Professional Documents
Culture Documents
http://journals.imedpub.com
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
Estudio Gentico Poblacional de Frecuencias Allicas para 15 marcadores STR presentes en la Poblacin del Estado de Zacatecas Aplicado a la Prctica Forense
Resumen
La gentica es el estudio de la herencia y la variacin biolgica en los organismos, los rasgos particulares son heredados de padres a hijos, existen pequeas variaciones en el ADN que hacen la diferencia entre personas, las diferentes formas de un mismo gen o marcador es llamado alelo y se dene como las mltiples variaciones de un gen o secuencia de ADN en la poblacin, donde cada par de alelos conformar un genotipo, encontrndose dentro de la poblacin con determinada frecuencia, sin embargo, existen cuatro fuerzas: la seleccin, deriva gnica, mutacin y migracin; que determinan la frecuencia de los mismos. Los marcadores en ADN forense son populares por trabajar con poca cantidad de ADN e incluso degradado, son manejables para la automatizacin, son altamente discriminatorios, con resultados fciles de interpretar y de comparar. El objetivo del presente estudio es crear una base de datos de la poblacin Zacatecana, obtener el perl gentico y con ello obtener las frecuencias allicas y genotpicas para ser utilizadas en casos forenses. Resultados: se obtuvieron las frecuencias allicas de la poblacin Zacatecana encontrando alelos que no se haban reportado en estudios con poblaciones similares, empleando estos datos en casos forenses de manera exitosa y con resultados ms exactos. Palabras clave: Marcadores de ADN, gentica forense, PCR, frecuencia allica, genotipos, base de datos.
Correspondencia:
M. en C. Flor de Mara Trejo Medinilla:
tmedinillafm@yahoo.com.mx
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
Genetic population Study of Allelic Frequencies on 15 STRs markers in the Estate of Zacatecas applied on Forensics practice
Abstract
The genetic study the inheritance and the biologic variations of the organisms, the particular characteristics are inherited form fathers to son, exist different variations on DNA that makes the difference between people, the different ways of a same gen o marker is called allele and it is the multiplex variations of a gen or DNA sequence at population, where every couple of alleles are a genotype, and nd it on the population at determinate frequency, although exist four forces: the selection, genetic drift, mutation and migration; that determined the frequency thereof. The Forensic DNA markers are popular for working with small amounts of DNA and even degraded, are manageable for automation, are highly discriminatory, and easy to interpret and compare results. The object of this study is created a database of people Zacatecana, obtain the genetic prole and thereby obtain the allelic and genetic frequencies, for use in forensic cases. Results: we obtained the allelic frequencies of population and we nding alleles that had not been reported in studies with similar populations, using this data in forensics cases successfully and with more accurate results. Key words: DNA markers, forensic genetic, PCR, allelic frequency, genotypes, database.
Introduccin
Gentica
La gentica es el estudio de la herencia y la variacin biolgica en los organismos, puede ser considerado como una base individual, donde los rasgos particulares son heredados de padres a hijos o ms global como un rastreo del movimiento de marcadores genticos en una poblacin. Todos los organismos se
componen de clulas (la unidad ms pequea de la vida), en las clulas humanas el ADN localizado en el ncleo es denominado ADN nuclear organizado en cromosomas [13, 17]. El genoma humano consta de 22 pares de cromosomas autosmicos y dos cromosomas sexuales, en hombres es designado como XY, mientras que en mujeres es XX. Muchas pruebas de identicacin humana son realizadas usando marcadores en cromosomas autosmicos y determinando el gnero sobre los cromosomas
Este artculo esta disponible en: www.archivosdemedicina.com
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
sexuales [3-6]. El ADN se compone por regiones codicantes (conocidas como genes) y no codicantes (ADN basura). Los marcadores usados en pruebas de identicacin humana se encuentran en las regiones no codicantes o dentro de los genes que no codican en las variaciones genticas. Las pequeas variaciones en el ADN individual permite la diferencia entre las personas, las diferentes formas de un mismo gen o marcador es llamado alelo, si los alelos de un lugar en particular (locus) en el genoma son los mismos en ambos pares de cromosomas, la situacin es llamada homocigoto, si una pequea diferencia est presente en un locus en especco, la diferencia allica ser llamada heterocigoto [13, 11].
Genotipo y Fenotipo
El genotipo es el contenido gentico de un individuo en forma de ADN y se dene como el conjunto de genes de un organismo [9], el fenotipo es la manifestacin fsica o externa de un gen.
Gentica poblacional
La gentica de poblaciones no solo estudia la composicin gentica del individuo, tambin a la poblacin entera y los cambios de esta a travs de las generaciones, y establecer la variacin de distintos locus, tratar de explicar las posibles causas de esa variacin e incluso establecer un modelo, siendo aplicable a todos los seres vivos [12]. Un alelo se dene como las mltiples variaciones de un gen o secuencia de ADN en la poblacin y cada par de alelos conformar un genotipo (combinacin de alelos para un gen o grupo de genes). Todos los marcadores genticos se encuentran en la poblacin con determinada frecuencia, siendo importante determinar su presencia. Existen cuatro fuerzas a considerar: la seleccin, deriva gnica, mutacin y migracin. La frecuencia de un genotipo (homocigoto o heterocigoto), vara al cambiar las frecuencias allicas. Si existen ms de dos alelos de un mismo gen, ste es considerado como polimrco y cada nuevo alelo que surge en la poblacin aumenta el polimorsmo del gen, para considerarlo como tal, la frecuencia del alelo ms comn debe ser menor al 99%, y para un alelo poco comn debe superar al menos el 0.005% de frecuencia en la poblacin; los alelos que no alcanzan estas frecuencias son considerados como raros [12]. ADN microsatlite (STR). Por su tamao son conocidos como Repeticiones Cortas en Tndem, son elementos extraordinariamente tiles en la identicacin humana o en el mapeo genmico, debido al elevado polimorsmo, con tasas de mutaciones
Identicacin Humana
El estudio de la variabilidad gentica como medio de identicacin humana inici con el anlisis de los grupos sanguneos, continuando con protenas sricas leucocitarias y eritrocitarias ms tarde el sistema de Antgenos Leucocitarios Humanos (HLA). En 1985 Alec Jeffreys y colaboradores describan un mtodo de identicacin al que denominaron DNA nger printing o huella gentica; que sera la solucin denitiva al anlisis de la diversidad humana en Medicina Legal, Investigacin Biolgica de Paternidad y en criminalstica. En 1987, el uso de la huella gentica se admiti en procesos penales en Inglaterra, Estados Unidos de Amrica y actualmente la prueba de ADN est consolidada cientcamente y de gran peso ante los tribunales a nivel mundial. El avance tecnolgico y cientco en marcadores gentico moleculares han permitido el desarrollo de la Gentica Forense, para la identicacin de personas, restos cadavricos, anlisis de vestigios biolgicos de inters criminal, investigacin de paternidad y las variabilidades genticas de la poblacin [10].
