DOBRODOLI

DANAS

LUMINISCENCIJA

Prof. dr Mirjana Medenica

EMISIONA SPEKTROSKOPIJA
ta prouava?

Emitovano zraenje nastalo povratkom elektrona iz pobuenog u osnovno energetsko stanje

Molekulska emisija
E E2 E1 E0

Jablonski dijagram

http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/fluorescence/exciteemit/index.html

MOLEKULSKA EMISIONA SPEKTROSKOPIJA

LUMINISCENCIJA
Razliite energije mogu biti uzroci ekscitacije
elektrona

Emitovana energija moe se transformisati u sledee energije:

Svetlosnu LUMINISCENCIJA
Toplotnu ili Hemijsku

LUMINISCENCIJA
FOTOluminiscencija HEMIluminiscencija BIOluminiscencija TERMOluminiscencija ELEKTROluminiscencija TRIBOluminiscencija RADIOluminiscencija

FOTOLUMINISCENCIJA

FLUORESCENCIJA

FOSFORESCENCIJA

Javljaju se apsorpcijom svetlosti u UV I VIS oblasti

HEMILUMINISCENCIJA
uzrok hemijska reakcija

Rodamin u vodi

Eozin u vodi

Hlorofil u toluolu

BIOLUMINISCENCIJA (vrsta hemiluminiscencije)

Luminiscencija izazvana hemijskom reakcijom u ivom organizmu

TERMOLUMINISCENCIJA Pod uticajem toplote koja samo oslobaa energiju ELEKTROLUMINISCENCIJA Luminiscencija izazvana elektrinom energijom Televizijska slika kao katodna luminiscencija izazvana strujom elektrona Neonsko svetlo TRIBOLUMINISCENCIJA Mehanika energija je uzrok luminiscencije Kvarc RADIOLUMINISCENCIJA Luminiscencija uzrokovana nuklearnom radijacijom

FOTOLUMINISCENCIJA
E2 E1 E0
Fluorescencija Fosforescencija

FLUORESCENCIJA
Traje koliko i osvetljavanje
Vibraciona relaksacija Neradijaciono zraenje

VIS

UV

U MRAKU

Fluorescein pod UV lampom

PODELA
Prema talasnoj duini emitovane svetlosti:

Rezonantna Stoksova Anti-Stoksova Senzibilizovana

Sir George Stokes (1819 1903)

REZONANTNA FLUORESCENCIJA

h (aps.) = h (emit.)

(aps.) = (emit.)
Nema gubitka energije Javlja se kod gasova i kod para metala pod malim pritiskom Pare natrijuma apsorbuju i emituju 589 nm

h (aps.) > h (emit.) (aps.) < (emit.)

STOKSOVA FLUORESCENCIJA

Jedan deo apsorbovane energije se gubi u sistemu

ANTI-STOKSOVA FLUORESCENCIJA

h (aps.) < h (emit.)

(aps.) > (emit.)

Deava se na viim temperaturama, pa se jedan deo toplotne energije pretvara u svetlosnu

SENZIBILIZOVANA FLUORESCENCIJA

h
= 253,7 nm Pare ive Pare natrijuma

Hg + h = Hg Hg + Na = Na + Hg Na Na + h
= 589,6 nm

Eemitovana < Eapsorbovane

FOSFORESCENCIJA

The Discovery of Phosphorus by Hennig Brand in 1669 - painted by Joseph Wright

FOSFORESCENCIJA
Zadravanje elektrona u metastabilnom stanju

SKOKOVITO vraanje u osnovno stanje

Eemitovana < Eapsorbovane

Deje igrake

Vibraciona relaksacija
(neradijaciono zraenje)
10-11-10-14s

Meustanje

Apsorpcija
10-15s

Fluorescencija
10-7-10-9s

Fosforescencija

Kvantni prinos fluorescencije

Broj emitovanih fotona Broj apsorbovanih fotona

Zavisi od vrste molekula

identifikacija

Nosioci fluorescencije u molekulu su

FLUOROFORE

Nosioci apsorpcije u molekulu su

HROMOFORE

Koja jedinjenja poseduju fluoroforne grupe?

