MTODOS PARA LA DETERMINACIN DEL EXTRACTO ETREO

WILLIAM OVIEDO ARGUMEDO

ANLISIS DE ALIMENTOS

UNIVERSIDAD DE CRDOBA PROGRAMA DE INGENIERA DE ALIMENTOS 2011

INTRODUCCION. El estudio de la composicin bromatolgica de un alimento es muy importante como forma de determinar de forma especfica, pero a la vez de forma general los componentes principales de una muestra de alimentos (humedad, cenizas, extracto etreo, protenas). Se considera grasa al extracto etreo que se obtiene cuando la muestra es sometida a extraccin con ter etlico. El trmino extracto etreo se refiere al conjunto de las sustancias extradas que incluyen, adems de los steres de los cidos grasos con el glicerol, a los fosfolpidos, las lecitinas, los esteroles, las ceras, los cidos grasos libres, los carotenos, las clorofilas y otros pigmentos. En el presente documento se pretender abarcar de manera resumida los diferentes tipos de mtodos que existen para la determinacin de extracto etreo as como un enfoque directo al mtodo de extraccin con soxhlet en diferentes tipos de alimentos.

DETERMINACIN DEL EXTRACTO ETREO. El extracto etreo o grasa bruta como tambin se le conoce como el contenido de grasa total presente en una muestra de alimento que puede ser extrada por medio de adicin o sin adicin de solventes. Los mtodos ms empleados son los que hacen uso de solventes, el ms comn es el mtodo de soxhlet, pero tambin existen otros no tan conocidos como extraccin por Lotes, continua, ASE (Accelerated Solvent Extraction), SFE (Supercritical Fluid Extraction). En cuanto a la preparacin de la muestra para este tipo de extraccin se debe tener en cuenta las siguientes recomendaciones: La muestra debe estar seca, es decir la muestra debe estar libre de humedad. Se puede someter a la muestra a un liofilizado para eliminar la humedad y para aumentar la superficie de la muestra. La muestra debe estar reducida.

Como este tipo de extraccin depende netamente del solvente a utilizar es muy importante que el solvente cumpla las siguientes especificaciones: Que sea capaz de romper los enlaces de los compuestos lipidicos, adems de liberar estos y solubilizarlos. Debe tener una polaridad similar a la del analito.

En cuanto a la extraccin del extracto etreo sin el empleo de solventes, se basan en el empleo de reactivos para separar los lpidos del resto de constituyentes del alimento. Generalmente este tito de mtodos se emplea para el anlisis de productos lcteos. En esta clasificacin encontramos el mtodo de BABCOCK y el mtodo de GERBER, cuya caracterstica es el empleo de acido sulfrico en el mtodo de BABCOCK y una mescla de acido sulfrico/alcohol en el mtodo de GERBER, para liberar la grasa de la capa proteica que le rodea. Se mide directamente la grasa despus de centrifugar. Tambin existe en esta categora el mtodo del detergente donde se emplea un reactivo que es una mezcla de tensioactivos, surfactantes o detergentes capaz de romper la capa de globulos de las grasas.

MTODOS PARA LA DETERMINACIN DE EXTRACTO ETREO.

MTODO DE SOXHLET Es una extraccin semicontinua con un disolvente orgnico. En este mtodo el disolvente se calienta, se volatiliza y condensa goteando sobre la muestra la cual queda sumergida en el disolvente. Posteriormente ste es sifoneado al matraz de calentamiento para empezar de nuevo el proceso. El contenido de grasa se cuantifica por diferencia de peso (Nielsen, 2003).

MTODO DE GOLDFISH Es una extraccin continua con un disolvente orgnico. ste se calienta, volatiliza para posteriormente condensarse sobre la muestra. El disolvente gotea continuamente a travs de la muestra para extraer la grasa. El contenido de grasa se cuantifica por diferencia de peso entre la muestra o la grasa removida (Nielsen, 2003)

MTODO POR LOTES Este mtodo hace uso de la solubilidad intrnseca de la sustancia a separar; es claro que un compuesto no polar es soluble en un disolvente no polar (Hoffman, 1989). La extraccin se realiza en fro para evitar el dao del material lipdico y por lotes para incrementar la eficiencia.

