Prcticas de Bioqumica General

Prctica: pH, curvas de titulacin y soluciones buffer

pH, CURVAS DE TITULACIN Y SOLUCIONES BUFFER

Objetivos Al finalizar este trabajo prctico el estudiante estar en capacidad de: Conocer el fundamento de la medicin de pH. Medir el pH de diferentes soluciones y fluidos biolgicos. Preparar soluciones amortiguadoras a pH definido. Demostrar mediante experimentos, la importancia de los sistemas buffer en fluidos biolgicos. Construir curvas de titulacin e identificar por medio de sta un amortiguador o buffer. Introduccin La gran mayora de las molculas orgnicas que se encuentran en los organismos vivos existen en forma inica. Dependiendo de la naturaleza de la carga, stas pueden ser aniones (cargada negativamente), cationes (cargados positivamente) o anfolitos (con cargas positivas y negativas). La concentracin a la cual estas molculas se encuentran en los tejidos y/o fluidos biolgicos es de singular importancia, puesto que esto determina las posibilidades que determinadas reacciones ocurran o no. Estas concentraciones son utilizadas en clnica para el diagnstico de ciertas condiciones fisiolgicas o patolgicas. La carga neta de las biomolculas orgnicas en solucin est determinada por la concentracin de hidrogeniones [H+] en el medio, comnmente expresado como pH. El trmino pH fue introducido en 1909 por Sorensen, quien defini el pH como el logaritmo negativo de la concentracin de iones hidrgeno:

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pH= - log [H+]. Los valores de pH estn representados en una escala que abarca desde el 0 hasta 14. Los valores inferiores a 7,0 corresponden a concentraciones elevadas de H+ (soluciones cidas) y los valores superiores a 7,0, equivalen a concentraciones bajas de H+ (soluciones bsicas). El pH 7,0 es el valor de las soluciones neutras. Para calcular el pH de una solucin se debe realizar lo siguiente: 1. Calcular la concentracin de iones hidrgeno [H+]. Para esto debe considerarse si se trata de un cido o base y stos son fuertes o dbiles. Si se trata de un cido fuerte [H+] = [cido]; base fuerte [OH-] = [Base] Si se trata de un cido dbil [H+] = Ka x [cido] si es una base dbil [OH-] = Kb x [Base] 2. Para los cidos calcular el pH como el logaritmo negativo de [H+] 3. Para las bases calcular el pOH como el logaritmo negativo de [OH-] y luego calcular el pH a partir de la expresin: pH = 14 - pOH A nivel del laboratorio podemos medir el pH de diferentes soluciones con el empleo del pHmetro o potencimetro o con el uso de tiras indicadoras. pH metros El pH de soluciones puede determinarse ms exactamente, por mediciones del potencial de ciertos electrodos, que con el uso de tiras indicadoras. Los instrumentos utilizados con tal fin, se conocen como pH-metros y estn constituidos generalmente por un sistema potencimetro de dos electrodos. Uno de los electrodos, construido generalmente de calomel, funciona como electrodo de referencia (Er). El electrodo analtico puede ser de hidrgeno (Eh) o de vidrio (Ev). Por razones prcticas es ms comnmente utilizado el electrodo de vidrio. Modernamente ambos electrodos han sido integrados en una unidad, conocida como electrodo integrado vidrio-clomen. ;

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El potencimetro mide diferencia de potencial o fuerza electromotriz entre ambos electrodos. En uno de los electrodos (Er) las condiciones son constantes, mientras en el electrodo de vidrio (Ev) las condiciones son variables, por cuanto es variable la [H+] de la solucin puesta en contacto con l. Para comprender los principios fundamentales del anlisis electromtrico o potenciomtrico del pH, es necesario conocer las partes constituyentes del electrodo de vidrio y la exacta relacin matemtica entre pH y la diferencia de potencial entre el electrodo de referencia (Er) y el electrodo de vidrio (Ev). Por equivalencia de unidades, los instrumentos de medida del pH, estn diseados en tal forma que pueda hacerse la lectura directa del pH, sin necesidad de conocer la diferencia de potencial. En la prctica, se calibra el instrumento frente a un amortiguador o una serie de amortiguadores de pH conocido y luego se procede a realizar la lectura del pH en la solucin que se desea medir. Soluciones Buffer Son aquellas soluciones tambin llamadas soluciones amortiguadoras que se oponen a los cambios bruscos de pH y estn constituidas por un cido o base dbil y su par conjugado. Debido al control que el pH ejerce sobre las biomolculas orgnicas en solucin, es lgico pensar que los organismos vivos deben mantener un control riguroso sobre cambios excesivos en el pH intra y extra celular (pH fisiolgico). El pH fisiolgico es mantenido en un valor aproximado de 7,0 mediante la accin de sistemas buffer biolgicos como H2CO3/ HCO3- ; H2PO4-/ HPO4-2 y otros. Este efecto puede ser demostrado en la prctica preparando un sistema buffer (cido + base conjugada) y midiendo el pH de la solucin amortiguadora a medida que se agrega un cido o una base fuerte, observndose el poder amortiguador de la misma, obtenindose la llamada curva de titulacin.

