4. MATERIALES Y MTODOS Estudio Experimental 4.

1 El estudio fitoqumico para la bsqueda de antraquinonas Especies Vegetales

Las especies vegetales analizadas fueron proporcionadas y recolectadas por los pobladores de las localidades...... ,con el apoyo de la literatura fitoqumica comparativa,para antraquinonas. Especie 1. Juglans neotropica 2. Alnus glutinosa 3. Sambucus nigra 4. Eucalyptus globulus labill Nombre Vulgar Nogal Aliso Sauco Eucalipto

Reactivos

1. Cloroformo 2. Hidrxido de amonio 3. Hidrxido de potasio 4. Metanol 5. Silicagel-G 70 6. ter de petrleo 7. Etanol Materiales de vidrio

1. Ampollas 2. Placas cromatogrficas 3. Pipetas y buretas 4. Soxhlet 500 ml. 5. Tubos de ensayo

Equipos

1.Lmpara de luz UV de onda corta 2.Estufa MEMMERT 3.Molino de cuchillas WILEY MILL elctrico 4.Molino manual 5.Bao Mara 6.Espectrofotmetro UV CARY 7.Balanza analtica METTLER Mtodo

a. Las hojas que fueron trituradas para tener una mayor rea de contacto, se sometieron a una extraccin con TER DE PETROLEO con un equipo SOXHLET, obtenindose en el extracto de antraquinonas en forma libre. b. Al extracto obtenido se almaceno con ETANOL, quedando las antraquinonas en forma de glicsidos. c. Las antraquinonas fueron aisladas por cromatografa en SILICAGEL G, en una escala preparativa ascendente, utilizando como solventes la mezcla de TER DE PETROLEO,ETANOL,ACETATO DE ETILO y H2O;en una proporcin de 5:4:2:1 y como revelador lmpara de luz UV con el reactivo de BORNTRGER(Hidrxido de potasio en metanol al 10%). d. Las antraquinonas fueron eludas desde el cromatograma con metanol , que sirvi para la determinacin de sus espectros UV-visible. 4.2 Estudio antioxidante 1. 2. 3. 4. 5. 6. Materiales Reactivo DPPH. (1,1-difenil-2picril hidracilo) Vitamina C. Tubos limpios y secos Espectrofotmetro Balanza analtica electrnica METTLER Micropipetas Mtodo

La capacidad antioxidante se realiz utilizando el reactivo DPPH (1,1-difenil2picrilhidracilo) a una concentracin de 20 ug/mL. Las soluciones de antraquinonas fueron evaluadas a una concentracin de 50 ug/mL, preparado a partir del aislamiento de antraquinonas de una solucin de

150 ug/mL, en etanol siendo comparados frente a vitamina C de concentracin de 50 ug/mL. Se ley en el espectrofotmetro a 517 nm por triplicado. Posteriormente los valores de la absorbancia fueron utilizados para determinar el % de captacin de radicales libres(DPPH)mediante la formula siguiente: CAPACIDAD ANTIOXIDANTE=[1-(A2-A3)/A1]x100 %.Captacin de Radical Libre A1=Absorbancia del patrn de referencia A2=Absorbancia de la muestra A3=Absorbancia del blanco de muestra