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Índice:
1. Necesidad de patrones en los laboratorios de análisis y ensayos
2. Comprobación de la exactitud de instrumentos
3. Los patrones en el análisis químico clásico: Volumetrías y Gravimetrías
4. Métodos de calibración
5. Validación de métodos analíticos
6. Materiales de referencia certificados (CRMs)
7. Cuestionario
• Ser suficientemente estable para que solo sea necesario determinar una vez su
concentración.
• Reaccionar rápido con el analito para reducir al mínimo el tiempo requerido entre las
adiciones del reactivo.
• Reaccionar completamente con el analito para que se alcance satisfactoriamente el
punto final.
• Reaccionar en forma selectiva con el analito para que esta reacción pueda describirse
por una simple ecuación balanceada.
Las soluciones patrón pueden prepararse por disolución directa del patrón primario,
pesando muy cuidadosamente la cantidad exacta que se disuelve en el disolvente adecuado
y se lleva, exactamente, a un volumen final en un matraz aforado; o preparando una
disolución de un patrón secundario que se valora o contrasta su concentración con una
disolución de un patrón primario, esta se conoce como solución patrón secundaria.
4. Métodos de calibración.
Los métodos instrumentales de análisis se basan en la medida de la respuesta del aparato a
cantidades conocidas de analito (patrones), y basándose en ellas se puede interpretar la
respuesta a una muestra de contenido desconocido, de modo que permiten comprobar el
contenido de analito y asegurar la exactitud de la metodología.
A la aplicación de los patrones para relacionar la respuesta del aparato con la
concentración de analito se llama calibración.
Los métodos de calibración utilizados son: del patrón externo y de patrones agregados;
el método de los patrones agregados a su vez se dividen en dos categorías: de patrón
interno y de adición estandar, ambas se basan en añadir una cantidad conocida (spike, en
inglés) de un patrón a cada muestra que se analiza.
En el método del patrón externo se analizan los patrones y el problema por separado. Se
preparan una serie de patrones que contienen diferentes cantidades de analito junto con
una matriz (matriz es todo lo que hay en la muestra problema menos el analito) semejante
o idéntica a la de las muestras. Si el análisis es confiable y la muestra sencilla se puede
eliminar la matriz y puede ser suficiente con un patrón y un blanco (el blanco tiene la
misma composición que la muestra a excepción del analito).
Los métodos de patrones agregados se utilizan cuando la matriz de la muestra se
desconoce o es tan compleja que no es posible utilizar un patrón externo con confianza;
cuando la química de la preparación o del método de ensayo son complejas o muy
variables; y cuando el ensayo depende de condiciones instrumentales de alta precisión y
difíciles de controlar. Por ejemplo, en los análisis por cromatografía pequeñas variaciones
de caudales de gas o líquido podrían variar la respuesta del detector.
El método de la adición estandar consiste en realizar una medición inicial del problema sin
adición estándar y después agregar una cantidad de analito a cada muestra problema
repitiendo la medición tras cada adición estandar. Por lo general las adiciones y las
mediciones se realizan una o dos veces y la cantidad de analito presente originalmente en
la muestra se encuentra mediante extrapolación.
El método del patrón interno consiste en agregar una cantidad conocida de un
compuesto, diferente del analito, a cada réplica problema y al blanco. La señal del analito
se compara con la del patrón interno, y de ese modo se determina el analito presente en el
problema. El patrón agregado debe diferir lo suficiente del analito, desde el punto de vista
= = 0.113 M
A menudo debemos calcular la concentración de una muestra, después de diluirla desde
un volumen inicial Vi a Vf. En el ejemplo anterior la disolución de Na Cl 2.08 M se diluyó
desde un Vi =5 a un Vf = 5.00 + 95.0 = 100.0 ml. La concentración del NaCl se diluye, pues,
de 2.08 M a (Vi/Vf) x (2.08 M) = 0.104. La cantidad (Vi/Vf) se llama factor de dilución y se
suelen usar para facilitar los cálculos.
4.2.1. Procedimiento gráfico para la adición estándar
Este método se ilustra en la figura siguiente (fig. 4.2.1.):
=F
La concentración de analíto y patrón a que se refiere la ecuación, es después de mezclados.