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
relativamente bajas y son de tamao pequeo lo que optimiza su amplicacin y ubicacin cromosmica establecida. Formados por secuencias muy cortas de ADN repetitivo (2 a 13 pb), distribuidos ampliamente en el genoma en bloques menores a 400 pb, con tamaos de 80 y 550 pb. Los STRs son la principal herramienta de la Gentica Forense por sus caractersticas y tambin que es posible tipicar muestras con poco material biolgico por sistemas de PCR mltiplex.
D13S317, D16S539, D18S51 y D21S11. Los 3 marcadores con mayor polimorsmo son: FGA, D18S51 y D21S11, TPOX muestra la menor variacin entre individuos [3, 4, 5, 65)16] En la siguiente imagen se muestran las posiciones cromosmicas de los loci (Figura 1).
Figura 1. Posicin cromosmica de los STR loci. Tomado de Butler J. M. en Forensic DNA Typing/ Biology, Technology, and Genetics of STR markers.
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
Metodologa
Obtencin de muestras: El nmero de muestras a estudiar fue un total de 271 muestras de las que 170 pertenecen a hombres (62.73% de las muestras) y 101 a mujeres (37.27% de las muestras)e este nmero que fue obtenido con la informacin obtenida con el censo realizado por el INEGI en el 2005, con una poblacin de1,37,692 habitantes, estableciendo un 5% de error y un 95% de conanza. Las muestras son aceptadas tomando en cuenta todos los requisitos planteados anteriormente y abarcando todos los municipios del estado de Zacatecas. Las muestras se colectaron mediante hisopados bucales y sangre en tarjetas FTA, asignando una clave a cada muestra recabada.
sedimentados en el fondo del tubo, el sobrenadante contiene el ADN que debe ser removido y puede agregarse directamente a la reaccin de PC5)[14].
Papel FTA
Mediante una lanceta se punza el dedo donador colocando la sangre sobre el papel FTA al contacto ste lisa las membranas celulares de la sangre y desnaturaliza las protenas, los cidos nucleicos son inmovilizados, protegidos de los rayos UV, agentes microbianos y hongos [14, 5)]
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
cional de ADN del CODIS: CSF1PO, FGA, TH01, TPOX, vWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51 y D21S11 [14, 15) (estos son empleados en estudios para crear bases de datos), y otros tres marcadores ms: D2S1338 Y D19S433, y uno extra para Amelogenina dan un total de 16 marcadores analizados. Tipicacin de ADN mediante el Secuenciador Automatizado 3130 de Applied Biosystems. El uso del secuenciador automatizado y los software Genotyper y GeneMapper asignan el valor allico correspondiente a cada una de las muestras para los diferentes marcadores analizados.
observadas (genotipos) entre el nmero total de las muestras analizadas y posteriormente multiplicando por 100% para obtener el porcentaje de las frecuencia genotpicas.
Clculos Estadsticos
El equilibrio Hardy Weinberg (H-W): los alelos de un locus muestran correlacin no a priori con cada otro locus [2)]. El equilibrio de Hardy Weinberg ocurre en una poblacin que se mezcla al azar y no ocurren las fuerzas de migracin, deriva gnica o seleccin en una poblacin innita; el resultado es un locus en equilibrio donde las frecuencias allicas no cambian de generacin en generacin, las frecuencias genotpicas se mantienen constantes, la suma de las frecuencias genotpicas de un locus y de los alelos siempre debe ser uno [5)].
Algunos alelos ocurren (aparecen) en menor frecuencia que otros por lo que la frecuencia mnima para estos alelos se obtiene de dividir cinco entre 2n donde n es el numero de muestras totales analizadas para la base de datos.
* La frecuencia allica mnima para aquellos alelos que no aparecen regularmente es 9.2251x10-3 0.0092.
Estimacin de Frecuencias
La frecuencia gnica allica es la medida de la proporcin relativa de alelos de una poblacin dada, expresndose en porcentaje o en la unidad. Se estima contando el nmero de veces que es observado el alelo de un locus y dividindolo entre el nmero total de alelos estudiados [4, 5, 6, 16).
Prueba del Equilibrio de un Locus. No hay forma de comprobar los supuestos de Hardy-Weinberg contra una muestra de datos observados a menos que los fenotipos dominantes hayan sido analizados mediante observaciones. Al involucrar los alelos codominantes se puede conrmar fcilmente las observaciones contra los valores esperados en equilibrio a travs de la prueba de Chi-cuadrada [5)]. La Prueba de Chi-Cuadrado. En cualquier experimento gentico es necesario decidir si nuestros datos estn en relacin con las proporciones Mendelianas. Una prueba estadstica que resulta muy til es la prueba de hiptesis de Chi-cuadrad8) [19].
Las frecuencias genotpicas se obtienen mediante a partir de dividir cada nmero de combinaciones
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
* Estos clculos se analizaron de manera manual para cada marcador y estimar los valores de Chi cuadrada para cada marcador.
