UNIVERSIDAD COMPLUTENSE DE MADRID Facultad de Ciencias Qumicas Departamento de Ingeniera Qumica

OBTENCIN DE CIDO CTRICO Asignatura de Ingeniera de Bioprocesos Grado en Ingeniera Qumica

Molt Marn, Jos Luis 53716719N Madrid, enero 2014

Se ha descrito los distintos procesos downstream para la obtencin del cido ctrico por medio de las etapas de separacin, concentracin y purificacin ms comunes y utilizadas y las que estn en pleno desarrollo y aplicacin a nivel de laboratorio y planta piloto. El desarrollo y uso de un proceso de los que se describen viene en funcin de un estudio de la pureza del producto obtenido, el costo de produccin en relacin con el rendimiento, la escalabilidad, la reproducibilidad y facilidad de implementacin y por ltimo la robustez con respecto a las variables de proceso de flujo

NDICE
1. 2. 3. 4. 4.1 4.2 4.3 4.4 4.5 4.6 4.7 4.8 INTRODUCCIN Y OBJETIVOS ...................................................................... 1 CIDOS ORGNICOS ........................................................................................ 2 CIDO CTRICO .................................................................................................. 2 DOWNSTREAM PROCESSING DEL CIDO CTRICO ............................... 4 PRETRATAMIENTO DEL CALDO DE FERMETACIN ......................... 4 PRECIPITACIN .............................................................................................. 5 EXTRACCIN ................................................................................................ 11 ADSORCIN, ABSORCIN E INTERCAMBIO INICO ....................... 14 MEMBRANAS LQUIDAS ........................................................................... 16 ELECTRODILISIS ....................................................................................... 17 LA ULTRAFILTRACIN .............................................................................. 19 INMOVILIZACIN DE MICROORGANISMOS ....................................... 20

1.

INTRODUCCIN Y OBJETIVOS El objetivo de las etapas del downstream processing es obtener un compuesto en

concreto que puede estar mezclado con millones de otros componentes, lo que puede llevar a errores de clculo, dar palos de ciego y hacer esfuerzos intiles hasta superar los problemas que se pueden dar para cumplir con los requisitos que garanticen la purificacin eficaz y eficiente con un rendimiento y pureza ptimos. Para ello es necesario adoptar ciertas estrategias: reducir procedimientos innecesarios manteniendo una purificacin simple; cuando las tcnicas ms econmicas estn disponibles, se deben mantener y evitar las ms costosas; optimizar cada paso a medida que avanza el proceso; reemplazar o actualizar equipos lentos para acelerar el proceso y utilizar siempre tcnicas y aparatos fiables, adems de artculos necesarios ms pequeos como tubos de ensayo, pipetas, etc, lo cual es muy importante. Tambin, se tienen que seguir las buenas prcticas de manufactura (BPM), procedimientos operativos estndar (SOP), procedimiento operativo estndar de saneamiento (SSOP) y las buenas prcticas de laboratorio (BPL) que deben ser especficos de nuestro proceso y la prctica; se tiene que controlar el procedimiento en todos los pasos necesarios y registrar las desviaciones de las normas establecidas; asegurarse de que los ensayos se han desarrollado y estandarizado para monitorear la purificacin, la actividad de produccin, el costo unitario y la pureza de la produccin en cada etapa necesaria. Siempre es necesario recordar que los objetivos son el rendimiento, la pureza, el cambio de escala, la reproducibilidad y el uso econmico de los reactivos o aparatos. No se pueden generalizar los problemas que se pueden encontrar durante la recuperacin de los bioproductos, y la exigencia de los diferentes mtodos de procesamiento y tcnicas de ensayo, pero tienen que ser entendidos mediante la individualizacin de productos o procesos, ya que los problemas que se pueden generar durante una etapa en particular puede variar de un producto a otro, e incluso los requisitos pueden variar para el mtodo en particular o el instrumento. Se entienden los problemas que se pueden producir en cada etapa y los requisitos de superacin de stos, para lograr una recuperacin ptima, en este caso de la produccin de cidos orgnicos.

2.

CIDOS ORGNICOS Los cidos orgnicos son principalmente el ctrico, glucnico y itnico que son

recuperados por eliminacin de la biomasa que la produce a partir de, principalmente, una filtracin seguida de una precipitacin (citrato clcico, gluconato de calcio o de sodio, cido itnico). En la Tabla 2.1 se recoge el cido orgnico, el sustrato, el microorganismo productor y los usos que tiene.

Tabla 2.1. Ejemplos de cidos orgnicos comerciales producidos por microorganismos. 3. CIDO CTRICO El cido ctrico es un cido orgnico tricarboxlico que est presente en la mayora de las frutas, sobre todo en ctricos como el limn y la naranja. Su frmula qumica es C6H8O7. El nombre IUPAC del cido ctrico es cido 2-hidroxi-1,2,3-

propanotricarboxlico. Est representado en la Figura 3.1.

Figura 3.1. Formulacin orgnica del cido ctrico. Es un buen conservante y antioxidante natural que se aade industrialmente como aditivo en el envasado de muchos alimentos como las conservas de vegetales enlatadas.
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Aparece como un metabolito intermediario en el ciclo de los cidos tricarboxlicos, proceso realizado por la mayora de los seres vivos. Las propiedades fsicas del cido ctrico se resumen en la Tabla 3.1. Tabla 3.1. Principales propiedades del cido ctrico. Nmero CAS Densidad Masa molar Punto de fusin Acidez Solubilidad en agua Riesgos 77-92-91 1665 kg/m3 192,13 g/mol 175 C 1=3,15; 2=4,77; 3=6,40 pKa 133 g/100 ml (22 C) Irrita piel y ojos.