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Si se desea amortiguar una solucin a un pH determinado, se debe usar un cido o base dbil cuyo pK no estn alejados a ms de 2 unidades de dicho pH. Esto con la finalidad de que la capacidad amortiguadora de la solucin sea la mayor posible. En vista de la efectividad de los sistemas buffer en el mantenimiento del pH fisiolgico se hace necesario el estudio de los principales sistemas buffer que se encuentran en los organismos vivos, entre los cuales se pueden mencionar el buffer bicarbonato/cido carbnico, fosfato/cido fosfrico, protenas/proteinato, etc.

MATERIALES Y REACTIVOS - Bureta de 50 mL - Cilindro graduado de 50 mL - 3 Erlenmeyers de 50 mL - Agitador magntico y plancha de agitacin - Potencimetro - Vaso de precipitado 100 mL - cido actico 0,1 N - NaOH 0,1 N - cido clorhdrico 0,1 M - Agua destilada - Plasma de bovino - Buffer fosfato pH 7,4 Experimento N 1 Clculo y determinacin del pH en soluciones cidas y bsicas. Calcule y mida el pH de las siguientes soluciones con la ayuda de tiras indicadoras o papel pH y el potencimetro. Anote los resultados para posterior discusin.

Solucin

Resultados pH terico
4

pH real

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HCl 0,1 M NaOH 0,1 M CH3COOH 0,1 M Experimento N 2 Preparacin de un sistema amortiguador a partir de soluciones valoradas. Utilizando soluciones de cido actico 0,1 M e hidrxido de sodio 0,1 M realice los clculos para preparar 50 mL de una solucin amortiguadora de acetato 0,1 M pH 5 (pKa=4,74). Medir el pH (pH inicial) a 25 mL de agua, plasma, amortiguador acetato (preparado por su equipo de trabajo) y buffer fosfato. Luego agregar 1 mL de HCl 1 M a cada solucin y medir nuevamente el pH (pH final). Registre los resultados en la tabla anexa e interprtelos. Resultados pH inicial

Solucin Agua Plasma Buffer acetato Buffer fosfato

pH final

Experimento N 3 Curvas de Titulacin del cido actico 0,1 N y cido clorhdrico 0,1 N contra una solucin de NaOH 0,1 N. Procedimiento: 1. Calibrar el potencimetro con soluciones de pH conocidas (buffer de referencia). 2. Colocar 40 mL del cido a valorar (cido actico 0,1 N o cido clorhdrico 0,1 N segn sea el caso), en un beaker o vaso de precipitado de 100 mL. 3. Colocar el agitador magntico y el electrodo del potencimetro en la solucin. 4. Poner en marcha el agitador y comenzar la titulacin adicionando con una bureta fracciones de 2 mL de NaOH 0,1 N

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5. Anotar el valor del pH de la solucin por cada mL de NaOH aadido. 6. Continuar la titulacin hasta que no ocurran cambios en el valor de pH. 7. Calcular los miliequivalentes de NaOH adicionados y graficarlos contra los valores de pH obtenidos. ( N = mEq / mL , mEq = N x mL ) 8. Compare e interprete los resultados de las dos curvas. Discuta el comportamiento del pH de cada cido frente al agregado de NaOH. Auto evaluacin 1. Defina los siguientes trminos: a. pH b. Solucin cida. c. Solucin alcalina. d. Solucin amortiguadora. 2. Explique la funcin de un indicador cido-base. 3. Defina que es un buffer y como est constituido. 4. Calcule el pH de las siguientes soluciones a. HCl 0,0003 M. b. CH3COOH 7x10-5 M c. NaOH 3x10-2 M 5. Calcule el pH de una mezcla de iguales volmenes de cido actico 0,25 M y acetato de sodio 0,1 M. El pKa del cido actico es 4,76. Anexo Constantes de disociacin y pKa de los cidos y bases dbiles ms comunes:
cido o base HCOOH (cido frmico) CH3COOH (cido actico) Ka (M) 1,78 x 10-4 1,74 x 10-5 pKa 3,75 4,76

Prcticas de Bioqumica General CH3CH2COOH (cido propinico) CH3CH(OH)COOH (cido lctico) H3PO4 (cido fosfrico) H2PO4- (fosfato dibsico) HPO4- (fosfato monobsico) H2CO3 (cido carbnico) HCO3 (bicarbonato) NH4+ (amonio)

Prctica: pH, curvas de titulacin y soluciones buffer 1,35 x 10-5 1,38 x 10-4 7,25 x 10-3 1,38 x 10-7 3,98 x 10-13 1,70 x 10-4 6,31 x 10-11 5,62 x 10-10 4,87 3,86 2,14 6,86 12,4 3,77 10,2 9,25

Bibliografa Conn y Stumpf. Bioqumica Fundamental. Edit Limusa. 3ra Edic. Mexico 1976. Manuales departamentales UNAM. Biqumica y Biologa Molecular. Mc Graw Hill. 1999-2000. Shugar, Gershon; Bauman, Lawrence. Chemical technicians ready reference handbook. Mc Graw Hill. 2da Edicin. 1981.