ASIGNATURA: LAB.DE MICROBIOLOGIA. TEMA: CULTIVO PURO PROFESORA: BLGA ALICIA DECHECO EGUSQUIZA.

SECCIN: B INTEGRANTES: ROQUE MENDOZA, MIRLA LIZET. RODRIGUEZ CRUZ, KARINA ISABEL TAFUR GARAY, CARLOS. VERTIZ GARCIA, MAYUMI ALEJANDRA.

2011

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Los microorganismos en estado natural crecen de forma heterognea o mixta. Cuando queremos estudiar un microorganismo dado, debemos aislarlo. Un cultivo puro es aquel que contiene un solo tipo de microorganismo. El modo de obtener estos cultivos consiste en obtener colonias aisladas, que provienen de una sola clula (son clones). Hay diferentes mtodos para obtenerlas: MTODO DE SIEMBRA POR AGOTAMIENTO O EN ESTRA Procedimiento: Con el asa estril tomamos la muestra y hacemos extensiones en la placa. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y extendemos parte de la extensin anterior en otra direccin. Volvemos a esterilizar el asa de siembra y volvemos a extender parte de la segunda extensin en otra direccin. Esterilizamos y repetimos la operacin. Incubamos a 37 durante 24 horas y, en la primera zona, habr un amasijo de clulas. En la segunda, parte de la primera zona estar mejor extendida, y en la tercera y en la 4 mejor an. Si tomamos una colonia y la ponemos sobre una placa petri, tendremos un cultivo puro. MTODO DE LAS DILUCIONES SUCESIVAS Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas clulas que, tras inocularse en un medio de cultivo, generen colonias aisladas. Metodologa: Ahora tomamos 0.1 ml de cada tubo y lo depositamos en una placa petri con medio de cultivo. Con un asa de vidrio se extiende esa cantidad sobre la placa, e incubams a 37 C durante 24 horas. En la primera dilucin habr un amasijo de colonias. En la siguiente habr diez veces menos nmero de colonias, y as sucesivamente hasta conseguir colonias aisladas.
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Este mtodo nos permite calcular el nmero de microorganismos viables que existen en la muestra que estamos analizando: N=C 1/D 1/i donde: N es el nmero de microorganismos presentes en la muestra C es el nmero de colonias contadas UFC (unidades formadoras de colonias) D es la dilucin I es el inculo Debe haber entre 30 y 300 colonias. Si hay menos, no es significativo (puede tratarse de una contaminacin) y, si hay ms, no estn aisladas.

Mantenimiento y preservacin de cultivos puros.

La mayora de los laboratorios de bacteriologa cuentan con una gran variedad de este tipo de cultivos, que frecuentemente se denominan coleccin de cultivos tipo. Es muy importante tener identificadas las bacterias del cultivo puros listas para usarse. La mayora de las compaas industriales de productos biolgicos, mantienen colecciones de cultivos bacterianos en cantidades importantes. Estos cultivos se emplean para probar la efectividad de agentes qumicos moteraputicos y potencialmente efectivos, as como cultivos de referencia para estudios taxonmicos., como agentes de ensayo para antibiticos y vitaminas, y como cultivos de referencia que citan en las patentes de las compaas.

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AGAR SS Es un medio selectivo empleado para el aislamiento de Salmonella y Shigella a partir de muestras fecales. El medio contiene sales biliares y verde brillante para impedir el crecimiento de coliformes y grmenes Gram positivos.

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La presencia de metilo nos permiten colonias que (rosas o rojas) de las (incoloras). Las especies de no fermentan nunca este medio es descartar todas las cumplan este requisito.

lactosa y rojo de diferenciar las fermentan la lactosa que no lo hacen Salmonella y Shigella la lactosa por lo que excelente para colonias que no

El agar SS es doblemente diferencial, porque adems de indicarnos el comportamiento de los grmenes con relacin a la lactosa, nos muestra los grmenes que son capaces de producir cido sulfhdrico, que se manifiesta como un precipitado de color negro en el centro de la colonia.

Preparacin de agar Pesamos 6,3g de agar. Disolver en 100 ml de agua destilada Revolver bien hasta que el agar se disuelva Transportar a una botella esterilizada Hacer hervir la botella por un periodo de 5 minumtos y sacarla y moverla en forma de crculos por un minuto Repetir esta operacin 6 veces Dejar enfriar a una temperatura aprox de 45C y plaquear Luego de plaquear dejar enfriar por 10 min para lograr una buena solidificacin

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Preparacin de la muestra Primero se peso 10g de nuestra muestra pan con chorizo de distintas partes en un herber estril. Luego ponemos la muestra de chorizo en otro herber y lo mezclamos con 20 ml de agua hervida fra Aplastar con el tenedor hacia las paredes del herber la muetra para lograr una solucin viscosa Luego pasar a sembrar

