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MACEI 2009
IINTRODUO Metabolismo pode ser definido como o conjunto de reaes qumicas que esto ocorrendo continuamente nas clulas. O conjunto de determinadas reaes direcionadas por enzimas especficas pode ser chamado de rota metablica. Em grande parte, as rotas metablicas visam, primariamente, a transformao de nutrientes para o aproveitamento celular, cumprindo as exigncias fundamentais para a sobrevivncia da clula: produo de energia (derivada basicamente de ATP), poder redutor (NADPH) e biossntese das substncias essenciais a sua sobrevivncia, as macromolculas (carboidratos, protenas, etc). Entretanto, vegetais, microorganismos e, em menor escala os animais, apresentam todo um arsenal metablico (coenzimas, enzimas e organelas) utilizado para produzir, transformar e acumular inmeras outras substncias necessrias, indiretamente, a vida do organismo produtor. Nesse grupo, encontram-se substncias cuja produo e acumulao esto restritas a um nmero limitado de organismos, caracterizando-se como elementos de diferenciao e especializao. A todo esse conjunto metablico costuma-se definir como metabolismo secundrio, cujos produtos, embora no sejam necessariamente essenciais para o organismo produtor, garantem vantagens para a sua sobrevivncia e para a perpetuao de sua espcie, em seu ecossistema. A origem de todos os metablitos secundrios pode ser resumida a partir do metabolismo da glicose, oriunda da fixao do carbono realizada na fotossntese. A glicose, por meio de uma cascata metablica origina gliceraldedo-3P, que posteriormente transformado
-
em
fosfoenolpiruvato que, na presena de uma piruvato cinase, origina o piruvato ( OOC-CO-CH3). Este, na presena de NAD+ e HSCoA sofre descarboxilao oxidativa resultando em acetil-SCoA (CH3-CO-SCoA). A glicose, na via das pentoses, fornece outro metablito importante, a 4-fosfato de eritrose. A biossntese de todos os metablitos secundrios conhecidos iniciada pela combinao do fosfoenolpiruvato, acetil-SCoA e 4-fosfato de eritrose, entre si ou no (Figura 1). Desta forma, podemos dividir o metabolismo secundrio em trs vias principais (Figura 2): a) A via do cido chiqumico b) A via do acetato c) A via mista, pela combinao das vias acetato e cido chiqumico Os derivados do acetato podem ser classificados segundo trs vias: a) Via do cido ctrico b) Via da condensao do acetato c) Via do mevalonato ou do cido mevalnico
HO2C
OH cido fosfoglicrico PO
OH O OH 4-fosfato de eritrose
PO
HO2C
OP
acetil-SCoA
CO2
hv
fotossntese
Eritrose 4-fosfato
Poliacetatos
Acetil-CoA
Mevalonato
Ciclo
Terpenos e esterides
VIA DO CHIQUIMATO: produo de substncias aromticas A rota do chiquimato uma via alternativa para a produo de compostos aromticos, particularmente, os aminocidos aromticos L-fenilalanina, L-feniltirosina e L-triptofano. Esta via utilizada por microorganismos e plantas, mas no por animais e, os aminocidos aromticos felinalanina e triptofano produzidos por ela, so essenciais dieta humana e por isso devem ser consumidos. A formao do cido chiqumico comea pela condensao aldlica do fosfoenol piruvato com a D-eritrose-4P, resultando no cido 3-deoxi-D-arabinoheptulosonico-7-fosfato (DAHP) que, posteriormente, na presena de NAD+ sofre desfosforilao e uma reao aldlica interna formando o cido 3-deidroqunico. A reduo deste, leva ao cido qunico, que facilmente encontrado como produto livre, na forma esterificada ou em combinao com alcalides como a quinina. Entretanto, a desidratao do cido 3-deidroqunico leva formao do cido 3deidrochiqumico que, por reduo (NADPH) transformado em cido chiqumico, ou por desidratao seguida de enolizao, em cido protocatecico; ou ainda, por oxidao seguida de enolizao, em cido glico, precursor dos galotaninos. Uma vez formado, o cido chiqumico tambm pode ser metabolisado em cido corsmico, pela incorporao de uma molcula de fosfoenol piruvato seguida de uma eliminao do tipo 1,4 do grupo fosfato. A reduo do corismato e a incorporao de amnia conduzem a via do antranilato, que forma o aminocido triptofano, precursor dos alcalides indlicos. Um rearranjo intramolecular do cido corsmico produz o cido prefnico. A descarboxilao deste, seguida de aromatizao e transaminao produz o aminocido fenilalanina. Uma rota alternativa, a partir do cido prefnico, conduz formao da tirosina. Esses aminocidos originam vrios protoalcalides. A fenilalanina pela ao da PAL (fenilalanina amonialiase) perde uma molcula de amnia, originando o cido cinmico. A regulao desta enzima um fator crtico na produo dos metablitos do chiquimato. Nas plantas, a atividade da PAL est sob o controle de vrios fatores internos e externos, tais como: hormnios, nveis de nutrientes, luz, infeco por fungos e leses. A infeco por fungos resulta na sntese de compostos fenlicos por induo da produo de PAL.
