Professional Documents
Culture Documents
Elektrohemija: 15 pitanja Maks.: 25 bodova Min.: 13 bodova Separacija: 5 pitanja Maks.: 10 bodova Min.: 6 bodova
Ispit
Maks.: 25 + 10 = 35 Min: 13 + 6 = 19
Instrumentalne metode
SEPARACIONE METODE
PLAN PREDAVANJA
Uvod u separacione instrumentalne metode Principi razdvajanja Elektroforeza (princip i podela) Hromatografija (princip i podela)
LITERATURA
1. M. Medenica, D. Maleev, Eksperimentalna fizika hemija http://supa.pharmacy.bg.ac.rs/courses/17/posts/Ud benik/Udbenik/ Eksperimentalna fizika hemija 2. M. Medenica, Skripta: Instrumentalne metode,
deo C
INSTRUMENTALNE METODE
Spektroskopske
(refrakcija, rotacija, apsorpcija, emisija, difrakcija, rasipanje)
Elektroanalitike
(Q, U, I, )
Separacione
VE STE NAUILIIM
I deo ispita
SEPARACIONE METODE
"Klasine" Instrumentalne
Kvalitativna analiza: Boja, rastvorljivost, Tm, Tk, indeks refrakcije, itd. Kvantitativna analiza: Gravimetrijska i titrametrijska merenja
SEPARACIONE METODE
CENTRIFUGA ( (veliini, obliku)) MASENA SPEKTROMETRIJA ( m/e)
HROMATOGRAFIJA
ELEKTROFOREZA
HROMATOGRAFIJA
ELEKTROFOREZA
Planarna
Kapilarna
ELEKTROFOREZA
Elektrokinetika pojava Kretanje koloidnih i drugih naelektrisanih estica kroz neku sredinu (rastvor, gel i sl.) uslovljeno prisustvom i delovanjem homogenog elektrinog polja
Metoda Separaciona metoda razdvajanje komponenata smee (naelektrisanih estica istog, ili predznaka) u polju jednosmernog elektrinog napona
10
Istorija Istorija
Arne Tiselius 19021971
elektroforeza
. 37 19
. 48 a 19 ov ju s el i Tis lija e
Nobelova nagrada za hemiju (elektroforeza pokretne granice razdvajanje smee serum proteina)
nekompletna separacija (mnogi proteini imaju isto ukupno naelektrisanje komplikovana aparatura i skupa
Princip Princip
Podela Podela
ELEKTROFOREZA Prema nainu izvoenja
Elektroforetske tehnike:
Slobodna (u rastvoru)
papir, gel
kapilara
u kapilari
Zonska elektroforeza je sli slina hromatografiji, hromatografiji, osim to je migracija uslovljena dejstvom elektri elektrinog polja, umesto mobilnom fazom
13
Podela Podela
ZONSKA ELEKTROFOREZA Prema obliku podloge
1 1
Planarna Kapilarna
2 2
Podloga: papir, celuloza-acetat, polimerni gel (L: 210 cm) potopljena u pufer jednostavna spora ne moe se automatizovati loa kvantifikacija potrebne velike koliine uzorka (L)
kapilara (L: 40100 cm, R: 2575 m) kvarc koji sadri sinanolne grupe kompleksna brza moe se automatizovati dobra za kvantitivnu analizu potrebne male koliine uzorka (nL)
14
Razdvajanje komponenata smee izmeu DVE FAZE razliite pokretljivosti (stacionarne i mobilne) faze
15
Istorija Istorija
Mikhail Tswett (18721919)
hromatografija adsorpciona
19 06 .
go d.