La acidez del cido ctrico es debida a los tres grupos carboxilos -COOH que pueden perder un protn en las soluciones. Si sucede esto, se produce un ion citrato. Los citratos son unos buenos controladores del pH de soluciones cidas y forman sales con muchos iones metlicos. El cido ctrico es un polvo cristalino blanco que puede existir en una forma anhidra (sin agua), o como monohidrato. La forma anhidra se cristaliza en el agua caliente, mientras que la forma monohidrato se cristaliza en fra. El monohidrato se puede convertir a la forma anhidra calentndose sobre 74 C. Qumicamente, el cido ctrico comparte las caractersticas de otros cidos carboxlicos. Cuando se calienta a ms de 175 C, se descompone produciendo dixido de carbono y agua. El descubrimiento del cido ctrico se atribuye al alquimista islmico Jabir Ibn Hayyan en el siglo VIII d.c. y fue el primer cido aislado en 1784 por el qumico sueco Carl Wilhelm Scheele, que lo cristaliz a partir del jugo de limn. La produccin de cido ctrico a nivel industrial comenz en 1860, basado en la industria italiana de los ctricos. En 1893, C. Wehmer descubri que cultivos de penicillium podan producir cido ctrico a partir de la sacarosa molecular. Sin embargo, la produccin microbiana del cido ctrico no lleg a ser industrialmente importante hasta la Primera Guerra Mundial que interrumpi las exportaciones italianas de limones. En 1917, el qumico americano
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James Currie y Claudio Coln descubri que ciertos cultivos de Aspergillus niger podan ser productores eficientes de cido ctrico, y Pfizer comenz la produccin a escala industrial usando esta tcnica dos aos ms tarde. El cido ctrico es obtenido principalmente en la industria gracias a la fermentacin de azcares como la sacarosa o la glucosa, realizada por un microhongo lla mado Aspergillus niger. El proceso de obtencin tiene varias fases como la preparacin del sustrato de melaza, la fermentacin aerbica de la sacarosa por el aspergillus, la separacin del cido ctrico del sustrato por precipitacin al aadir hidrxido de calcio o cal apagada para formar citrato de calcio. Despus, se aade cido sulfrico para recuperar la molcula de cido ctrico y retirar el calcio como sulfato de calcio. La eliminacin de impurezas se realiza con carbn activado y resina de intercambio catinico y aninico, se contina con la cristalizacin del cido ctrico, el secado o deshidratacin, luego se separa por tamao de partcula y finalmente se empaca el producto. El producto anhidro es muy higroscpico por tal razn debe guardarse a baja temperatura y humedad relativa, de lo contrario se forman terrones del cido. Cerca del 92 % de la produccin de cido ctrico mundial es elaborado por la Unin Europea, Estados Unidos, China, Brasil y Colombia. 4. DOWNSTREAM PROCESSING DEL CIDO CTRICO 4.1 PRETRATAMIENTO DEL CALDO DE FERMETACIN

Al trmino de la fermentacin de cido ctrico la solucin obtenida contiene, adems del producto deseado, micelios y cantidades variables de otras impurezas, como por ejemplo, sales minerales, otros cidos orgnicos, protenas, etc. El mtodo de recuperacin de cido ctrico a partir del caldo de fermentacin puede variar dependiendo de la tecnologa y de las materias primas utilizadas para la produccin. En el proceso de recuperacin del lquido de la fermentacin, ste se drena y se introduce agua caliente para lavar la cantidad restante de cido ctrico de las esteras de micelio. Es necesario un exhaustivo lavado en esta etapa, porque el micelio es alrededor del 15 % del producto formado en la fermentacin. Despus de 1-1,5 horas, cantidades limitadas de agua de lavado que se drena, se aade al licor de fermentacin y las esteras de micelios, y, entonces, stos se retiran desintegrados del recipiente de lavado. En este recipiente, el micelio se calienta a aproximadamente 100 C mediante vapor de agua. La pulpa caliente posteriormente se deshidrata por filtrado a presin. La solucin que
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contiene 2-4 % de cido ctrico se aade al lquido de la fermentacin, mientras que la torta de filtracin, que no contiene ms de un 0,2 % de cido ctrico, se seca para producir una alimentacin de material rico en protenas. En la fermentacin sumergida, el micelio es mucho ms difcil de separar del caldo de fermentacin. Despus de que el proceso de fermentacin se completa, el micelio que contiene el caldo se calienta a una temperatura de 70 C durante aproximadamente 15 minutos, para obtener la coagulacin parcial de protenas, y despus se filtra, generalmente por medio de los filtros continuos (por ejemplo, un filtro g centrfugo de tambor vaco o un filtro de descarga de la correa). Debido a la consistencia viscosa del micelio formando en el proceso sumergido, se pueden requerir filtraciones auxiliares. Si el micelio se va a utilizar como alimento, el coadyuvante de filtracin tambin debe ser digerible, como por ejemplo, hecho a partir de materiales celulsicos. Si durante el proceso de fermentacin, se forma cido oxlico como producto secundario debido al mal control del proceso, tiene que ser eliminado del caldo. Esto generalmente se logra por el aumento del pH del fluido de fermentacin con el hidrxido de calcio a pH =2,7 hasta 2,9 a una temperatura de 70 -75 C. El oxalato de calcio precipitado se puede retirar de la solucin por filtracin o centrifugacin, y el cido ctrico permanece en disolucin como el citrato de monocalcio. La separacin del oxalato aumenta la tasa de filtracin del citrato de calcio y de yeso en los pasos siguientes aguas abajo del proceso y reduce el matiz amarillo de la solucin de cido ctrico. La recuperacin de cido ctrico a partir de caldo de fermentacin pretratado puede llevarse a cabo por varios procedimientos, mediante: el mtodo clsico de precipitacin, la extraccin con disolventes, la adsorcin/absorcin en resinas de intercambio inico y los mtodos ms sofisticados desarrollados recientemente tales como: la electrodilisis, ultra y nanofiltracin o la aplicacin de membranas lquidas. 4.2 PRECIPITACIN

