Qu es Microscopa?

La microscopa es la tcnica de producir imgenes visibles de estructuras o detalles demasiado pequeos para ser percibidos a simple vista. En este campo ha habido gran impulso por parte de la fsica.
Biologa II Enero 2009

Tamao relativo de clulas

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1.1 Microscopa ptica

Un microscopio ptico es un microscopio basado en lentes pticas que nos permiten observar objetos de puequeo tamao. El desarrollo de este aparato suele asociarse con los trabajos de Anton van Leeuwenhoek. Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el tamao original. El lmite lo tienen en unas 2000 veces.
Elementos de un microscopio bsico: (1) ocular, (2) revlver, (3) objetivo, (4) mecanismo de enfoque, (5) tornillo de enfoque fino, (6) platina, (7) espejo, (8) condensador.

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Principio de funcionamiento
Las lentes de un microscopio ptico son el condensador, el objetivo y el ocular. La luz que entra en el sistema debe enfocarse sobre la preparacin y para esto se utiliza el condensador. Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una posicin que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se transmite al ocular. En el ocular se realiza el aumento final.

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Aumento y resolucin
Es importante recordar que un microscopio, aparte de tener la capacidad de dar AUMENTO al tamao de la imagen de la muestra, tambin tiene PODER RESOLUTIVO, esto es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor ser la definicin de un objeto. Los microscopios de gran poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeas estructuras.

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Microscopio ptico de campo oscuro

El microscopio de campo oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dipersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Las porciones transparentes del espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partculas se ven brillantes. Esta forma de iluminacin se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin de muestras metalogrficas para la observacin de detalles en superficies con alta reflectancia.

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El microscopio ptico es un instrumento formado por un sistema de lentes que permite ver objetos muy pequeos. Sus principales componentes son:
Oculares. Lentes a travs de las que se observa la preparacin ampliada Objetivos. Lentes que aumentan el tamao de la imagen. Platina. Base sobre la que se coloca la preparacin, que se sujeta con dos pinzas. Iluminacin. Espejo o lmpara que ilumina la preparacin.

Tornillos de enfoque. Mueven la platina arriba o abajo para enfocar la imagen.

Recorrido de la luz Aumento Imagen visualizada ojo

Lente ocular Imagen intermedia (invertida respecto a la muestra)

Lente objetivo Muestra Ninguno Condensador Fuente de luz

Microscopio ptico

Tincin de clulas para la observacin microscpica

Extensin de una fina capa de clulas sobre el porta

Adicin del colorante lavado y secado Secado al aire

Fijacin por flameado del porta

Se coloca una gota de aceite de inmersin sobre el porta y se observa con el objetivo de 100X

Tincin de Gram
Tincin del frotis Paso 1
Previamente fijado al calor, con cristal violeta Durante 1 minuto. Todas las clulas se tien de color azul-violeta.

Paso 2

Aadir Lugol, dejar actuar 2 minutos Todas las clulas siguen de color azul-violeta.

Gram +

Decolorar con alcohol Paso 3

Las clulas Gram + siguen de color azul-violeta. Las Gram negativas se decoloran.

Tincin de contraste
Con safranina 2 minutos. Las clulas G+ se ven azul-violeta.

Paso 4

Las G- rosas o rojas.

Gram -

Microscopio de Campo Claro

Alga verde (eucariota)

Microscopio de Fluorescencia
Bacteria filamentosa Teida con naranja de acridina

Microscopio de Contraste de Fases

Saccharomyces cerevisiae

Microscopa Confocal por Lser

Cianobacteria filamentosa