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COLUMNA DE WINOGRADSKY

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN DE BACTERIAS PRPURAS, VERDES Y CIANOBACTERIAS: COLUMNA DE WINOGRADSKY


I. INTRODUCCIN: La columna de Winogradsky es un sistema acutico en el que se ayuda a los microorganismos a establecerse en regiones diferenciadas segn su metabolismo, y constituye un modelo de ecosistema, similar a los tapetes microbianos que se hallan en aguas dulces o saladas, donde proliferan microorganismos del medio acutico y delos sedimentos. Esta tcnica fue desarrollada inicialmente por el microbilogo ruso Serge Winogradsky(1856-1953), quien us la columna para estudiar los microorganismos del suelo. La columna de Winogradsky es un sistema que permite observar en el laboratorio el proceso evolutivo de los microorganismos, es decir, el proceso de adaptacin a los diferentes ambientes empleando diferentes estrategias para la obtencin de energa .Una vez que se prepare la columna y se exponga a la luz solar, se desarrollar una sucesin de comunidades bacterianas interrelacionadas

metablicamente, de un modo similar a lo que ocurre en la naturaleza, que se podrn observar fcilmente porsu distinta coloracin. Adems, la columna es un sistema anxico en miniatura que puede usarse como suministro a largo plazo de bacterias para cultivos de enriquecimiento.

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1. MICROORGANISMOS DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY: Una vez establecida la columna, se pueden diferenciar tres zonas caractersticas en base a su concentracin relativa de oxgeno: 1) zona aerbica, es la ms superficial, dispone de una alta concentracin de oxgeno; 2) zona microaerfila, inmediatamente debajo de la anterior, con una menor concentracin de oxgeno; 3) zona anaerbica,que constituye el lecho de lodo .Las algas y cianobacterias forman una capa superficial de color verde brillante, y al producir oxgeno ayudan a mantener la aerobiosis en la zona superior de la columna. Mientras que, en el fondo de la columna, las bacterias reductoras del sulfato producen sulfuro, que provoca el crecimiento de bacterias rojas y verdes del azufre (fottrofos anoxignicos). De modo que se establecen dos gradientes en la columna, uno de oxgeno y otro de sulfuro de hidrgeno (H2S). Las bacterias quimiorganotrofas crecen a lo largo de toda la columna, los microorganismos aerobios y microaerfilos en la parte superior, los anaerobios en las zonas donde hay sulfuro de hidrgeno.

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2. ZONAS DE LA COLUMNA DE WINOGRADSKY: Zona aerbica

Esta es la parte de la columna ms rica en oxgeno y ms pobre en azufre. El agua de la parte superior de la columna contiene abundantes poblaciones de microorganismos aerobios, que aparecen normalmente en hbitats acuticos ricos en materia orgnica (estanques poco profundos, arroyos, etc.). Suelen ser microorganismos flagelados, lo que les permite moverse y establecerse en nuevas reas, as como microorganismos fotosintticos: algas (diatomeas) y cianobacterias filamentosas. El oxgeno que producen estos productores primarios difunde desde la superficie, creando condiciones similares a las que existen en un lago con sedimentos ricos en nutrientes.

Zona microaerfila

Es la zona en la que solapan ambos gradientes, el de oxgeno y el de sulfuro de hidrgeno. Aparecen bacterias oxidadoras del azufre como Beggiatoa, Thiothrix o Thiobacillus, que usan como fuente de carbono lamateria orgnica, y oxidan el H2S que llega por difusin desde las capas inferiores a azufre elemental.

