LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI DI M-BRIO FOOD LABORATORY BOGOR

oleh

Marinda Eka Saputri NIS 09.55.06496

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri Sekolah Menengah Kejuruan - SMAK Bogor 2013

LAPORAN PRAKTIK KERJA INDUSTRI DI M-BRIO FOOD LABORATORY BOGOR

Sebagai Syarat untuk Mengikuti Ujian Akhir Sekolah Menengah KejuruanSMAK Bogor Tahun Ajaran 2012/2013

oleh

Marinda Eka Saputri NIS 09.55.06496

KEMENTERIAN PERINDUSTRIAN REPUBLIK INDONESIA Pusat Pendidikan dan Pelatihan Industri Sekolah Menengah Kejuruan - SMAK Bogor 2013

LEMBAR PENGESAHAN DAN PERSETUJUAN

Disetujui dan disahkan oleh:

Disetujui oleh:

Intan Nurmala Dewi, STP Manajer Mutu Pembimbing 1 ,

Dra. Vera Marzuklina, M.Pd NIP. 19620212 198712 2 001 Pembimbing 2 ,

Disahkan oleh:

Dra.HadiatiAgustine NIP. 19570817 198103 2 002 Kepala Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor

DAFTAR ISI KATA PENGANTAR.i DAFTAR ISI. .........................iii DAFTAR TABEL........................... v DAFTAR GAMBAR ......................... vi DAFTAR LAMPIRAN .......................... vi BAB I PENDAHULUAN. ............................. 1 A. B. C. D. Latar Belakang ............................................................................ 1 Tujuan Praktik Kerja Industri ....................................................... 2 Tujuan Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri ......................... 3 Sistematika Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri ................. 3

BAB II INSTITUSI PRAKERIN ........................... 4 A.Sejarah dan Perkembangan Perusahaan.. .......................... 4 B. C. D. E. Komitmen dan Misi Perusahaan.................................................. 5 Lokasi Perusahaan ..................................................................... 6 Struktur Organisasi M-BRIO Food Laboratory ............................. 7 Tugas dan Tanggung Jawab Organisasi ..................................... 8

BAB III TINJAUAN PUSTAKA ........................ 9 A. B. C. Jeli Agar ...................................................................................... 9 Mikrobiologi Pangan.................................................................. 11 Alat-alat yang digunakan saat Praktikum Mikrobiologi ............... 12

BABIVMETODEANALISIS...20 1. not defined. 2. Uji Bakteri Coliform Metode Angka Paling Mungkin (APM) Menggunakan Seri 3 Tabung ....... Error! Bookmark not defined. 3. 4. 5. 6. 7. Uji Bakteri Eschericcia coli Metode Angka Paling Mungkin (APM) Menggunakan Seri 3 Tabung .................................................... 23 Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar ..................... 26 Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi ....................................... 27 Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang ............................. 32 Pewarnaan Gram menurut Preston dan Morrel ......................... 33 Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode TuangError! Bookmark

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN.. ......................... 34

iii

A. B.

Hasil .......................................................................................... 34 Pembahasan ............................................................................. 34 1. Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode Tuang........................... 34 2.Uji Bakteri Coliform...................................................................... 35 3.Uji Bakteri E.coli ......................................................................... 36 4.Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar ....................... 36 5.Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi.......................................... 37 6.Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang ................................ 38

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN............................... 39 A.Simpulan...................................................................................... 39 B.Saran ........................................................................................... 39 DAFTAR PUSTAKA.. ............................ 40

iv

DAFTAR TABEL

Tabel 1. Tugas dan Tanggung Jawab PT. M-BRIO Food Laboratory ................. 8 Tabel 2. Hasil Reaksi IMViC dari E.coli .............................................................. 28 Tabel 3. Hasil Reaksi Biokimia dari Salmonella ................................................. 31 Tabel 4. Hasil Analisis Mikrobiologi Jeli Agar .................................................... 35 Tabel 5. Hasil Analisis ALT pada Jeli Agar......................................................... 43 Tabel 6. Hasil Analisis Bakteri Coliform dan E. coli pada Jeli Agar..................... 44 Tabel 7. Hasil Analisis Bakteri Staphylococcus aureus pada Jeli Agar............... 45 Tabel 8. Hasil Analisis Bakteri Salmonella pada Jeli Agar .................................. 46 Tabel 9. Hasil Analisis Kapang dan Khamir pada Jeli Agar ................................ 49 Tabel 10. Tabel APM Seri 3 Tabung .................................................................. 64

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1.Autoklaf ............................................................................................... 6 Gambar 2. ose ................................................................................................... 13 Gambar 3. Cawan petri ...................................................................................... 13 Gambar 4. Tabung reaksi .................................................................................. 14 Gambar 5. Tabung durham................................................................................ 14 Gambar 6. Pembakar spirtus ............................................................................. 15 Gambar 7. Inkubator .......................................................................................... 15 Gambar 8. Hot plate .......................................................................................... 15 Gambar 9. Colony counter ................................................................................. 16 Gambar 10. Mikroskop....................................................................................... 16 Gambar 11. Water bath ..................................................................................... 16 Gambar 12. Stomacher...................................................................................... 17 Gambar 13. Laminar flow................................................................................... 17 Gambar 14. Oven .............................................................................................. 18 Gambar 15. Mikropipet dan tip ........................................................................... 18 Gambar 16. Mesin Vortex .................................................................................. 18 Gambar 17. pH meter ........................................................................................ 19 Gambar 18. Hasil Pengamatan Uji Angka Lempeng total .................................. 43 Gambar 19. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Coliform dan E.coli .......................... 44 Gambar 20. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Staphylococcus aureus ................... 45 Gambar 21. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Tahap Enrichment, Kontrol Negatif dan Kontrol Positif) ................................................................................ 46 Gambar 22. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi dari media TBB) . 47 Gambar 23. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi Salmonella dari Media SCB) ....................................................................................................... 48 Gambar 24. Hasil Pengamatan Kapang dan Khamir.......................................... 49

vi

DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Gambar Hasil pengamatan Uji Angka Lempeng Total pada Media PCA ................................................................................................................... 40 Lampiran 2. Gambar Hasil Pengamatan Bakteri Coliform dan E.coli pada Media LSTB ................................................................................................................. 41 Lampiran 3. Gambar Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus pada Media BPA .......................................................................................................................... 42 Lampiran 4. Gambar Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella .............................. 43 Lampiran 5. Gambar Hasil Pengamatan Kapang dan khamir Pada Media PDA. 47 Lampiran 6.Pembuatan Media dan Pereaksi ..................................................... 48 Lampiran 7. Tabel APM Seri 3 Tabung .............................................................. 64

iii

vi

BAB I PENDAHULUAN A. Latar Belakang Sejalan dengan meningkatnya pembangunan di sektor industri maka tidak dapat dielakkan lagi sekolah-sekolah kejuruan, khususnya Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor harus mampu menghadapi tuntutan dan tantangan yang senantiasa muncul dalam kondisi seperti sekarang ini. Mengingat tuntutan dan tantangan masyarakat industri di tahun-tahun mendatang akan semakin meningkat dan bersifat padat pengetahuan dan keterampilan, maka pengembangan pendidikan

menengah kejuruan khususnya rumpun kimia analisis harus difokuskan kepada lulusan yang berkualitas. Berkaitan dengan itu, maka pola pengembangan yang digunakan dalam pembinaan sistem pendidikan menjadi sangat penting. Seperti halnya sekolah menengah kejuruan lainnya, Sekolah Menengah Kejuruan SMAK Bogor memepunyai visi,mengemban misi dan memilki tujuan sebagai berikut. 1. Visi Menjadi sekolah menengah analis kimia nasional bertaraf internasional yang menghasilkan lulusan professional dan bermartabat. 2. Misi

a.

Melakasanakan pendidikan kejuruan analisis kimia yang berkualitas mampu memenuhi kebutuhan masyarakat dunia usaha dan dunia industri baik tingkat nasional maupun internasional.

b. Meningkatkan kemitraan nasional dan membina kemitraan internasional. c. Membina dan menyelenggarakan fungsi sosial dan kemasyarakatan.

3. Tujuan Menyiapkan tamatan untuk menjadi tenaga kerja tingkat

menengah dalam bidang teknisi pengelola laboratorium, pengatur dan pelaksana analis kimia, serta melanjutkan ke jenjang yang lebih tinggi. Untuk mengatasi hal tersebut, perlu adakemitraan antara sekolah dengan dunia industri, dimana dunia industri turut membantu kekurangan sekolah melalu Praktik Kerja Industri. B. Tujuan Praktik Kerja Industri Dalam rangka melaksanakan program kurikulum Sekolah

Menengah Kejuruan SMAK Bogor tahun ajaran 2012/2013, pihak sekolah mewajibkan siswa kelas 13 untuk melaksanakan Praktik Kerja Industri pada semester VIII selama 12 minggu efektif (3 bulan) termasuk pembuatan laporan dan pelaksanaan ujian, mulai tanggal 12 November 2012 sampai tanggal 01 Maret 2013. Tujuan dari Praktik Kerja Industri adalah :

1. Meningkatkan kemampuan dan memantapkan keterampilan siswa sebagai bekal kerja yang sesuai dengan program studi kimia analisis. 2. Menumbuhkembangkan dan memantapkan sikap professional siswa dalam rangka memasuki lapangan kerja. 3. Meningkatkan wawasan siswa pada aspek-aspek yang potensial dalam dunia kerja, antara lain : struktur organisasi, disiplin, lingkungan dan sistem kerja. 4. Meningkatkan pengetahuan siswa dalam hal penggunaan instrument kimia analisis yang lebih modern, dibandingkan dengan fasilitas yang tersedia di sekolah. 5. Memperoleh masukan dan umpan balik guna memperbaiki dan mengemban pendidikan di SMK-SMAK Bogor. 6. Memperkenalkan fungsi dan tugas seorang analis kimia (sebutan bagi lulusan SMK-SMAK Bogor) kepada lembaga-lembaga penelitian dan perusahaan industri di tempat pelaksanaan Prakerin (sebagai konsumen tenaga analis kimia).