Jedinjenja sa nezasienim vezama, ali ne sva! Najee su to ciklini ugljovodonici ili kondenzovani heterociklusi

10

Piridin

Pirol

Furan

Tiofen

Hinolin

Emisioni spektar
Svaki prelaz praen je pojavom emisione trake u spektru

POLOAJ TRAKE u spektru zavisi od

prirode molekula, tj. od strukture Kod sloenih jedinjenja, fluorescentni i apsorpcioni spektar odnose se kao predmet i lik u ogledalu

11

12

Faktori koji utiu na fluorescenciju

Koncentracija uzorka Prisustvo drugih supstancija pH sredine Temperatura Priroda rastvaraa

IF = f(c)

IF = f(c)

Linearno

Nelinearno Gaenje

13

Priroda rastvaraa

Fluorescencija X u: 1) toluenu, 2) hloroformu, 3) acetonitrilu, 4) etanolu, 5) metanolu i 6) vodi

IF = f(T)

IF

IF = f(pH)

14

Anilin

IF = 20

Anilin jon

IF = 0

IF = f(M) IF
IF opada

F Cl Br J IF = 0

Fluorescencija kadminijum-selenida razliitih veliina estica

15

AUKSOFLUORI - supstituenti koji pojaavaju intenzitet fluorescencije DIMINOFLUORI supstituenti koji smanjuju intenzitet fluorescencije

KALCIT
Aktivator fluorescencije prisutan mangan

KALCIT
Organske neistoe

GAENJE fluorescencije
Prisustvo stranih supstancija, otrovi (Fe, Co, Cu, Ni)
pH Velika koncentracija (koncentraciono gaenja) Dug ivot pobuenog stanja (sudarima molekuli gube energiju) Molekuli sa velikim dipolom u polarnom rastvarau

INTENZZITET fluorescencije proporcionalan je koncentraciji

I F = f (c )
c

IF

100%

16

I F = 2,303 I 0 a b c
IF intenzitet fluorescencije I0 intenzitet upadnog zraenja kvantni prinos a apsorpcioni koeficijent b duina optikog puta c koncentracija

Metoda
FLUORIMETRIJA
Fotometrijsko odreivanje intenziteta fluorescencije

ema ureaja
Galvanometar

Detektor

Emisioni filtar

Kiveta

Izvor

Ekscitacioni filtar

17

Osnovni delovi
Izvor zraenja (ivina ili ksenonova lampa) Primarni optiki filtar (proputa samo ekscitirajue zraenje) Sekundarni optiki filtar (proputa samo emitujue zraenje) Fotodetektor fotoelija
Ksenonova 200800 nm

18

Primena fluorimetrije
Analitika lekova

Odreivanje koncentracije jedinjenja koja

fluoresciraju

Odreivanje neistoa u farmaceutskim

preparatima

Ispitivanje metabolita lekova u organizmu Tetraciklini, alkaloidi, hinin, vitamini, hormoni,

antihistaminici

Autofluorescencija

Neuron - obeleavanje

elija - obeleavanje

Hromozomi - obeleavanje

19

Analitika namirnica Neorganska hemija (mnogi minerali fluoresciraju) Biohemija (odreivanje nekih vitamina, npr.
riboflavina ili tiamina)

Uran prisutan u kvarcu

Oftalmologija

Kriminalistika obeleavanje ninhidrinom

20

Rasveta

Savremena umetnost

21

... I
NETO ZA OPTU KULTURU

Moscow, 1916.

22

Kompozicija, 1913.

Oil on canvas, 200 x 300 cm Tretyakov Gallery, Moscow

PORTRAIT OF GABRIELE MUNTER, 1905.

Wassily Kandinsky (1866 1944 )

23