Para calcular la concentración inicial se aplica el factor de dilución.
Ejemplo.
que un CRM sea, desde el punto de vista práctico, la mejor referencia posible en la
verificación de la trazabilidad de un método analítico.
Por lo tanto, un CRM es un material, similar a las muestra reales que estamos analizando en
nuestro laboratorio, y que un organismo competente nos certifica y garantiza el valor de la
propiedad que nos interesa (por ejemplo a concentración de un analito).
6.1. Propiedades de los CRMs
Para que un material pueda ser considerado como CRM debe cumplir una serie de
requisitos:
A. Trazabilidad: el valor de la propiedad certificada se ha obtenido utilizando diversos
métodos analíticos cuyos principios de medida sean completamente diferentes y
haciendo un ejercicio de inter-laboratorios.
B. Homogeneidad: es indispensable y significa que debe presentar el mismo valor de la
propiedad certificada dentro de la misma unidad y en todas las unidades del CRM.
Puede ser homogéneo respecto a la propiedad de interés aunque no lo sea respecto a
otras, siempre que no influya en la primera.
C. Estabilidad: el material debe ser estable en las condiciones de envío y se debe conocer
durante cuanto tiempo permanece estable el CRM desde su recepción y desde que se
abre el recipiente. La estabilidad debe referirse tanto a las propiedades certificadas
como a la matriz. Si los CRMs se ven afectados por factores como la luz, la tª o la
exposición al oxigeno de la atmósfera, el fabricante debe indicar las condiciones de
transporte, manejo y almacenamiento recomendadas.
D. Similitud con muestras reales: tanto la matriz como el valor de la propiedad a medir
deben ser lo mas parecido posible a las muestras reales que serán analizadas con ese
método analítico. Por ejemplo: si mi laboratorio analiza plomo a nivel de µg/L en agua
del rio Segura, el mejor CRM es el agua del rio Segura. Como, probablemente, no
exista como tal hemos de utilizar uno parecido que puede ser el CRM 1640-NIST, en el
cual se encuentra certificado el plomo en aguas naturales recogidas en Clear Creek
(Colorado, EEUU).
E. Incertidumbre: los valores certificados de la propiedad deseada deben ir acompañados
por sus valores de incertidumbre. Esto informa de la calidad del CRM y es importante
que se adecue a cada necesidad.
Los CRMs no siempre están disponibles, se calcula que solo hay entre un 5 y un 10 % de
CRMs para los análisis que actualmente se hacen en todo el mundo, además son muy
caros, por ejemplo el CRM 1515-NIST, elementos traza en 50 gramos de hojas de manzana
cuesta 342 dólares. En la siguiente tabla aparecen una serie de CRMs.
⋅ SRMs son materiales bien caracterizados y certificados que se producen en suficiente cantidad,
es la caracterización que usa el National Institute of Standards and Technology (NIST) para un
CRM.
⋅ E significa patrón de contenido elemental y M patrón de ajuste de matriz
Los organismos productores de CRMs son principalmente el NIST de
EEUU(http://www.nist.gov) y en Europa el IRMM (Institute for Reference Materials and
Measurments, http://www.irmm.jrc.be). Otros productores de reconocido prestigio son la
IAEA (International Atomic Energy Agency, http://iaea.org ) , el NCR (National Research
Council de Canadá, http://www.nrc-cnrc.gc.ca y el LGC (Laboratory of the Government
Chemist del Reino Unido, http://www.lgc.co.uk)
7. Cuestionario
1. Un procedimiento normal para determinación de proteínas es el ensayo de porción de
colorante de Bradford. Según ese método, la proteína se trata con un colorante que, al
unirse a ella cambia su color de pardo a azul. La intensidad del color azul (medido por
absorción de la luz a una longitud de onda de 595 nm) es proporcional a la cantidad de
proteína presente.
Proteína (µg) 0.00 9.36 18.72 28.08 37,44
Absorbancia a 0.466 0.676 0.883 1.086 1.280
595 nm
REFERENCIAS: Análisis químico cuantitativo (D.C. HARRIS, Ed. Reverte); Análisis Instrumental
(SKOOG/LEARY, Ed. McGraw Hill); Química analítica contemporanea ( Rubinson, Ed. Pearson
Educación), y otros.