C. Tujuan Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri Setiap siswa yang telah melaksanakan Praktik Kerja Industri wajib membuat rangkuman hasil kegiatannya berupa sebuah laporan. Adapun tujuan penulisan laporan yaitu : 1. Memantapkan siswa dalam pengembangan dan penerapan pelajaran dari sekolah di institusi tempat prakerin. 2. Siswa mapu mencari alternatif lain dalam pemecahan masalah analisis kimia, secara lebih rinci dan mendalam (seperti apa yang terungkap dalam laporan prakerin yang dibuatnya). 3. Menambah koleksi pustaka di perpustakaan sekolah maupun di institusi prakerin, sehingga dapat menambah pengetahuan, baik bagi dirinya (penulis) maupun para pembaca. 4. Siswa dapat membuat laporan kerja dan mempertangggung

jawabkannya. D. Sistematika Penulisan Laporan Praktik Kerja Industri Penulisan laporan terdiri dari beberapa bagian, yaitu : 1. Bagian pertama yang terdiri dari: halaman judul, lembar pengesahan, kata pengantar, daftar isi, daftar tabel, dan daftar lampiran. 2. Bagian kedua yang terdiri dari: a. Pendahuluan yang berisi uraian latar belakang dan tujuan prakerin, tujuan penulisan laporan, dan sistematika laporan prakerin. b. Institusi prakerin yang berisi sejarah dan perkembangan perusahaan, komitmen dan misi perusahaan, lokasi perusahaan, struktur organisasi, tugas dan tanggung jawab. c. Kegiatan di laboratorium yang berisi deskripsi komoditi, metode analisis (secara teoritis maupun praktik), cara kerja, serta sarana dan peralatan yang digunakan. d. Pembahasan yang berisi uraian tentang metode yang digunakan dalam analisis, serta hasil analisis.

3. Bagian ketiga yang berisi simpulan dan saran, daftar pustaka dan lampiran.

BAB II INSTITUSI PRAKERIN

A. Sejarah dan Perkembangan Perusahaan M-BRIO Food Laboratory didirikan pada tanggal 15 Februari 1999 beredasarkan Akte Notaris No. tanggal 8 Januari 1999, dengan nama CV Embrio Biotekindo dengan Akte Notaris No.14 PT. Embrio Biotekindo memiliki lima divisi yaitu: 1. Divisi M-BRIO Food Laboratory, merupakan laboratorium yang bergerak di bidang pangan (food safety). 2. Divisi M-BRIO HACCP Certification Body, yaitu layanan jasa sertifikasi HACCP uuntuk sistem keamanan pangan (food safety). 3. Divisi M-BRIO Training, yang melayani pelatihan dibidang mutu dan keamanan pangan berbasis kompetensi (CBT). 4. Divisi M-BRIO Research & Development (R & D), yang memberikan pelayanan jasa penelitian dan pengembangan produk pangan untuk produk-produk baru maupun modifikasi. 5. M-BRIO Press, yang menerbitkan buku-buku bermutu tentang pangan dan industri pangan untuk kalangan awam dan akademik. M-BRIO Food Laboratory merupakan salah satu divisi dari PT Embrio Biotekindo yang bergerak dalam jasa analisis pengujian dalam bidang kimia dan mikrobiologi khusus untuk produk pangan (food specialist). Jasa pengujian yang ditawarkan oleh laboratorium M-BRIO antara lain adalah : komposisi makanan, kualitas makanan, nutrition fact, aktivitas enzim, kadaluarsa, sensori, logam berat, residu peptisida, uji mikroba, dan Tempat Uji Kompetensi (TUK). Selain itu Laboratory juga sebagai provider program uji M-BRIO Food profisiensi yang

diselenggarakan Komite Akreditasi Nasional (KAN).

M-BRIO Food Laboratory telah memperoleh akreditasi dari:

1. Komite Akreditasi Nasional (KAN) sebagai laboratorium penguji tanggal 02 Juni 2000 dengan nomor akreditasi LP-067-IDN. 2. Komite Nasional Akreditasi Pranata Penelitian dan

Pengembangan (KNAPPP) sebagai laboratorium penelitian dan pengembangan sejak tahun 2004, dengan nomor akreditasi PL005-INA. 3. LEMBAGA Sertifikasi Profesi Tenaga Laboratorium Penguji Indonesia (LSPTELAPI) sejak tahun 2007, dengan nomor 2TELAPI IV/07/013 sebagai laboratorium tempat uji kompetensi bagi personil laboratorium (TUK). B. Komitmen dan Misi Perusahaan M-BRIO Food Laboratory memiliki komitmen Akurat, Cepat dan Bersahabat Demi Kepuasan Pelanggan serta mengemban misi sebagai berikut :

1. Untuk memuaskan pelanggan M-BRIO Food Laboratory memberikan pelayanan jasa pengujian dengan hasil akurat dan cepat. 2. Pengelolaan M-BRIO Food Laboratory mengacu pada ISO/IEC17025:2005 dan pedoman KNAPPP 02:2004 secara konsisten. M-BRIO Food Laboratory didukung oleh personil yang memiliki kualifikasi yang dapat dipertanggungjawabkan .

C. Lokasi Perusahaan PT EMBRIO Biotekindo berada pada dua lokasi. Kantor pusat terletak di jalan Pajajaran Indah V No. 1 C Baranangsiang, Bogor 16143. Telepon (0251) 8332403, 8377973, yang meliputi divisi HACCP & ISO Certification Body, M-BRIO Training Body dan M-BRIO Press. Sedangkan divisi M-BRIO Food Laboratory dan M-BRIO Research and Development (R&D) terletak di Jalan Villa Indah Pajajaran Blok B-17 Pulo Armin, Bogor 16143. Telepon/Faksimile (0251) 8346986/8325753.

D. Struktur Organisasi M-BRIO Food Laboratory

E. Tugas dan Tanggung Jawab Organisasi

No. 1. Organisasi Manajemen Penanggung Jawab Founder & Chairman Ruang Lingkup Pekerjaan a. Mengembangkan laboratorium secara keseluruhan. b. Menandatangani dokumendokumen yang mengikat perusahaan secara hukum dengan pihak lain. a. Mengelola keuangan dan pendanaan secara keseluruhan. b. pengembangan sumber daya. c. Pemasaran jasa laboratorium. a. Bertanggungjawab dalam pengelolaan laboratorium secara keseluruhan. b. Menandatangani dokumendokumen yang berkaitan dengan laboratorium. a. Bertanggungjawab atas keuangan dan pemasaran jasa laboratorium. a. Mengelola keuangan dan pemasaran jasa laboratorium. a. Memimpin kegiatan teknik di laboratorium b. Bertanggungjawab atas proses pengujian dan mutu hasil pekerja teknik. a. Bertanggungjawab terhadap operasional teknis laboratorium. Melaksanakan pekerjaan sesuai ruang lingkup laboratorium. a. Bertanggungjawab dalam pelaksanaan implementasi dan dokumentasi sistem manajemen mutu laboratorium. b. Bertanggungjawab atas administrasi laboratorium. a. Memantau pelaksanaan implementasi dan dokumentasi system manajemen mutu laboratorium b. Mengelola administrasi dan pembelian barang/jasa a. Menerbitkan laporan hasil pengujian b. Bertanggungjawab atas pengelolaan kegiatan manajemen sampel di laboratorium.

2.

Manajemen

Direktur Administrasi Keuangan & Marketing

3.

Manajemen

Kepala Divisi

4.

Manajemen

Manajer Keuangan & Marketing Asisten Manajer Keuangan & Marketing Manajer Teknik

5.

Manajemen

6.

Manajemen Teknik

Supervisor Laboratorium Analis 7. Manajemen Mutu Manajer Mutu

Supervisor mutu

jaminan

Staf Administrasi dan keuangan

Tabel 1. Tugas dan Tanggung Jawab PT. M-BRIO Food Laboratory

BAB III TINJAUAN PUSTAKA

A. Jeli Agar Menurut SNI 01-3552-1994, Jeli adalah makanan ringan berbentuk gel, dapat dibuat dari pektin, agar, karagenan, gelatin, atau senyawa hidrokoloid lainnya dengan penambahan gula, asam dan atau dengan bahan tambahan makanan lain yang diizinkan. Jeli dibuat dengan mencampurkan bubuk jeli, air, bahan pemanis, dan asam kemudian dimasak pada suhu 8185C selama 15-25 menit. Produk jeli merupakan olahan lanjut dari sari buah jernih memiliki tekstur padat dan transparan (tembus pandang), dibuat melalui proses pengentalan dan pencetakan. Bentuk, ukuran dan

warna produk jeli bervariasi disesuaikan dengan kesukaan anak-anak. Jeli mengandung unsur gizi dan kalori. (Suprapti, 2004) Minuman jeli adalah minuman yang terbuat dari jeli yang berbentuk cair dan kenyal dan mengandung banyak serat. Untuk meningkatkan daya tarik, minuman jeli ditambah dengan nata de coco, nata de soya atau manisan buah dalam berbagai bentuk. Sifat dasar dari minuman ini adalah rendah lemak dan tinggi serat, kandungan gizi minuman jeli tergantung dari bahan pembuatnya. Bahan dasar dalam pembuatan jeli yang paling bermanfaat adalah sari buah karena mengandung banyak serat dan nilai gizi. Secara umum, minuman jeli mempunyai empat atau lima komponen utama yaitu bahan pembentuk jel (hidrokoloid), air, pengasam (bisa berupa asam sitrat atau sari buah), gula (pemanis), perasa (komponen flavor atau buah), serta pewarna. Tekstur jel yang terbentuk sangat dipengaruhi oleh jenis bahan pembentuk jel, gula, asam dan komponen lainnya. (Suprapti, 2004)

Mutu produk minuman jeli sangat di pengaruhi oleh beberapa hal, antara lain bahan baku yang sesuai dengan ketentuan, proses produksi yang benar, penggunaan bahan pengawet, pengemasan, penutupan kemasan, penerapan sistem pengawetan, dan penyimpanan. Oleh karena itu, perlu

10

dilakukan uji cemaran mikroba pada jeli untuk mengetahui mutu jeli berdasarkan ada atau tidaknya kontaminasi saat proses pembuatannya. Jika kontaminasi terjadi, maka mikroba dapat tumbuh dan berkembang biak pada jeli tersebut karena jeli mengandung gula dan pektin yang dapat mendukung pertumbuhan mikroba. Adapun bagan pembuatan jeli agar sebagai berikut :

