AMILASA (1,4--D-glucan glucanohidrolasa) La amilasa es un enzima perteneciente a la familia de la hidrolasas Se produce principalmente en las glndulas salivares y en el pncreas exocrino.

. Escinde los enlaces a 1-4 glucosdicos de los polisacridos (almidn y glucgeno) para formar azcares simples. Es una molcula de tamao molecular pequeo (45 000) lo que le permite atravesar los glomrulos y por ello es normal encontrar en la orina pequeas cantidades de amilasa Se utiliza para evaluar la funcin del pncreas, diagnosticar la presencia de enfermedades del mismo y para controlar su evolucin. La amilasa srica aparece levada a las 12 horas de una lesin de pncreas para volver a la normalidad a las 48 a 72 horas.

 Su actividad in vitro depende del sustrato: Generalmente se utiliza almidn como sustrato y este a su vez depende de la proporcin de amilosa y amilopectina que tenga. Generalmente se usa el almidn de papa. El almidn se dispersa en el agua en forma de sol coloidal que contiene micelas de diferentes tamaos Activa en presencia de Cl-

METODOS
1. MTODOS AMILOCLASTICOS

Turbidimtrico : turbidez

Iodimetrico:

color azul

2. M. SACAROGENICOS: FORMACION DE AZUCARES Sustrato almidn.a) Medicin de la cantidad de azcares reductores liberados a partir del almidn. (Nelson-Somogyi) b) Cuantificacin de glucosa

Maltosa

maltasa

Glucosa

GOD HK GDH

Sustrato maltopentaosa: Cuantificacin de glucosa

3. Los mtodos cromolticos Utilizan p-nitrofenilglucsidos como sustratos 2-cloro-p-nitrofenil-a-D-maltotriosida

a-amilasa

CNPG3

CNP +
cloronitrofenol

D-Maltotriosida

2-cloro-4-nitrofenil-galacto piranosil Maltodiosa GalG2CNP

a-amilasa

GalG2 + CNP

5-etilideno-4-nitrofenil-a-maltoheptaosido

4.- Sustrato unido a colorante.Assay uses an insoluble dye-coupled substrate amyloseazure, which is cleaved by -amylase into soluble colored products. The color intensity, measured at 595 nm, is proportionate to the enzyme activity in the sample Red-Starch with -amylase the substrate is depolymerised by an endo-mechanism to produce low-molecular weight dyed fragments which remain in solution on addition of ethanol to the reaction mixture. High molecular weight material is removed by centrifugation, and the colour of the supernatant is measured at 510 nm.

SUSTRATO: 2-cloro-pnitrofenol- maltotriosido

Protocolo de la prctica