UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS QUIMICA FARMACEUTICA I LABORATORIO DE QUIMICA FARMACEUTICA I PRCTICA N 1 INTEGRANTES: Bonifaz

z Carina Reyes Jessica Suquillo Toms Grupo N 3 Fecha: 23/09/2013 Hora de Laboratorio: Lunes 08:00-10:00

1. TEMA: VALORACIN DE AMPICILINA POR EL METODO ESPECTROFOTOMTRICO. 2. OBJETIVOS: 2.1 Objetivo general: Valorar Ampicilina en producto terminado.

2.2 Objetivo especfico: Determinar el porcentaje de principio activo presente en polvo para suspensin inyectable de la Casa Farmacutica LIFE por mtodo espectrofotomtrico a 254nm (UV). Comparar el porcentaje de ampicilina presente en el polvo para suspensin inyectable con las especificaciones de la USP35 NF30. Comparar el porcentaje de principio activo determinado con los dems grupos de laboratorio. 3. MARCO TERICO: 3.1 Fundamento de la valoracin. 3.1.1 Espectrofotometra.

Es el mtodo de anlisis ptico ms usado en el rea de investigacin. Es la medida de la cantidad de energa radiante absorbida por las molculas de una muestra en funcin de las longitudes de onda especficas. El fundamento de la espectroscopa se debe a la capacidad de las molculas para absorber radiaciones, entre las radiaciones dentro del espectro UV-visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molcula puede absorber y la eficiencia

con la que se absorben dependen de la estructura atmica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza inica, constante elctrica) , por lo que dicha tcnica constituye un valioso instrumento para la determinacin y caracterizacin de biomolculas. Cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energa es absorbida; la energa radiante no puede producir ningn efecto sin ser absorbida. El color de las sustancias se debe a que stas absorben ciertas longitudes de onda de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas longitudes de onda no absorbida. LEYES DE ABSORCIN Cuando un haz de luz pasa a travs de un medio, se registra una cierta prdida de intensidad, debido a la absorcin por parte de la sustancia. Se llama TRANSMITANCIA (T) a la relacin entre la luz incidente y la luz transmitida: T = Is / I0 ; %T = (Is / I0 ) x 100. Se puede perder intensidad por la interaccin con la cubeta o el solvente. Para evitar este error se hace una primera medida con una solucin de referencia o BLANCO, que contiene todos los posibles compuestos que intervienen en la lectura menos el que vamos a medir. Todas las medidas que se hagan con posterioridad sern referidas a esta medida inicial y se harn en la misma cubeta que se utiliz en la medida del blanco. La Transmitancia se usa poco, se emplea ms la Absorbancia (A) porque la relacin entre A y la concentracin de una solucin es directamente proporcional y la de la T es inversamente proporcional. La relacin entre la absorbancia y la transmitancia es la siguiente: Si el %T = 100 Si el %T = 0 A = 2-log T = 2-log 100 = 0 A = 2-log 0 =

En los aparatos que se usan actualmente se presentan absorbancias, pero el aparato lo que mide realmente es %T que luego transforma a absorbancia. El espectrofotmetro es un instrumento que permite comparar la radiacin absorbida o transmitida por una solucin que contiene una cantidad desconocida de soluto, y una que contiene una cantidad conocida de la misma sustancia.

La valoracin espectrofotomtrica de las ampicilina se basa en la reaccin que tiene esta en un medio cido, produciendo la ruptura del anillo betalactmico, y dando como resultado la formacin de un compuesto coloreado, llamado cido Penlico (cromforo) el cual puede ser detectado en el UV a una longitud de onda de 254nm. 3.1.2 Reacciones de Degradacin de Penicilinas en medio cido.
NH
O N O S

R2

CH3 CH3
O O R1

H
S

,t

te en bi am

(b)
S

R2 O

NH
N+ O
H

CH3 CH3
O O R1 R2 O

CH3 CH3

HN

O O R1

(a)
O HO

CH3 CH3 (c)