B. Mikrobiologi Pangan Mikrobiologi adalah suatu ilmu yang mempelajari makhluk hidup yang sangat kecil yang hanya dapat dilihat dengan menggunakan lensa pembesar atau mikroskop. Makhluk yang sangat kecil tersebut disebut mikroorganisme atau mikroba, dan ilmu yang mempelajari tentang mikroba yang sering ditemukan pada pangan disebut mikrobiologi pangan. Yang dimaksud dengan pangan disini mencakup semua makanan, baik bahan baku pangan maupun yang sudah diolah (produk jadi). Makanan mengandung berbagai macam nutrisi seperti air, karbon, nitrogen, mineral serta faktor lingkungan berupa kelembaban dan pH yang dapat menunjang pertumbuhan mikroba. Pertumbuhan mikroba pada pangan dapat menimbulkan berbagai perubahan, baik yang merugikan maupun yang menguntungkan. Mikroba yang merugikan misalnya yang menyebabkan kerusakan pangan seperti terjadinya pembusukan, perubahan warna, tekstur, menimbulkan bau busuk, lendir, asam, pembentukan gas, dan perubahanperubahan lain yang tidak diinginkan. Selain itu, beberapa bakteri dapat menyebabkan gejala sakit atau keracunan disebut bakteri patogenik atau patogen. Gejala penyakit yang disebabkan oleh patogen timbul karena bakteri tersebut masuk ke dalam tubuh melalui produk pangan yang dimakan dan dapat berkembang biak di dalam saluran pencernaan dan menimbulkan gejala sakit perut, diare, muntah, mual, dan gejala lain. Beberapa bakteri yang tergolong ke dalam bakteri patogen adalah Staphylococcus aureus, Clostridium perfringens, dan Bacillus cereus yang memproduksi racun yang menyerang saluran

pencernaan dan disebut enterotoksin, dan Clostridium botulinum yang memproduksi racun yang menyerang syaraf serta dapat menyebabkan kelumpuhan saluran tenggorokan dan disebut neurotoksin atau racun botulinum (Sudiarto,2010). Beberapa bakteri penyebab penyakit seringkali terdapat dalam jumlah kecil didalam makanan, oleh karena itu dalam isolasinya diperlukan beberapa tahapan pengujian yaitu tahap pra-pengkayaan (pre-enrichment),

pengkayaan (enrichment), seleksi dan identifikasi.

11

12

Pada tahap pra-pengkayaan (pre-enrichment) dan pengkayaan (enrichment) digunakan medium yang dapat merangsang pertumbuhan bakteri target yang akan diuji, tetapi bakteri lainnya masih mungkin tumbuh. Medium pengkaya (enrichment) bersifat lebih spesifik dibandingkan dengan medium pra-pengkayaan. Pada tahap seleksi digunakan medium selektif yang dapat merangsang pertumbuhan bakteri target dan menghambat pertumbuhan bakteri non-target pada medium selektif ini ditandai dengan terbentuknya koloni yang mempunyai ciri-ciri penampakan yang spesifik. Tahap identifikasi bakteri pada umumnya memerlukan beberapa tahap yaitu : 1. Uji penduga 2. Uji penguat 3. Uji pelengkap (Fardiaz,1989) C. Alat-alat yang digunakan saat Praktikum Mikrobiologi

1. Autoklaf

Gambar 1.Autoklaf

Autoklaf adalah alat untuk mensterilkan berbagai macam alat dan bahan yang digunakan dalam mikrobiologi menggunakan uap air panas bertekanan. Tekanan yang digunakan pada umumnya 15 psi atau sekitar 2 atm dan dengan suhu 121C (250F). Proses sterilisasi dilakukan pada suhu 121C selama 15 menit.

2. Jarum inokulum / ose

Gambar 2. ose

Jarum inokulum berfungsi untuk memindahkan biakan (bakteri dan khamir) untuk ditanam/ditumbuhkan ke media baru. Jarum inokulum biasanya terbuat dari kawat nichrome atau platinum sehingga dapat berpijar jika terkena panas. Bentuk ujung jarum dapat berbentuk lingkaran (loop) dan disebut ose atau inoculating loop / transfer loop, dan yang berbentuk lurus disebut inoculating needle / transfer needle. Inoculating loop cocok untuk melakukan streak di permukaan agar, sedangkan inoculating needle digunakan untuk inokulasi secara tusukan pada agar tegak (stab inoculating). 3. Cawan petri

Gambar 3. Cawan petri

Cawan petri terbuat dari gelas dan berfungsi sebagai tempat pembiakan mikroorganisme. Media pertumbuhan dapat dituang ke cawan bagian bawah dan cawan bagian atas sebagai penutup. Cawan petri tersedia dalam berbagai macam ukuran yaitu berdiameter 5 cm, 8 cm, 9 cm atau 15 cm. Cawan berdiameter 15 cm dapat menampung media sebanyak 15-20 ml, sedangkan cawan berdiameter 9 cm kira-kira cukup diisi media sebanyak 10 ml.

13

4. Tabung Reaksi

Gambar 4. Tabung reaksi

Di dalam mikrobiologi, tabung reaksi digunakan sebagai tempat media pertumbuhan atau penampungan cairan lainnya seperti pelarut dalam pengenceran. Tabung reaksi dipilih karena bentuknya yang vertikal (bandingkan dengan cawan petri) sehingga mempermudah penanganan dan menghemat tempat penyimpanan. Tabung reaksi dapat diisi media padat maupun cair. Media padat yang dimasukkan ke tabung reaksi dapat diatur menjadi 2 bentuk menurut fungsinya, yaitu media agar tegak (deep tube agar) dan agar miring (slants agar). 5. Tabung Durham

Gambar 5. Tabung durham

Tabung Durham berbentuk mirip dengan tabung reaksi namun ukurannya lebih kecil dan tanpa tutup. Tabung Durham berfungsi untuk menampung/menjebak gas yang terbentuk dari metabolisme pada bakteri yang diujikan. Penempatannya terbalik dalam tabung reaksi dan harus terendam sempurna dalam media (jangan sampai ada sisa udara) sebelum diinokulasikan bakteri uji.

14

6. Pembakar Spirtus

Gambar 6. Pembakar spirtus

Pembakar spirtus digunakan untuk sterilisasi alat inokulasi dengan pembakaran seperti sterilisasi jarum inokulum atau spreader. Untuk memastikan kesterilannya jarum inokulum dibakar sampai membara dan spreader dapat dicelupkan alkohol lalu dibakar. 7. Inkubator

Gambar 7. Inkubator

Inkubator adalah alat untuk menginkubasi atau memeram mikroba pada suhu terkontrol. Alat ini dilengkapi dengan pengatur suhu. 8. Hot plate

Gambar 8. Hot plate

Merupakan alat yang digunakan untuk memanaskan suatu zat dengan menggunakan listrik sebagai sumber energi yang kemudian diubah menjadi energi panas. Proses pelarutan media akan lebih sempurna jika dilakukan diatas hot plate, namun pada suhu pemanasan yang sesuai.

15

9. Colony counter

Gambar 9. Colony counter

Alat ini berguna untuk mempermudah perhitungan koloni yang tumbuh setelah diinkubasi di dalam cawan karena adanya kaca pembesar. Selain itu, alat tersebut dilengkapi dengan skala/kuadran yang sangat berguna untuk pengamatan pertumbuhan koloni sangat banyak. Jumlah koloni pada cawan petri dapat ditandai dan dihitung otomatis dapat di-reset. 10. Mikroskop

Gambar 10. Mikroskop

Mikroskop adalah alat yang dapat digunakan untuk melihat sel mikroba yang sedemikian rupa kecil ukurannya melalui suatu sistem lensa pembesar. 11. Water bath (Coliform Incubator)

Gambar 11. Water bath

Fungsi utama water bath adalah untuk menciptakan suhu yang konstan dan digunakan untuk inkubasi pada analisa mikrobiologi. Pada water bath suhu yang digunakan biasanya 44,50-45,50C untuk analisa konfirmasi E.coli dengan ketelitian suhu 0,1C.

16

12. Stomacher

Gambar 12. Stomacher

Stomacher dapat berfungsi sebagai pengganti blender karena memiliki fungsi sebagai alat untuk homogenisasi. Prinsip dari stomacher adalah untuk melepaskan sel-sel bakteri atau mikroorganisme yang terkandung dalam sampel. Komponen pada stomacher meliputi : kantong plastik steril dan stomacher merupakan suatu alat berbentuk kotak yang pada bagian dalam ada suatu pedal penumbuk. 13. Laminar Air Flow (LAF)

Gambar 13. Laminar flow

Semua prosedur mikrobiologi yang melibatkan patogen, pembuatan media yang steril atau pemeriksaan bahan makanan dibutuhkan suasana yang steril termasuk tempat juga harus steril, Untuk itu digunakan Laminar Air Flow. Komponen LAF terdiri dari : exhaust filter, lampu neon biasa, lampu UV.

17

14. Oven

Gambar 14. Oven

Sterilisasi dengan pemanasan kering untuk peralatan gelas yang tahan terhadap pemanasan tinggi dilakukan dengan menggunakan oven. 15. Mikropipet dan tip

Gambar 15. Mikropipet dan tip

Mikropipet adalah alat untuk memindahkan cairan yang bervolume cukup kecil. Beberapa ukuran volume mikropipet diantaranya 10-100 l, 20200 l, 100-1000 l dan 1-5 ml. Banyak pilihan kapasitas dari mikropipet, misalnya mikropipet yang dapat diatur volume pengambilannya (adjustable volume pipette) dan mikropipet yang tidak bias diatur volumenya. Tip digunakan sesuai dengan volume mikropipet. 16. Vortex

Gambar 16. Mesin Vortex

18

19

Vortex adalah alat yang memiliki suatu dudukan berengsel yang dapat berputar cepat sehingga larutan dalam botol atau tabung yang diletakkan (dengan ditekan) akan berputar dan teraduk. Umumnya digunakan untuk menghomogenisasi larutan dalam botol atau tabung saja. Jika menggunakan alat ini analis tidak perlu mengocok tabung menggunakan tangan dan cara ini mampu meminimalisasi resiko tumpahan. 17. pH meter

Gambar 17. pH meter

pH meter merupakan alat yang digunakan untuk mengukur pH suatu larutan. Pada laboratorium mikrobiologi biasa digunakan untuk mengukur pH media sehingga mikroorganisme dapat tumbuh dengan baik pada media biakan tersebut.

BAB IV METODE ANALISIS 1. Uji Angka Lempeng Total Metode Tuang (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992) Prinsip : Pada suhu pertumbuhan bakteri mesofil aerob setelah contoh diinkubasikan dalam media yang cocok pada suhu 351C selama 24-48 jam.