El mtodo estndar de recuperacin de cido ctrico involucra a la precipitacin del citrato triclcico insoluble por la adicin de una cantidad equivalente de la cal a la disolucin de cido ctrico. El xito de la precipitacin depende de la concentracin de cido ctrico, la temperatura, el pH y de la velocidad de adicin de cal. Para obtener grandes cristales de
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alta pureza, se aade la lechada de cal, que contiene xido de calcio (180-250 kg/m3), gradualmente a una temperatura de 90 C o por encima y a un pH por debajo, pero cerca, de 7. La concentracin de cido ctrico en la solucin debe estar por encima del 15 %. El proceso de neutralizacin suele durar unos 120-150 minutos. Las prdidas mnimas de cido ctrico, debido a la solubilidad del citrato de calcio, son del 4-5 %. Si la precipitacin se realiza correctamente, la mayora de las impurezas permanecen en la solucin y pueden ser eliminadas por el lavado del citrato clcico filtrado. ste lavado se realiza con la menor cantidad posible de agua caliente (aprox. 10 m3 de agua por tonelada de cido a 90 C) hasta que los sacridos, cloruros o sustancias coloreadas se dejen de detectar en el efluente. El citrato clcico se filtra y posteriormente se trata con cido sulfrico concentrado (60-70 %) para obtener el cido ctrico y el precipitado de sulfato de calcio (yeso). Despus de filtrar el yeso se obtiene una disolucin del 2530 % de cido ctrico. El filtrado se trata con carbn activo para eliminar las impurezas residuales o se purifica en columnas de intercambio inico. La disolucin purificada se concentra a continuacin en los evaporadores de vaco a temperaturas por debajo de 40 C (para evitar la caramelizacin), una vez cristalizado, se centrifuga y se seca para obtener los cristales de cido ctrico. Si la cristalizacin se lleva a cabo a temperaturas por debajo de 36,5 C, se forma el cido ctrico mono-hidrato y por encima de esta temperatura de transicin se pueden obtener el anhidrato cido ctrico. La desventaja de esta tecnologa es la gran cantidad de cal requerida para la neutralizacin del cido ctrico y de cido sulfrico para la descomposicin del citrato de calcio. Por otra parte, se forman grandes cantidades de desechos lquidos y slidos (en la disolucin formada de la filtracin del citrato de calcio y yeso). Por una tonelada de cido ctrico se consumen 579 kg de hidrxido de calcio, 765 kg de cido sulfrico y 18m3 de agua y se produce, aproximadamente, una tonelada de residuos de yeso. Con el fin de disminuir la cantidad de cal y cido sulfrico en un tercio, se propuso la recuperacin de cido ctrico por precipitacin del citrato de cido di-clcico. Una ventaja adicional de este mtodo es que el citrato de cido di-clcico tiene una definida estructura cristalina y el lavado es ms limpio que el citrato tri-clcico amorfo. Por otra parte, precipitan menos impurezas del fluido de fermentacin con la sal de dicalcio que con la sal normal, si la mezcla de reaccin se neutraliza por completo.

FERMENTACIN
calentar a 90 C

COAGUL. PARCIAL DE PROTENAS

coadyudante agua

SEPARACIN DEL MICELIO PRECIPITACIN DE OXALATO

micelio

cal, 70 C pH= 2,7-2,9

SEPARACIN

Oxalato cclcico

cal, 95 C pH= 7 agua de lavado

PRECIPITACIN DE CITRATO CLCICO

residuo de filtrado

SEPARACIN

cido sulfrico

TRATAMIENTO CON CIDO SULFRICO

residuo de yeso

SEPARACIN

PURIF. CON C ACTIV. O INT. INICO

condensado

EVAPORACIN

CRISTALIZACIN

licor madre recirculado

SEPARACIN

SECADO EMPAQUETADO

Figura 4.2. Diagrama de bloques de la separacin y purificacin del cido ctrico por el mtodo de precipitacin estndar.
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El citrato cido di-clcico precipita a partir de una solucin de cido ctrico que ha sido parcialmente neutralizado por la adicin de hidrxido de calcio, xido de calcio o carbonato de calcio en una temperatura elevada. Se cree que existe un equilibrio entre el citrato tri-clcico y el cido ctrico, por un lado, y el cido citrato di-clcico en el otro. A temperatura ambiente la velocidad de formacin del hidrurocitrato de calcio es insignificante, pero si la temperatura se eleva por encima de 40 C la conversin completa del citrato tri-clcico en una solucin acuosa de cido ctrico se produce dentro de un perodo razonable de tiempo (alrededor de 24 horas). De acuerdo con este principio, se ha desarrollado un nuevo mtodo de recuperacin de cido ctrico. La disolucin de cido ctrico, obtenida a partir del caldo de fermentacin, se divide en dos partes. La primera parte, unos dos tercios del volumen total, se neutraliza completamente con una lechada de cal, el citrato de tri-clcico se separa por filtracin y se aade a la parte restante de la solucin de cido ctrico original. Si la mezcla obtenida se calienta por encima de 40 C se produce la precipitacin del cido citrato de dicalcio. Como mtodo alternativo, se puede aadir directamente una cantidad de hidrxido de calcio de no ms de dos tercios de la requerida para la neutralizacin completa de la solucin de cido ctrico. Esta mezcla de citrato de tri-clcico y cido ctrico se convierte a cido citrato di- clcico por calentamiento por encima de los 40 C, preferiblemente a 80-95 C (dependiendo del punto de ebullicin de la solucin). Los resultados del proceso se pueden mejorar, tanto acortando el tiempo como aumentando la produccin, si la mezcla se siembra con cristales de citrato cido dicalcio (el rendimiento mejora alrededor del 10 a 25 % del esperado). Como una alternativa a los mtodos clsicos de la precipitacin, separacin y purificacin de cido ctrico a partir de soluciones de fermentacin, Schultz (1963) ha sugerido el aislamiento del cido ctrico a partir de una disolucin de fermentacin en la que forme sales con un metal alcalino y se recupere directamente en una sola operacin. Este proceso se basa en el hecho de que ciertas sales de un metal alcalino con cido ctrico cristalizan a partir de una disolucin de fermentacin despus de la neutralizacin del cido mediante la adicin de compuestos de metales alcalinos (hidrxidos , bicarbonatos o carbonatos) de una manera se obtienen el mono- , dicitratos del metal o tri-lcali. Las impurezas contenidas en la fermentacin del caldo influyen o incluso inhiben la cristalizacin de las sales, lo que hace que, tericamente, no todas las sales de metales
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alcalinos de cido ctrico posibles se pueden producir en forma cristalina de acuerdo con el proceso. Sin embargo, si se de sodio, las tres sales pueden ser recuperadas en forma de cristales. Antes de la neutralizacin de la disolucin de fermentacin, sta puede ser concentrada mediante la evaporacin a vaco hasta una concentracin de, al menos, un 40 %. Despus de la neutralizacin de las sales de metales alcalinos, cristaliza al dejarlo en reposo o en agitacin lenta; para mejorar la velocidad del proceso se pueden aadir cristales de siembra. La cristalizacin normalmente finaliza en el plazo de 24 horas. La separacin de los cristales de la disolucin se lleva a cabo por los mtodos habituales (filtracin, centrifugacin). Despus de lavar los cristales con una pequea cantidad de agua, se obtiene un precipitado casi blanco o ligeramente amarillento-marrn, dependiendo el tipo de citrato del metal alcalino recuperado. La purificacin posterior de cido ctrico se puede realizar por intercambio inico en resinas de intercambio catinico o por electrodilisis. El rendimiento de cido ctrico de la recuperacin en forma de sales de metales alcalinos es entre el 50 % y 80 % dependiendo de la sal que se usa. El cido ctrico restante del caldo de fermentacin se puede recuperar mediante el mtodo "clsico" de precipitacin en forma de citrato de calcio y, despus, el tratamiento con el cido sulfrico. De acuerdo con este proceso, se consigue un ahorro considerable en los productos qumicos y se reduce la cantidad de yeso gastado producido. Por otra parte, el yeso obtenido filtra ms rpidamente, debido a la presencia de iones de metales alcalinos, que el yeso de la tecnologa "clsica", producido en ausencia de estos iones. El uso de materias primas ms puras de la melaza (por ejemplo, sacarosa o glucosa) en la produccin de cido ctrico conduce a mtodos simplificados para su recuperacin y purificacin. Tanto el azcar cristalino como crudo son las mejores materias primas en vista del alto rendimiento de cido y de la fermentacin relativamente corta. El azcar cristalino tambin se ve favorecida por la reduccin del riesgo de infeccin con microorganismos externos debido al valor bajo del pH inicial del medio nutriente (2,5 a 3), y por la considerable reduccin de la cantidad total de residuos y efluentes. La fermentacin a base de azcar cristalina hace que sea posible el uso de citrato de un mtodo de recuperacin libre del cido ctrico modificado aplicado industrialmente en varias plantas de fabricacin de cido ctrico en Polonia y la Repblica Eslovaca. Esta tecnologa consiste en la eliminacin directa de las impurezas de las aguas despus
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de la fermentacin formado sobre todo por protenas coloidales, sustancias derivadas de micelio, sustancias coloreadas formadas en el calentamiento del caldo de fermentacin, y sales minerales introducidos con el medio nutriente, el sustrato y el agua. Estas impurezas deben ser eliminadas, ya que interfieren en el proceso de cristalizacin posterior. La primera etapa de purificacin de la disolucin se consigue utilizando un agente coagulante seleccionado adecuadamente y con carbn activado y, a continuacin, separar por filtracin los precipitados. El tratamiento posterior implica la eliminacin de las impurezas restantes mediante ultrafiltracin y la retencin de las sales minerales utilizando resinas de intercambio inico. La disolucin de cido ctrico es purificada, concentrada, cristalizada, centrifugada y secada de acuerdo con el proceso de produccin clsico. Despus de la separacin de cristales de cido ctrico, el lquido sobrenadante de la centrifugacin es reciclado de nuevo a la seccin de concentracin, donde a partir del llamado segundo cultivo se obtiene la tercera cosecha de cristales. El lquido sobrenadante, obtenido despus de la eliminacin de la tercera cosecha cristales por centrifugacin, contiene una gran cantidad de impurezas y debe ser purificado por el mtodo clsico, que implica la precipitacin del citrato de calcio. Este mtodo se puede utilizar para purificar slo hasta el 80 % de toda la cantidad de cido ctrico. Esto hace necesario la construccin de una lnea de proceso independiente, con el fin de evitar que las plantas utilicen una tecnologa superior para la fabricacin de una solucin de slo el 50 % de cido ctrico, lo que convierte necesario purificar una parte del cido ctrico por el mtodo de citrato de calcio. Tambin, es posible producir la mitad de la cantidad de cido en forma cristalina y el resto en forma lquida. En este caso, la solucin de cido ctrico purificada por el mtodo de citrato libre se espesa, se cristaliza y se centrifuga para obtener la primera cosecha. El lquido sobrenadante de la centrifugacin (concentracin de cido ctrico de aproximadamente es del 50 %) se purifica por el mtodo descrito a fin de cumplir con los requisitos de la norma de calidad en forma lquida. La ventaja de esta tecnologa radica en el hecho de que alrededor de la mitad del producto se obtiene en forma cristalina y se elimina el uso de cal y cido sulfrico, as como la formacin de grandes cantidades de efluentes y residuos slidos.