MTODO DE BLIGH-DYER El mtodo de Bligh-Dyer as como su modificacin por Hanson y Olley proporciona un mtodo rpido para la extraccin de lpidos de tejidos y productos alimenticios que contienen una cantidad significativa de agua. El mtodo se basa en la homogenizacin de la muestra con cloroformo, metanol y agua en proporciones tales que se forme una sola fase miscible con el agua de la muestra. Al aadir alcuotas de cloroformo y agua se logra la separacin de fases. El material lipdico se encuentra en la fase no acuosa, mientras que el material no lipdico se

encuentra en la fase acuosa. Los lpidos se pueden extraer de dos gramos de muestra seca hasta veinte gramos de muestra hmeda. El contenido de agua de la muestra se ajusta a diecisis mililitros para conservar la proporcin de cloroformo, metanol y agua la cual es esencial si se pretende una separacin de fases y una extraccin cuantitativa de lpidos. La ventaja de este procedimiento es que las etapas de filtrado y lavado son eliminadas. Sin embargo no es un mtodo muy cuantitativo y tiene un elevado margen de error para muestras secas de cereales (Rossell y Pritchard, 1991)

MTODO DE RSE-GOTTLIEB. De acuerdo a este mtodo, la separacin de la grasa es lograda por amoniaco y etanol con un posterior efecto de deshidratacin sobre los fosfolpidos. La grasa es disuelta en ter recin destilado y se aade algo de petrleo de tal suerte que se separen algunos compuestos no lipdicos que se puedan encontrar en la fase etrea. Esta mezcla es completamente inmiscible en agua de manera que mediante una extraccin adecuada es simple dejar la grasa en la fase etrea y el residuo graso es pesado. Este mtodo es particular para leche fresca que no contiene cidos grasos libres, los cuales en disolucin alcalina forman sales de amonio y esto es insoluble en ter. Esta es la razn por la cual esto no se aplica a quesos, los cuales si tienen cidos grasos libres. (Boekenoogen, 1964)

MTODO DE GERBER. ste, as como los dems mtodos volumtricos presentan un carcter un tanto cuanto emprico ya que varios factores afectan la gravedad especfica de la grasa separada, variaciones propias de la grasa, cidos grasos presentes, solubilidad de la grasa en los disolventes, etc. Con estos mtodos volumtricos la muestra se sita en un butirmetro y se descompone utilizando cidos o lcalis de manera que la grasa es liberada, esta se separa por mtodos mecnicos (centrifuga) y se colecta en el cuello calibrado. (Boekenoogen, 1964)

MTODO DE MOJONNIER La grasa es extrada con una mezcla de ter etlico y ter de petrleo en un matraz de Mojonnier, la grasa extrada se pone a peso constante y es expresada en porcentaje de grasa por peso. La prueba de Mojonnier es un ejemplo de extraccin discontinua con disolvente. Esta extraccin no requiere remover previamente la humedad de la muestra. (Nielsen, 1998)

DETERMINACIN DE EXTRACTO ETREO PARA ALIMENTOS CRNICOS POR MTODO DE SOXHLET. FUNDAMENTO: Extraccin de la grasa de la muestra previamente hidrolizada y desecada por medio de hexano o ter de petrleo. Eliminacin del disolvente por evaporacin, desecacin del residuo y posterior pesada despus de enfriar. MATERIALES Y REACTIVOS: Erlermeyer de 500 ml Vidrio de reloj Plancha Papel filtro Embudos Extractor soxhlet Estufa elctrica Balanza analtica Horno desecador Hexano o ter de petrleo Acido clorhdrico 3 N

PREPARACIN DE LA MUESTRA: Quitar las diferentes capaz del producto, si las tuviera, luego tomar una muestra representativa de 200 g, trocear esta en rodajas de 1cm o en pequeos cubos, pasar varias veces por una trituradora hasta conseguir una mezcla bien homogenizada y luego almacenar en frascos limpios y secos, de forma que queden llenos, para prevenir la perdida por humedad. Guardar las muestras en refrigeracin de tal forma que sufra algn deterioro o cambios en su estructura qumica. Las muestras deben durar en almacenamiento un tiempo no mayor a 24 horas.