Peralatan : a. Tabung reaksi b. Rak tabung c. Gelas ukur 100 ml d. Mikropipet e. Cawan petri f. Vortex mixer

g. Inkubator suhu 361C h. Penangas air i. j. l. Pengaduk Colony Counter Stomacher

k. Neraca analitik

m. Laminar flow n. Erlenmeyer Pereaksi : a. Buffered Peptone Water (BPW) b. Plate Count Agar (PCA) c. Alkohol 70%

Cara kerja : 1. Ditimbang sebanyak 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hingga diperoleh pengenceran 1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan pengenceran yang diperlukan.

20

21

2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan Petri steril, dibuat duplo. 3. Ke dalam setiap cawan Petri dituangkan sebanyak 15 ml Media PCA yang telah didinginkan hingga suhu 45 C. 4. Lakukan putaran pada cawan petri hingga membentuk angka delapan supaya contoh tercampur rata dengan media. 5. Dikerjakan blanko dengan mencampurkan larutan pengencer dengan media. 6. Dikerjakan kontrol positif dengan mencampurkan suspensi bakteri dengan media. 7. Diamkan campuran dalam cawan petri hingga padat. 8. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 351C selama 24-48 jam. 9. Dicatat pertumbuhan koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan alat Colony counter. Perhitungan : Faktor pengenceran = 1/pengenceran Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran Bakteri Coliform Metode Angka Paling Mungkin (APM)

2. Uji

Menggunakan Seri 3 Tabung (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)

Prinsip

Pertumbuhan

bakteri

Coliform

yang

ditandai

dengan

terbentuknya gas dalam tabung Durham, setelah contoh diinkubasi pada media yang cocok pada suhu 361C selama 24-48 jam dan jumlah bakteri Coliform dapat diketahui berdasarkan tabel APM.

Peralatan : a. Tabung reaksi b. Rak tabung c. Tabung Durham d. Mikropipet e. Cawan petri

22

f.

Inkubator suhu 361C

g. Sengkelit(ose) h. Neraca analitik i. j. l. Stomacher Laminar flow Erlenmeyer

k. Pembakat spirtus

Pereaksi : a. Buffered Peptone Water (BPW) b. Lauryl Sulphate Tryptone Broth (LSTB) c. Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB) d. Alkohol 70%

Cara kerja : 1. Ditimbang sebanyak 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hingga diperoleh pengenceran 1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan sampai dengan pengenceran 1:1000. 2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke dalam 3 media tabung yang berisi Lauryl Sulphate Tryptone Broth yang

didalamnya terdapat tabung durham terbalik. 3. Diinkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam. 4. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas. Uji Penegasan : a. Diambil satu ose dari tabung yang terbentuk gas. b. Dimasukkan ke dalam tabung ulir yang berisi durham dengan media BGLBB c. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 24-48 jam. d. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas. e. Dihitung jumlah bakteri berdasarkan tabel APM seri 3 tabung.

Perhitungan : Jumlah Bakteri = dihitung berdasarkan tabel APM seri 3 Tabung

3. Uji Bakteri Eschericcia coli Metode Angka Paling Mungkin (APM) Menggunakan Seri 3 Tabung (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992) Prinsip : Pertumbuhan bakteri E.coli yang ditandai dengan terbentuknya gas dalam tabung Durham, setelah contoh diinkubasi pada media yang cocok pada suhu 44,5-45,5C selama 24-48 jam yang diikui uji biokimia dan jumlah bakteri E.coli dapat diketahui berdasarkan tabel APM.

Peralatan : a. Tabung reaksi b. Rak tabung c. Tabung Durham d. Gelas ukur 100 ml e. Mikropipet f. Cawan Petri g. Inkubator suhu 361C h. Penangas air 44,5-45,5C i. j. Pengaduk Sengkelit (ose)

k. Neraca analitik l. Stomacher

m. Laminar flow n. Pembakar spirtus o. Erlenmeyer

Pereaksi : a. E.coli Broth (ECB) b. Lauryl Sulfate Tryptose Broth (LSTB) c. Eosin Methylene Blue (EMB) Agar d. Nutrient Agar (NA) e. Tryptone Broth f. Methylene Red Voges Proskauer Broth (MRVP).

23

g. Koser Citrate Broth (KS) h. Indikator Merah Metil i. j. Larutan -naftol 5% Larutan KOH 40%

k. Alkohol 70% Cara kerja : 1. Diambil satu ose dari tabung durham yang terbentuk gas dari media LSTB. 2. Dimasukkan ke dalam tabung ulir yang berisi durham terbalik dengan media ECB. 3. Diinkubasi pada suhu 44,5-45,5C selama 24-48 jam dalam penangas air. 4. Dicatat jumlah tabung yang membentuk gas. 5. Dihitung jumlah bakteri berdasarkan table APM seri 3 tabung. 6. Bila terbentuk gas, suspensi tersebut digoreskan pada media EMB Agar. 7. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam. 8. Jika terbentuk koloni warna kilap logam maka hasil positif, sedangkan jika tidak terbentuk koloni warna kilap logam maka hasil negatif (dibandingkan terhadap kontrol positif E.coli ATCC 25922) 9. Koloni digoreskan pada media NA miring. 10. Lalu diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam. 11. Dilanjutkan dengan pewarnaan gram,dan dilakukan uji Indol Reagent Merah Voges Proskauer Koser Citrate (IMViC). Pengujian IMViC : a. Uji Indol : 1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam Tryptone broth. 2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 18-24 jam. 3) Ditambahkan 0,2-0,3 pereaksi Indole (Kovacs) 4) Dikocok selama 10 menit, warna merah tua pada permukaan menunjukkan hasil indol positif, warna jingga menunjukkan reaksi Indol negatif.

26

b. Uji Merah Methyl 1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam MRVP Broth. 2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 24-48 jam. 3) Dipipet 5 ml biakan ke dalam tabung steril. 4) Ditambahkan 5 tetes larutan MM dan kocok, warna kuning menunjukkan hasil negatif, dan warna merah menunjukkan hsil positif.

c. Uji Voges Proskauer 1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam MRVP Broth. 2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 24-48 jam. 3) Dipipet 1 ml biakan ke tabung steril 4) Ditambahkan 0,6 -naftol 5% dan 0,2 ml KOH 40% dan kocok. Warna merah muda hingga merah tua menunjukkan reaksi positif, dan warna tidak berubah menunjukkan reaksi negatif.

d. Uji Citrate 1) Dari biakan NA miring, diinokulasikan satu ose biakan ke dalam Koser Citrate. 2) Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 351C selama 48-96 jam. Adanya kekeruhan pada media Koser Citrate menunjukkan reaksi positif.

Bakteri E..coli

Indol +

Methyl Red +

Voges Proskauer -

Citrate -

Tabel 2. Hasil Reaksi IMViC dari E.coli

Perhitungan : Jumlah Bakteri = dihitung berdasarkan tabel APM seri 3 Tabung

26

4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)

Prinsip : Pertumbuhan bakteri Staphylococcus aureus pada perbenihan khusus setelah inkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam dan

dilanjutkan dengan uji koagulase. Peralatan : a. Tabung reaksi b. Rak tabung c. Holkey stick d. Gelas ukur 100 ml e. Mikropipet f. Cawan petri

g. Inkubator suhu 361C h. Colony counter i. j. Pengaduk Sengkelit(ose)

k. Neraca analitik l. Stomacher

m. Laminar flow n. Pembakat spirtus o. Erlenmeyer Pereaksi : a. Buffered Peptone Water (BPW) b. Larutan Fisiologis 0,85% c. Baird Parker Agar (BPA) d. Brain Heart Infusion Broth (BHIB) e. Plasma darah kelinci f. Alkohol 70%

26

27

Cara kerja : 1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hinnga diperoleh pengenceran 1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan pengenceran yang diperlukan. 2. Dipipet 0,1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan petri yang berisi media BPA lau disebarkan dengan menggunakan holkey stick, dikerjakan secara duplo dan dilakukan blanko. 3. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 361C selama 18-24 jam. 4. Dihitung jumlah koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan alat Colony counter. Cirinya koloni berwarna hitam dikelilingi areal bening, lalu dilanjutkan dengan uji koagulase (dibandingkan dengan control positif S.aureus ATCC 25923). Uji Koagulase : a. Diambil satu koloni yang dicurigai. b. Dimasukkan ke dalam tabung yang berisi media BHI. c. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 361C selama 18-24 jam. d. Diambil 0,1 ml biakan ke dalam tabung yang berisi plasma darah kelinci sebanyak 0,3 ml. e. Dihitung jumlah Staphylococcus aureus yang memberikan reaksi koagulase positif. Perhitungan : Faktor pengenceran = 1/pengenceran Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran

5. Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992)

Prinsip : Pertumbuhan Salmonella pada perbenihan selektif yang dilanjutkan dengan uji biokimia dan uji serologi.

28

Peralatan : a. Tabung reaksi b. Rak tabung c. Gelas ukur 100 ml d. Mikropipet e. Cawan petri f. Inkubator suhu 37C dan 42-43C g. Penangas air h. Pengaduk i. j. Sengkelit(ose) Neraca analitik

k. Stomacher l. Laminar flow m. Pembakat spirtus n. Erlenmeyer Pereaksi : a. Buffered Peptone Water (BPW) b. Selenite Cystine Broth (SCB) c. Tetrathionate Brilliant Green Broth (TBB) d. Salmonella Shingella Agar (SSA) e. Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD) f. Nutrient Agar (NA) g. Triple Sugar Iron Agar (TSIA) h. Urea broth i. j. l. Lysine Iron Agar (LIA) S.I.M Medium Toulena

k. Beta-Galactosidase reagent

m. V.P. Medium n. Creatine o. Alpha- Naftol p. KOH 40%

29

q. Indole medium r. Pereaksi Indole s. Antisera O dan H t. Alkohol 70%

Cara kerja : Pra-pengkayaan (pra-enrichment) 1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW. 2. Dihomogenkan dengan stomacher, lalu dimasukkan ke dalam Erlenmeyer steril secara aseptik. 3. Diinkubasi dalam inkubator pada suhu 361C selama 16-20 jam. Pengkayaan (enrichment) 1. Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media Selenite Cystine Broth (SCB), lalu diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 35-37C selama 24 jam. 2. Dipipet 10 ml, dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi media Tetrathionate Brilliant Green Broth (TBB), lalu diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 43C selama 24 jam. Penanaman pada media selektif 1. Diambil satu ose dari masing-masing media pengkayaan yang telah diinkubasikan. 2. Diinokulasikan ke dalam media Salmonella Shingella Agar (SSA) dan Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLD). 3. Diinkubasi di dalam inkubator pada suhu 361C selama 24 jam. 4. Diamati,pada media SSA terbentuk koloni tidak berwarna sampai merah muda,bening sampai buram dan pada media XLD terbentuk koloni merah muda, bintik hitam ditengah/koloni bening bintik hitam latar belakang merah, (dibandingkan dengan control positif S. tiphy ATCC 14028). 5. Uji Penegasan (Biokimia) a. Pilih 2-5 koloni tersangka dan goreskan pada media agar miring Nutrient Agar, diinkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam. b. Pindahkan isolat dari media Nutrient Agar ke dalam media sebagai berikut:

30

1) TSIA a) Tersangka koloni Salmonella ditusuk ke media dasar agar dan digores pada agar miringnya. b) Inkubasi pada suhu 361C selama 24-48 jam. c) Amati terjadinya perubahan-perubahan sebagai berikut : Bagian tegak : warna kuning dengan atau tanpa warna hitam (H2S). Bagian miring : warna merah atau tidak berubah. 2) Urea Agar a) Goreskan koloni tersangka Salmonella, pada permukaan Urea Agar miring. b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 24 jam, jika media berwarna merah maka menunjukkan reaksi positif, jika tidak terjadi perubahan warna, maka reaksi negatif. 3) Lysine Decaboxylation Medium a) Inokulasikan tersangka koloni Salmonella pada perbenihan cair (Lysine Decaboxylation Medium) b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 48 jam.timbulnya warna ungu menunjukakan reaksi positif. 4) Beta-Galactosidase reagent a) Suspensikan tersangka koloni Salmonella dalam 0,25 ml larutan saline pada tabung reaksi. b) Ditambahkan satu tetes toulena. c) Masukan dalam penangas air pada suhu 37C selama beberapa menit. d) Ditambahkan 0,25 ml pereaksi Beta-Galactosidase dan dikocok. e) Disimpan kembali dalam penangas air pada suhu 37C selama 24 jam. Terbentuknya warna kuning menunjukkan reaksi positif. Jika warna tidak berubah maka reaksi negatif.

31

5) V.P. Medium a) Dimasukkan masing-masing satu ose tersangka koloni Salmonella ke dalam 2 tabung reaksi yang masing-masing terdiri dari 0,2 ml media V.P. b) Inkubasikan tabung I pada suhu kamar dan tabung II pada suhu 37C selama 48 jam. c) Pada tiap tabung ditambahkan 2 tetes larutan Creatine, 3 tetes larutan alpha-naftol, dan 2 tetes larutan KOH 40%(lakukan pengocokan setiap penambahan pereaksi). d) Amati dalam waktu 15 menit. Terbentuknya warna merah jambu sampai merah tua menunjukkan reaksi positif dan bila tidak berubah reaksi negatif. 6) Indole Medium a) Ambil satu ose koloni tersangka Salmonella, dimasukkan kedalam media Indole dalam tabung reaksi. b) Diinkubasi pada suhu 361C selama 24 jam. Ditambahkan 1 ml pereaksi Indole. Terbentuknya warna gelang merah menunjukkan reaksi positif dan bila tidak berubah atau warna kuning kecoklatan, maka reaksi negatif.
No. 1. Media TSIA Reaksi Biokimia Bagian tegak : warna kuning dengan atau tanpa warna hitam (H2S). Bagian miring : warna merah atau tidak berubah Warna tidak berubah ( reaksi negatif )

2. 3.

Urea Agar

Lysine Medium

Decaboxylation Warna ungu ( reaksi positif )

4. 5. 6.

Beta-Galactosidase reagent V.P. Medium Indole Medium

Warna tidak berubah ( reaksi negatif ) Warna tidak berubah ( reaksi negatif ) Warna kuning kecoklatan ( reaksi positif ).

Tabel 3. Hasil Reaksi Biokimia dari Salmonella

6. Jika reaksi biokimia menunjukkan ada Salmonella, ambil satu ose biakan dari TSIA dan dioleskan pada gelas sediaan. Diteteskan sedikit antisera O dan H disamping biakan. Dengan menggunakan

32

ose campur tetesan antisera dengan kultur hingga homogen. Penggumpalan yang terjadi menunjukkan reaksi positif Salmonella.

Perhitungan : Hasil = (Positif/Negatif) gram/ mL sampel 6. Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang (Cara Uji Cemaran Mikroba SNI 19 -2897-1992) Prinsip : Pertumbuhan Kapang dan Khamir dalam media yang cocok setelah diinkubasi pada suhu 25C selama 5 hari. Peralatan : a. Tabung reaksi b. Rak tabung c. Gelas ukur 100 ml d. Mikropipet e. Cawan petri f. Inkubator suhu 25C g. Pengaduk h. Neraca analitik i. j. l. Stomacher Laminar flow Erlenmeyer

k. Pembakat spirtus

Pereaksi : a. Buffered Peptone Water (BPW ) b. Larutan Fisiologis 0,85% c. Potato Dextrose Agar (PDA) d. Alkohol 70% e. Asam Tartarat 10%

33

Cara kerja :

1. Ditimbang sejumlah 25 g sampel secara aseptik ke dalam kantung plastik steril, ditambahkan 225 ml BPW hinnga diperoleh pengenceran 1:10, dihomogenkan dengan stomacher, lalu dilanjutkan dengan pengenceran yang diperlukan. 2. Dipipet 1 ml suspensi dari masing-masing pengenceran ke cawan petri steril secara duplo dan dilakukan blanko. 3. Ke dalam setiap cawan petri dituangkan sebanyak 15 ml Media PDA yang telah ditambahkan Asam Tartarat 10% (1,6 ml dalam 100 ml) yang sudah disterilisasi. 4. Lakukan putaran pada cawan petri hingga membentuk angka delapan supaya contoh tercampur rata dengan media. 5. Dikerjakan blanko dengan mencampurkan larutan pengencer dengan media. 6. Diamkan campuran dalam cawan petri hingga padat. 7. Diinkubasi cawan dalam posisi terbalik pada suhu 25C selama 5 hari. 8. Dicatat pertumbuhan koloni yang tumbuh pada setiap cawan dengan alat Colony counter.

Perhitungan :

Faktor pengenceran = 1/pengenceran Jumlah total bakteri/g = jumlah koloni bakteri x Faktor pengenceran

7. Pewarnaan Gram menurut Preston dan Morrel Prinsip : Pewarnaan gram ini digunakan untuk menentukan jenis bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Yang termasuk bakteri gram positif adalah segolongan bakteri yang menahan persenyawaan yang disebut Iodinedye Complex yang terbentuk dari KI dan I2 dengan zat warna Kristal Violet sewaktu dicuci. Sedangkan yang termasuk bakteri gram negatif adalah segolongan bakteri yang melepaskan persenyawaan dan zat warna tadi, tetapi mengikat zat warna berikutnya yaitu Safranin.

34

Peralatan :

a. Kaca obyektif. b. Ose. c. Pembakar spirtus. d. Mikroskop. Bahan:

a. Alkohol 96%. b. Suspensi bakteri. c. Zat warna Kristal Violet d. Lugol. e. Zat warna Safranin. f. Kertas serap. g. Air suling.

Cara Kerja: 1. Disiapkan kaca obyek, lalu dibersihkan dengan menggunakan kapas yang telah dibasahi dengan alkohol sampai terbebas dari kotoran dan lemak, setelah itu difiksasi di atas api. 2. Diambil 1-2 ose penuh suspensi bakteri pada kaca obyek, lalu sebarkan hingga rata seluas area yang disediakan. 3. Difiksasi 3 kali di atas api. 4. Diletakkan kaca obyektif tersebut di atas bak pewarna, lalu diwarnai dengan zat warna Kristal Violet selama 60 detik. 5. Dipegang kaca obyektif dengan pinset atau penjepit lain dan miringkan untuk membuang kelebihan zat warna, lalu bilas dengan air suling sampai tidak ada lagi zat warna yang mengalir dari kaca obyek. 6. Ditetesi kaca obyek tersebut dengan larutan lugol selama 30 detik. 7. Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkan kaca obyek untuk membuang kelebihan larutan lugol, lalu bilas dengan air suling.

35

8. Kemudian dicuci dengan alkohol 95% tetes demi tetes selama 30 detik atau sampai zat warna Kristal Violet tidak terlihat lagi mengalir dari kaca obyek, lalu dicuci dengan air suling. 9. Diwarnai kembali kaca obyek tersebut dengan menggunakan zat warna Safranin selama 60 detik. 10. Dengan menggunakan pinset atau penjepit lain, miringkan kaca obyek untuk membuang kelebihan zat warna Safranin, lalu dibilas dengan air suling. 11. Kaca obyek dikeringkan dengan menggunakan kertas serap.Diamati dibawah mikroskop dengan menggunakan lensa obyektif 100 x dengan meneteskan minyak.

BAB V HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Hasil Hasil Analisis Mikrobiologi sampel jeli agar dibandingkan dengan SNI 01-3552-1994 Jeli Agaradalah sebagai berikut :
No. 1. 2. 3. 4. 5. 6. Krietria Uji Angka Lempeng Total Coliform E. coli Staphylococcus aureus Salmonella Kapang dan Khamir Metode Tuang APM APM Sebar Isolasi Tuang Satuan Koloni/g APM/g APM/g Koloni/g per 25 g Koloni/g Hasil <1.0 X 10 <3 <3 2 <1.0 X 10 Negatif <1.0 X 101
1

Batas Maksimum 4 Maks.10 Maks. 20 <3 2 Maks. 10 Negatif Maks. 50

Tabel 4. Hasil Analisis Mikrobiologi Jeli Agar

B. Pembahasan

1. Uji Angka Lempeng Total (ALT) Metode Tuang Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil Angka Lempeng Total <1.0 x 10
1

koloni/g. Hasil ALT sesuai dengan

persyaratan SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar). Hal ini dapat disebabkan oleh adanya kandungan zat dalam jeli seperti gula, asam sitrat yang dapat menghambat pertumbuhan mikroba. Adanya mikroba dalam sampel jeli dapat disebabkan oleh beberapa faktor

36

seperti saat pemilihan bahan baku, pengolahan bahan baku, proses pengemasan, penyimpanan serta proses distribusi yang tidak baik. Angka lempeng total merupakan salah satu cara untuk menghitung cemaran mikroba, dimana cara ini merupakan bagian dari metode hitungan cawan. Prinsip pada metode hitungan cawan adalah jika sel jasad renik yang masih hidup ditumbuhkan pada medium agar, maka sel jasad renik tersebut akan berkembang biak membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dan dapat dihitung dengan menggunakan mata tanpa mikroskop.

