supongamos que se quiere determinar la concentracin de paladio en una muestra de agua. Para ello se realiz una curva de calibracin de la cual se obtuvieron los siguientes datos: Muestra Blanco 1 2 3 4 5 Concentracin (mg/l) 0.00 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 Absorbancia 0.075 0.225 0.275 0.375 0.470 0.550 Absorbancia real 0.000 0.015 0.200 0.300 0.395 0.475
Observars que la absorbancia real se determina restando el valor del blanco a las muestras. Con estos datos se construye la curva de calibracin resultando:
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Curva de calibracin Paladio en agua

0.500 Absorbancia 0.400 0.300 0.200 0.100 0.000 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Concentracin mg/l
Las muestras problema dieron absorbancias de 0.400 y 0.610, respectivamente. Restando el valor del blanco quedaran 0.325 y 0.535, los cuales al ser extrapolados en la grfica corresponderan con los siguientes resultados de concentracin: 0.327 y 0.563 mg/l de paladio. La espectroscopia de la regin ultravioleta utiliza los mismos principios que los de la regin visible, de hecho, la gran mayora de los espectrofotmetros estn diseados para hacer ambas determinaciones, esto es por su gran cercana en el espectro electromagntico. Las tcnicas espectrofotomtricas UV-Visible han recibido gran aceptacin, de tal forma que se utilizan de manera rutinaria en casi todos los laboratorios de anlisis (Hernndez y Gonzlez, 2002). Algunas de sus ventajas son: 1. Tienen un amplio campo de aplicacin: gran parte de los analitos son coloridos o son capaces de formar algn complejo colorido, el cual es cuantificable en la regin visible. De igual manera existe una gran cantidad de sustancias que absorben en la regin UV. 2. Buena exactitud y precisin: en la realizacin de estas metodologas ocurren errores relativos del 1 al 3%, por lo cual se puede considerar que se tendrn resultados analticos con un mnimo de incertidumbre si se procede en forma adecuada. 3. Facilidad y conveniencia: con estas tcnicas es posible obtener resultados muy aceptables para realizar anlisis de rutina, incluso con los instrumentos o espectrofotmetros ms sencillos del mercado. 16
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Sin embargo, no slo las espectroscopias en la regin visible y UV son tiles en el laboratorio, a continuacin veremos la espectrofotometra en el rango de infrarrojo, la cual tambin nos ayudar a complementar anlisis qumicos en los que deseamos determinar la naturaleza del analito. Actividad 3. Obtencin del espectro de absorcin de la clorofila El (la) Facilitador(a) se encargar de asignarles por parejas los datos experimentales para la obtencin del espectro de absorcin de la clorofila, con los cuales debern realizar lo siguiente: 1. Grafiquen los datos, utilizando Excel o papel milimtrico. 2. Localicen en la grfica la longitud de onda de mxima absorbancia A qu longitud de onda corresponde? De acuerdo a la longitud de onda, que color del espectro absorbe mejor? 3. Interpreten qu importancia tiene la obtencin de espectro de absorcin de la clorofila dentro de tu preparacin acadmica. 4. Guarden su trabajo con la siguiente nomenclatura: QAN_U4_A3E1_XXYZ. Sustituye las XX por las dos primeras letras de tu primer nombre, la Y por la inicial de tu apellido paterno y la Z por la inicial de tu apellido materno. 5. Carguen su archivo a la base de datos y esperen los comentarios de sus compaeros. Es importante que ustedes tambin descarguen al menos dos de los trabajos, para que puedan realizar aportes con respeto y acierto. *Consideren las aportaciones para mejorar su trabajo y en caso de dudas, pueden participar en el foro, compartindolas. 6. Enven de nuevo con la nomenclatura: QAN_U4_A3E2_XXYZ, ya que sta versin les ser evaluada. Actividad 4. Procedimientos y aplicaciones Esta actividad te permitir para que desarrolles habilidades en las espectrofotometras visible, ultravioleta, infrarroja y por absorcin atmica: El (la) Facilitador(a) se encargar de asignarte 10 ejercicios que se encuentran dentro del Cuaderno. 1. Realiza los clculos pertinentes para cada uno de los problemas. 2. Guarda tu trabajo con la siguiente nomenclatura: QAN_U4_A6E1_XXYZ. Sustituye las XX por las dos primeras letras de tu primer nombre, la Y por la inicial de tu apellido paterno y la Z por la inicial de tu apellido materno. 17
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3. Carga tu archivo a la base de datos y espera los comentarios de tus compaeros. Es importante que t tambin descargues al menos dos de los trabajos, para que puedas realizar aportes con respeto y acierto. *Considera las aportaciones para mejorar tu trabajo y en caso de dudas, puedes participar en el foro, compartindolas. 4. Enva nuevamente tu archivo con la nomenclatura: QAN_U4_A6E2_XXYZ, ya que ste ser el archivo que te evaluarn. Actividad 5. Prctica 1: Cuantificacin de glucosa en mermeladas Esta actividad te permitir determinar la concentracin de azcares de una sustancia orgnica (mermelada) por medio de un procedimiento espectrofotomtrico, para ello el Facilitador(a) te proporcionar el nmero de equipo con el que trabajars, que deber estar conformado de 3 a 4 participantes, de tal forma que puedan realizar los clculos necesarios y se simule el procedimiento de la prctica de laboratorio. 1. Descarguen y guarden el Cuaderno de Prcticas y ejercicios, lo utilizarn para realizar todas las prcticas que corresponden a la unidad 4. 2. Lean las instrucciones que corresponden a la Prctica 1. 3. Comiencen a trabajar en equipo y realicen todo lo que se solicita. 4. Guarden su documento con la siguiente nomenclatura QAN_U4_A4_XX. Sustituyan las XX por el nmero de equipo. *Consideren que aunque hayan elaborado el reporte de la prctica por equipo cada uno deber enviar su trabajo para que pueda ser evaluado. 5. Enven su reporte al Facilitador (a) mediante la seccin de Tareas y esperen la retroalimentacin.
4.1.2. Espectrofotometra UV e IR
La regin del infrarrojo se localiza a frecuencias de 8x10-5 a 8x10-2 cm. Los fotones de la radiacin infrarroja no tienen la energa suficiente para provocar transiciones electrnicas pero pueden conseguir vibraciones de los enlaces de las molculas a analizar. La energa requerida para lograr una transicin depende del tipo de tomos y del tipo de enlace que presenten. Podramos pensar que los tomos se encuentran estticos en una molcula, pero eso no es cierto. Los tomos se mueven constantemente, vibran en torno a sus enlaces. Cuando los tomos se acercan unos a otros, las fuerzas de repulsin se incrementan y por el
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contario, al alejarse disminuyen. La absorcin de energa infrarroja trae como resultado un aumento en la frecuencia de vibracin.
Figura 13. Vibracin de una molcula diatmica, HCl.
Si la molcula est constituida slo de dos tomos, slo se presenta un modo de vibracin, pero si contiene ms de dos tomos, existe la posibilidad de que puedan presentarse dos tipos de vibracin (figura 14): Tensin simtrica: esta forma de vibracin se presenta cuando los enlaces de la molcula se contraen o alargan simultneamente. Tensin asimtrica: esta ocurre cuando uno de los enlaces se contrae mientras que el otro se alarga.
Figura 14. Vibracin simtrica y asimtrica de los enlaces en la molcula del agua.
Existen otros modos vibracionales como los provocados por los cambios del ngulo de enlace, denominada flexin (figura 15). Si la flexin tiene lugar en un mismo plano, se pueden presentar los siguientes modos: Flexin simtrica en el plan (tijera): el ngulo de enlace aumenta o disminuye debido a que los tomos se acercan o se alejan, haciendo un movimiento similar al abrir o cerrar unas tijeras. Flexin asimtrica en el plano (balanceo): el ngulo de enlace aumenta o disminuye debido a que el tomo central se acerca a uno de los extremos y por lo tanto se aleja del otro, provocando un balanceo. 19
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Flexin simtrica fuera del plano (coleo): el ngulo de enlace aumenta o disminuye, porque los tomos se acercan o se alejan entre ellos, pero fuera del plano. Flexin asimtrica fuera del plano (torsin): el ngulo de enlace aumenta o disminuye debido a que el tomo central se acerca a uno de los extremos y se aleja del otro; este movimiento lo hace fuera del plano.
Tijera
Figura 15. Tipos de flexin de las molculas.
Una molcula absorbe luz infrarroja cuando la energa de los fotones es muy cercana a la diferencia entre un estado vibracional y el siguiente. La absorcin de la energa requiere que el enlace de la molcula presente un momento dipolar, para que la absorcin sea ms intensa. Las bandas de absorcin de casi todos los grupos funcionales orgnicos se localizan entre los 4000 y 800 cm-1. Los espectros infrarrojos se presentan como grficas de absorbancia frente a nmero de onda (Hernndez y Gonzlez, 2002). El espectrofotmetro infrarrojo (IR) contiene una fuente de emisin, que regularmente es una barra de material cermico cuya radiacin se divide en dos porciones: la primera que atraviesa la celda que contiene la muestra; y la segunda, una celda que contiene slo el disolvente empleado. El haz de la muestra se dirige a la rejilla de difraccin, dnde se separa en las longitudes de onda que la integran y dan lugar al espectro IR. En la siguiente tabla se muestran las bandas de absorcin caractersticas de algunos grupos funcionales orgnicos.
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Tabla 1. Bandas de absorcin de algunos grupos funcionales orgnicos.
Por ejemplo, en los alcanos de cadena normal o con ramificaciones, se espera slo encontrar estiramientos y deformaciones de los enlaces C-H y C-C. Los estiramientos debidos a la interaccin C-H son muy estables y aparecen en entre los 3000 y 2840 cm-1, como se muestra en la figura 16.
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Figura 16. Espectro infrarrojo del dodecano.
La absorcin de los alcoholes y fenoles es debida a la vibracin de los enlaces entre el O-H y C-O. La vibracin de estiramiento del enlace O-H aparece alrededor de los 3400 cm-1. Es una absorcin intensa y amplia (desde 3600 hasta 3200 cm-1 aproximadamente), como se puede apreciar en la figura 17.
Figura 17. Espectro infrarrojo del 4-pentenol
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En resumen, cada uno de los grupos funcionales tiene una seal caracterstica que requiere del entrenamiento o experiencia del analista. Sin embargo, para fines de esta asignatura es importante que visualices su importancia y aplicacin en tu campo profesional. Otra de las tcnicas de gran importancia en el anlisis qumico es la espectrofotometra de absorcin atmica, la cual resulta de inters al realizar la cuantificacin de metales, sobre todo contaminantes de algunos ecosistemas o recursos naturales.
4.1.3. Espectrofotometra de absorcin atmica