Heterocigosidad Esperada (HE), es la probabilidad de que dos alelos tomados al azar de la poblacin sean diferentes obtenindose a partir de la siguiente frmula:
Grados de Libertad. El nmero de variables en las pruebas de Chi-cuadrada en el equilibrio de HardyWeinberg consiste en el nmero de fenotipos menos 1. El nmero de variables observadas (nmero de fenotipos =k) se restringe comprobando su conformidad con las proporciones de frecuencias esperadas Hardy-Weinberg originadas por el numero de variables adicionales (nmero de alelos o frecuencias de alelos =r). Se tienen (k-1) grados de libertad en el nmero de fenotipos, (r-1) grados de libertad al establecer las frecuencias de los alelos r. El nmero combinado de grados de libertad es (k-1) (r-1) = k-r. En la mayora de las pruebas de Chi-cuadrada para equilibrio que involucran alelos mltiples, el nmero de grados de libertad es el nmero de fenotipos menos el nmero de alelos [15). Grados de Libertad= n-1 n= es el nmero de clases La Probabilidad de Coincidencia (PM) es la probabilidad de que dos personas tomadas al azar posean el mismo genotipo descrito para la poblacin de estudio. Heterocigosidad (H) representa una mejor medida de la variacin gentica, ya que es precisa y no arbitraria. Estudiada como HO y HE, se dene como HO la frecuencia relativa de individuos heterocigo-
Donde; N es el nmero de muestras estudiadas. Realizando este clculo de manera manual para cada marcador analizado con sus respectivos datos. ndice de Contenido Polimrco (PIC) es similar al valor de heterocigosidad y oscila entre 0 y 1. Este ndice evala la informacin de un marcador en la poblacin de acuerdo a las frecuencias de los alelos. Se obtiene de multiplicar la probabilidad de cada posible cruzamiento (estimado a partir de las frecuencias allicas) por la probabilidad de que sean informativos, es decir, que se pueda identicar al progenitor del que procede el alelo. n n-1 n ; i=1
i=1
j=1-i
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
Poder de Discriminacin (PD) es la probabilidad de que dos individuos no relacionados y tomados al azar puedan ser diferenciados genticamente mediante el anlisis de un marcador o marcadores, calculndose:
Una vez realizado el estudio del equilibrio se obtuvieron diversos parmetros estadsticos de inters que nos permiten saber cmo se estn comportando los diferentes alelos dentro de la poblacin concentrados en Tabla 4 y Tabla 5 (anexo). Una vez obtenidas las frecuencias allicas encontradas dentro de la poblacin Zacatecana se realiza una comparacin con las frecuencias proporcionadas por el manual de Identiler y las encontradas en el estudio de la Poblacin Mestiza del Noroeste del Pas, dichos resultados se encuentran concentrados en la Tabla 6; (anexo).
Resultados
Una vez que las muestras fueron recabadas para realizar el estudio gentico poblacional, se realiz la extraccin del ADN de las muestras para ser amplicadas, genotipicadas y posteriormente obtener los perles genticos de las 271 muestras colectadas, se analiz cada uno de los alelos observados para cada locus concentrando los datos para posteriormente obtener las frecuencias allicas de cada uno de ellos. Estos datos se encuentran agrupados en la Tabla 2 y Tabla 3 (que se encuentran como anexos al nal del escrito).
Discusin
Actualmente son pocos los estudios realizados sobre la poblacin Mexicana que proporcionen datos estadsticos sobre las frecuencias allicas y gnicas de la poblacin, ya que son pocos los laboratorios con equipos y recursos necesarios para realizar este tipo de estudios y el elevado costo para llevarlos
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
vWA
D19S433 0.0018
D2S1338
D3S1358
D21S11
FGA
0.0018 0.0000 0.0018 0.0738 0.0701 0.3432 0.2860 0.1642 0.0535 0.0055
0.0092 0.0535 0.0166 0.2048 0.0849 0.2768 0.0572 0.1587 0.0756 0.0351 0.0258 0.1697 0.0609 0.2177 0.1328 0.0295 0.0701 0.1900 0.0554 0.0406 0.0055 0.1255 0.1107 0.0018 0.0221 0.2454 0.0037 0.4317 0.0756 0.0055 0.0037
0.1199 0.1089 0.1808 0.1531 0.0867 0.1458 0.0812 0.0480 0.0314 0.0092 0.0111 0.0055 0.0037 0.1402 0.0978 0.0018 0.0111 0.0369 0.0037 0.0037 0.0037 0.0923 0.0664 0.1181 0.1273 0.1310 0.1734
0.0018
0.0775 0.0018 0.2085 0.0018 0.2786 0.0074 0.0793 0.1015 0.0166 0.1587 0.0037 0.0443 0.0055
0.0037
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
*PM=Probabilidad de Coincidencia, PD=Poder de Discriminacin, PIC=Contenido de Informacin Polimrca, PEP=Poder de Exclusin de Paternidad, TIP=Tpico ndice de Paternidad, H(obs)=Heterecigosidad Observada, H(esp)=Heterocigosidad Esperada, SE=Error Estndar, X 2=Chi-Cuadrada, HW-F=ndice de Fijacin para el equilibrio H-W, HWSE=Equilibrio W-H aplicando SE.
10
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
a cabo. Pese a eso diversas Procuraduras como: Procuradura General de la Repblica, Procuradura General de Justicia Militar, Procuradura General de Justicia del Distrito Federal y las Procuraduras Generales de Justicia de los treinta y un Estados integrantes de la Federacin, celebraron un Convenio de Colaboracin llevado a cabo en la ciudad de San Luis Potos, S. L. P., el veintisiete de Marzo del ao 2007, publicado en el Diario Ocial de la Federacin con fecha Veintisis de junio del mismo ao; rmando de comn acuerdo tanto Directores de los Servicios Periciales como Procuradores de la Federacin, en donde qued establecido el material para la recoleccin de las muestras y para la determinacin de los perles genticos, que permitirn establecer la futura base de datos a Nivel Nacional de la Poblacin Mexicana. Con ello se realiz un Anteproyecto de Ley para la Creacin de la Base Nacional de Datos Genticos Forenses en la que se exponen las ventajas de contar con una Base de Datos a Nivel Nacional para el esclarecimiento de hechos delictuosos. Para ello se decidi utilizar un procedimiento de extraccin, amplicacin y tipicacin de ADN que fuera eciente y que brindara resultados ptimos debido a la gran cantidad de muestras que se decidieron analizar. El anlisis realizado para 15 STRs contenidos en el kit AmpFlSTR Identiler de la compaa de Applied Biossystems permiti realizar la tipicacin para 271 muestras de la poblacin del Estado de Zacatecas realizndolo de manera automatizada, lo que permite disminuir el error por manejo y apreciacin de los resultados; utilizando este kit por contener todos los loci deseados y seleccionados para la creacin de la base de datos del FBI llamada CODIS y tres ms (incluyendo uno para Amelogenina). Se realiz la tipicacin automatizada mediante el secuenciador ABI 3130 HITACHI de la compaa de APPLIED BIOSYSTEMS se obtuvo el genotipo para cada muestra, posteriormente se analizaron y organizaron todos los genotipos de las muestras, para establecer las frecuencias allicas y genotpicas dentro de la pobla Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License
cin Zacatecana. Comparando las frecuencias allicas obtenidas de este estudio y las reportadas en el Manual de Identiler (realizado con una muestra de 290 Hispanos radicados en Estados Unidos), a la par se compararon las frecuencias reportadas en un estudio de la poblacin mestiza del noroeste del pas y las obtenidas del manual de Identiler, realizando de igual manera una comparacin entre las frecuencias obtenidas de la poblacin Zacatecana y las reportadas en el estudio de la poblacin mestiza encontrando resultados interesantes que se encuentran reportados en conjunto en la Tabla 6. Al analizar esta tabla de comparaciones se observa para los diferentes marcadores analizados que en: CSF1P0 el alelo 15 solo se encontr en el estudio de los hispanos. D2S13338 este marcador no fue analizado para la poblacin mestiza, pero si para los hispanos y los zacatecanos (reportando los alelos 15 y 28 para esta ltima). D3S1358 en la base de hispanos el alelo 20 est reportado sin detectarlo en la poblacin zacatecana. D5S818 para la poblacin zacatecana y mestiza los alelos 16 y 17 no se presentaron, pero en el grupo de hispanos analizados si se reportan. D7S820 en los hispanos los alelos 9.1 y 15 no se reportan, coincidiendo con la poblacin zacatecana aadindose el alelo 6, en la poblacin mestiza los alelos ausentes son 6 y 15. D8S1179 en los hispanos los alelos 18 y 19 no se detectaron, en la poblacin zacatecana no se detectaron los alelos 17, 18 y 19, la poblacin mestiza coincidi con la ausencia de estos alelos sumndose el alelo 9. D13S317 tanto en hispanos como en mestizos no se encontr el alelo 15 pero si se en la poblacin zacatecana. D16S539 las tres poblaciones estudiadas no presentaron los alelos 5 y 15.