2. Uji Bakteri Coliform Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil Bakteri Coliform < 3 koloni/g. Hasil Coliform sesuai dengan persyaratan SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar).

Coliform merupakan suatu kelompok bakteri yang digunakan sebagai indikator adanya polusi kotoran dan kondisi sanitasi yang tidak baik terhadap air, makanan, susu dan produk-produk susu. Adanya bakteri Coliform di dalam makanan menunjukkan kemungkinan adanya mikroorganisme yang bersifat enteropatogenik yang berbahaya bagi kesehatan. Bakteri Coliform terdiri dari Coliform fecal dan Coliform non-fecal. Coliform fecal biasa ditemukan pada kotoran hewan dan manusia seperti Eschericia coli sedangkan Coliform non-fecal yang bisa ditemukan pada jasad hewan atau tumbuhan yang telah mati seperti Enterobacter aerogenes.

Metode yang digunakan dalam menghitung jumlah Coliform yaitu metode Angka Paling Mungkin (APM). Metode ini lebih baik dibanding dengan metode hitungan cawan karena lebih sensitif dan dapat mendeteksi Coliform dalam jumlah yang sedikit. Pengujian Coliform terdiri dari uji penduga, dan uji penegasan. Pada uji penduga digunakan media Lauryl Sulfate Trptose Broth, sedangkan untuk sampel yang mengandung bakteri asam laktat yang tinggi digunakan media Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB).

37

Perhitungan bakteri Coliform dilakukan berdasarkan jumlah tabung yang positif, yaitu yang ditumbuhi oleh mikroba stelah diinkubasi pada suhu dan waktu tertentu. Pengamatan tabung positif dapat dilihat dari timbulnya kekeruhan atau terbentuknya gas pada tabung durham.

3. Uji Bakteri E.coli Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil Bakteri E. coli < 3 koloni/g. Hasil E. coli sesuai dengan persyaratan SNI 013552-1994 (Jeli Agar). E.coli merupakan salah satu golongan bakteri Coliform fecal sehingga dalam pengujian awal digunakan media LSTB. Terbentuknya gas pada media LSTB tidak pasti menunjukkan bahwa bakteri yang menghasilkan gas tersebut adalah E.coli sehingga tabung Durham yang terbentuk gas diisolasi ke media E.coli Broth (ECB) dan diinokulasikan ke media Eosin Methylene Blue (EMB) tiap masing-masing pengenceran yang menunjukkan adanya pertumbuhan Coliform baik fecal maupun non-fecal . Coliform fecal dapat diketahui dengan mengamati penampakan koloni gelap, dengan sinar hijau metalik (keemasan). Sedangkan Coliform non-fecal berwarna merah muda dengan bagian tengah gelap. Dari pertumbuhan koloni pada media EMB dipilih satu koloni yang berwarna gelap dengan sinar hijau metalik yang diduga E.coli lalu diisolasi ke media NA dan dilakukan pewarnaan Gram. Reaksi pewarnaan gram menunjukkan bakteri gram negatif dan berbentuk batang, sedangkan pada pengujian IMViC (Indole, Methyl Red, Voges Proskauer, dan Citrate) menunjukan reaksi positif pada uji Indole dan uji Methyl Red serta reaksi negatif pada uji Voges Proskauer dan uji Citrate.

4. Uji Bakteri Staphylococcus aureus Metode Sebar Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil Bakteri Staphylococcus aureus <1,0 x 102 koloni/g. Hasil Staphylococcus aureus sesuai dengan persyaratan SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar). Kemungkinan terdapatnya bakteri ini dalam jeli relatif sedikit karena bakteri ini sering ditemukan pada makanan yang berprotein tinggi. Sedangkan kandungan protein dalam jeli ini hanya sedikit. Staphylococcus aureus merupakan bakteri Gram positif berbentuk bulat berdiameter 0,7-0,9 m yang yang sering ditemukan pada makanan yang mengandung protein tinggi misalnya, sosis, telur dan sebagainya. Staphylococcus aureus juga merupakan bakeri penyebab keracunan yang memproduksi enterotoksin. Gejala keracunannya adalah banyak mengeluarkan ludah, mual, muntah, kejang perut, diare, sakit kepala,, berkeringat dingin.

38

39

Media yang digunakan pada pengujian S.aureus adalah media Baird Parker Agar (BPA) yang mengandung Egg Yolk Tellurite (1 ml larutan glysin 20%, 1 ml larutan Kalium tellurit 1%, 5 ml Na-piruvat 20 %, 5 ml Emulsi Egg Yolk). Egg Yolk Tellurite Enrichment ditambahkan pada media Baird Parker Agar setelah proses sterilisasi. Fungsi penambahan Lithium dan Kalium tellurit pada media adalah untuk menghambat pertumbuhan mikroba lainnya. Sedangkan Na-piruvat dan Glysin untuk merangsang pertumbuhan

Staphylococcus aureus. Selain S.aureus, mikroba yang dapat tumbuh pada media BPA yaitu Staphylococcus epidermidis. Kedua koloni ini dapat dibedakan dengan melakukan uji koagulase. S.aureus mampu mengkoagulasi plasma kelinci dari media Brain Heart Infusion Broth (BHIB), sedangkan Staphylococcus epidermidis tidak mampu mengkoagulasi plasma kelinci tersebut.

5.Uji Bakteri Salmonella Metode Isolasi Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil Bakteri Salmonella negatif/25g. Hasil Salmonella sesuai dengan persyaratan SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar). Salmonella adalah bakteri berbentuk batang, pada pengecatan gram berwarna merah muda (gram negatif) dan termasuk bakteri patogen yang dapat menimbulkan penyakit demam tifus dan gastroenteritis pada manusia. Oleh sebab itu bakteri Salmonella tidak boleh ada dalam bahan pangan. Keberadaannya dalam jumlah yang sedikit sudah dapat menimbulkan gejala penyakit. Seperti diantaranya Salmonella typhii yang merupakan penyebab typhus dan Salmonella paratiphus penyebab penyakit Paratiphus. Karena pada suatu bahan makanan jumlahnya sedikit, hal ini memungkinkan analisis dilakukan secara kualitatif. Pengujian secara kualitatif dilakukan melalui tahap pra-pengkayaan, pengkayaan, seleksi, isolasi, identifikasi primer, dan identifikasi lengkap. Jika tahapan prapengkayaan, pengkayaan, seleksi dan isolasi telah dilakukan, dan bahan makanan dicurigai mengandung bakteri Salmonella, maka dilakukan tahapan berikutnya yaitu identifikasi primer (uji biokimia).

6.Uji Total Kapang dan Khamir Metode Tuang Berdasarkan analisis mikrobiologi sampel jeli agar, didapatkan hasil Bakteri Kapang dan khamir<1,0 x 101 koloni/g. Hasil Kapang dan Khamir sesuai dengan persyaratan SNI 01-3552-1994 (Jeli Agar). Adanya pertumbuhan Kapang dan Khamir ini harus dijadikan acuan untuk selalu menjaga kualitas jeli dengan cara meminimalkan terjadinya kontaminasi. Media yang digunakan dalam uji kapang dan khamir adalah media PDA. Yang mengandung karbohidrat dan glukosa yang baik untuk pertumbuhan kapang dan khamir. Pada media PDA ditambahkan asam tartarat 10% (1,6 ml untuk 100 ml) yang berfungsi untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Dalam analisis sampel jeli ini, digunakan kontrol media untuk mendapatkan hasil analisis yang akurat dan bukan karena terjadinya kontaminasi saat analisis maka pengujian disertai dengan kontrol positif dan kontrol negatif. Kontrol positif dilakukan dengan menambahkan spike kultur bakteri pada media yang sesuai, yang bertujuan untuk mengetahui keefektifitasan pertumbuhan bakteri pada media dan juga digunakan sebagai pembanding dalam mempermudah pengamatan sedangkan kontrol negatif menunjukan pengerjaan saat analisis dilakukan secara aseptik atau tidak.

40

38

BAB VI SIMPULAN DAN SARAN

A. Simpulan Berdasarkan hasil analisis mikrobiologi yang dilakukan pada sampel jeli agar dapat disimpulkan bahwa sampel jeli agar memenuhi persyaratan yang ditetapkan dan sesuai dengan Standar Nasional Indonesia 01-3552-1994 (jeli Agar).

B. Saran

1. Penggunaan APD lebih ditingkatkan untuk mencegah kecelakaan dan kontaminasi saat analisis. 2. Perlu ditambahnya alat yang baru untuk meningkatkan kinerja analisis. 3. Kerjasama antara PT. M-BRIO Food Laboratory dan Sekolah Menengah Analis Kimia Bogor lebih ditingkatkan.

41

DAFTAR PUSTAKA Anonimus. 1994. Standar Nasional Indonesia Jeli Agar. Jakarta: Badan Standarisasi Nasional. Fardiaz, Srikandi. 1993. Analisis Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Raja Grafindo Persada. Fardiaz, Srikandi. 1989. Penuntun Praktek Mikrobiologi Pangan. Jakarta: Institut Pertanian Bogor. Hadioetomo, Ratna Siri.1985. Mikrobiologi Dasar Dalam Praktek.Jakarta : PT. Gramedia. Suprapti M. Lies.2004.Jelly Jambu Mete. Yogyakarta: Kanisius. Sudiarto, Fadil.2010.Mikrobiologi Pangan.Yogyakarta:Diva Press Yogyakarta. Anonimus.2013.Pengumpulan dan Pengolahan Data. Tersedia di URL : http://www.library.upnvj.ac.id/pdf/4s1teknikindustri/207415011/BAB%20IV.pdf Diakses pada tanggal 23 Februari 2013 Pukul : 19.25. Anonimus.2013.Analisis Pengemasan. Tersedia di URL: http://blog.ub.ac.id/midori/2012/03/20/analisis-pengemasan-5/ . Diakses pada tanggal 24 Februari 2013. Pukul :19.05. Anonimus.2013.Alat-alat dalam Praktikum Mikrobiologi. Tersedia di URL : http://praktikmikrobiologi.blogspot.com/2011/07/bab-1-alat-alat-dalamlaboratorium_23.html . Diakses pada tanggal 24 Februari 2013. Pukul:20.30. Anonimus.2013.Jeli.Tersedia di URL: http://unlimited4sedoyo.wordpress.com/2011/02/21/jelly/*. Diakses pada tanggal.24 Februari 2013. Pukul: 17.15. Anonimus.2013.Staphylococcus aureus. Tersedia di URL: http://pustaka.unpad.ac.id/wpcontent/uploads/2011/09/pustaka_unpad_staph ylococcus.pdf . Diakses pada tanggal 25 Februari 2013. Pukul : 20.38.