Zona anaerbica

Esta zona contiene H2S (procedente del fondo), en la zona anaerbica superior predominan las bacterias fotosintticas anaerobias, y en la columna se observan una serie de bandas de colores rojo y verde. Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum, Rhodomicrobium o

Rhodopseudomonas, son bacterias anaerobias fotoorgantrofas, que slo pueden realizar la fotosntesis en presencia de una fuente de carbono orgnico. Forman una capa de color rojo-anaranjado. Las bacterias verdes no del azufre son termfilas y, por lo tanto, no crecen en la columna a temperatura ambiente. Bacterias rojas del azufre (Chromatium,Thiospirillum,Thiocapsa ,forman una capa de color rojo-prpura) y bacterias verdes del azufre(Chlorobium,Pelodyctium). Estas bacterias son fotolittrofas y realizan una fotosntesis anoxignica. Estos microorganismos aparecen como zonas decrecimiento en el lodo de la columna, pero tambin pueden desarrollarse en el agua si los fottrofos oxignicos son escasos.

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En la zona anaerobia ms profunda, de color negro intenso, aparecen microorganismos capaces de realizar respiracin anaerbica y fermentacin. Bacterias reductoras del sulfato (BRS): Desulfovibrio, Desulfobacter ,

Desulfotomaculum

Desulfomonas. Usan el sulfato, u otras formas parcialmente

oxidadas de azufre como el tiosulfato, y generan grandes cantidades de H2S en el proceso. Bacterias fermentadoras: utilizan la celulosa del papel aportado como fuente primaria para su metabolismo, aparecen las bacterias del gnero Clostridium. Son anaerobias estrictas, y no empiezan a crecer hasta que el oxgeno desaparece del sedimento. Estas bacterias degradan la celulosa hasta residuos de glucosa y, a continuacin, fermentan laglucosa para obtener la energa que necesitan, produciendo una serie de compuestos orgnicos simples (etanol, cido actico, cido lctico, cido succnico, etc.) como productos finales de esa fermentacin. Estos compuestos orgnicos sern, a su vez, respirados por las bacterias reductoras del sulfato. Cuando la celulosa se agote, usarn la materia orgnica producida por el resto de bacterias. Tambin pueden aparecer bacterias metanognicas que generan CH4 ,que se observa como burbujas de gas en el fondo de la columna.

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II. OBJETIVOS: Aprender a elaborar una columna de Winogradsky. Identificar bacterias prpuras, verdes y cianobacterias.

III.

MATERIALES: MUESTRA: Lodo residual Agua residual Hojas secas y alas de insectos Aserrn Yema de huevo Papel remojado peridico EQUIPO: Mortero con pilones Probeta de 20 cm x 2.5ancho Pepel aluminio REACTIVOS: Extracto de carne Carbonato de calcio Sulfato de calcio Vaselina

IV.

PROCEDIMIENTO: 1. Triturar las alitas de insectos y las hojas secas. 2. Mezclar el triturado con el papel peridico remojado 3. Agregar a la mezcla una pequea porcin de yema de huevo 4. Adicionar el polvo de aserrn. 5. Mezclar con el lodo residual. 6. Adicionar a esa masa homognea los reactivos. 7. Llenar el tubo hasta 1/3 con agua residual 8. Cubrir con vaselina y tapar la boca del tubo con papel aluminio

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ALITAS DE INSECTOS

ASERRN

AGUA RESIDUAL

AGREGAR REACTIVOS

MEZCLAR TODO LOS ELEMENTOS

LODO RESIDUAL

AGREGAR LA MEZCLA A PROBETA Microbiologa Acutica

VERETER EL AGUA RESIDUAL

CUBRIR CON VASELINA Y PAPEL ALUMINIO Pgina 6

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RESULTADO: 1. Columna de Winogradsky a las 2 semanas de haberse hecho:

ZONA 1

ZONA 2

ZONA 3

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ZONA 4

2. Obtencin de muestra de cada zona:

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3. Observacin de microorganismos al microscopio:

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V. VI. CONCLUSIONES: BILIOGRAFA: Brock Biologa de los microorganismos . 10 edicin (2003). J. Parker, J.M. Martinko,M.T. Madigan. Pearson Education http://es.scribd.com/doc/59281261/Columna-de-Winogradsky http://redalyc.uaemex.mx/pdf/920/92050311.pdf

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