O O R1

R2

ACIDO PENLICO

3.2 Ficha del medicamento. NOMBRE NOMBRE SISTEMTICO AMPICILINA (2S,5R,6R)-cido 6-(2-amino-2-fenil-acetil)amino-3, 3-dimetil-7-oxo-4-tia-1-azabiciclo [3.2.0]heptano-2-carboxlico

ESTRUCTURA

MECANISMO DE ACCIN

Los antibiticos beta-lactmicos como la ampicilina son bactericidas. Actan inhibiendo la ltima tapa de la sntesis de la pared celular bacteriana unindose a unas protenas especficas llamadas PBPs (Penicillin-Binding Proteins) localizadas en la pared celular. Al impedir que la pared celular se construya correctamente, la ampicilina ocasiona, en ltimo trmino, la lisis de la bacteria y su muerte. La ampicilina no resiste la accin hidroltica de las beta-lactamasas de muchos estafilococos, por lo que no se usa en el tratamiento de estafilococias. Aunque la ampicilina es activa frente a los estreptocos, muchas cepas se estn volviendo resistentes medante mecanismos diferentes de la induccin de b-lactamasas, por lo que la adicin de cido clavulnico no aumenta la actividad de la ampicilina frente a estas cepas resistentes. Dado que muchos otros grmenes se estn volviendo resistentes a la ampicilina, se recomienda realizar un antibiograma antes de instaurar un tratamiento con ampicilina, siempre que ello sea posible. La ampicilina, junto con la amoxicilina, es el frmaco preferido para el tratamiento de infecciones urinarias producidas por enterococos sensibles. La Listeria monocytogenes es sensible a la ampicilina. Otros grmenes sensibles son N. meningitidis, H. influenzae no productora de b-lactamasa, Gardnerella vaginalis, Bordetella pertussis, y algunos bacilos entricos como E. coli, Proteus mirabilis, Salmonella, y Shigella. Aunque inicialmente era sensible a la ampicilina, la N. gonorrhoeae se ha ido volviendo resistente.Otros grmenes resistentes a la ampicilina son las Klebsiella, Serratia, Acinetobacter, Proteus indol-positivos, Pseudomonas, y Bacteroides fragilis.

FARMACODINAMIA

La ampicilina inhibe la sntesis de la pared celular de bacterias susceptibles. El evento terminal de la sntesis de la pared celular es la formacin de uniones cruzadas de unidades de peptidoglicano mediante una reaccin de transpeptidacin. Las penicilinas se unen al sitio activo de la enzima transpeptidasa y previenen la formacin de las uniones cruzadas y, por lo tanto, inhiben la formacin de la pared celular. Asimismo, se ha reportado que las penicilinas activan un sistema autoltico endgeno que inicia la lisis celular y la muerte en algunas bacterias. La ampicilina es similar a la bencil penicilina en su accin bactericida contra organismos susceptibles, especialmente durante el estadio de multiplicacin. Es por esta razn que la ampicilina no debe administrarse conjuntamente con agentes bacteriostticos como el cloranfenicol, las tetraciclinas, la eritromicina o las sulfonamidas, ya que estos antibiticos inhiben la accin bactericida de la ampicilina.