42

Lampiran 1. Gambar dan Data Hasil pengamatan Uji Angka Lempeng Total pada Media PCA
-1 -2

Pengenceran Simplo Duplo Kontrol media

10

10

0 0 0

0 0

Tabel 5. Hasil Analisis ALT pada Jeli Agar Jumlah total bakteri = 1,0 x 101 koloni/gram

Kontrol Negatif

Pengenceran 10-1

Pengenceran 10-2

Gambar 18. Hasil Pengamatan Uji Angka Lempeng total

43

Lampiran 2. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Bakteri Coliform dan E.coli pada Media LSTB
10-1 0 0 0 10-2 0 0 0 10-3 0 0 0

Pengenceran Tabung 1 Tabung 2 Tabung 3

Kontrol (+) (+)

Kontrol (-) (-)

Tabel 6. Hasil Analisis Bakteri Coliform dan E. coli pada Jeli Agar Keterangan kontrol (+): E.coli ATCC 25922 Jumlah Bakteri menurut tabel APM seri 3 tabung = < 3 APM/gram.

Kontrol Negatif

Kontrol Positif

Pengenceran 10-1

Pengenceran 10-2

Pengenceran 10-3

Gambar 19. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Coliform dan E.coli

44

Lampiran 3. Gambar Hasil Pengamatan Staphylococcus aureus pada Media BPA

Pengenceran Simplo Duplo 10
-2

Kontrol (+) (+)

Kontrol (-) (-)

0 0

Tabel 7. Hasil Analisis Bakteri Staphylococcus aureus pada Jeli Agar Keterangan kontrol (+): S.aureus ATCC 25923 Jumlah total bakteri = <1,0 x 102 koloni/gram.

Kontrol Negatif

Kontrol Positif

Sampel

Gambar 20. Hasil Pengamatan Uji Bakteri Staphylococcus aureus

45

Lampiran 4. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella

Media Hasil (-) (-) Kontrol (+) (+) Kontrol (-) (-)

Salmonella Shigella Agar (SSA) Xylose Lysine Desoxycholate Agar (XLDA)

Tabel 8. Hasil Analisis Bakteri Salmonella pada Jeli Agar Keterangan kontrol (+): S.tiphy ATCC 14028 a.Tahap Enrichment

Media TBB b.Kontrol Positif dan Negatif

.Media SCB

Kontrol Negatif pada Media XLD

Kontrol Positif pada Media XLD

Kontrol Negatif pada Media SSA

Kontrol Positif pada Media SSA

Gambar 21. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Tahap Enrichment, Kontrol Negatif dan Kontrol Positif)

46

c.Inokulasi dari media TBB

Inokulasi Sampel Simplo pada Media XLD

Inokulasi Sampel Duplo pada Media XLD

Inokulasi pada Sampel Simplo pada Media SSA

Inokulasi Sampel Duplo pada Media SSA

Gambar 22. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi dari media TBB)

47

d.Inokulasi dari media SCB

Inokulasi Sampel Simplo pada Media XLD

Inokulasi Sampel Duplo pada Media XLD

I Sampel Simplo pada Media SSA

Inokulasi Sampel Duplo pada Media SSA

Gambar 23. Hasil Pengamatan Bakteri Salmonella (Inokulasi Salmonella dari Media SCB)

48

Lampiran 5. Gambar dan Data Hasil Pengamatan Kapang dan khamir Pada Media PDA
Pengenceran Simplo Duplo Kontrol media 10
-1

10

-2

0 0 0

0 0

Tabel 9. Hasil Analisis Kapang dan Khamir pada Jeli Agar Jumlah total bakteri = <1,0 x 101 koloni/gram

Kontrol Negatif

Pengenceran 10-1

Pengenceran 10-2

Gambar 24. Hasil Pengamatan Kapang dan Khamir

49

Lampiran 6.Pembuatan Media dan Pereaksi 1. Buffered Peptone Water (BPW) Komposisi: Peptone Sodium chloride Phospate Buffer Air Suling Pembuatan: Ditimbang 2,55 gram BPW dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit, BPW digunakan sebagai larutan pengencer. 2. Plate Count Agar (PCA) Komposisi: Tryptone Yeast extract Glucose Agar Air suling Pembuatan: Ditimbang 2,25 gram PCA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. PCA digunakan sebagai media pada perhitungan Angka Lempeng Total yang dituangkan ke dalam cawan petri steril 15 ml. 5,0 gram 2,5 gram 1,0 gram 15,0 gram 1 liter 10,0 gram 5,0 gram 10,5 gram 1 Liter

50

3. Baird Parker Agar (BPA) Komposisi: Peptone from casein Meat extract Yeast extract Sodium piruvat Glysin Lithium chloride Agar Air suling Pembuatan: Bahan-bahan dicampurkan dan dipanaskan hingga larut sempurna (pH 6,8 0,2), kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit, didinginkan sampai suhu 45-50oC, kemudian ditambahkan Egg yolk emulsion dan 10 ml Tellurit 1%. BPA digunakan sebagai media selektif untuk uji Staphylococcus aureus. 10,0 gram 5,0 gram 1,0 gram 10,5 gram 12,5 gram 5,0 gram 15,0 gram 1 liter

4. Selenite Cystine Broth (SCB) Komposisi: Pepton from casein L (-) cystine Lactose Phospate buffer Sodium hydrogen selenite Air suling Pembuatan: Ditimbang 2,3 gram SCB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak hingga larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di masukkan ke dalam autoklaf. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan. Media ini digunakan sebagai media pengkaya pada tahapan homogenasi contoh makanan untuk uji Salmonella. 5.0 gram 0,01 gram 4,0 gram 10,0 gram 4,0 gram 1 liter

51

5. Lauryl Sulphate Broth Komposisi: Tryptone,tryptose atau trypticase Lactose K2HPO4 KH2PO4 NaCl Sodium Lauryl Sulphate Air Suling 20 gram 5 gram 2,75 gram 2,75 gram 5 gram 0,2 gram 1 liter

Pembuatan: Larutkan bahan-bahan dalam air suling. Atur pH 6,8. Masukkan 10 ml ke dalam tabung kimia yang berisi tabung durham terbalik, kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

6. Brilliant Green Lactose Bile Broth (BGLBB) Komposisi: Peptone from meat Lactose Oxgall bile Brilliant green Air suling Pembuatan: Ditimbang 4 gram BGLBB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisis tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan untuk uji Coliform dengan metoda APM pada tahapan penegasan media memberikan hasil positif apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada tabung durham. 10,0 gram 10,0 gram 20,0 gram 0,0133 gram 1 liter

52

7. E. coli Broth (ECB) Komposisi: Tryptone Lactose Bile salt no 3 Dipotassium phosphate Monopotassium phosphate Sodium chloride Air suling Pembuatan: Ditimbang 3,7 gram ECB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,9 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan sebagai media selektif untuk uji E.coli dengan metode APM pada tahapan penegasan media memberikan hasil positif apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada tabung durham. 8. Salmonella Shigella Agar (SSA) Komposisi: Lab. Lemco powder Lactose Bile salt Sodium citrate Sodium thiosulphate Ferric citrate Brilliant green Neutral red Agar Pembuatan: Ditimbang 6,3 gram SSA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak hingga mendidih dan larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di masukkan ke dalam autoklaf. Didinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke dalam cawan petri. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan. 53 5,0 gram 10,0 gram 8,5 gram 10,0 gram 8,5 gram 1,0 gram 0,00033 gram 0,025 gram 15,0 gram 20,0 gram 5,0 gram 1,5 gram 4,0 gram 1,5 gram 5,0 gram 1 gram

9. Eosine Methylene Blue (EMB) Agar Komposisi: Peptone Di-kalium hydrogen phosphate Lactose Sacharose Eosin yeblich Methylen blue Agar Air suling Pembuatan: Ditimbang 3,6 gram EMB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, panaskan hingga mendidih dan setelah larut sempurna (pH 7,2 0,2) disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan sebagai media selektif pada pengujian bakteri E.coli yang akan menunjukkan hasil positif apabila terbentuk koloni berwarna kilap logam. Pembuatan: 10. Salmonella Shigella Agar (SSA) Komposisi: Lab. Lemco powder Lactose Bile salt Sodium citrate Sodium thiosulphate Ferric citrate Brilliant green Neutral red Agar Pembuatan: Ditimbang 6,3 gram SSA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, masak hingga mendidih dan larut sempurna (pH 7,2 0,2). Media ini jangan di masukkan ke dalam autoklaf. Didinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke dalam cawan petri. Buat media ini fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan. 5,0 gram 10,0 gram 8,5 gram 10,0 gram 8,5 gram 1,0 gram 0,00033 gram 0,025 gram 15,0 gram 10,0 gram 2,0 gram 5,0 gram 5,0 gram 0,4 gram 0.07 gram 13,5 gram 1 liter

54

55

49

11. Potato Dextrose Agar (PDA) Komposisi: Potato infusion Infusion from 200 gram potato D (+) glucose Agar Air suling Pembuatan: Ditimbang 3,9 gram PDA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, panaskan hingga mendidih dan setelah larut sempurna (pH 5,2 0,2) disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Pada saat akan digunakan, media ditambahkan 1,6 ml asam tartarat 10% untuk 100 ml media. Media ini digunakan pada pengujian Kapang dan Khamir yang dituang sebanyak 15 ml pada cawan steril. 20,0 gram 15,0 gram 1 liter 4,0 gram

12. Lactose Broth (LB) Komposisi: Lab. Lemco powder Peptone Lactose Air suling Pembuatan: Ditimbang 1,3 gram LB dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,9 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi yang berisi tabung durham terbalik sebanyak 10 ml, lalu disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan sebagai media selektif untuk perhitungan bakteri Coliform dengan metode APM pada tahapan sangkaan. Media memberikan hasil positif apabila terbentuk gas atau gelembung udara pada tabung durham. 3,0 gram 5,0 gram 5,0 gram 1 liter

55

13. Nutrient Agar (NA) Komposisi: Bacto beef extract Bacto peptone Bacto agar Air suling Pembuatan: Bahan-bahan dilarutkan (pH 6,8-7,0), kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. 14. Brain Heart Infusion (BHI) Komposisi: Calf brain infusion solids Beef heart infusion Proteose paptone Glucose Sodium chloride di-sodium phosphate Air suling Pembuatan: Ditimbang 3,7 gram BHI dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 7,3 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Media ini digunakan sebagai media pertumbuhan bakteri S.aureus. 12,5 gram 5,0 gram 10,0 gram 2,0 gram 5,0 gram 2,5 gram 1 liter 3,0 gram 5,0 gram 15,0 gram 1 liter

15. Triple Sugar Iron (TSIA) Komposisi: Lab. Lemco powder Yeast extract Peptone Sodium chloride 3,0 gram 3,0 gram 20,0 gram 5,0 gram

56

57

Lactose Sucrose Glucose Ferric citrate Sodium thiosulphate Phenol red Agar Air suling Pembuatan:

10,0 gram 10,0 gram 1,0 gram 0,3 gram 0,3 gram 5,0 gram 12 gram 1 liter

Ditimbang 6,5 gram TSIA dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 7,4 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121 oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Lalu dimiringkan, media ini digunakan sebagai media penegasan uji bakteri Salmonella.

