METODO DE METENAMINA DE PLATA

Existen varias tinciones argnticas que incorporan metenamina, entre las que se encuentran:

Tincin de metenamina plata de Grocott, ampliamente utilizada para revelar microorganismos fngicos. Tincin de Jones, una tincin de metenamina-plata-cido peridico de Schiff que ti membranas basales, permitiendo ver la membrana basal glomerular "espinada" asociada con glomerulonefritis membranosa.

PLATA METENAMINA: El fundamento de esta tcnica es la oxidacin de los H d C mediante el cido crmico y el cido perydico. Estos H d C oxidados reducen las sales de Ag que contiene el reactivo, haciendo precipitar la plata metlica sobe la estructura a teir. _ La sal de plata empleada es el complejo metenamina argntica Es inestable y slo se mantiene como tal a pH alcalino entre 8.3 y 9.2, fuera de ste se disocia en sus dos componentes La tcnica debe realizarse con un control continuo de pH, de modo que la precipitacin de la plata mtalica no ocurra anticipadamente Por sus caractersticas especiales, esta tcnica se emplea para visualizar membranas basales sobre todo en el rin (glomerulonefritis), compuestas en gran medida por hidratos de carbono del tipo glicoprotenas y que, por tanto, son adems PAS + La tcnica de GOMORI MODIFICADO Es una variante de la plata metenamina. Lo que correspondera a PAS+ se teir de negro: glucgeno, mucina, hongos, membranas basales, reticulina y elastina.

La plata metanamina de Grocott es un mtodo de tincin especial ms empleado para hongos. La reaccin tintorial est basada en que, en presencia de cido perydico, los polisacridos de la pared celular de los hongos son oxidados a aldehdos; stos, a su vez, reducen el complejo nitrato-plata metanamina (o metenamina) produciendo una coloracin de caf a negra, debido al depsito de plata reducida en los lugares de localizacin de los aldehdos.

Tambin se utiliza para la identificacin de la melanina. Este pigmento es producido en la piel por los melanocitos. En los humanos la melanina se encuentra en piel, cabello, en el recubrimiento de la retina. Aunque los seres humanos generalmente poseen una concentracin similar de melanocitos en su piel, estos expresan en algunos individuos y en algunas etnias ms frecuentemente el gen productor de melanina, por lo que se confiere una mayor concentracin de melanina en la piel. PREPARACIN DE LA MUESTRA El tejido debe ser fijado en formol para mejores resultados, y seccionado a 5 micras. REACTIVOS 1. Solucin de cido brico (solucin A): 1. 3,09 g de cido brico. 2. 250 cc de agua destilada. 2. Solucin de tetraborato sdico (solucin B): 1. 4,77 g de tetraborato sdico. 2. 250 cc de agua destilada. 3. Solucin buffer borato (comprobar que el pH sea 8.2) 1. 13 cc de solucin A. 2. 7 cc de solucin B. 4. Solucin de plata metanamina: 1. 42,5 cc de metanamina (hexametilentetranamina) 3%. 2. 2,5 cc de nitrato de plata 5%. 3. 12 cc de buffer borato (pH 8.2). PROCEDIMIENTO Debe evitarse, durante todo el proceso, el uso de instrumentos metlicos, ya que la plata precipitara sobre ellos. 1. 2. 3. 4. Desparafinar e hidratar. Aadir cido perydico 0,5%, 12 minutos. Lavar con agua destilada. Sumergir los cortes en la solucin de plata metanamina, 1 hora mnimo a 60 C; a partir de este tiempo comprobar regularmente al microscopio. 5. Lavar con agua destilada. 6. Aadir cloruro de oro, 1 minuto.

7. Lavar con agua destilada. 8. Aadir tiosulfato sdico 3%, 1-2 minutos. 9. Lavar con agua corriente. 10. Tincin de contraste (rojo nuclear, hematoxilina, verde luz...), 1 minuto. 11. Deshidratar, aclarar, montar.

RESULTADOS

Reticulina, membranas basales, hongos, mucinas, glucgeno: negro. Fondo: segn tincin de contraste. Nucleos: marrn oscuro a negro