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4.3

EXTRACCIN

Un mtodo alternativo de recuperacin libre de citrato del cido ctrico a partir de un caldo de fermentacin es la extraccin por medio de un disolvente selectivo que es insoluble o slo escasamente soluble en el medio acuoso. El disolvente debe ser elegido con el fin de extraer la mxima cantidad de cido ctrico y la mnima cantidad de impurezas. El cido ctrico puede ser entonces recuperado a partir del extracto, ya sea por destilacin del disolvente o lavando el extracto con agua. A partir de la solucin acuosa purificada, el cido ctrico se cristaliza posteriormente por concentracin. En la primera patente sobre el cido ctrico de extraccin por disolventes, se propuso aplicar n-butanol y a continuacin, a lavar la disolucin de cido ctrico en n-butanol con agua. Desde el primer informe de una serie de combinaciones de disolventes, se han sugerido una gran cantidad de informacin y se han publicado las patentes. En general, los mtodos de extraccin pueden ser divididos en tres grupos bsicos: La extraccin con disolventes orgnicos que sean total o parcialmente inmiscibles con agua, tales como ciertos alcoholes alifticos, cetonas, teres o steres. La extraccin con compuestos organofosforados, tales como tri-n-butilfosfato (TBP) y alcalisufxidos, por ejemplo, el xido trioctilfosfina (TOPO). La extraccin con aminas insolubles en agua o una mezcla de dos o ms de stas aminas, disueltas en un disolvente orgnico sustancialmente inmiscible en agua, y la extraccin con sales de aminas. Cada disolvente utilizado para la extraccin se caracteriza por su coeficiente de distribucin de equilibrio, que se define como la relacin de la concentracin de cido del extracto y la concentracin de cido de la fase acuosa. Para bajas concentraciones de cido ctrico en el fluido, el coeficiente de distribucin depende en gran medida del tipo de disolvente; en mayores concentraciones de cido, estas diferencias entre disolventes se reducen en gran medida.

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FERMENTACIN
coadyudante agua

SEPARACIN DEL MICELIO PRECIPITACIN DE LA PROTENA

micelio

coagulante

tierra de diatomeas

FILTRACIN I

Protena precipitada

vapor vaco coagulante carbn activado agua

CONCENTRACIN I

condensado

CLARIFICACIN

tierra de diatomeas

FILTRACIN II

precipitado

PURIFICACIN INTERC. INICO

vapor vaco condensado

CONCENTRACIN II

DISTRIBUCIN

CRISTRALIZACIN

Disolucin al 50 % de cido ctrico lquido

SEPARACIN DEL CRISTAL SECADO EMPAQUETADO

cido ctrico cristalino

Figura 4.2. Diagrama de bloques de la separacin y purificacin del cido ctrico por el mtodo libre de citrato.
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La extraccin con disolventes orgnicos (en la prctica se utilizan cetonas y alcoholes) puede ser til en los casos en que el cido tiene una concentracin relativamente alta en el sistema acuoso del que se va a extraer. Estos disolventes tienen coeficientes de distribucin bastante bajos (0,02-0,36), por lo tanto el extracto est ms diluido que el licor crudo y como norma, son necesarias mltiples etapas de extraccin. Por otra parte, los disolventes con coeficientes de distribucin relativamente altos (tales como butanoles) son demasiados miscibles en agua, por lo que requieren etapas de recuperacin de disolvente que consumen mayor energa. Por lo tanto, estos sistemas de extraccin son relativamente ineficientes para la recuperacin de cido a partir de las disoluciones acuosas diluidas que se encuentran en la mayora de los caldos fermentacin. Los extractantes organofosforados tienen una relacin de distribucin

significativamente mayor que los disolventes carbonados bajo las mismas condiciones, por ejemplo, utilizando el TPB sin diluir para la extraccin del cido ctrico en un cido inicial con una concentracin 0,1 mol a 25 C, puede obtenerse una relacin de distribucin de, aproximadamente 2. Los alcalisufxidos son capaces de extraer cidos carboxlicos con una relacin de distribucin incluso mayor que la de TBP (Nikitin y Egutkin, 1974). El valor del coeficiente de distribucin est influenciado no slo por concentracin de cido, sino tambin por la temperatura. En el TBP la relacin de distribucin del cido ctrico disminuye en un factor de 4 en el intervalo de 0-80 C. Esta propiedad permite un perfecto control del proceso de: la extraccin a baja temperatura (10-30 C) y de la re-extraccin con agua a mayor temperatura (70-95 C). Para la extraccin por medio de aminas, aminas alifticas, aralifticos o aromticos, o mezclas, se utiliza preferiblemente los que tienen el nmero medio de tomos totales de carbono de, al menos, 20 para cada grupo amino. Estos reactivos tienen la ventaja de proporcionar un coeficiente de distribucin favorable del cido ctrico entre las fases acuosa y de aminas de manera que el cido puede ser extrado incluso a partir de disoluciones altamente diluidas. Por otro lado, est el problema de descomposicin de la sal de amina y de recuperacin del cido y la amina por separado, ya que las aminas son demasiado caras para eliminarlas. Por lo general, la amina se libera por el tratamiento de la sal con una base inorgnica (por ejemplo hidrxido de calcio) o con un cido inorgnico, y la sal es obtenida de esta manera en lugar del cido ctrico libre. Adems,