16. Lysine Decarboxylase Broth Komposisi: L-lysine Yeast extract Glucose Bromoceresol purple Air suling 5,0 gram 3,0 gram 1,0 gram 0,015 gram 1 liter

Pembuatan: Masukkan bahan-bahan dalam air suling,panaskan perlahan sambil diaduk,masukkan 5 ml ke dalam tabung. kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. pH akhir 6,5.

57

17. Urea Broth Komposisi: Peptone Glucose Sodium chloride Di-sodium phosphate Potassium dihydrogen phosphate Phenol red Air suling Pembuatan: Ditimbang 2,4 gram Urea Broth dan dilarutkan dalam 100 ml air suling (pH 6,8 0,2), dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit, didinginkan sampai suhu 50oC. Lalu dimiringkan, media ini digunakan sebagai media penegasan uji bakteri Salmonella. 18. Xylose Lysine Desoxycholate Agar(XLD) Komposisi: Yeast extract L(-) Lysine HCl Xylose Lactose Sucrose Sodium desoxycholate Sodium chloride Ferric ammonium citrate Phenol red Agar Air suling Pembuatan: Ditimbang 5,3 gram XLD dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, panaskan sampai mendidih agar larut semua (pH 7,4 0,2) jangan dimasukkan ke dalam autoklaf. Dinginkan pada suhu 50oC dan dituangkan ke dalam cawan 58 3,0 gram 5,0 gram 3,75 gram 7,5 gram 7,5 gram 1,0 gram 0,8 gram 0,8 gram 0,008 gram 12,5 gram 1 liter 1,0 gram 1,0 gram 5,0 gram 1,2 gram 0,8 gram 0,012 gram 1 liter

59

petri. Buatlah media ini dalam keadaan fresh (siap pakai) dan tidak untuk disimpan. Media ini digunakan sebagai uji bakteri Salmonella yang menunjukan hasil positif apabila terbentuk koloni tak berwarna sampai merah muda atau bening.

19. Methyl Red Voges Proskauer Broth (MRVP) Komposisi: Peptone Glucose Sodium chloride K2HPO4 Air suling Pembuatan: Ditimbang 1,5 gram MRVP dan dilarutkan dalam 100 ml air suling, dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit, media ini digunakan sebagai media penegasan uji bakteri Salmonella dan E.coli. 20. Koser Citrate Broth Komposisi: Sodium ammonium hydrogen phosphate K2HPO4 MgSO4 Sodium citrate Air suling 1,4 gram 1,0 gram 0,2 gram 3,0 gram 1 liter 5,0 gram 5,0 gram 30 gram 5,0 gram 1 liter

Pembuatan: Ditimbang 5,7 gram Koser Citrate Broth dan dilarutkan dalam 1000 ml air suling, dipanaskan hingga mendidih hingga larut sempurna. Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit.

21. Indole Medium Komposisi: Tryptone NaCl DL-tryptophane Air suling Pembuatan: Bahan-bahan dilarutkan dengan air suling (pH 7,0). Kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi 7 ml, disterilkan dalam autoklaf pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. 10,0 gram 5,0 gram 1,0 gram 1 liter

22. Tetrathinonate Broth Base (TBB) Komposisi: Lab lemco powder Peptone Yeast extract Sodium chloride Calcium carbonat Sodium thiosulfat Pembuatan: Dilarutkan 7,7 gram TBB dalam 10 ml air suling. Dipanaskan sampai mendidih agar larut sempurna. Media ini jangan di autoklaf. Pada saat akan digunakan, tambahkan 2 ml larutan iodine untuk 100 ml media. Jangan disimpan terlalu lama setelah media ditambahkan larutan iodine. Media ini digunakan sebagai media pengkaya pada homogenasi contoh makanan untuk uji Salmonella setelah ditambahkan larutan iodine dan 1 ml Brillian Green 0,1 % untuk 10 ml. 0,9 gram 4,5 gram 1,8 gram 4,5 gram 25,0 gram 40,7 gram

60

58

23. Kovacs reagent Komposisi: p-dimethylaminobenzaldehyde n-amylalkohol HCl pekat Pembuatan: Larutkan p-dimethylaminobenzaldehyde dalam Amylalkohol. Dengan perlahan-perlahan tambahkan HCl, simpan pada 4oC. 5,0 gram 75 gram 25 mL

24. Merah metil (MM) Komposisi: Methyl Red Etil alkohol Pembuatan: Larutkan Methyl Red dalam alkohol, lalu encerkan dengan air suling sampai menjadi 500 ml. 0,10 gram 300 mL

25. Alpha-naftol 5% Pembuatan: Larutkan 5 gram alfa-naftol dalam 100 ml alkohol mutlak.

26. Rabbit Plasma Pembuatan: Gunakan bacto-coagulase plasma (EDTA No. kode 0803) dehidrat. Larutkan 1 amful (100 mg) dalam 3 ml air suling. Larutkan plasma yang tidak terpakai dapat disimpan dalam lemari pendingin (0-5oC) selama beberapa hari.

27. Voges Proskauer a. Larutan alfa-naftol 5% Pembuatan: Larutkan 5 gram alfa-naftol dalam 100 mL air suling.

61

62

b. Larutan KOH 40% Pembuatan: Larutkan 40 gram Kalium Hidroksida dalam 100 ml air suling. Larutkan alfa-naftol harus segar disiapkan setiap hari (setiap akan dipakai).

28. Kalium Tellurit Trihidrat 1 % Pembuatan: Larutkan 1 gram Kalium tellurit trihidrat dalam 100 ml air suling, kemudian disterilkan pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit atau dengan penyaringan. Larutan ini digunakan sebagai indikator pada pengujian S. aueus yang ditambahkan 2 ml pada 100 ml media Baird Parker Agar (BPA).

29. Asam Tartarat 10 % Pembuatan: Larutkan 10 gram asam tartarat dalam 100 ml air suling, kemudian disterilkan pada suhu 121oC tekanan 15 psi selama 15 menit. Larutan ini digunakan sebagai penurun pH menjadi pH 3,5 pada pengujian Kapang dan Khamir yang ditambahkan 1,6 ml pada 100 ml media Potato Dextrose Agar (PDA).

30. -Galaktosidase Komposisi: a. Natrium dihidrogen fosfat b. Larutan NaOH 0,1 N c. Air suling d. Pyranoside 6,9 gram 3,0 gram 65 ml 80 mg

Pembuatan: a. Natrium dihidrogen fosfat Larutkan Natrium dihidrogen fosfat dalam 45 ml air. Atur pH 7,00,1. Ditambahkan air hingga mencapai 50 ml. Disimpan dalam lemari pendingin.

63

b. Orto-nitrophenyl Beta-D-glacto-Pyranoside Larutkan Pyranoside dengan air suling pada 50oC, didinginkan lalu ditambahkan 5 ml larutan Natrium dihidrogen fosfat yang telah dibuat. Disimpan pada suhu 4oC (penyimpanan tidak melebihi 1 bulan).

31. Larutan Kristal Violet Komposisi: Kristal violet (85-90% kadar zat warna) Etil alkohol (95%) Ammonium oksalat Air suling Pembuatan: Larutkan Kristal Violet dalam alkohol dan Ammonium Oksalat dalam air suling sebanyak 80 ml. Campurkan kedua larutan tersebut dan simpan campuran selama 24 jam sebelum digunakan. 2 gram 20 mL 0,8 gram 80 ml

32. Larutan Lugol Komposisi: Iodine Kalium Iodida Air suling Pembuatan: Masukan bahan-bahan tersebut ke dalam air suling sebanyak 300 ml, campurkan dan biarkan 24 jam sehingga Yod melarut sempurna. 1,0 gram 2,0 gram 300 ml

Lampiran 7. Tabel APM Seri 3 Tabung

Jumlah Tabung Positif 10-1 10=2 10-3 0 0 0 0 0 1 0 0 2 0 0 3 0 1 0 0 1 1 0 1 2 0 1 3 0 2 0 0 2 1 0 2 2 0 2 3 1 3 0 1 3 1 1 3 2 1 3 3 1 0 0 1 0 1 1 0 2 1 0 3 1 1 0 1 1 1 1 1 2 1 1 3 1 2 0 1 2 1 1 2 2 1 2 3 2 3 0 2 3 1 2 3 2 2 3 3 2 0 0 2 0 1 2 0 2 2 0 3

APM/g

3 3 6 9 3 6 9 12 6 9 12 16 9 13 16 19 4 7 11 15 7 11 15 19 11 15 20 24 16 20 24 29 9 14 20 26

Jumlah Tabung Positif =1 -2 -3 10 10 10 2 1 0 2 1 1 2 1 2 2 1 3 2 2 0 2 2 1 2 2 2 2 2 3 2 3 0 2 3 1 2 3 2 2 3 3 3 0 0 3 0 1 3 0 2 3 0 3 3 1 0 3 1 1 3 1 2 3 1 3 3 2 0 3 2 1 3 2 2 3 2 3 3 3 0 3 3 1 3 3 2 3 3 3

APM/g

15 20 27 34 21 28 35 42 29 36 44 53 23 39 64 95 45 75 120 160 93 150 210 290 240 460 1100 1400

Tabel 10. Tabel APM Seri 3 Tabung

64