11
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
D18S51 tanto en hispanos y mestizos no se encontraron los alelos: 7, 9, 10.2, 13.2 y 14.2 sumndose el alelo 23 y 25 para la poblacin mestiza, y en los zacatecanos no se encontraron los alelos 7, 10.2, 13.2, 14.2, 23 y 25. D19S433 en mestizos este marcador no fue analizado, en hispanos y zacatecanos no presentaron los alelos 17.2 y 18.2, el alelo 10 tampoco se encontr en hispanos, los alelos 9, 11.2, y 17 se sumaron a los alelos ausentes para los zacatecanos. D21S11 los alelos ausentes que coinciden en los tres estudios son: 24, 24.3, 25, 29.3, 34, 34.1, 35.1, 35.2, 36, 37 y 38. Para la poblacin de Zacatecas y poblacin mestiza los alelos faltantes son: 25.2, 26 y 35 el estudio en los hispanos no se encontr el alelo 28.2 mientras que para las otras poblaciones si se detect. En la poblacin mestiza el alelo 33 no estuvo presente dentro del estudio mientras que en la poblacin zacatecana e hispana si se detect. FGA tanto para los hispanos, zacatecanos y la poblacin mestiza comparten la ausencia de los alelos: 16, 17.2, 18.2, 19.2, 20.2, 22.3 y 43.2. Entre la poblacin zacatecana y la poblacin mestiza comparten por ausencia los alelos: 21.2, 22.2, 24.2 y 30.2. Los hispanos y la poblacin mestiza no presentaron el alelo 29, la poblacin zacatecana e hispanos no presentan el alelo 30. En el estudio de los hispanos no hay dato para el alelo16.1, para la poblacin zacatecana no se encontraron los alelos 23.2 y 32.2. TH01 los alelos que comparten los tres estudios por la ausencia de stos son: 4, 11 y 13.3, el alelo que no est presente en hispanos y zacatecanos es el 8.3, los zacatecanos y mestizos no presentaron el alelo 5. TPOX en hispanos el alelo 13 no est presente y en la mestiza el alelo 7. vWA en los 3 estudios no se presentaron los alelos: 12, 13, 22, 23, y 24, el alelo 21 no se encontr en la poblacin zacatecana y mestiza, el alelo 11 y
20 no se reportan en la poblacin mestiza mientras que en hispanos y zacatecanos si se detect. Realizando una comparacin entre las frecuencias obtenidas del manual de Identiler y las obtenidas mediante el anlisis de la poblacin Zacatecana el promedio de la diferencia de las frecuencias es de 0.98% (en una escala del 1 al 100, siendo mnima), al comparar las frecuencias de la poblacin mestiza con las obtenidas del manual de Identiler el promedio de la diferencia de las frecuencias es de 1.82%, y nalmente al comparar las frecuencias obtenidas de la poblacin Zacatecana y las de la poblacin mestiza el promedio de las diferencias de las frecuencias es de 1.87%. La diferencia entre las frecuencias encontradas es mnima, existe mayor diferencia entre los datos obtenidos de la poblacin mestiza y la poblacin zacatecana, la diferencia de las frecuencias entre la poblacin zacatecana y los datos obtenidos de los hispanos es 50% menor que los datos de la poblacin mestiza y la hispana. Los datos encontrados en este estudio se asemejan ms a los obtenidos de los hispanos (reportados en el manual de Identiler), encontrando algunos de los alelos entre la poblacin zacatecana que no se reportaron entre los hispanos. La Probabilidad de Coincidencia obtenida mediante este anlisis es signicativamente mayor que el registrado por el anlisis de las muestras de los hispanos. Mientras que para la poblacin Zacatecana es de 1/6.7965-18, proporcionando una probabilidad de coincidencia de 1.471217 (superando ampliamente la poblacin a nivel mundial que es de 7,000 millones de acuerdo con datos de la ONU) para los datos obtenidos de los hispanos la probabilidad de coincidencia es de 1/1.31x1017, haciendo una diferencia de 0.1612x1017, entre los datos obtenidos de la poblacin Zacatecana y de los hispanos.
12
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
Si bien no existen otros datos para cotejar los resultados obtenidos para Chi-Cuadrada y poder observar las uctuaciones de los datos obtenidos mediante este anlisis lo que si podemos recalcar es que las frecuencias obtenidas mediante la plantilla de Excel de Microsoft Word y las obtenidas de manera manual son casi idnticas, los datos que se analizaron manualmente se opto por dejar cuatro dgitos y no presentarlas en forma de porcentaje en cambio, las obtenidas mediante la plantilla de Excel son presentadas en forma de porcentaje y redondeando las cifras obtenidos a dos dgitos. El uso de la plantilla de Excel proporcionada por la pgina de Internet de la compaa de Promega (antes citada) ayud a proporcionar un anlisis ms rpido debido a la gran cantidad de genotipos por analizar de las diferentes muestras ayudando as a disminuir el tiempo de anlisis de stas y a obtener los parmetros estadsticos que facilitan el anlisis de muestras forenses como los son: Probabilidad de Coincidencia, Poder de Discriminacin, Contenido de ndice Polimrco, Poder de Exclusin de Paternidad y Tpico ndice de Paternidad, (Tabla 4 y Tabla 5). Estos parmetros deben ser obtenidos ya que en casos de probabilidad de coincidencia nos permiten saber que tan probable es que dos personas tomadas al azar pudieran tener el mismo genotipo. El poder de exclusin es el promedio de todas las posibles combinaciones de madre e hijo para la identicacin de un padre alegado que ser excluido de la prueba de paternidad antes de ser sometido al anlisis de ADN. El ndice de paternidad nos indica la probabilidad que tiene el presunto padre de ser el padre biolgico del hijo con respecto a una hombre tomado al azar. El contenido de ndice polimrco es similar a los clculos de heterocigosidad proporcionando la informacin para cada marcador en la poblacin de acuerdo a las frecuencias de los alelos. Los datos obtenidos para Homocigotos y Heterocigotos proporcionan el porcentaje de stos que estn presentes en el tamao de muestra analizada aprovechndose para obser Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License
var si la poblacin se encuentra inclinada hacia una mayor cantidad de homocigotos o heterocigotos. La cantidad de Heterocigotos Observada, Heterocigotos Esperados y el Error Estndar son datos que son necesarios obtener y analizar si se quiere evaluar el Equilibrio de HardyWeinberg. Una vez que se analizaron las frecuencias de la poblacin Zacatecana tambin se observa si la poblacin de Zacatecas se encuentra en equilibrio de H-W, cuyo nico propsito de este anlisis era establecer una Base de Datos para la poblacin de Zacatecas que pudiera ser empleada en el anlisis Forense.
En la prctica forense
Caso1. Vnculo biolgico
Problema: Se presenta un caso donde el Problema de Estudio es Establecer si existe Vnculo Biolgico entre dos personas del sexo Femenino(X,X) que presuman tener parentesco con uno de los cadveres procedentes de un accidente tipo choque entre dos vehculos cuya identicacin no poda realizarse mediante el reconocimiento de los cuerpos por los familiares debido a que despus del suceso los vehculos se incendiaron resultando difcil su reconocimiento optando entonces realizar un estudio gentico entre los tres cadveres obtenidos del accidente. Material de estudio: Las muestras de referencia (sangre en papel FTA, cabello e hisopados bucales) son recibidas junto con tres muestras de tejido biolgico pertenecientes a los cadveres identicados como cadver 1(uno), 2(dos) y 3(tres). Anlisis estadstico: Para realizar los clculos estadsticos de vnculo biolgico se emple la Tabla 6 de frecuencias allicas obtenida mediante el estudio de la Poblacin Zacatecana. Los perles obtenidos
13
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
14
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
17 18 19 20 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 6 7 8 9 9.1 10 11 12 13 14 8 9 10 11 12 13 14 15
16.03 8.97 1.03 0.34 6.72 0.69 5.17 5.17 39.14 29.31 12.59 0.69 0.18 0.17 0.17 0.17 1.72 11.72 6.21 * 27.41 28.79 20.17 3.45 0.34 0.34 0.34 8.45 5.86 12.07 32.93 26.21 10.86
12.55 11.07 0.18 * 5.17 0.55 4.24 6.27 48.89 26.01 8.30 0.37 0.18 * * * 2.03 9.96 5.72 * 24.35 32.29 20.48 4.43 0.74 1.29 1.11 14.39 5.72 9.23 29.89 28.23 8.12
3.48 2.10 0.85 0.34 D5S818 1.55 0.14 0.93 1.10 9.75 3.30 4.29 0.32 0.00 0.17 0.17 D7S820 0.17 0.31 1.76 0.49 0 3.06 3.50 0.31 0.98 0.40 D8S1179 0.95 0.77 5.94 0.14 2.84 3.04 2.02 2.74
14.69 11.54 0.35 * 7.69 0.35 4.55 6.29 38.81 29.37 11.54 1.05 0.35 0 0 0 1.4 8.39 8.74 0.35 29.02 27.97 19.93 3.85 0.35 0.7 0 12.59 7.34 11.19 32.52 22.38 10.84
1.34 2.57 0.68 0.34 0.97 0.34 0.62 1.12 0.33 0.06 1.05 0.36 0.17 0.17 0.17 0.17 0.32 3.33 2.53 0 1.61 0.82 0.24 0.4 0.01 0.36 0.34 4.14 1.48 0.88 0.41 3.83 0.02
2.14 0.47 0.17 0.00 2.52 0.20 0.31 0.02 10.08 3.36 3.24 0.68 0.17 0.00 0.00 0.00 0.63 1.57 3.02 0.35 4.67 4.32 0.55 0.58 0.39 0.59 1.11 1.80 1.62 1.96 2.63 5.85 2.72
15
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
16 17 8 9 10 11 12 13 14 15 8 9 10 11 12 13 14 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
2.41 0.52 9.66 21.72 9.14 23.1 20.86 10.17 5.34 * 1.72 9.31 15.69 30.17 29.48 11.55 2.07 * 0.52 1.21 10.34 14.48 15.52 16.55 11.72 14.14 6.72 4.14 2.24 1.03 0.52 0.52 0.17 0.17
2.03 * 7.20 21.03 9.41 22.69 21.03 11.07 7.20 0.37 1.48 11.99 18.45 26.57 27.49 11.99 2.03 0.18 1.11 0.55 11.99 10.89 18.08 15.31 8.67 14.58 8.12 4.80 3.14 0.92 1.11 * 0.55 *
0.38 0.52 D13S317 2.46 0.69 0.27 0.41 0.17 0.90 1.86 0.37 D16S539 0.24 2.68 2.76 3.60 1.99 0.44 0.04 D18S51 0.00 0.59 0.66 1.65 3.59 2.56 1.24 3.05 0.44 1.40 0.66 0.90 0.11 0.59 0.52 0.38 0.17
2.45 0 9.09 23.08 6.99 19.58 25.17 12.24 3.85 0 0.35 9.79 19.58 31.82 26.92 9.79 1.75 0 1.05 2.1 9.09 11.19 17.13 16.78 12.24 15.38 8.04 1.75 3.5 0.7 0.7 0 0.35 0
0.04 0.52 0.57 1.36 2.15 3.52 4.31 2.07 1.49 0 1.37 0.48 3.89 1.65 2.56 1.76 0.32 0 0.53 0.89 1.25 3.29 1.61 0.23 0.52 1.24 1.32 2.39 1.26 0.33 0.18 0.52 0.18 0.17
0.42 0.00 1.89 2.05 2.42 3.11 4.14 1.17 3.35 0.37 1.13 2.20 1.13 5.25 0.57 2.20 0.28 0.18 0.06 1.55 2.90 0.30 0.95 1.47 3.57 0.80 0.08 3.05 0.36 0.22 0.41 0.00 0.20 0.00
16
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
D19S433 9 10 11 11.2 12 12.2 13 13.2 14 14.2 15 15.2 16 16.2 17 24.2 25.2 26 27 28 28.2 29 29.2 30 30.2 31 31.2 32 32.2 33 33.2 34.2 35 0.17 * 0.52 0.17 6.21 1.9 16.03 8.62 31.72 5 13.45 8.79 4.31 2.93 0.17 0.17 0.17 0.17 1.21 9.14 * 21.21 0.52 29.31 2.93 6.72 8.62 1.55 12.93 * 4.14 0.86 0.34 * 0.18 0.92 * 5.35 1.66 20.48 8.49 27.68 5.72 15.87 7.56 3.51 2.58 * 0.37 * * 1.11 7.75 0.18 20.85 0.18 27.86 0.74 7.93 10.15 1.66 15.87 0.37 4.43 0.55 * 0.17 0.18 0.40 0.17 0.86 0.24 4.45 0.13 4.04 0.72 2.42 1.23 0.80 0.35 0.17 D21S11 0.20 0.17 0.17 0.10 1.39 0.18 0.36 0.34 1.45 2.19 1.21 1.53 0.11 2.94 0.37 0.29 0.31 0.34 0 0 0 0.35 10.49 0.35 20.98 0.7 27.97 3.15 6.64 11.54 0.7 12.94 0 3.85 0.35 0 0.17 0.17 0.17 0.86 1.35 0.35 0.23 0.18 1.34 0.22 0.08 2.92 0.85 0.01 0 0.29 0.51 0.34 0.37 0.00 0.00 0.76 2.74 0.17 0.13 0.52 0.11 2.41 1.29 1.39 0.96 2.93 0.37 0.58 0.20 0.00 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0.17 0 0.52 0.17 6.21 1.9 16.03 8.62 31.72 5 13.45 8.79 4.31 2.93 0.17 0.00 0.18 0.92 0.00 5.35 1.66 20.48 8.49 27.68 5.72 15.87 7.56 3.51 2.58 0.00
17
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
FGA 17 18 19 20 21 21.2 22 22.2 23 23.2 24 24.2 25 26 26.2 27 28 29 30 31.2 5 6 7 8 8.3 9 9.3 10 6 7 8 9 10 11 0.17 0.52 7.07 7.41 14.66 0.17 17.24 0.34 11.9 0.86 15.34 0.17 14.14 6.9 * 2.41 0.69 * * * 0.17 22.76 33.62 8.45 * 14.14 20.34 0.52 0.34 0.34 49.66 7.24 4.66 27.24 * 0.37 9.23 6.64 11.81 * 12.73 * 13.10 * 17.34 * 14.02 9.78 0.18 3.69 0.37 0.37 * 0.37 * 24.91 33.95 9.59 * 11.81 18.63 1.11 0.92 0.55 50.55 7.38 6.64 23.80 0.17 0.15 2.16 0.77 2.85 0.17 4.51 0.34 1.20 0.86 2.00 0.17 0.12 2.88 0.18 1.28 0.32 0.37 0.00 0.37 TH01 0.17 2.15 0.33 1.14 0.00 2.33 1.71 0.59 TPOX 0.58 0.21 0.89 0.14 1.98 3.44 0.35 0 49.3 8.74 2.8 31.12 0.01 0.34 0.36 1.5 1.86 3.88 0.57 0.55 1.25 1.36 3.84 7.32 0 28.67 30.77 10.49 9.44 0.0000 19.23 1.4 0.17 5.91 2.85 2.04 9.44 14.14 1.11 0.88 0.00 3.76 3.18 0.90 9.44 11.81 0.60 0.29 0 1.05 8.74 10.49 11.54 0 11.89 0 15.73 0.35 17.48 0 12.24 7.34 0 2.1 0.7 0 0.35 0 0.17 0.53 1.67 3.08 3.12 0.17 5.35 0.34 3.83 0.51 2.14 0.17 1.9 0.44 0 0.31 0.01 0 0.35 0 0.00 0.68 0.49 3.85 0.27 0.00 0.84 0.00 2.63 0.35 0.14 0.00 1.78 2.44 0.18 1.59 0.33 0.37 0.35 0.37
18
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
12 13 11 14 15 16 17 18 19 20 21
9.96 0.18 0.18 7.38 7.01 34.32 28.60 16.42 5.35 0.55 *
0.56 0.18 vWA 0.01 0.48 2.99 0.01 7.05 2.03 1.72 0.83 0.17 0.98 Diferencia de Frecuencias Identiler vs B.D.Z
3.18 0.35 0.17 1.84 0.49 2.49 8.17 4.81 1.48 1.38 0.17 1.820140187
2.62 0.17 0.18 1.36 3.48 2.50 1.12 2.78 0.24 0.55 0.00 1.869725595 Diferencia de Frecuencias B.D.Z vs PobMestiza
Diferencia Promedio de Frecuencias Marcador Gentico U.S. Hispanos (n=290) Zacatecanos (n=271)
19
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
de las muestras analizadas se reportan en la Tabla 7 (anexa al nal de la bibliografa). De manera simultnea se analizaron controles (+) y (-). Posteriormente, se establece el ndice de parentesco de acuerdo al genotipo presentado en las muestras. Resultados e interpretacin: El ndice de parentesco es calculado mediante la multiplicacin de todos los ndices de parentesco individuales de cada locus y dividiendo uno entre el valor obtenido de los ndices de parentesco acumulado. Tabla 8. Relacin Muestras ndice de Parentesco Probabilidad de Parentesco.
Relacin de muestras VB1 y C1 VB1 y C2 VB1 y C3 VB2 y C3 Indice de parentesco 1.25X10-4 1.5999 113608.6819 53849.14 Probabilidad de parentesco 0.012% 61.52% 99.99% 99.99%
Resultando una probabilidad de parentesco entre estas dos muestras mayor al 99.9999% y el valor-p >0.0001 (valor de signicancia), las muestras restantes fueron analizadas como la anterior y obteniendo los valores de igual manera, concentrando los resultados de los clculos en la Tabla 8.
Al cotejar las muestras VB1 y C3 el ndice de parentesco de todos los locus es 8.802144x10 -6. El ndice de parentesco para estas dos muestras se obtuvo de:
Donde p q
20
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
: Aplicando las frmulas anteriores para los perles obtenidos de las muestras analizadas se obtuvieron los datos contenidos en la Tabla 10. Tabla 10. Relacin Muestras ndice de Coincidencia Probabilidad de Coincidencia.