PROCEDIMIENTO: Tomar 2.5 gramos de muestras previamente acondicionada e introducirla en un erlermeyer de 500 ml. Aadir 100ml de acido clorhdrico 3 N. cubrir la boca del erlermeyer con un vidrio de reloj y someter la muestra a ebullicin suave en la estufa calefactora durante una hora. Enfriar y filtrar sobre doble papel filtro evitando cualquier paso de materia grasa al filtrado. Lavar el residuo con agua fra para eliminar el exceso de acido en la muestra. Colocar los papeles filtros donde estn contenidos los residuos sobre un vidrio de reloj y desecar en horno a 98C durante hora y media. Una vez eliminada la muestra colocar sobre el cartucho de extraccin, extrayendo con eter de petrleo etlico o hexano durante 6 horas regulando la temperatura. Eliminar el disolvente en el rotavapor y eliminar el resto de disolvente en la estufa durante hora y media a 75 C. Enfriar el matraz con la grasa en desecador, y pesar cuando alcance la temperatura ambiente. CLCULOS: Expresar el resultado en porcentaje de peso: % de grasa= ((p-p)/ p)*100 P: peso en gramo del matraz P: peso en gramo del matraz con la grasa P: peso en gramo de la muestra PARMETROS OPERACIONALES: La temperatura del disolvente a utilizar debe ser menor a 40-60C para una fcil destilacin y separacin del solvente de la muestra o la grasa. Es importante el procedimiento preliminar con acido ya que ayuda a eliminar interferencias como protenas y carbohidratos presentes en la muestra.

REFERENCIA DEL MTODO: Norma ISO 1443.

DETERMINACIN DE EXTRACTO ETREO PARA CEREALES Y SUS DERIVADOS POR MTODO DE SOXHLET. Fundamento: El contenido en grasa bruta de un producto se define convencionalmente como la parte del mismo extrable por ter etlico en condiciones determinadas. Incluye adems de la grasa, otras muchas sustancias solubles en ter etlico, como son ceras, pigmentos, vitaminas, etc. Este mtodo es aplicable a granos, harinas y cualquier derivado de los cereales. MATERIALES Y REACTIVOS: Extractor tipo soxhlet Balanza analtica Estufa de desecacin Desecador de silicagel Matraces de 100 a 150 ml ter etlico ter etlico, de petrleo, hexano

PROCEDIMIENTO: Pesar de 5 a 10 gramos de muestra, molida, de tal forma que pase por un tamiz de 500 y previamente desecada a 100 C, e introducirlo en un cartucho de extraccin. Tarar el matraz, desecado en la estufa y enfriado en el desecador. Introducir el cartucho en el extractor, aadir alguno de los solventes ya mencionados y proceder con la extraccin, de forma continua hasta que el

solvente sea incoloro (aproximadamente 4 horas) a una velocidad de destilacin de 4 a 5 gotas/s. Sacar el cartucho del extractor y recuperar el solvente. Llevar el matraz con el extracto y el resto del disolvente a la estufa de desecacin a 100C y tenerlo media hora. Dejar el matraz en el desecador, y en cuanto alcance la temperatura ambiente (aproximadamente unos 20 minutos) pesarlo. CLCULOS: Expresar el resultado en porcentaje de peso: % de grasa= ((p-p)/ p)*100 P: peso en gramo del matraz P: peso en gramo del matraz con la grasa P: peso en gramo de la muestra PARMETROS OPERACIONALES: La temperatura del disolvente a utilizar debe ser menor a 40-60C para una fcil destilacin y separacin del solvente de la muestra o la grasa. REFERENCIA DEL MTODO: American association of cereal chemist. Cereal laboratory methods 1967.

DETERMINACIN DE EXTRACTO ETREO PARA PASTAS ALIMENTICIAS POR MTODO DE SOXHLET. Fundamento: El producto es hidrolizado con acido clorhdrico diluido, de la masa seca resultante las materias grasas son extradas con solventes ya sea ter de petrleo o ter etlico, el solvente es evaporado y el residuo pesado. MATERIALES Y REACTIVOS: Extractor tipo soxhlet Estufa de desecacin Balanza analtica Desecador silicagel Matraz 250-300 ml Acido clorhdrico 3N ter etlico, de petrleo o hexano Solucin de nitrato de plata

Procedimiento: Tomar aproximadamente 10 gramos de muestra previamente triturada en un matraz de 250 a 300ml. Agitando continuamente adicionar 100 ml de acido clorhdrico y cerrar el matraz con un vidrio de reloj. Hervir unos 60 minutos, agitando de manera descontina, luego dejar enfriar y filtrar. Lavar el precipitado con agua destilada hasta que el filtrado no de precipitado con nitrato de plata o no de la reaccin acida con papel tornasol. Poner el filtro en un horno de secado a100 C por una hora. El extracto ya seco se coloca en un cartucho para extraccin de tipo soxhlet. Se aade el solvente al montaje y se procede con la extraccin durante 8 horas.

El matraz receptor debe estar secado y tarado. Evaporar el solvente, secar en estufa y pesar. CLCULOS: Expresar el resultado en porcentaje de peso: % de grasa= ((p-p)/ p)*100 P: peso en gramo del matraz P: peso en gramo del matraz con la grasa P: peso en gramo de la muestra Para una muestra previamente seca el contenido de grasa viene dada por: %grasa= (G*100)/100-H Donde: G: porcentaje de grasa anterior H: humedad PARMETROS OPERACIONALES: La temperatura del disolvente a utilizar debe ser menor a 40-60C para una fcil destilacin y separacin del solvente de la muestra o la grasa. Es importante el procedimiento preliminar con acido ya que ayuda a eliminar interferencias como los carbohidratos presentes en la muestra. REFERENCIA DEL MTODO: ADAC, edicin 1980, 14.059.

DETERMINACIN DE EXTRACTO ETREO PARA ESPECIAS ALIMENTICIAS POR MTODO DE SOXHLET. FUNDAMENTO: El contenido en grasa bruta de un producto se define convencionalmente como la parte del mismo extrable por ter etlico en condiciones determinadas. Incluye adems de la grasa, otras muchas sustancias solubles en ter etlico, como son ceras, pigmentos, vitaminas, etc. MATERIALES Y REACTIVOS: Extractor tipo soxhlet Balanza analtica Estufa de desecacin Desecador de silicagel Matraces de 100 a 150 ml ter etlico ter etlico, de petrleo, hexano sulfato sdico anhdrido

PROCEDIMIENTO: Pesar aproximadamente 5 gramos de muestra previamente triturada y homogenizada en un cartucho de extraccin. Aadir 1 gramo de sulfato sodico anhdrido que acta como desecante y taponar el catucho con algodn desengrasado. Poner el cartucho en el extractor y dejar extyraer por un minimo de 8 horas con alguno de los solventes ya mencionados. El matraz receptor debe estar previamente secado y tarado. Recoger todo el extacto graso en el matraz y evaporar el solvente por destilacin. Terminar de evaporar en la estufa con aireacin a 100 C y pasar a un desecador hasta que se enfrie a temperatura ambiente. Luego se procede a pesar.

CLCULOS: Expresar el resultado en porcentaje de peso: % de grasa= ((p-p)/ p)*100 P: peso en gramo del matraz P: peso en gramo del matraz con la grasa P: peso en gramo de la muestra PARMETROS OPERACIONALES: La temperatura del disolvente a utilizar debe ser menor a 40-60C para una fcil destilacin y separacin del solvente de la muestra o la grasa. A la muestra no se le realiza un secado previo debido a aqu las especias contienen un contenido bajo de humedad. Es fundamental la adicin del sulfato sdico anhdrido a la muestra antes de la extraccin ya que al actuar como desecante ayuda a eliminar el bajo contenido de humedad en la muestra.

BIBLIOGRAFA. Mtodos oficiales de anlisis de los alimentos. 1994 madrid Vicente ediciones. http://books.google.com/books?id=8VpJ8foyDiIC&pg=PA131&dq=extracto+ etereo&hl=es&ei=7_P3Tblcg7m2B6uSwOEK&sa=X&oi=book_result&ct=res ult&resnum=6&ved=0CEAQ6AEwBQ#v=onepage&q&f=false. Anlisis de los alimentos. Reinhard matissek, gabriel steiner. Acribia s.a. Zaragoza espaa. http://www.utp.edu.co/php/revistas/ScientiaEtTechnica/docsFTP/1019312326.pdf. Manual y tcnicas de anlisis de alimentos. Pdf.