En el caso de la espectrofotometra de absorcin atmica, son tiles los espectros de emisin, contrarios a los de absorcin. El mtodo se fundamenta en que al hacer incidir energa en forma de calor o de manera elctrica, mediante una llama o una descarga a una muestra problema, provocar un cambio del estado basal al estado excitado del analito (figura 18). De tal manera que los electrones ms externos en un tomo, pasarn a un estado excitado. Sin embargo, despus de unos nanosegundos se relajan hacia un estado fundamental, cediendo la energa absorbida. Esta energa en forma de fotones corresponde al espectro visible o ultravioleta y es medida por medio de un detector.
Estado excitado
Figura 18. Excitacin de electrones e ionizacin de tomos.
El equipo para la espectrofotometra de absorcin atmica consta de manera general de una fuente de luz, el tomador de muestra, el atomizador, la fuente de excitacin, el selector de longitud de onda (monocromador) y el dispositivo de lectura, tal y como se muestra en la figura 19.
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Figura 19. Componentes de un espectrofotmetro de absorcin atmica.
Para realizar la medicin es importante que el analito se encuentre en forma atomizada, esto es, los tomos o iones deben estar en fase gaseosa. Los dispositivos de atomizacin pueden ser de dos tipos: atomizadores continuos y atomizadores discretos. Los primeros introducen la muestra en forma continua, mientras que los segundos lo hacen en porciones, es decir, para fragmentar la muestra pueden utilizar una jeringa o un automuestreador. La nebulizacin es la tcnica ms utilizada para introducir la muestra. El nebulizador introduce la muestra en forma continua como un roco, llamado aerosol (Skoog D. A., 2005). Posteriormente, para lograr la atomizacin o ionizacin de la muestra se requiere de una fuente de energa que alcance altas temperaturas. Los mecheros empleados en la espectroscopa de llama suelen ser de flujo laminar con premezcla. La muestra nebulizada se transporta a la llama y ah ocurre la desolvatacin (eliminacin de agua). Las partculas slidas llegan al centro de la llama (cono interno), donde se vaporizan y convierten en tomos gaseosos, iones elementales y especies moleculares. La excitacin de los espectros de emisin atmica tambin ocurren en esta regin (Skoog D. A., 2005) En la tabla 2 se muestran algunas mezclas de gases utilizadas en los equipos de espectrofotometra de absorcin atmica. Como se puede apreciar, alcanzan temperaturas muy altas, en las cuales los tomos pueden excitarse y de esta manera lograr su ionizacin. Combustible/oxidante *Gas/aire *Gas/O2 H2/aire H2/ O2 Acetileno/aire Temperatura (C) 1700-1900 2700-2800 2000-2100 2500-2700 2100-2400 24
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Acetileno/O2 3050-3150 Acetileno/N2O 2600-2800 *Propano o gas natural

Tabla 2. Llamas empleadas en espectroscopia atmica (Skoog D. A., 2005).
El mtodo por excelencia para el anlisis en espectroscopia de absorcin atmica es el del estndar externo, el cual consiste en emplear al menos tres estndares para construir la grfica o curva de calibracin. Las disoluciones estndar se preparan a concentraciones cercanas a las esperadas en la muestra problema, con ello se evitan errores en la medicin. Las principales interferencias que se pueden presentar en el mtodo de espectrofotometra por absorcin atmica son los dependientes de la atomizacin. El grado de disociacin de los tomos depende principalmente de la composicin de la muestra. Por ejemplo, el CaCl2 se disocia rpidamente en comparacin con Ca3(PO4)2 para dar tomos de Ca. La tcnica de la espectrofotometra de absorcin atmica se ha aplicado a ms de 60 elementos y es una herramienta indispensable para los estudios en los que se determinan vestigios de metales en muestras biolgicas o del medio ambiente.
Actividad 6. Prctica 2: Cuantificacin de plomo en material de empaque y dulces de tamarindo Esta actividad te permitir determinar la concentracin de una sustancia inorgnica venenosa (plomo) presente en un medio slido (celofn) por medio de un procedimiento espectrofotomtrico. Para esta actividad el Facilitador(a) te proporcionar el nmero de equipo con el que trabajars, que deber estar conformado de 3 a 4 participantes, de tal forma que puedan realizar los clculos necesarios y se simule el procedimiento de la prctica de laboratorio. 1. Descarguen y guarden el Cuaderno de Prcticas y ejercicios, lo utilizarn para realizar todas las prcticas que corresponden a la unidad 4. 2. Lean las instrucciones que corresponden a la Prctica 2. 3. Comiencen a trabajar en equipo y realicen todo lo que se solicita. 4. Guarden su documento con la siguiente nomenclatura: QAN_U4_A5_XX. Sustituyan las XX por el nmero de equipo. *Consideren que aunque hayan elaborado el reporte de la prctica por equipo cada uno deber enviar su trabajo para que pueda ser evaluado. 25
25
Qumica Analtica
5. Enven su reporte al Facilitador(a) mediante la seccin de Tareas y esperen la retroalimentacin. Evidencia de aprendizaje. Control de calidad del agua: Anlisis de resultados y conclusin En esta actividad utilizars los conocimientos adquiridos a lo largo de la asignatura, mediante el planteamiento de un proyecto de investigacin enfocado a resolver alguna problemtica ambiental con respecto al control de calidad del agua. Al finalizar la asignatura debers entregar un proyecto de investigacin, el cual debe estar relacionado con alguno de los siguientes temas: Control de calidad del: - Agua potable. - Agua residual. - Agua tratada. En la tercera unidad se continu la parte experimental relacionada con el equilibrio por complejacin, xido-reduccin y precipitacin, en esta ocasin se debern realizar los anlisis correspondientes a los anlisis espectrofotomtricos, de acuerdo al cronograma de actividades establecido en el planteamiento del proyecto. Para ello, sigue las siguientes indicaciones: 1. Indica las pruebas a realizar en el control de calidad del agua de tu muestra, fundamentadas en el anlisis espectrofotomtrico. 2. Indica el procedimiento a seguir para cada una de las pruebas. 3. Seala en cuadros, tablas o grficos los resultados obtenidos en cada una de las determinaciones. 4. Realiza los procedimientos matemticos necesarios para el manejo de tus resultados. 5. Elabora tu reporte final, el cual debe contener: a) Ttulo. b) Justificacin. c) Objetivos. d) Marco terico. e) Planeacin. f) Metodologa (mtodos y tcnicas utilizadas, con fundamento incluyendo materiales y reactivos). g) Resultados (tablas de concentraciones de los analitos). 26
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Qumica Analtica
h) Anlisis de resultados. i) Conclusiones. j) Referencias de acuerdo al formato APA. 6. Una vez concluida la actividad, enva tu documento a tu Facilitador(a) por medio del Portafolio de evidencias.
Cierre de la unidad
En esta unidad analizamos la importancia que tienen los mtodos pticos, especialmente los espectrofotomtricos para complementar los anlisis volumtricos de muestras problema. Observamos las ventajas que presentan al trabajar con cantidades pequeas de muestra, su gran sensibilidad, precisin y exactitud. As como la principal metodologa para determinar la cantidad o caracterizacin de un analito en una muestra determinada. Es importante hacer hincapi, en que en este curso slo se manejaron algunas generalidades de estos mtodos, por lo que para su manejo ptimo se requiere especializarse en cada uno de ellos. Sin embargo, la informacin recibida as como las actividades planteadas te permitirn interpretar y realizar anlisis qumicos basados en estas tcnicas. Los conocimientos y habilidades desarrolladas a lo largo de la unidad tambin te sern de gran utilidad para incursionar en otros mbitos cientficos, como es el caso de la investigacin y desarrollo de nuevos mtodos y productos.
Para saber ms.