La ampicilina presenta una farmacocintica lineal. Es estable en cido, por lo que se absorbe mejor del tracto gastrointestinal que la bencil penicilina o penicilina G. Sin embargo, posee una biodisponibilidad de 50% en ayunas. Los alimentos retardan y reducen la absorcin. La concentracin plasmtica mxima despus de una administracin de 500 mg en cpsulas se alcanza en 1 a 2 horas, con una Cmx. de 3-4 m/ml. Se une en 17 a 20% a las protenas plasmticas. Su volumen aparente de distribucin vara entre 19.5 a 27 litros. Se alcanzan concentraciones elevadas en la bilis, que varan de 0.4 a 6.5 m/ml en un periodo de 12 horas despus de una administracin oral de 500 mg. En hueso tambin se alcanzan concentraciones elevadas, as como en orina y lquido prosttico. No atraviesa en concentraciones teraputicas al sistema nervioso central, excepto cuando existe inflamacin de meninges. FARMACOCINTICA La ampicilina se elimina principalmente por la orina y en menor proporcin por las heces, sin biotrasformacin, ya que slo 10% del frmaco es metabolizado. La eliminacin renal es de entre 40 a 92%, principalmente por secrecin tubular. Tambin se elimina por va biliar en cantidades menores. Se ha observado que tambin se elimina a travs de la leche, aunque las concentraciones plasmticas en la leche materna son bajas. Presenta una vida media de eliminacin de 1 a 2 horas. Se ha observado que la concentracin tisular de la ampicilina se encuentra entre 3 a 10 veces por arriba de la concentracin mnima inhibitoria (MIC, por sus siglas en ingls) de cepas sensibles que es de 1.5 g. En pacientes voluntarios mexicanos, la administracin de ampicilina cpsulas a una dosis de 1 g origina una Cmx. de 7.88 g/ml en un Tmx. de 2.09 horas. Estos parmetros farmacocinticos son semejantes y bioequivalentes con la ampicilina en cpsulas de referencia. La ampicilina est indicada en el tratamiento de infecciones producidas por microorganismos sensibles. Los siguientes microorganismos son considerados sensibles a la ampicilina in vitro: Actinomyces sp.; Bacillus anthracis; Bacteroides funduliformis; Bifidobacterium sp.; Bordetella pertussis; Borrelia burgdorferi; Brucella sp.; Calymmatobacterium granulomatis; Clostridium perfringens; Clostridium sp.; Clostridium tetani; Corynebacterium diphtheriae; Corynebacterium xerosis; Eikenella corrodens; Enterococcus faecalis; Erysipelothrix rhusiopathiae; Escherichia coli; Eubacterium sp.; Gardnerella vaginalis; Haemophilus influenzae (negativos a la b-lactamasa); Helicobacter pylori; Lactobacillus sp.; Leptospira sp.; Listeria monocytogenes; Moraxella catarrhalis; Neisseria meningitidis; Pasteurella multocida; Peptococcus sp.; Peptostreptococcus sp.; Propionibacterium sp.; Proteus mirabilis; Salmonella sp.; Salmonella typhi; Shigella sp.; Streptococcus agalactiae (estreptococos del grupo B); Streptococcus dysgalactiae; Streptococcus pneumoniae; Streptococcus pyogenes (grupo A b-hemolticos); Treponema pallidum; Viridans streptococci. Las dosis recomendadas son: Administracin parenteral Adultos y adolescentes: 0.5-1 g i.v. o i.m. cada 6 horas. Las dosis pueden aumentarse hasta 14 g/da

INDICACIONES Y POSOLOGIA

 Nios y bebs: 100-200 mg/kg/da i.v. o i.m. divididos en administraciones cada 4 a 6 horas Neonatos > 7 das y > 2 kg: 100 mg/kg/da i.v. o i.m. divididos cada 6 horas Prematuros > 7 days y de 1.2 a 2 kg: 75 mg/kg/da i.v. o i.m. divididos cada 8 horas. Prematuros de < 1.2 kg: 50 mg/kg/da i.v. o i.m. divididos cada 12 horas Administracion oral Adultos y adolescentes: 0.25-1 g cada 6 horas. Las dosis de pueden aumentar hasta 14 g/da Nios: 50-100 mg/kg/da en dosis iguales cada 6 horas.

La ampicilina est contraindicada en pacientes con alergias conocidas las penicilinas, cefalosporinas o al imipenem. La incidencia de hipersensibilidad cruzada es del 3 al 5%. Los pacientes con alergias, asma o fiebre del heno son ms susceptibles a reacciones alrgicas a las penicilinas. Los pacientes con alergia o condiciones alrgicas como asma, fiebre el heno, eczema, etc., tienen un mayor riesgo de hipersensibilidad a las penicilinas. La ampicilina est relativamente contraindicada en pacientes con infecciones virales o leucemia linftica ya que estos pacientes pueden desarrollar rash. Se ha comunicado una mayor incidencia de esta reaccin adversa en pacientes con infecccin por citomegalovirus o con mononucleosis infecciosa. CONTRAINDICACIONES Pueden producirse superinfecciones durante un tratamiento con ampicilina, en particular si es de larga duracin. Se han comunicado candidiasis orales y vaginales Los pacientes deben ser monitorizados estrechamente si padecen alguna enfermedad gastrointestinal: las pencilinas puede exacerbar condiciones como la colitis que, en ocasiones, puede llegar a ser pseudomembranosa. Las penicilinas se excretan en la leche materna, y pueden ocasionar en los lactantes diarrea, candidiasis y rash. Deber ser considerado este riesgo si se decide mantener la lactancia en madres tratadas con ampicilina.