razdvajanje sastojaka zelenog lia (hlorofil, ksantofil) CaCO3 kao adsorbens, petrol-etar/etanol kao mobilna faza odvojeni pigmenti (obojene trake u koloni)
16
K =
cs cm
Podsetiti se:
Teorijski principi i tehnike izvoenja adsorpcione, particione i jonoizmenjivake hromatografije
18
STACIONARNA FAZA
vrsto telo ( porozno ili granulisano) sloj tenosti adsorbovan na vrstom telu jonoizmenjiva
19
Podela Podela
HROMATOGRAFIJA Prema mehanizmu razdvajanja
Adsorpciona
adsorpcioni koeficijenti
u koloni
Podeona(particiona) Jonoizmenjivaka
koeficijenti rastvorljivosti afinitetu sastojaka prema jonskoj izmeni
u koloni
20
Adsorpciona hromatografija
Razdvajanje zasnovano na razlici u afinitetu adsorpcije sastojaka uzorka prema povrini vrste faze (razdvajanje na osnovu adsorpcionih koeficijenata)
Podeona hromatografija
Jonoizmenjivaka hromatografija
Razdvajanje bazirano na razlici u afinitetu sastojaka uzorka prema jonskoj izmeni
21
Podela Podela
HROMATOGRAFIJA Prema fizikom stanju mobilne i stacionarne faze
22
Podela Podela
HROMATOGRAFIJA Prema obliku hromatografske podloge
Planarna
(hromatografija otvorene podloge)
U koloni
(kapilara i punjena kolona)
Stacionarna:
Kristalna voda inkorporirana u silika-gel H2O kojom je natopljena traka filter-papira
Stacionarna:
Kapilara: film tenosti ili vrsti adsorbens Punjena kolona: vrsti zrnasti materijal
Mobilna: tenost koja se kree pod dejstvom kapilarnih sila, ili zemljine tee
Mobilna: tenost koja se kree pod dejstvom sile zemljine tee i /ili p
Podela Podela
FRONTALNA ANALIZA Na stacionarnu fazu se const. dodaje RASTVOR UZORKA i samo komponenta koja se najbre kree dobija se u istom stanju RETKO SE KORISTI
ISTISKIVANJE Na stacionarnu fazu se nanosi rastvor uzorka, a onda supstancija koja istiskuje komponente uzorka i tako ubrzava njihovo kretanje SAMO KVALITATIVNA
ELUIRANJE
Uzorak se unosi u kolonu, jedan kraj papira, ili tankog sloja vrste stac. faze i ISPIRA MOBILNOM FAZOM (ELUENTOM) KVALITATIVNA I KVANTITATIVNA
24
1) izokratsko: uvek ista mobilna faza 2) gradijentno: sastav mobilne faze se menja za vreme eluiranja
(npr. 50% metanol (5 min), 60% metanol (drugih 5 min), 70% metanol (treih 5 min), itd.)
25
ELUIRANJE
DETEKCIJA
Na kraj kolone postavi se detektor koji reaguje na prisustvo analita: signal detektora u funkciji vremena daje dijagram sa nizom pikova
HROMATOGRAFIJE U KOLONI
27
28
HROMATOGRAF
Ureaj kojim se vri hromatografsko razdvajanje komponenata smee
GC(HP) LC(HP)
HPLC(HP)
29
HROMATOGRAM
Zone (razdvojene komponente) rasporeene u stacionarnoj fazi (u planarnoj hromatografiji: papir, ili tanki sloj na kome su zone)
unutranji
Grafiki prikaz odziva detektora (koncentracije analita u eluatu ili neke druge veliine (srazmerne koncentraciji)) u funkciji vremena ili zapremine eluata OD = f(t), tj. c = f(t) OD = f(V), tj. c = f(t) spoljanji
30
Tipovi hromatograma
i kod elektroforeze
1 1
UNUTRANJI sastojci analize: prelaze udaljenosti na podlozi za isto vreme detektuju se na samoj podlozi
SPOLJANJI
2 2
2 2 A A
Diferencijalni c = f(t)
SPOLJANJI HROMATOGRAM Integralni Ukupna koliina = f(t) detektor belei ukupnu koliinu izeluiranih sastojaka u vremenu
B B
detektor belei promenu koncentracije komponente (u mobilnoj fazi) u funkciji vremena eluiranja
OD
c/mmolcm
-3
OD
c/mmol
t
32
A A
B B
33
HROMATOGRAM
Grafiki prikaz (zapis) hromatografskog razdvajanja
Veliina merenog signala (OD) u funkciji vremena zadravanja komponente smee u koloni t
ili
