PRAKTIKUM BLOK 10 PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Pewarnaan Ziehl Neelsen, termasuk pewarnaan tahan asam. biasanya dipakai untuk mewarnai golongan Mycobacterium (M. tuberculosis dan M. leprae) dan Actinomyces. Bakteri genus Mycobacterium dan beberapa spesies nocardia pada dinding selnya mengandung banyak zat lipid (lemak) sehingga bersifat permiable dengan pewarnaan biasa. Bakteri tersebut bersifat tahan asam (+) terhadap pewarnaan tahan asam. Pewarnaan tahan asam dapat digunakan untuk membantu menegakkan diagnosa tuberculosis. Bahan pemeriksaan TB biasanya berupa sputum yang diambil dari pasien tersangka KP (Koch pulmonum), tetapi dapat pula diambil dari lokasi lain seperti cairan otak (Liquor Cerebro Spinalis), getah lambung, urine, ulkus, dll. Pasien tersangka lepra (baca teorinya). Pembacaan BTA sputum mempergunakan skala IUATLD (International Union Against Tuberculosis and Lung Diseases). Tingkat positivitas dapat meperkirakan berat ringannya infeksi KP pada penderita.

Pewarnaan Ziehl Neelsen Pewarnaan diferensial yang membedakan bakteri tahan asam dengan bakteri yang bukan tahan asam. Prinsip pewarnaan : Bakteri tahan asam (BTA) tahan terhadap pencucian dengan alkohol asam, walau telah dicuci dengan alkohol asam bakteri tahan asam tidak melepaskan zat warna yang telah diikatnya. Bakteri tahan asam akan berwarna merah, dan bakteri tidak tahan asam berwarna biru.

Alat dan bahan : 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Mikroskop Objek gelas Carbol Fuchsin 0,3 % Alkohol Asam 3 % ( Alkohol + HCl konsentrasi 3 %) Methylen Blue 0,3 % Ose Lampu Bunsen/Lampu spiritus Oil Immersi

Cara membuat sediaan : 1. Bersihkan objek gelas, beri label 2. Sterilkan ose, dinginkan 3. Ambil 1 ose sputum yang kental (hijau kuning) letakkan diatas objek gelas, ratakan. 4. Sediaan biarkan kering pada suhu kamar.

5. Setelah kering fiksasi denga melewatkkan diatas nyala api sebanyak 3 x, sediaan siap untuk diwarnai. Cara Pewarnaan : 1. Sediaan dituangi Carbol Fuchsin sampai penuh 2. Panaskan selama 3-5 menit sampai keluar uap pertama jangan sampai mendidih. 3. Biarkan dingin selama 5 menit 4. Cuci dengan air 5. Dekolorisasi denga alkohol asam 10-30 detik. 6. Cuci dengan air 7. Tuangi dengan methylen blue selama 20-30 detik 8. Cuci dengan air Pembacaan Denga Skala IUATLD 1. 2. 3. 4. 5. Tugas : 1. Melakukan pewarnaan 2. Mengamati dengan mikroskop 3. Menggambar hasil pengamatan. Tidak ditemukan BTA dalam 100 lp, disebut negatif Ditemukan 1-9 BTA dalam 100 lp, ditulis jumlah kuman yang ditemukan Ditemukan 10-99 BTA dalam 100 lp, disebut + atau (1+) Ditemukan 1-10 BTA dalam 1 lp, minimal 50lp, disebut ++ atau (2+) Ditemukan >10 BTA dalam 1 lp, minimal 20lp, disebut +++ atau (3+)

LAPORAN PRAKTIKUM BLOK 10 PEWARNAAN ZIEHL NEELSEN

Nama : NIM : Grup :

Tanggal : 11 September 2013

1.

Pewarnaan Ziehl Neelsen

2.

Koloni M. tuberculosis Media : Ogawa