INTERACCIONES

En muchas ocasiones, los antibiticos aminoglucsidos de muestran sinrgicos con la ampicilina frente a enterococos y estreptococos del grupo B. Sin embargo, por existir una incompatibilidad qumica, ambos antibiticos no se deben mezclar ni administrar al mismo tiempo. Algunas penicilinas inactivan los antibiticos aminoglucsidos cuando se mezclan en infusiones intravenosas. El uso concomitante de la ampicilina y el cido clavulnico mejora la actividad antibacteriana de la ampicilina frente a las bacterias que producen beta-lactamasas

como la H. influenzae. Esta interaccin es aprovechada y existen asociaciones de ampicilina + cido clavulnico. La ampicilina en grandes dosis inhibe la excrecin tubular renal de metotrexato, aumentanto las concentraciones plasmticas de este ltimo y, por consiguiente, su potencial toxicidad. De igual forma, se ha observado que la administracin concomitante de ampicilina y alopurinol aumenta la incidencia del rash inducido por este ltimo. La ampicilina puede reducir la eficacia de los anticonceptivos orales que contienen estrgenos debido, bien a una estimulacin del metabolismo de estos, bien a un reduccin de su circulacin enteroheptica al reducirse la flora gastrointestinal por accin del antibitico. Se han documentado casos de fracasos anticonceptivos en pacientes tratadas con ampicilina, aunque se desconoce la naturaleza de esta interaccin. Por lo tanto, se recomienda advertir a las pacientes que se encuentre bajo anticonceptivos orales de la posibilidad de un fallo anticonceptivos para que tomen medidas alternativas durante el tratamiento con ampicilina Los inhibidores de la bomba de protones tienen efectos de larga duracin sobre la secrecin gstrica de cido. Como la absorcin gstrica de la ampicilina est influda por el pH gstrico, la administracin concomitante de lansoprazol, rabeprazol, u omeprazol puede tener un efecto significativo sobre la biodisponibilidad de la ampicilina. La entacapona deber administrarse con precaucin junto con frmacos que, como es elcaso de la ampicilina, interfieren con la excrecin biliar o glucuronacin. Puede producirse una reduccin de la excrecin biliar de la entacapona. Se han observado falsos positivos en los tests de glucosa en orina de pacientes tratados con penicilinas, en las pruebas que usan solucin de Benedict o de Fehling o Clinitest. Sin embargo, esta interaccin no se produce con las tiras reactivas basadas en la glucosa-oxidasa Los efectos secundarios ms frecuentes son los asociados a reacciones de hipersensibilidad y pueden ir desde rash sin importancia a serias reacciones anafilcticas. Se ha descrito eritema multiforme, dermatitis exfoliativa, rash maculopapular con eritema, necrolisis epidrmica txica, sndrome de StevensJohnson, vasculitis y urticaria. Estas reacciones suelen ser ms frecuentes con las aminopenicilinas que con las otras penicilinas. La incidencia de rash con la ampicilina suele ser mayor en pacientes con enfermedades virales tales como mononucleosis o en pacientes con leucemia linftica. En alguna rara ocasin se observado nefritis intersticial con necrosis tubular renal y sndrome nefrtico Los efectos secundarios ms comunes, asociados al tracto digestivo son similares a los de otros antibiticos y se deben a la reduccin de la flora: Nasea/vmitos, anorexia, darrea, gastritis, y dolor abdominal. En algn caso puede producirse colitis pseudomembranosa durante el tratamiento o despus, si bien este efecto suele ser

