Disciplina de Microbiologie UMF Tg.

Mure LP3

EXAMENUL MICROSCOPIC
I. Preparatul nativ (umed, ntre lam i lamel) Permite studierea: mobilitii germenilor morfologiei bacteriene Tehnica de lucru: se realizeaz o suspensie de germeni vii ntre lam i lamel Examinarea se face cu: microscopul optic, cu obiective uscate, condensator cobort. microscopul cu fond ntunecat microscop cu contrast de faz

II. Coloraia negativ (metoda Burri) Permite studierea: germenilor greu colorabili (Leptospira, Treponema) germenilor cu capsul (Klebsiella, S. pneumoniae) Colorani: suspensii coloidale (colargol, tu de China, tu de India) Tehnica de lucru: germenii se suspensioneaz intr-o pictur de colorant, care se ntinde cu o alt lam pe toat lama uscare la temperatura camerei examinare: cu microscopul optic, cu imersie. Se coloreaz fondul preparatului, bacteriile rmn necolorate III. Preparate colorate Permit studierea: morfologiei germenilor dispoziiei germenilor afinitii tinctoriale (colorabilitatea) Baza preparatelor colorate const n efectuarea unui frotiu. Etapele realizrii frotiurilor: etalarea ntinderea pp. pe lam (s nu ating marginile) uscarea la temperatura camerei fixarea (la flacr sau chimic) se denatureaz proteinele bacteriene -> moartea microbilor; asigur adeziunea preparatului de lam.

-1-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP3

Tipuri de preparate colorate: 1. coloraii simple se folosete un singur colorant (1-2 min) nlturarea colorantului n exces splare, uscare examinare la microscop cu obiectiv de imersie 2. coloraii compuse a. Coloraia Gram Difereniaz bacteriile Gram pozitive (colorate n albastru-violet) de cele negative (colorate n rou) Etape colorare cu violet de geniana 2 min. Gram + albastru Gram albastru

mordantare (lugol) 2 min. splare cu ap de robinet decolorare cu alcool 96

albastru

decolorate

splare cu ap de robinet recolorare fuxin 2 min.

albastru

rou

splare cu ap de robinet uscare examinare la microscop cu obiectiv de imersie Exemple de bacterii Gram pozitive i Gram negative: Gram + coci Staphylococcus spp, Streptococcus spp. cocobacili S. pneumoniae, Enterococcus spp. bacili Clostridium spp., Bacillus spp., Corynebacterium spp.

Gram Neisseria spp. Klebsiella spp., Haemophilus spp., Acinetobacter spp. E. coli, Salmonella spp., Shigella spp., Proteus spp. , Pseudomonas spp.

-2-

Disciplina de Microbiologie UMF Tg.Mure LP3

b. coloraia Ziehl-Neelsen Se utilizeaz pentru evidenierea germenilor acido-alcoolo-rezisteni (BAAR); ex: Mycobacterium tuberculosis pe fondul albastru al frotiului se observ bacili acido-alcoolo-rezisteni Etape colorare cu fucsina fenicat (carbol fucsina) 2 min

splare decolorare: alcool acid 3x l min

splare recolorare cu albastru de metilen 4 min

splare, uscare examinare la microscop cu obiectiv de imersie

3. Coloraii speciale a. Coloraia Neisser Se evideniaz corpusculii metacromatici Babe-Ernst la Corynebacterium spp. Se observ bacili cu corp bacterian colorat n galben, cu corpusculi colorai albastru i cu dispoziie caracteristic Etape colorare cu amestec de colorani preparat extemporaneu timp de 8 - 10 minute 2 pri colorant Neisser A (albastru de metilen) l parte colorant Neisser B (cristal violet) splare cu ap distilat colorare cu crizoidin 5 -10 secunde

uscare fr splare examinare la microscop cu obiectiv de imersie

-3-