Veliina merenog signala (OD) u funkciji zapremine mobilne faze koja je potrebna da eluira komponentu iz kolone V
34
1 1 2 2 3 3 4 4
mrtvo vreme
retencioni faktor
35
Retencija (zadravanje)
Komponente se razdvajaju jer se zadravaju u stacionarnoj fazi razliito vreme
1 1
Retenciono vreme
mrtvo vreme vreme od momenta unoenja uzorka do pojave pika mobilne faze
2 2
Retenciono vreme
3 3
Retenciona zapremina
36
Karakteristike hromatograma
Definicije
OD
t0 mrtvo vreme(retenciono vreme u mobilnoj fazi) tR ukupno vreme zadravanja, od trenutka ubacivanja uzorka do max. pika
t0
tR korigovano retenciono vreme (retenciono vreme u stacionarnoj fazi) h visina pika ( rastojanje izmeu osnovne linije i vrha pika ) W irina pika W0,5 irina pika na h
2 2
i k ti a m e at M
az r iz
t R = t + t0
, R
t = tR t0
, R
t0 (L/u) vreme od momenta unoenja uzorka do pojave pika
mobilne faze
38
Karakteristike hromatograma
VR
OD
Definicije
VR,
V0 prazna zapremina (zapremina mobilne faze koja bez zadravanja stie do detektora) VR zapremina mobilne faze potrebne da se data komponenta eluira iz kolone VR korigovana retenciona zapremina
V0
V/mL
Prazna zapremina
39
3 3
i k ti a m e at M
az r iz
RETENCIONA ZAPREMINA
VR = V + V0
, R
VR = t R u
u brzina protoka mobilne faze (cm3 s1)
V = VR V0
, R
V = t u
, R , r
40
4 4
Def.
Matematiki izraz
t R t0 t k = = t0 t0
,
, R
41
Ispitivani sistem Gasovi i isparljive supstancije Supstancije razliitog hemijskog tipa Supstancije slinog hemijskog tipa Neorganske i jonske supstancije
Vrsta hromatografije Gasna Podeona Adsorpciona Jonoizmenjivaka Hromatografija na tankom sloju i papiru Jonoizmenjivaka i gel hromatografija Gel hromatografija
42
HROMATOGRAFSKA ANALIZA
vrsta stacionarne faze; sastav i priroda mobilne faze sastav i priroda analiziranog uzorka tehnika injektiranja uzorka i injektorski sistem (posebno kod GC) T, p, brzina protoka mobilne faze izbor detektora (osetljivost) hromatogram
43
PRIMENA HROMATOGRAFIJE
Kvalitativna analiza
identifikacija (preko tR, t'R, VR,V 'R, oblika pika) tR je karakteristina vrednost na T = const., protoku i za datu kolonu dodatne identifikacije pomou IR, NMR ili MS
Kvantitativna analiza
odreivanje koliine na osnovu h = f(c), P = f(c) (automatski (pomou integratora) ili raunski kalibracija
44
HROMATOGRAM HROMATOGRAM
Nesteroidni anti-inflamatorni lekovi 1. 2. 3. 4. 5. Ketoprofen Naproksen Fenoprofen Ca Flurbiprofen Ibuprofen
Uslovi: Kolona: Kaseisorb LC ODS 2000 4.6mml.D.250mm Mobilna faza: CH3CN/H2O/CH3COOH T: 25C Brzina protoka: 1 mL/min Detekcija: UV na 254 nm
t/min
45
Elektroforeza
preparativne i analitike svrhe elektrino polje planarna (vsta podloga: papir, gel) kapilara naelektrisanje, veliina i oblik
Hromatografija
mobilna faza planarna (otvorene podloge) kolona (kapilara i punjena kolona) polarnost raspodela izmeu 2 faze (razliiti koeficijenti raspodele) spektrofotometar, fluorimetar, itd. hromatogram OD = f(vreme provedeno u koloni) OD = f(zapremina eluata) Retenciono vreme organska jedinjenja (lako (GC) i teko isparljiva (HPLC) 46
UV/VIS, MS, itd. elektroforezogram (elektroforegram) OD = f (migraciono vreme) Migraciono vreme joni, koloidni rastvori, vitamini, lekovi, proteini, organske kiseline
I Z V O D
Separacione instrumentalne metode (principi razdvajanja) Elektroforeza ( (ta je, princip, podela) Hromatografija ( (ta je, princip, podela) Hromatogram (karakteristike, definicije i matemati matematiki izrazi za karakteristi karakteristine veli veliine) Poreenje elektroforeze i hromatografije
47