EFECTOS ADVERSOS

bastante raro. Los efectos adversos sobre el sistema nervioso central incluyen cefaleas, agitacin, insomnio, y confusin, aunque no son muy frecuentes. Se han comunicado convulsiones en pacientes con insuficiencia renal a los que se administraron penicilinas en grandes dosis. Los efectos hematolgicos son poco frecuentes y suelen ir asociados a reacciones de hipersensibilidad: se han descrito eosinofilia y hemolisis anemia (incluyendo anemia hemoltica) trombocitopenia, prpura trombocitopnica, neutropenia, agranulocitosis, y leucopenia. Estas reacciones adversas son reversibles al discontinuar el tratamiento. (Vademecum.es) Constantes farmacocinticas proceso (LADME): Disponibilidad oral (%) Lugar de absorcin Excrecin leche materna (%) Unido a protenas (%) Depuracin (mL*min-1) Volumen de distribucin (L) Semivida (horas) Tiempo mximo (horas) Metabolismo Metabolitos Concentraciones mximas (g/mL) Excrecin 3.3 Tabla del medicamento. Nombre del medicamento Principio activo Presentacin Forma Farmacutica Qumico farmacutico responsable Registro Sanitario N Lote Fecha de elaboracin Fecha de expiracin Laboratorio 4. PROCEDIMIENTO: AMPIBEX 1g Ampicilina Frasco de vidrio con caucho Polvo para suspensin para inyectable 50 75-85 15 a 20 19.5 a 27 1-1.8 horas 1-2 Heptico 3-4 75 a 85

01897-MAC-04-02 13-0446 Febrero/2015 LIFE

4.1 Preparacin de la muestra Pesar el equivalente a 50mg de principio activo Agregar 10mL de HCl 0.1N y agitar (Nota 1), aforar a 100mL con agua destilada. Leer la absorbancia de la muestra a 254nm en un espectrofotmetro. Repetir un duplicado. Nota 1: si no se disuelve utilizar un ultrasonido durante 15 minutos. 4.2 Preparacin del estndar Pesar el equivalente de 25mg de ampicilina ST USP y ponerlo en un baln aforado de 50mL. Agregar 5mL de HCl 0.1N, agitar y aforar con agua destilada. Leer la absorbancia del estndar a 254nm en un espectrofotmetro. 5. CLCULOS: 5.1 Preparacin del estndar. % Pureza: 97.8 % 97.8g de estndar puros 100 g estndar impuros 0.025 g de estndar puros X X= 0.0255 g estndar puros (terico) Masa de estndar pesada (experimental)= 0.0263 g estndar impuros 97.8g de estndar puros 100 g estndar impuros X 0.0263g estndar impuros X= 0.0257 g estndar puros (corregido)

5.2 Porcentaje de principio activo en la cpsula. Primera rplica m1= 50.4 mg Am1= 0.478 Ast = 0.452 Cst= 51.4 mg/mL PP= 1000mg Vf= 100mL

 Segunda rplica m2= 51.4 g Am2= 0.464 Ast = 0.452 Cst= 51.4mg/mL PP= 1000mg Vaforo= 100mL

5.3 Promedio del porcentaje de principio activo en una cpsula. Porcentaje de principio activo Rplica 1 107.9% Rplica 2 102.7% Media: 105%

6. RESULTADOS: CASA COMERCIAL NIFA LIFE LIFE PORCENTAJE DE PRINCIPIO ACTIVO (%) 93 94 105

GRUPO 1 2 3

7. BOLETN DE ESPECIFICACIONES: CONTROL DE CALIDAD Ensayos Organolpticos Especificacin Resultado Cumplimiento Blanco Blanco Cumple Inodoro Inodoro Cumple Amargo Amargo Cumple Polvo Ensayos Fsicos Especificacin Resultado Cumplimiento NA NA NA NA Ensayos Qumicos Especificacin Resultado Cumplimiento 90%-120% 105% Cumple (FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMRICA, 2012)

Color Olor Sabor Aspecto

Dureza Desintegracin Peso medio Friabilidad

% P.A. 8. OBSERVACIONES:

