ACTIVIDAD DEL AGUA ELECTROLIZADA NEUTRA COMO AGENTE INHIBIDOR DEL CRECIMIENTO DE Rhizopus stolonifer CAUSANTE DE LA PUDRICION BLANCA

EN CULTIVOS DE FRESA

METODOLOGA Preparacin solucin de cloruro de sodio 5%

Produccin de Agua Electrolizada Neutra Esquema de la maquina

Preparacin y manejo de la maquina

Produccin del agua electrolizada neutra

Titulacin de agua electrolizada

Tratamiento en cultivos puros con agua electrolizada Preparacin de soluciones de agua electrolizada

Preparacin del inoculo de Rhizopus

La cepa de Rhizopus stolonifer fue obtenido del cepario de la universidad de Santander y mantenido en Agar PDA a 30C por 3 5 das, se prepara una suspensin de esporas realizando barrido de ellas con papel filtro, estas sern depositadas en agua estril hasta obtener una abundancia de 108 1010 UFC/ml. Tratamiento en cultivos puros con agua electrolizada Tomando 100l de la suspensin de esporas (108 UFC/ml) ser diluido en 9,9ml de agua electrolizada bajo concentraciones de (10, 25, 50, 75 y 100ppm de CRT, pH = 6,5 7,0, ORP = 800 900mV), los tratamientos sern incubados a 25C por 10 min despus son diluidos en agua estril (1/100) y tomando alcuotas de 1ml inoculando en Agar PDA e incubados a 25C por 4 das. Adicionalmente tomando 1ml de cada tratamiento fue diluido con 9ml caldo PDA e incubado a 25C por 4 das. Los montajes se realizan por triplicado. El AE debe ser preparado y usado entre 8 horas despus de obtenido, ser almacenado en recipientes oscuros a 25C. Preparacin e inoculacin en fresas Las fresas sern mantenidas a 4C antes de las pruebas, estas se desinfectaran superficialmente por inmersin en 0.5% blanqueador por 60seg, luego en etanol 70% por 30seg y lavar con agua destilada estril y se deja secar al aire en campana de flujo laminar. Las fresas (30) sern inoculadas pipeteando sobre la superficie de estas, 80l de la suspensin de esporas (1010 UFC/ml), se dejaran en recipientes plsticos estriles tapados con hojas de papel hmedas a 25C por 24h para permitir la fijacin de las esporas a la superficie de las fresas.

Desinfeccin de fresas con AEO Tratamiento 1 Un grupo de diez fresas inoculadas sern sumergidas en recipientes plsticos estriles que con 100ml de AE por 10, 15 y 20 minutos, posteriormente, se almacenaran en recipientes plsticos estriles tapados con hojas de papel hmedas a 25C. Tratamiento 2

Otro grupo de diez fresas inoculadas recibirn el tratamiento anterior y adicionalmente se les realizara diariamente aspersin con AE a 30cm del fruto para simular la nebulizacin que se realiza en centros comerciales. Tratamiento 3 Se realizara una desinfeccin con hipoclorito al 0.01% (100ppm) por 10, 15 y 20 minutos a un grupo de 10 fresas inoculadas con el microorganismo con el fin de comparar los resultados de los tratamientos con AE y el mtodo tradicional de desinfeccin de frutos. Control Se empleara un grupo control de 10 fresas inoculadas con el microorganismo sin tratamiento, estas sern sumergidas en agua destilada estril por 10 minutos y almacenadas en recipientes plsticos estriles tapados con hojas de papel hmedas a 25C. Seguimiento El porcentaje de fresas infectadas por el microorganismo en cada tratamiento ser calculado mediante la siguiente formula: