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Desarrolle una metodologa de trabajo para la extraccin de la bacteria, (campo y en el LAB), la duracin y las posibles pruebas a realizar.

En primer trmino, se debe aclarar que Alcaligenes eutrophus dentro de su taxonoma presenta varios sinnimos que son Ralstonia eutropha, Wautersia eutropha, Hydrogenomonas eutropha, y Cupriavidus necator. Esta especie en particular adems, deriva del dominio Bacteria y de las proteobacterias. El poli--hidroxi-butirato (PHB) es un termoplstico biodegradable y biocompatible producido por diversos microorganismos. Puede ser empleado para producir fibras, hojas e incluso bolsas plsticas y botellas. Alcaligenes eutrophus H16 es una bacteria auttrofa facultativa de rpido crecimiento en un medio cultivo general. Para sintetizar el PHB, esta bacteria requiere un medio de cultivo con condiciones anaerbicas con una fuente de CO2 y N. Este compuesto puede ser extrado con una solucin de hipoclorito de sodio, lo cual implica un procedimiento altamente degradante y produce una disminucin del peso molecular de los grnulos aislados, posiblemente debido a la remocin de la pared externa (Kumar & Prabakaran, 2005). Morfologa de los polihidroxialcanoatos Los polmeros de PHA suelen acumularse en grnulos esfricos discretos dentro de las clulas citoplasmtica de Alcaligenes eutropha, lo cuales alanzan dimetros de 100-800 nm Sntesis de PHB mediante Alcaligenes eutrophus Considerando que los PHB son insolubles en agua, los polmeros se acumulan en grnulos intracelulares dentro de las clulas. Es ventajoso para las bacterias que almacenen un exceso de nutrientes dentro de sus clulas, ya que sus capacidades fisiolgicas no se ven afectadas por este factor. Debido a la polimerizacin de molculas intermedias solubles en insolubles, la clula no sufre alteraciones en medio osmtico. Por ende, la prdida de estos
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compuestos fuera de la clula se previene y los sumideros de nutrientes se mantienen disponibles mediante un mantenimiento a bajo costo. Con el fin de hacer el proceso econmicamente ms atractivo, muchos objetivos deben ser abarcados de manera simultnea. Diversas cepas microbianas recombinantes se estn desarrollando para lograr tanto una elevada tasa de conversin de sustrato y un empaquetamiento completo de los grnulos de polihidroxi-alcanoatos en la clula husped. Un proceso de fermentacin ms eficiente, mayor recuperacin/purificacin y el uso de sustratos poco costosos pueden reducir sustancialmente los costos de produccin. Adicionalmente tambin es conveniente incrementar las propiedades fsicas de los polihidroxialcanoatos (Verlinden et al, 2007). Los investigadores han desarrollado plsticos biodegradables, tales como los polihidroxialcanoatos, que son compuestos extrados de clulas bacterianas, los cuales muestran propiedades similares al polipropileno. Las ventajas de estos materiales respecto a los plsticos petroqumicos es que son renovables, naturales y biocompatibles. Rasltonia eutropha es la bacteria ms estudiada a nivel bsico y aplicado respecto a la sntesis de polihidroxialcanoatos. Esta especie tiene la capacidad de acumular ms de un 80% del peso seco celular mediante el uso de una serie de fuente de carbono que incluyen carbohidratos, alcoholes y cidos orgnicos. Esta especie es utilizada debido a que crece mediante fuentes de carbono baratas, lo cual es un aspecto importante a escala industrial. Dos razones por las cuales se selecciona esta especie son: 1. La elevada capacidad de produccin del polmero por parte de la bacteria. 2. La fcil separacin del polmero de las clulas. La biosntesis de PHB ocurre nicamente cuando el microorganismo crece aerbicamente y bajo condiciones de oxgeno ilimitadas. El suministro de oxgeno

puede ser un paso controlado durante el escalamiento de sistemas de biosntesis aerbicos. El suministro de oxgeno vara de acuerdo con el ndice de transferencia de oxgeno, la velocidad de agitacin, el proceso de mezclado, entre otros. Por otra parte, la captacin de oxgeno se ve limitada por el incremento de la viscosidad, resultado de las propiedades polimricas (Binti, 2009). En trminos generales, la bacteria Cupriavidus nector puede acumular polihidroxialcanoatos (PHA) bajo condiciones de cultivo poco favorables de nutrientes limitantes en presencia de un exceso de fuente de carbono. La produccin de PHA por parte de esta especie bacteriana puede ocurrir ya sea mediante fermentacin continua o por alimentacin por lotes (Kim, 2008). Mtodo de la biosntesis de PHB mediante Cupriavidus necator: Cepa bacteriana: Cupriavidus necator es capaz de utilizar fuentes de carbono derivadas de plantas para producir PHB. La limitacin que presentan estas bacterias es que usualmente albergan la maquinaria nativa para la degradacin del polmero y tambin es difcil de lisar, causando que la recuperacin de PHB sea un proceso complicado. Proceso de fermentacin: Dependiendo de las condiciones de cultivo para favorecer la acumulacin de PHB, C. necator slo requiere de un medio de cultivo con nutrientes esenciales tales como nitrgeno, oxgeno y la presencia de un fuente de carbono en exceso para lograr la sntesis eficiente de PHB (Chee et al, 2010).

Literatura citada Binti, A. 2009. Scale up of biopolymer (PHB) fermentation from 500 mL shake flasks to 2 L stirred tank fermentor. Tesis para optar por el grado de

Bachiller en Ingeniera Qumica con nfasis en Biotecnologa. Pahang, Malaysia, Universiti Malaysia Pahang. 63 p. Chee, J; Yoga, S; Lau, N; Ling, S; Abed, R & Sudesh, K. 2010. Bacterially Produced Polyhydroxyalkanoate (PHA): Converting Renewable Resources into Bioplastics. Technology and Education Topics in Applied Microbiology and Microbial Biotechnology. 32: 1395-1404. Kim, Y. 2008. Biosynthesis and characterization of polyhydroxyalkanoates by a locally isolated Chromobacterium sp. USM2. Kumar, S & Prabakaran, G. 2005. Production of PHB (bioplastics) using bioeffluent as substrate by Alcaligens eutrophus. Indian Journal of

Biotechnology. 5: 76-79. Verlinden, R; Hill, D; Kenward, M; Williams, C & Radecka, I. 2007. Bacterial synthesis of biodegradable polyhydroxyalkanoates. Journal of Applied Microbiology. 102: 1437-1449.