COO
PO
COO
PO
HO
COO
3-deidroquinato sintase
HO OH OH
NAD
O OH
OH
HO OH
3-deidroquinato
3-deidrocinase
COO
COO
COO
PO OH
OH
chiquimato-3-fosfato
chiquimato
3-deidrochiquimato
COO
COO
corismato sintase
PO OH O COO OH O COO
5-enolpiruvilchiquimato-3-fosfato EPSP
corismato
COO
NH2
corismato mutase
OH OH
corismato
prefenato
COO
COO
NH2
4-hidrofenilpiruvato
L-tirosina
cido isocorismico
CO2H OH
cido antranlico
CO2H CO2H
L-triptofano
cido saliclico
cido O-succinilbenzoico
CO2H
CO2H
COH
OH
NH2
PAL
NADPH
L-Phe
cido cinmico
cool cinamlico
O2
NADPH
CO2H
CO2H
CO2H
CO2H
CO2H
NH2
O2 NADPH
HO OH OH OH
SAM
O2 NADPH
MeO OH MeO OH OH
L-tirosina
cido p-cumrico
cido cafico
cido ferlico
[H]
[H]
COH
SAM
CO2H
COH
MeO MeO OH OH OH
OMe
cido sinpico
aldedo ferlico
aldedo p-cumrico
CH2OH
CH2OH
CH2OH
MeO OH
MeO OH
OMe
OH
cool p-cumaroil
lcool ferlico
lcool sinaplico
X2 LIGNANAS
Xn LIGNINAS
Os cidos cinmicos so os precursores da maioria dos compostos classificados como fenilpropanides (Ar-C3): compostos aromticos com uma cadeia lateral de 3 tomos e carbono. Grande parte desses metablitos so cidos ou derivados destes, como por exemplo: cido pcumrico, cido cafico, cido ferlico, cido sinpico, coniferol, sinapol, lcool cinamlico, etc. A reduo da cadeia lateral dos cidos cinmicos pode levar a alil ou propenilfenis, como o eugenol e isoeugenol, respectivamente, a cadeia lateral pode perder tomos de carbono, originando derivados Ar-C2 ou Ar-C1. Os cidos cinmicos tambm so as unidades formadoras de compostos mais complexos como as lignanas e as ligninas. As lignanas so dmeros oxidativos de lcoois cinamlicos entre si, ou destes com cidos cinmicos; as neolignanas so dmeros oxidativos de alil e propenilfenis entre si ou cruzados; as alolignanas so dmeros mistos de arilpropanides, onde um dos monmeros apresenta o carbono oxigenado (lcool ou cido cinmico) e o outro no (alil ou propenilfenol); as norlignanas, sero quaisquer substncias descritas anteriormente, como 1 tomo de carbono a menos, etc. a lignina, depois da celulose, a substncia orgnica mais abundante nos vegetais. Quimicamente um polmero de fenilpropanides, altamente ramificado. Os metabolitos com estrutura ArC1 so substncias polifenlicas que ocorrem na natureza na forma de steres ou de glicosdos. Exemplos dos primeiros so a vanilina, o cido gentsico e a salicina. Metabolitos ArC2 so raros provenientes do cido chiqumico, sendo a maioria destes metabolitos resultante de acetato e malonato, (ex. cido 6-metilsaliclico). Cabe ainda referir que as unidades ArC1 e ArC2 provenientes de chiquimato, se incluem na estrutura de metabolitos mais complexos (ex. unidades ArC1 incorporam as estruturas de antibiticos macrocclicos e unidades ArC2 esto includas em grande nmero de alcalides, sob a forma de ArCH2CH2N feniletilamina). Os metabolitos ArC3(C2)n (flavonides) possuem estrutura derivada em parte do cido xiqumico (ArC3) e em parte de cadeias de poliacetato (C2)n, pelo que so considerados resultantes de biossntese mista.