Muestras Cabello y PB Cabello y SB Indice de coincidencia 2.6992x1010 2.6992x1010 Probabilidad de coincidencia <99.9999% <99.9999%
El ndice de coincidencia es calculado mediante la multiplicacin de los todos los ndices de coincidencia individuales de cada locus y dividiendo uno entre el valor obtenido de los ndices de coincidencia acumulado. Al cotejar las muestras Cabello y PB el ndice de coincidencia de todos los locus es 3.7048x10 -11, el
Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License
Debido a que los ndices de coincidencia solo se calculan cuando son encontrados dos perles genticos iguales, los ndices de coincidencia resultan
21
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
ser idnticos para las muestras obtenidas como: PB y SB comparadas con la muestra de referencia obtenida del adolescente obtenida de Cabello, con un ndice de coincidencia entre estas muestras de 2.6999X1010 con una probabilidad de coincidencia mayor al 99.9999% entre estas muestras y un valor-p >0.0001, los valores obtenidos del anlisis de estas muestra se encuentran concentrados en la Tabla 10.
Conclusiones
1. Se colectaron 271 muestras de los diferentes municipios del estado de Zacatecas en tarjetas FTA (64.21%) e hisopados bucales (37.79%), de la muestras el 62.73% de ellas fueron obtenidas de personas del sexo masculino y el 37.27% restante del sexo femenino. 2. Tratando de cubrir todos los requisitos para la formulacin de la base de datos y la extraccin de ADN de las diferentes muestras usando la resina Chelex100, la calidad y cantidad de ADN fue satisfactoria durante la amplicacin. Debido a la sensibilidad de la extraccin de ADN con la tarjeta FTA, no es necesario realizar cuanticacin de ADN ahorrando tiempo y costos para la obtencin de perles genticos. 3. Se evaluaron las frecuencias allicas obtenidas con esta base de datos comparando con otros estudios como: las frecuencias allicas de la poblacin mestiza del noroeste de Mxico, la base de datos de los hispanos contenida en el manual de Identiler con la que trabajan actualmente los laboratorios de Gentica Forense cuyas diferencias pueden deberse: al nmero de individuos sometidos a estudio, mestizaje de poblacin y a la informacin gentica de generaciones anteriores. 4. Con este estudio podemos asegurar que las frecuencias allicas obtenidas son exclusivamente de la poblacin Zacatecana siguiendo las re-
comendaciones que proporcionan: autores as como bibliografas, para la creacin de bases de datos en las que describen que para la obtencin de datos conables, los individuos que participen en ello debern preceder de al menos dos generaciones anteriores originarias del lugar de inters para el estudio. Caracterstica que se sigui de manera estricta para el cumplimiento de datos exactos, rechazndose aquellas muestras cuyos requisitos no se cumplan en su totalidad. 5. Se logr obtener la base de datos de la Poblacin Zacatecana, as como las frecuencias allicas y genotpicas de la poblacin, sumndose tambin otros parmetros de inters como: PM (permite saber que tan probable es encontrar dos genotipos que tomados al azar sean iguales), PD (indica la probabilidad de que dos individuos no relacionados y tomados al azar puedan ser diferenciados genticamente), PIC (proporciona informacin sobre la heterocigosidad de cada marcador de acuerdo a la informacin obtenida de las frecuencias), TIP (el ndice de paternidad nos indica la probabilidad que tiene el presunto padre de ser el padre biolgico del hijo con respecto a una hombre tomado al azar), H(obs), H(esp) (las heterocigosidades muestran el porcentaje de heterocigotos que conforman la poblacin y los datos esperados en el estudio hacindose necesarios para evaluar el equilibrio de Hardy-Weinberg), H-W (el equilibrio de Hardy-Weinberg se analiz para observar el comportamiento de la poblacin en estudio y saber si se encuentra en equilibrio o puede estar siendo afectada por algn factor como migracin, mutacin, seleccin natural deriva gentica), X2 (permite calibrar las diferencias entre el nmero de individuos observados y los esperados contrastando dos hiptesis mutuamente excluyentes) realizando estos otros parmetros para complementar el anlisis de este estudio. 6. Al llevar a cabo el anlisis de la cantidad de Homocigotismo esperada y observada para calcular
Este artculo esta disponible en: www.archivosdemedicina.com
22
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol. 10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
el equilibrio de Hardy-Weinberg se obtuvo que en 11 de los 15 marcadores genticos como fueron: CSF1P0, D2S1338, D3S1358, D13S317, D16S539, TH01, TPOX, D18S51, D19S433, vWA, D21S11, el valor encontrado fue positivo indicndonos que existe un exceso de heterocigotos para los diferentes marcadores. Aplicando el Error Estndar (SE) para los datos obtenidos como cantidad de Heterocigotos Esperados para los diferentes marcadores la cantidad de marcadores con exceso de heterocigotos se redujo a un total de 8 marcadores genticos. 7. Al observar los datos anteriores se calcul el Test de Chi-Cuadrada X2 que nos permite realizar una calibracin de las diferencias entre el nmero de individuos esperados y observados y contrastar dos hiptesis las cuales son: H0: la poblacin del estado de Zacatecas se encuentra en equilibrio H-W. H1: la poblacin del estado de Zacatecas no est en equilibrio H-W.
Una vez observados los datos calculados para ChiCuadrada y analizando los datos para los grados de libertad en cada marcador analizado como en el caso de CSF1P0 donde X2 es igual a 2.55 y los grados de libertad para este marcador es 6. El dato para X2 es 12.59 con un valor crtico del 5 %, debido a que el valor crtico es mayor que el de ChiCuadrada nos hace concluir que no hay evidencia suciente para rechazar la hiptesis H0 de que la poblacin de Zacatecas esta en equilibrio de HardyWeinberg para el marcador CSF1P0. Aplicando estos criterios se analizaron de igual manera todos los marcadores restantes llegando a determinar que la poblacin del estado de Zacatecas no se encuentra en equilibrio para dos de los marcadores analizados siendo estos: D21338 y D16S539. Encontrndose en equilibrio para los 13 marcadores restantes, obteniendo de manera exitosa la base de datos de la Poblacin Zacatecana.