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de los gastos por los productos qumicos usados, este proceso tiene la desventaja de requerir un alto nmero de pasos de procesamiento. La extraccin con sales de amina puede ser considerada como una variante de la extraccin con aminas. En algunos casos la cantidad de cido que se puede extraer con la amina inmiscible en agua es considerablemente mayor que la estequiomtrica de la amina presente en la disolucin. La cantidad en exceso posible de cido extrada depende de varios parmetros, por ejemplo, de la concentracin del cido en el lquido crudo, de la naturaleza de la amina y de su disolvente. En algunos casos, este fenmeno se puede aplicar para extraer el cido a partir de su disolucin acuosa concentrada por medio de sales de aminas con el mismo cido. A partir del extracto, el exceso de cido puede recuperarse mediante el lavado con agua. Los organofosforados y agentes de extraccin de aminas alifticas se desarrollaron inicialmente por las necesidades de tecnologas de separacin extractivas inorgnicas. Cuando se utilizan estos disolventes para la recuperacin de cido ctrico destinado a la industria alimentaria, la pregunta sobre su toxicidad debera de resolverse. Se sabe que algunos de estos compuestos muestran efectos teratognicos. Por otro lado, el disolvente de amina patentado por Baniel et al. (1981) y Baniel (1982) tiene la aprobacin de la Food and Drug Administration de EE.UU. para el uso en alimentos y medicamentos. De la gran cantidad de patentes relativas a la recuperacin de cido ctrico del caldo de fermentacin mediante extraccin slo ste se ha aplicado en la produccin a gran escala. 4.4 ADSORCIN, ABSORCIN E INTERCAMBIO INICO

Como el azcar cristalino o de otras materias primas puras se utiliza con ms frecuencia en la produccin de cido ctrico, estn ganando inters los mtodos de recuperacin y purificacin por adsorcin y por intercambio inico en resinas polimricas. Uno de estos mtodos, que se utiliza a veces como paso en otra tecnologa de recuperacin libre de citrato mencionado anteriormente, implica la adsorcin de los contaminantes en un resina no inica basada en poliestireno o poliacrilato y recoleccin del cido ctrico rechazado. Las patentes sugieren mtodos de adsorcin/absorcin ms eficientes que hacen que sea posible separar el cido ctrico a partir de caldo de fermentacin en un solo paso, se han propuesto varios mtodos basados en un principio
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similar, que implican adsorbentes polimricos de diferente tipos. Un grupo de estos adsorbentes puede ser polmeros neutros, no iongenos, macro-reticulares, insolubles en agua, a base de estireno reticulado con di-vinilbenceno. Se puede conseguir mejor selectividad y mayor capacidad del adsorbente usando intercambio aninico con resinas dbilmente bsicas impregnadas con amina terciaria o piridina, o resinas de intercambio aninico fuertemente bsicas que contienen grupos funcionales de amonio cuaternario. En el caso ms simple, el adsorbente se puede aplicar en forma de un lecho fijo denso y compacto, que se pone en contacto, alternativamente, con la mezcla de alimentacin y desorbente. Para el proceso en semicontinuo puede usarse cualquiera de los equipos convencionales empleados en un lecho fijo con contacto fluido-slido. El cido ctrico se recupera a partir del adsorbente por desorcin con agua o dilucin del cido inorgnico (preferiblemente cido sulfrico de una concentracin de 0,1-0,2 N). De acuerdo con las patentes mencionadas, la separacin completa del cido ctrico a partir de sales e hidratos de carbono se consigue ajustando el pH de la disolucin alimentada por debajo de la primera constante de ionizacin de cido ctrico. El valor de pH requerido para mantener la selectividad adecuada es inversamente proporcional a la concentracin de cido ctrico en la mezcla de alimentacin. Las resinas polimricas propuestas para su uso en la recuperacin de cido ctrico son fabricadas por varias empresas qumicas y se venden bajo diferentes nombres comerciales, por lo que son comercialmente disponibles. Estas empresas pueden diferir en propiedades fsicas tales como la porosidad, densidad, superficie especfica y momento dipolar. Los adsorbentes preferidos deben tener una superficie de 100-1000 m2/g. Los diversos tipos de adsorbentes polimricos originalmente eran diseados para diferentes tecnologas qumicas, por ejemplo, para decolorar tintes de desechos y en la fabricacin de pasta, blanqueador de efluentes o eliminar los pesticidas de los efluentes residuales. Su eficacia en la separacin de cido ctrico a partir de caldo de fermentacin de A. niger fue bastante inesperada. La eficiencia del proceso de separacin por intercambio inico se puede mejorar en gran medida mediante la aplicacin del llamado sistema de flujo en contracorriente de lecho mvil simulado. En este caso, el aparato consiste en, al menos, dos lechos estticos, conectados con las vlvulas apropiadas para que la mezcla de alimentacin se haga pasar a travs de un lecho adsorbente, mientras que el material desorbente se hace pasar travs del otro. Los cambios progresivos en la funcin de cada lecho simulan el
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movimiento en contra-corriente del adsorbente en relacin con el flujo de lquido. En este sistema, las operaciones de adsorcin y desorcin que tienen lugar, permiten tanto la produccin continua del extracto y del refinado como la entrada en continuo de las corrientes de alimentacin y de desorbente. El sistema de lecho mvil simulado aplicado para la recuperacin de cido ctrico en un escala piloto, se propuso por Edlauer et al. (1990). La desventaja del mtodo de intercambio de iones es el hecho de que la elucin de cido ctrico del lecho de adsorcin puede requerir una gran cantidad de desorbente, provocando una dilucin considerable del ctrico resultante. Es necesaria la regeneracin peridica de las resinas de intercambio inico de bases inorgnicas Tambin es una fuente de desechos efluentes no deseados. 4.5 MEMBRANAS LQUIDAS