VIA DO ACETATO O cido actico na sua forma ativada de acetil-SCoA tem uma posio central na biossntese de um grande nmero de molculas complexas: uma srie de condensaes de Claisen entre duas unidades de dois carbonos resulta em cadeias policetometilnicas, que por reduo levam a cido graxos, ou por ciclizaes futuras, a muitas classes de compostos aromticos. A variao, caracterizada por uma condensao aldlica, leva, via cido 3-hidroxi-3-metilglutrico e cido mevalnico, ao mundo dos terpenos. De fato, a acetil-SCoA age como unidade iniciadora do processo, e a malonil-SCoA que o faz prosseguir: uma descarboxilao concomitante ocorre durante o ataque a carbonila do grupo cetnico da acetil-SCoA, e a maloni-SCoA resultante um nuclefilo forte. Esta adio de duas unidades de carbono no como acontece na formao dos cidos graxos precedida de reduo das carbonilas: o resultado um poli--cetotioster, que altamente reativo por causa da presena concomitante de centro nucleoflicos (os grupos metilnicos) e de centros eletroflicos (os grupos carbonlicos). A estrutura deste poli--cetotioster por ser altamente reativa, favorece reaes intramoleculares: - condensao aldlica interna levando a cidos 2,4 diidroxi-6-alquilbenzicos (cido orselnico e seus homlogos); - condensao de Claisen interna induzindo a formao de 1-acil-2,4,6-triidroxibenzenos (floroacetofenona e seus homlogos, os acilfloroglucinis); -algumas vezes ciclizaes intramoleculares ocorrem por lactonizao, formando as pironas. Ao mesmo tempo, condensaes aldlicas podem acontecer, levando a formao de cromonas, isocumarinas, e outros compostos. A diversidade estrutural resulta diretamente do nmero de unidades de acetato no precursor, o modo de ciclizao, a identidade do grupo iniciador e as transformaes secundrias: oxidaes, redues, alquilaes, rearranjos, clivagem de anis, glicosilaes, etc. A formao de compostos aromticos a partir de poli--cetotioster particularmente comum em bactrias, liquens e fungos: toxinas e antibiticos so freqentemente elaborados por um processo deste tipo. Em plantas superiores, este caminho s aplicado para um limitado nmero de compostos, incluindo naftoquinonas, antraquinonas, cromonas e depsdeos. Por outro lado, comum a ocorrncia de compostos oriundos da via mista que possuem uma parte vinda da via acetato: flavonides, xantonas, estilbenides, terpenofenis de Cannabis, certas antraquinonas, e alguns alcalides (por exemplo, tropnicos, armanos e tetraidroquinolinas de Cactaceae).
Acetil-CoA
cidos tricarboxlicos
Terpenides
Compostos aromticos
1: Condensao do acetato 2: Condensaes de Claisen 3: Condensao de Claisen seguida de condensaes aldlicas e redues 4: Ciclo do cido ctrico 5: Via do cido mevalnico
Figura 6: Esquema das vias que utilizam o acetato como bloco de construo.
a) Via do cido ctrico No ciclo do cido ctrico, a acetil-SCoA vai levar a formao de cido asprtico e cido glutmico, que posteriormente, sero metabolizados a LISINA e ORNITINA, respectivamente, importantes precursores de vrios grupos de alcalides. Os alcalides pirrolidnicos, tropnicos e pirrolizidnicos tm origem da ornitina; enquanto que, os alcalides piridnicos e piperidnicos podem ser originados de vrias rotas, dentre as quais, uma que parte da lisina. Duas molculas de lisina originam o alcalide lupinina, precursor dos demais alcalides quinolizidnicos.
N H pirrol
N H piperidina
HOOC
NH2 lisina
NH2
N piridina
N quinolizidina
b) Via da condensao do acetato Os policetdeos constituem uma grande classe de produtos naturais agrupados unicamente por caractersticas biossintticas. Suas estruturas diversas podem ser explicadas como sendo derivadas de cadeias poli--cetnicas, formadas pela condensao de unidades de cido actico [nCH3CO2H (CH2CO)n-], incluindo os cidos graxos, poliacetilenos, prostaglandinas,
antibiticos macroldeos e muitos compostos aromticos (ex. antraquinonas e tetraciclinas). A via que gera estes policetdeos e cidos graxos iniciada pela carboxilao de uma acetilSCoA formando assim a malonil-SCoA, esta reao envolve ATP, CO2 (como bicarbonato) e a coenzima biotina como carreadora do CO2. a converso de acetil-SCoA a malonil-SCoA aumenta a acidez dos hidrognios , resultando em um nuclefilo melhor para a condensao de Claisen. Posteriormente, ocorre a reao de Claisen entre uma unidade de acetil-SCoA e malonil-SCoA, seguida da descarboxilao da malonil para formao da acetoacetil-SCoA. O processo de alongamento da cadeia continua pela condensao de unidades de malonil-SCoA ao produto formado (acetoacetil-SCoA) tantas vezes de faam necessrias, e sempre com a descarboxilao da malonil-SCoA (Figura 8). Para a biossntese dos cidos graxos, a acetil-SCoA e a malonil-SCoA so inicialmente transformadas em tiosteres com uma protena carreadora de grupo acila (ACP). O processo da condensao de Claisen da acetil-ACP e malonil-ACP semelhante a formao das cadeias poli-cetnicas, entretanto, para os cidos graxos, os grupos carbonilas so reduzidos antes do ataque da prxima malonil_ACP. Os cidos graxos insaturados geralmente so produzidos posteriormente por desidrogenao dos cidos saturados (Figura 8).