Se observ durante la prctica, que al momento de la disolucin en cido clorhdrico (HCl) y agua destilada tanto la masa del estndar como del polvo para suspensin inyectable se disolvieron rpida y completamente. Se pudo observar que no haba mucha variacin entre los datos obtenidos de absorbancias del estndar como de la muestra. 9. DISCUSIONES: El porcentaje de principio activo (ampicilina) determinado experimentalmente por el mtodo espectrofotomtrico en el polvo para suspensin inyectable a 254nm fue de 105% en promedio, este valor indica que no solo se encuentra dentro de los

rango establecidos por la USP35-NF30, sino que demuestra que los errores sistemticos fueron lo ms reducidos posibles como el hecho de tener material de vidrio completamente lavado y limpio, balanza analtica nivelada y calibrada, un estndar con caractersticas que proporcionan seguridad durante la determinacin experimental de dicho principio activo. El resultado experimental obtenido de principio activo, indica que si hubo una hidrlisis cida de la ampicilina por parte del cido clorhdrico diluido, en la cual hubo la formacin del cromforo que corresponde al cido penlico capaz de ser detectado a una longitud de onda de 254nm. 10. CONCLUSIONES: Se determin que le porcentaje de principio activo presente en el polvo para suspensin inyectable de la Casa Farmacutica LIFE, por el mtodo espectrofotomtrico a 254nm fue de 105%. Se comprob que el porcentaje de ampicilina presente en el polvo para suspensin determinado espectrofotomtricamente, se encuentra dentro del rango (90-120%) y por lo tanto cumple con lo especificado en la USP35-NF30. Se compar los diferentes porcentajes de ampicilina obtenidos por los tres grupos mediante el mismo mtodo espectrofotomtrico, en el cual el grupo No. 3 obtuvo un valor de 105%, elevado, en comparacin a los dems grupos, con porcentajes de 93% (Grupo No.1) y 94% (Grupo No.2 pertenecientes a las casa comerciales NIFA y LIFE respectivamente. CASA COMERCIAL NIFA LIFE LIFE PORCENTAJE DE PRINCIPIO ACTIVO (%) 93 94 105

GRUPO 1 2 3

11. CUESTIONARIO 11.1 Mecanismo de la hidrlisis cida de las penicilinas.

R2 O

NH

CH3 CH3

N O

O O R1

H
S

,t

te en bi m a

(b)
S

R2 O

NH
N+ O
H

CH3 CH3
O O R1 R2 O

CH3 CH3

HN

O O R1

(a)
O HO

CH3 CH3 (c)

O O R1

R2

ACIDO PENLICO

(a) Inicia con la protonacin del Nitrgeno (N) lactmico, seguido de un ataque nucleoflico del resto carbonilo de la cadena lateral. (b) Formacin de un anillo intermediario conocido como OXAZOLINA. (c) Nueva transposicin a un anillo denominado IMIDAZOL formado el cido penlico, que es producto de degradacin a pH cido. 11.2 En que afecta los radicales R1 y R2.
O R2

NH

CH3 CH3

N O O

O R1

Solubilidad Tiempo de accin

Responsable de la sensibilidad a la hidrlisis por parte de la lactamas. Enlace a protenas transportadoras. Vnculo con las protenas bacterianas PBP que transportan a la penicilina dentro de la clula. Relaciona con el espectro de accin.

12. BIBLIOGRAFA:

(s.f.). Recuperado el 5 de Mayo de 2013, de http://www.radiodent.cl/farmacologia/cloranfenicol.pdf EDIFARM. (2013). VADEMCUM FARMACUTICO . Imprenta Mariscal. (2012). FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE AMRICA. Estados Unidos De Amrica. SCRIBD. (26 de Mayo de 2009). Recuperado el 5 de Mayo de 2013, de http://es.scribd.com/doc/15822154/15/Aspecto-Analitico-del-Cloranfenicol Vademecum.es. (s.f.). Recuperado el 5 de Mayo de 2013, de http://www.vademecum.es/principios-activos-cloranfenicol-j01ba01