CARTILLA DE ANLISIS DEL PRODUCTO: CARTILLA DE HIGIENE Muestra fecha de compra Pan con chorizo 8 de noviembre del 2011

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Lugar de compra

Patio del anexo 8 de la universidad nacional Federico Villarreal Hora de compra 6: 31 pm Ubicacin del producto Este se encontraba dentro de una vitrina(conservador) con compartimientos con otros productos como gaseosa, pasteles, empanadas etc. Proteccin del producto Estaba en un plato junto a otros (pan con chorizo) cubierto por una bolsa de hamburguesa. Utensilio empleado Solo uso una bolsa de plstico transparente Materiales con que se vende el Sola la bolsa de hamburguesa y producto servilletas Analistas Roque Mendoza Mirla Lizet Vendedor Higiene preventa vendedor Proteccin de vendedor Condicin del vendedor Condicin del cabello Uas del vendedor Contacto con el producto Lugar Zona del lugar Piso del lugar Tena las manos aparentemente limpias, sin guantes, tena gorro, una chaqueta blanca. Tena una chaqueta blanca y un gorro blanco. Tena el cabello corto, semicubierto por el gorro. Semicortadas se notaba grasosas y no tena guantes. Fue casi directo pero usaba una bolsa de plstico transparente, es una zona semiabierto , poca iluminacin El piso es de granito y es de color negro se notaba que estaba un poco sucia con restos de grasa y papitas al hilo en el piso

Condicin del lugar Mascotas No hay mascotas Roedores e insectos Se pudo observar moscas. Se utilizo el mtodo de siembra por estras en placa

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Con un asa de kolle, se paso una porcin de la muestra a la superficie de un medio de cultivo hecho a base de agar, en nuetro Agar SS Incubar adecuadamente por un tiempo de 48 horas a una temperatura de 37C promedio

Nota: Todo este procedimiento se sigui para obtener colonias y luego seleccionar una sola y de esta manera volver a sembrar para obtener un cultivo puro de solo una colonia en nuestra placa Cada colonia aislada es descendencia de una sola clula y por lo tanto un cultivo puro. En las especies donde las colonias se agrupan de manera caracterstica, las colonias se desarrollan a partir de un mismo tipo de clulas e igualmente provienen de un cultivo puro. Una porcin de una colonia que se pase a un medio de cultivo en tubo viene a ser un cultivo puro.

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Medio de cultivo Muestra

SS Pan con chorizo

Lugar de recoleccin de la Patio del anexo 8 de la universidad muestra nacional Federico Villarreal Fecha y hora de recoleccin de la 8 de noviembre del 2011 muestra Fecha y hora de siembra 6: 31 pm Temperatura de muestra tiempo de incubacin Fecha y hora de lectura Analista Forma Redonda Irregular Redondeada Rizoide Aplanado Elevado Convexo Liso Rugoso Estirado mate Brillante Entero Ondulado Lobulado Dentado irregular Color Opacidad Consistencia CREMA Transparente Opaco Seco Mucoide Membranosa Escasa regular abundante 2 mm X X y 24 - 48 horas a 150C 15/11/2011

Elevacin

X X

Superficie

Bordes

X X

contaminacin

dimetro

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RESULTADOS Obtuvimos clones de colonias de una sola especie Analizamos la poblacin de nuestra placa sembrada (sus caractersticas principales) Analizamos el gnero, la especie a la cual pertenece nuestro cultivo de colonias

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Seleccionar una colonia que tenga las siguiente caractersticas: La mejor desarrollada La que tenga mejor coloracin La que este mas aislada del resto La que sea netamente de una bacteria que tenga un excelente crecimiento en el otro agar en el cual se va a sembrar y cultivar

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Al momento de transporta la colonia elegida hacia el otro agar, observar que este pura y libre de otras colonias, hongos, levaduras ya que stas pueden alterar nuestro resultado Incubar convenientemente para que el proceso de desarrollo de la bacteria sea lo mas optimo posible BIBLIOGRAFA Microbiologa, Pelczar/Reid/Chan, cuarta edicin, editorial MC.GRAW-HILL, Capitulo 8, Pg. 117. Titulo:manual para la introduccin al laboratorio de microbilogia Autor: Daniel Ricardo Toro ,Editorial: Universidad de Caldas,Mes y ao de edicin: Noviembre de 2005 Titulo: Laboratorio de Microbiologa Instrumentacin y principios bsicos;Autores: Jos Gonzlez Alfaro, Boris Gonzlez Gonzlez,Rosa T. Barrial Gonzlez;Editorial: Ciencias Mdicas Ecimed,Paginas: 255,Edicion: 2004

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