Recientemente se estn desarrollando mtodos ms sofisticados para la separacin de cido ctrico con la aplicacin de membranas lquidas. Las membranas lquidas contienen operadores mviles que consisten en un material inerte, micro- poroso con un soporte impregnado, con un agente de intercambio inico mvil inmiscible en agua. El portador mvil que se impregna en los poros de la membrana soporte por capilaridad, acta como un servicio de transporte, recogiendo los iones de la disolucin acuosa en un lado de la membrana, llevndolas a travs de la membrana y la liberndolas a la disolucin del lado opuesto de la membrana. El flujo del ion complejo est unido al flujo del segundo ion (por ejemplo, el ion de hidrgeno). Este proceso se clasifica como "un transporte combinado, y las membranas en las que se tiene lugar se llaman membranas de transporte acopladas. El acoplamiento de los flujos de los dos iones permite a uno de los iones ser bombeado 'cuesta arriba ' de la disolucin en la que se diluye a una disolucin que est ms concentrada. Para la separacin del cido ctrico por membranas lquidas, tambin se pueden utilizar las aminas terciarias que dan mejores resultados en la extraccin de disolvente. En la etapa de extraccin, la amina bsica reacciona con iones de hidrgeno en la disolucin de alimentacin para formar el catin alquilamonio terciario. Este catin se asocia con un par de aniones citrato para formar una sal de alquilamonio, que se transporta a travs de la membrana y saca de la disolucin. Esta reaccin regenera la amina terciaria, que luego se difunde de nuevo al lado de alimentacin de la membrana, donde se recompleja con hidrgeno y iones citrato.
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Las membranas lquidas soportadas no se han adoptado para la escala industrial, debido principalmente a la falta de estabilidad a largo plazo como resultado de la prdida de la membrana por su solubilidad, el flujo osmtico de agua a travs de la membrana, la obstruccin progresiva de los poros del soporte, y la presin diferencial travs de la membrana. Para eliminar estos problemas se han empleado fibras huecas microporosas. En este caso, el permeabilizador consiste en dos conjuntos de fibras huecas microporosas hidrfobas idnticas. Un conjunto lleva la disolucin de alimentacin de cido ctrico y la otra disolucin fluye en el lumen. La membrana lquida orgnica est contenida en el lado de la carcasa entre estos dos conjuntos de fibras huecas. Esta tcnica ha demostrado ser prometedora para la separacin del cido ctrico incluso a gran escala, ya que el grado de recuperacin del cido ctrico es de hasta el 99 %. El uso de membranas lquidas para la recuperacin de cido ctrico a partir de caldos de fermentacin ofrece ventajas nicas con respecto las tcnicas convencionales: menor consumo de energa, el aumento de la separacin en una sola etapa, la capacidad de concentracin de cido ctrico durante la separacin y el tamao ms pequeo del aparato de separacin. Estas ventajas pueden producen una reduccin de los costes generales de recuperacin y de la cantidad de desechos. 4.6 ELECTRODILISIS

Otra alternativa ecolgica a los mtodos convencionales para la recuperacin de cido ctrico puede ser la electrodilisis. Este proceso permite la separacin de las sales de una disolucin y su conversin simultnea en los cidos y bases correspondientes usando potenciales elctricos y membranas mono o bipolares. Las membranas bipolares son membranas de intercambio inico que, en un campo elctrico, permiten que la divisin de agua en iones H+ y OH-. Mediante la integracin de membranas bipolares con tensioactivos aninicos y catinicos se dispone de membranas intercambio de una clula de tres o cuatro compartimentos, en el que se lleva a cabo la separacin electrodialtica de iones de la sal y su conversin en la base y el cido. La completa transformacin del tri-citrato de sodio en cido ctrico en una clula de cuatro compartimientos se puede lograr un poco ms rpido, pero la tensin en los electrodos es mayor que en una celda de tres cmaras. El consumo energa elctrica especfica de la celda de cuatro compartimientos fue de un 40 % mayor que la de un aparato de tres cmaras.
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En la conversin de sales orgnicas se puede conseguir altas concentraciones finales de cido, en contraposicin con sales minerales. Esto hace que el proceso sea especialmente ventajoso para la recuperacin de cido ctrico, omitindose la etapa de evaporacin requerida normalmente. Por otra parte, las sales orgnicas tales como citrato de sodio tiene un peso molecular relativamente grande y la disolucin muestra una baja conductividad. Estas propiedades hacen que la separacin sea ms difcil y llevan a un mayor el consumo de energa, como en el caso de compuestos inorgnicos. El consumo de energa (con exclusin del bombeo) para la separacin de 1 kg de cido ctrico utilizando membranas bipolares es del intervalo de 6,1103 a 7,2103 kWs. Debido a la baja transferencia de masa en valores de pH bajo es ventajoso ajustar el pH de la corriente de cido de alimentacin a 7,5. Antes de que la disolucin de fermentacin llegue a la electrodilisis son normalmente necesarias algunas etapas de pretratamiento: filtracin del caldo, eliminacin de sustancias iongenos (especialmente Ca2+ y Mg2+) y de los iones de neutralizacin por medio de hidrxido de sodio. En el siguiente paso, la disolucin de citrato de sodio se convierte en la base y el cido ctrico, el cual se concentra simultneamente y se purifica en su mayor parte. El NaOH producido puede ser reutilizado para la neutralizacin. Aunque hay varias patentes publicadas relativas a la recuperacin y purificacin de cidos orgnicos por electrodilisis, todava este mtodo esta aplicado slo a escala de laboratorio y requiere su optimizacin. La economa est principalmente influenciada por el relativo alto consumo de energa, los costos de la membrana y el tiempo de vida de la membrana. Sin embargo, debido una disponibilidad comercial ms amplia de las membranas bipolares en los ltimos aos y las diversas ventajas de la tcnica de electrodilisis se espera que esta tecnologa pronto sea competitiva con los dems procesos. Adems de la eliminacin de los problemas ambientales, el uso de la electrodilisis permite la separacin continua del cido ctrico del caldo durante la fermentacin, lo que lleva a la disminucin de la influencia en la inhibicin del producto. Tambin, es posible aplicar esta tcnica para la recuperacin de cido ctrico en procesos continuos de fermentacin. El esquema del mtodo propuesto para la separacin de cido ctrico por medio de electrodilisis con las membranas bipolares se muestra en la Figura 4.3.