Lee el artculo Factores de riesgo y niveles de plomo en sangre en estudiantes de licenciatura de Judith Ruiz Luna. En l encontrars informacin de cmo se realiz un estudio para determinar la concentracin de plomo en sangre, utilizando la espectrofotometra de absorcin atmica.
Fuentes de consulta
Harris, D. C. (2001). Anlisis Qumico Cuantitativo. Espaa: Revert S.A. Hernndez, L., Gonzlez, C. (2002). Introduccin al anlisis instrumental. Espaa: Ariel S.A. Skoog, D. A.; et al. (2005). Fundamentos de Qumica Analtica. Mxico: Thomson. Skoog, D. A.; et al. (2008). Principios de anlisis instrumental. Mxico: CENGAGE Learning. 27
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Qumica Analtica
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Metodos Espectofotometricos U4

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Unidad 4 Mtodos espectrofotomtricos

Unidad 4. Mtodos espectrofotomtricos

Figura 1. Componentes bsicos de un instrumento analtico (Hernndez y Gonzlez, 2002).

Estos parmetros se relacionan de la siguiente forma:

Figura 3. Radiaciones electromagnticas relacionadas con actividades humanas.

Figura 4. Espectro electromagntico.

Figura 5.Grfica que muestra la proporcionalidad de la absorbancia con la concentracin.

Figura 6. Principales componentes de un espectrofotmetro.

Figura 7. Espectrofotmetro UV-visible.

4.1.1. Espectrofotometra visible

Figura 8. Espectro de luz visible.

Figura 9. Complementariedad de los colores del espectro visible.

Figura 10. Lectura del blanco y muestras problema en el espectrofotmetro.

Figura 11. Curva de calibracin para la cuantificacin de plomo.

Figura 12. Curva de mxima absorcin del metamizol.

Curva de calibracin Paladio en agua

Figura 13. Vibracin de una molcula diatmica, HCl.

Figura 15. Tipos de flexin de las molculas.

Tabla 1. Bandas de absorcin de algunos grupos funcionales orgnicos.

Figura 16. Espectro infrarrojo del dodecano.

Figura 17. Espectro infrarrojo del 4-pentenol

4.1.3. Espectrofotometra de absorcin atmica

Figura 18. Excitacin de electrones e ionizacin de tomos.

Figura 19. Componentes de un espectrofotmetro de absorcin atmica.

Acetileno/O2 3050-3150 Acetileno/N2O 2600-2800 *Propano o gas natural

Para saber ms.

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