Under License of Creative Commons Attribution 3.0 License
8. Al analizar las muestras obtenidas para el Caso 1 sobre el posible Vnculo Biolgico entre las muestras obtenidas de los Vnculos Biolgico 1(uno) y 2(dos) y las obtenidas de los cadveres 1(uno), 2(dos) y 3(tres) se obtuvo el perl gentico y mediante el uso de la base de datos se logr obtener los ndices de parentesco y la probabilidad de parentesco entre las muestras, para determinar la existencia de Parentesco entre las muestras VB1 y C3, as como tambin entre las muestras VB2 y C3 con un ndice de parentesco de 99.999% y el valor-p >0.0001 (valor de signicancia). Estos valores estadsticos indican que entre estas muestras SI EXISTE VNCULO BIOLGICO. 9. Al analizar las muestras obtenidas para el Caso 2 sobre el ndice de Coincidencia entre las muestras obtenidas del adolescente, las muestras obtenidas de las prendas de vestir y del objeto punzo cortante se obtuvo el perl gentico y mediante el uso de la base de datos se logr establecer los ndices de coincidencia y la probabilidad de coincidencia entre las muestras, para determinar el ndice de coincidencia entre las muestras Cabello, PB y SB el perl gentico que se encontr es el mismo con un ndice de coincidencia de 2.6999x1010 entre estas, con una probabilidad de coincidencia mayor al 99.9999% y p>0.0001 (valor de signicancia). Estos valores nos indican que estas muestras SON PROCEDENTES DE LA MISMA PERSONA. 11. El uso de la base de datos elaborada se emple de manera exitosa brindndonos unos excelentes resultados para la aplicacin en la prctica forense.
Agradecimientos
Este trabajo fue realizado en el Laboratorio de Gentica Forense de la Procuradura General de Justicia del Estado de Zacatecas y apoyado en su conjunto con la Procuradura General de la Repblica.
23
ARCHIVOS DE MEDICINA
2014
Vol.10 No. 1:1 doi: 10.3823/1209
Referencias
1. Aranguren-Mndez, J.A., Romn-Bravo, R., Isea, W., Villasmil, Y., Jordana, J. Los microsatlites (STRs), marcadores moleculares de ADN por excelencia para programas de conservacin: una revisin. Arch. Latinoam. Prod. Anim. 2005; 1 (13): 30-42. 2. Biosystem Applied Manual de Usuario [Protocolo de usuario]. Genetic Analyzers 3130/3130xl. 3. Butler, J.M. Forensic DNA Typing /Biology, Technology, and Genetics of STR markers [Seccin del libro] = Combined DNA Index System// Forensic DNA Typing /Biology, Technology, and Genetics of STR markers. Elselvier, 2005. 4. Butler, J.M. Forensic DNA Typing/Biology, Technology, and Genetics of STR markers [Seccin del libro] // Forensic DNA Typing/Biology, Technology, and Genetics of STR markers. Elselvier, 2005. 5. Butler, J.M. Forensic DNA Typing/Biology, Technology, and Genetics of STR markers [Seccin del libro] = The Polymerase Chain Reaction (DNA Amplication) // Forensic DNA Typing / Biology, Technology, and Genetics of STR markers. Elselvier, 2005. 6. Butler, J.M. DNA Biology Review, in forensic DNA Typing/ Biology, Technology, and Genetics of STR markers [Seccin del libro]// Forensic DNA typing/ aut. libro Butler John M. ed. USA. Elselvier, 2005. 7. Cano Fernandez, J.A., Arce, A.B. http://www.iuisi.es/15_ boletines/15_2006/doc051-2006.pdf [En lnea] = Gentica Forense: Crimen e Identidad // http://www.iuisi.es/15_ boletines/15_2006/doc051-2006.pdf. [Consultado 9 de Octubre de 2012]. http://www.iuisi.es/15_boletines/15_2006/ doc051-2006.pdf. Instituto Universitario de Investigacin sobre Seguridad Interior. 8. Entrala, C. Tcnicas de Anlisis del ADN en Gentica Forense [En lnea] = Laboratorio de ADN forense, Depto. de Medicina Legal, Universidad de Granada Espaa// Tcnicas de Anlisis del ADN en Gentica Forense. - 2000. [Consultado 9 de Octubre de 2012]. http://www.ugr.es/~eianez/Biotecnologia/forensetec. htm. 9. Gerard, J., Reynolds Grabowski, S. Principios de Anatoma y Fisiologa [Seccin del libro]= Aparato Reproductor// Principios de Anatoma y Fisiologa / ed. Gonzlez Jorge Alberto Ruz. Mxico: Oxford, 2002. 10. Gonzlez Andrade, F. Anlisis Molecular de Variacin de Polimorsmos STR autosmicos y de cromosoma Y en grupos tnicos de Ecuador con aplicacin Mdico Forense. = Anlisis Molecular de Variacin de Polimorsmos STR autosmicos y de cromosoma Y en grupos tnicos de Ecuador con aplicacin Mdico Forense. Zaragoza: [s.n.], 2006. 11. Guradado Estrada, M. et al. Diversidad gentica en la poblacin mexicana: utilizacion de marcadores de ADN. [Publicacin peridica]. Mediagraphic ARtemisa. 2008; 3 (71): 162-174. 12. McClean, Ph. Mendelian Genetics [En lnea] = Mendelian Genetics// Mendelian Genetics. [Consultado 29 de septiembre de 2009]. http://www.ndsu.edu/pubweb/~mcclean/plsc431/ mendel/mendel4.htm. 13. Norah Rudin, K.I. The Scientic Basis of DNA Typing [Seccin del libro]= The Scientic Basis of DNA Typing// An introduccion to forensic DNA analysis/ aut. libro Norah Rudin K. I. United States od America: McGraw-Hill, 2002.
14. Novagen. I.a.a.o. M.K Proteinasa K [Protocolo de uso] = Proteinasa K// Proteinasa K Novagen.Darmstadt [s.n.], 2005. 15. Promega. Promega Proteinasa K [Protocolo de Uso]// Proteinasa K Promega. 2008. 16. Quintero Ramos, A. et al. Uso de marcadores polimorocos= Uso de marcadores polomrcos. 2005. 17. Rodriguez Carlin, C. et al. Gentica Forense [Publicacin peridica]// Fuente. Mxico, 2010. 18. Watson, J.D. et al. Biologa Molecular del Gen [Publicacin peridica] = Tcnicas de Biologa Molecular. Panamericana, 2005. 19. Wing Kam, F., Yue-qing, H. Statistical DNA Fonesics, Theory, Methods and Computation Statistics in Practice [Seccin del libro] // Statistical DNA Fonesics, Theory, Methods and Computation Statistics in Practice. Ed. Wiley. 2008 .
http://medicalia.org.es/ Los mdicos disponen de una red social para intercambiar experiencias clnicas, comentar casos y compartir conocimiento. Tambin proporciona acceso gratuto a numerosas publicaciones. nase ahora!
24