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Figura 4.3. Separacin del cido ctrico por electrodilisis con membranas bipolares. 4.7 LA ULTRAFILTRACIN

La separacin continua y concentracin del cido ctrico se pueden conseguir tambin por ultra y/o nanofiltracin. Visacky (1996) verific, a escala de laboratorio, un proceso de membrana de dos etapas para la recuperacin de cido ctrico a partir del caldo de cultivo obtenido en A. niger en sacarosa. La membrana de polisulfona con corte de 10.000 utilizada en la primera etapa permite que el producto pase con la corriente de permeado, mientras que la corriente de retenido contiene la mayora de los pptidos y protenas del caldo. El coeficiente de rechazo para el producto en esta etapa fue de 3 %, para la reduccin de azcares 14 % y para las protenas del 100 %. En la segunda etapa, la membrana de nanofiltracin con corte 200 rechaz aproximadamente un 90 % de cido ctrico y un 60 % de azcares reductores (monosacridos). La concentracin del producto en la corriente de retenido se aumenta tres veces en comparacin con la alimentacin. Una tcnica similar de membrana de dos etapas fue adaptada por Bohdziewicz y Bodzek (1994) para la separacin simultnea y la concentracin de enzimas pectinolticas y cido ctrico del caldo de fermentacin. La disolucin del cido ctrico diluido obtenido como permeado en la primera etapa de la ultrafiltracin de despus de la fermentacin se concentra hasta un 20 % mediante el uso de smosis inversa. Tales procesos de membrana pueden dar importantes beneficios en la industria del cido ctrico mediante las ventajas: el
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consumo de energa baja, no hay residuos en comparacin con los mtodos qumicos convencionales, existe la posibilidad de su uso en procesos continuos. Sin embargo, necesita una verificacin prctica y optimizacin en una planta piloto y a escala industrial. 4.8 INMOVILIZACIN DE MICROORGANISMOS

Vale la pena sealar que algunos de los problemas que surgen en el procesamiento downstream del cido ctrico producido por fermentacin, se producen especialmente en el proceso continuo y se pueden minimizar mediante la inmovilizacin de los microorganismos en el biorreactor. En los ltimos aos, el inters en la inmovilizacin de clulas microbianas ha ido en aumento. La aplicacin exitosa de microorganismos inmovilizados como biocatalizadores, implicando un manejo ms cuidadoso, a menudo tiene mayores tasas de produccin que los microorganismos libres, lo que ha llevado a un rpido desarrollo de esta tcnica. La produccin de cido ctrico por A. niger inmovilizado ha sido realizado a escala de laboratorio con el uso de gel de alginato de calcio (Eikmeier y Rehm, 1984; Tsay y A, 1987), gel de poliacrilamida (Gary y Sharma, 1992; Mittal et al, 1993), espuma de poliuretano (Lee et al, 1989; Sanroman et al, 1994, Pallares et al, 1996) y acrilamida criopolimerizada (Wang y Liu, 1996). El efecto rentable de la inmovilizacin del micelio de A. niger desde el punto de vista de la recuperacin de cido ctrico a partir de la fermentacin caldo depende del tipo del material de soporte y condiciones de proceso. Se requiere una investigacin adicional para sacar el mximo provecho a esta tecnologa, pero parece ser prometedor, sobre todo en combinacin con otras tcnicas de recuperacin recientemente en desarrollo, tales como la ultrafiltracin o de intercambio inico.

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BIBLIOGRAFA Prasad K. Downstream Process Technology: A New Horizon In Biotechnology. PHI Learning Pvt. Ltd., 2012. Kristiansen B., Mattey M. y Linden J. Citric Acid Biotechnology. Taylor & Francis e-Library, 2002. Bailey, J; Ollis, D; (1986). Biochemical Engeneering Fundamentals. 2 nd Edition. McGraw-Hill Chemical Engeneering Series. The large scale production of organic acids by microorganisms:

http://ftp.kdis.edu.cn/211-xkkr-04/doc/fineCourses/HN-B-1997-0007Biotechnological%20Innovations%20in%20Chemical%20Synthesis/Biotechnological% 20Innovations%20in%20Chemical%20Synthesis%20The%20large%20scale%20produc tion%20of%20organic%20acids%20by%20micrwrganisms.pdf: Enero 2014.

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