O CH3 C
CH3COSCoA SCoA H3 C
O C
O CH2 C SCoA
Claisen
acetil-SCoA
acetoacetil-CoA
Claisen
CH3COSCoA
O H3CO H2 C C CH2COSCoA n
O C SCoA SCoA H 3C
O C
O CH2 C SCoA
CH2 C O
malonil-SCoA
O H3CO H 2C C CH2COSCoA n
poli--ceto ster
C O
ACP
acil-ACP
NADPH
CH2 CH2CH2CO
ACP
c) Via do cido mevalnico Os terpenides e seus derivados (ex: saponinas e esterides) so substncias formadas pela juno de molculas de isopreno, derivado do cido mevalnico. Este, por sua vez, formado pela condensao de Claisen de duas molculas de acetil-SCoA, formando a acetoacetil-SCoA, seguida de uma reduo, dependente de NADPH. A converso de cido mevalnico em isopreno comea com uma fosforilao dupla na hidroxila do C5, seguida de uma nova fosforilao na hidroxila remanescente, que transformada em um bom grupo abandonador. A eliminao desta ser acompanhada por uma descarboxilao, induzindo a formao do isopentenilpirofosfato (IPP), que pode ser isomerizado a dimetilalilpirofosfato (DMAP). O DMAP altamente reativo, sendo susceptvel ao ataque nucleoflico no C1, com sada simultnea do grupo pirofosfato. A condensao do IPP com o DMAP, entre as extremidades inferior e superior, respectivamente (cabea-cauda), sob a influncia de preniltransferases, d origem ao pirofosfato de geranila (C10). Este serve como substrato para as snteses de vrios dos monoterpenides. O pirofosfato de geranila (GPP) tambm pode sofrer alongamento com a adio seqencial de IPP por conjugao
entre as extremidades superior e inferior (cabea-cauda), produzindo pirofosfato de farnesila (C15) e geranila (C20), atravs das prenilases correspondentes, e esses intermedirios do origem aos sesquiterpenides e aos diterpenides, respectivamente. A formao de ttriterpenos implica na condensao cabea-cauda de duas unidades de pirofosfato de farnesila para a formao do esqualeno. Os esterides (C27), as saponininas e os glicosdeos cardiotncos so metablitos resultantes de modificaes estruturais em esqueletos triterpnicos. J a ligao cabea-cauda de duas molculas de pirofosfato de geranilgeranila levam a formao do fitoeno, precursor dos carotenos (C40).
O C
O CH2 C SCoA
CH2 C O
acetoacetil-CoA
malonil-SCoA
OH
2ADP
2ATP
OH
PPO
CO2H
CO2H SCoA
3-hidrxi-3-metilglutaril-CoA HMG
ADP OP
PPO
O H
PPO
IPP
PPO
DMAPP
+ IPP
OPP
GPP sintase
Quadro 1: Precursores dos terpenides. Cn C5 C10 C15 C20 C25 C30 C40 n =45 a 105 Classe Hemiterpenide Monoterpenos Sesquiterpenos Diterpenos Sesterpenos Triterpenos e esterides Carotenides Poliisoprenides Precursor Isopentilpirofosfato Geranilpirofosfato Farnesilpirofosfato Geranilgeranilpirofosfato Geranilfarnesilpirofosfato Esqualeno Fitoeno Geranilgeranilpirofosfato sigla IPP GPP FPP GGPP GFPP 2 x FPP 2 x GGPP n x GGPP
MONOTERPENOS (C10)
geranilpirofosfato IPP
IPP
geranilgeranilpirofosfato IPP
DITERPENOS (C20)
ESQUALENO
TRITERPENIDES(C30)
ESTERIDES (C27)
SAPONINAS
14b 6b 12b 14a 5a 4a 3a 1a 2a 12a 15a 10a 15b 7a 8a 13a 9a ESQUALENO 7b 11b 10b 9b 8b 5b 4b 3b 2b 13b 1b
11a 6a
14a 5a 7a 6a 4a
13a
PPO
1b 13b 2b X-Enz
3a
2a
1a
OPP
3b 4b 5b 14b 6b FAPP
FAPP
1b 1b 13a 3a
R H
OPP
2b 13b 13a 3a
R H
13a 3b 13b
R
1b 1a 2b 3b
OPP
2b 1a 2a
R1
13b
X-Enz
1a 2a H
3b
3a
R1
2a
R1
13a
H
1b 1a 2a
H
2b 3b 13b
3a
ESQUALENO