UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO

Facultad de Ingeniera Ambiental y de Recursos

Naturales



MICROBIOLOGIA GENERAL
Grupo Horario 02A
Semana 9: CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

1. Sarmiento Gonzales Giannina 101315H
2. Vasquez Huaman Rub Dayan 100237C
3. Gonzales Rojas Maryori 093211H
4. Salazar Aliaga Kevin 101308A

Profesor: Blgo. Juan Jara Chumpitaz
Semestre Acadmico: 2012-B




CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO

1. INTRODUCCIN AL CRECIMIENTO BACTERIANO
Se suele definir el crecimiento de cualquier sistema biolgico como el incremento ordenado de
todos los elementos componentes de ese sistema, lo cual implica un aumento de la masa celular
que eventualmente conduce a la multiplicacin celular. En organismos pluricelulares dicha
multiplicacin se traduce en un aumento del tamao del individuo, mientras que en unicelulares
que se dividen por fisin o por gemacin, lo que ocurre es un aumento de la poblacin. En los
microorganismos cenocticos (en los que la duplicacin del genoma no se acompaa de divisin
celular) el crecimiento se traduce en aumento de tamao de la colonia cenoctica. El crecimiento
bacteriano podemos estudiarlo desde dos puntos de vista:
A escala individual
A escala poblacional
Los eventos de crecimiento en el mbito individual hacen referencia al ciclo celular, y dentro de
ste podemos abordar los siguientes temas:
inicio y transcurso de la replicacin cromosmica y de plsmidos;
segregacin de cromosoma y plsmidos a las clulas hijas;
sntesis de nuevos materiales de las envueltas, sobre todo de pared celular;
seales que coordinan la replicacin genmica con la divisin celular.
El estudio del crecimiento a nivel de poblaciones incluye los siguientes tpicos:
cintica del crecimiento;
factores que afectan al tiempo de generacin (g);
factores ambientales que limitan el crecimiento.
En el presente captulo nos dedicaremos al estudio en el crecimiento de poblaciones (que es el
ms frecuentemente empleado al trabajar con microorganismos), con una visin de algunos
mtodos para obtener crecimientos balanceados.
2. CRECIMIENTO EN BACTERIAS A NIVEL DE POBLACIONES:
En su mayora las bacterias se reproducen mediante un mecanismo asexual en el cual la clula
crece, duplica su material gentico y luego se divide por la mitad; este proceso da origen a dos
clulas cada una de las cuales repite el proceso. Este tipo de reproduccin se denomina fisin
binaria. (Vera Garca)
El crecimiento bacteriano sigue tres fases. Cuando una poblacin bacteriana se encuentra en un
nuevo ambiente con elevada concentracin de nutrientes que le permiten crecer necesita un
perodo de adaptacin a dicho ambiente. Esta primera fase se denomina fase de adaptacin o fase
lag y conlleva un lento crecimiento, donde las clulas se preparan para comenzar un rpido
crecimiento, y una elevada tasa de biosntesis de las protenas necesarias para ello, como
ribosomas, protenas de membrana, etc. La segunda fase de crecimiento se denomina fase
exponencial, ya que se caracteriza por el crecimiento exponencial de las clulas. La velocidad de
crecimiento durante esta fase se conoce como la tasa de crecimiento k y el tiempo que tarda cada
clula en dividirse como el tiempo de generacin g. Durante esta fase, los nutrientes son
metabolizados a la mxima velocidad posible, hasta que dichos nutrientes se agoten, dando paso a
la siguiente fase. La ltima fase de crecimiento se denomina fase estacionaria y se produce como
consecuencia del agotamiento de los nutrientes en el medio. En esta fase las clulas reducen
drsticamente su actividad metablica y comienzan a utilizar como fuente energtica aquellas
protenas celulares no esenciales. La fase estacionaria es un perodo de transicin desde el rpido
crecimiento a un estado de respuesta a estrs, en el cual se activa la expresin de genes
involucrados en la reparacin del ADN, en el metabolismo antioxidante y en el transporte de
nutrientes.

Basado en el concepto que una clula se divide dando dos clulas hijas, y stas a su vez se vuelven
a dividir dando dos clulas cada una de ellas, se presenta en el siguiente cuadro la proliferacin de
una poblacin de clulas a partir de una sola, con un tiempo de generacin de 30 minutos.



Al graficar en un sistema de coordenadas el tiempo (abscisas) y el nmero de clulas (ordenadas)
se obtiene una grfica como la que se muestra en el siguiente esquema:




3. MEDIDA DEL CRECIMIENTO DE UNA POBLACIN

El crecimiento de una poblacin microbiana se puede medir estimando el incremento de masa
celular o el aumento del nmero de clulas. En ambos casos se pueden emplear mtodos directos
o mtodos indirectos. Los ms utilizados son los siguientes:
3.1. Mtodos de medida de la MASA CELULAR

3.1.1 Determinacin del peso seco (directo)

Las clulas de un cultivo se recogen por centrifugacin de un volumen determinado, se
lavan, se secan y se pesan.
Se admite que 1 mg contiene entre 5 y 10 clulas
Mtodo laborioso y poco sensible pero es vlido para hongos.

3.1.2 Determinacin del peso hmedo (directo)

Pasos a seguir:

Se tara un tubo centrfuga
Se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante
Se determina el peso del sedimento


3.1.3. Determinacin de un componente caracterstico (directo)

Se debe encontrar componentes como el peptidoglucano, ADN, ARN, protenas, ATP, clorofilas en
organismos fotosintticos, etc.

3.1.4. Medida de consumo de nutrientes o de produccin de algn metabolito por
unidad de tiempo (indirectos)

Ejemplos: consumo de oxgeno (QO2) y consumo de carbnico (QCO2), determinados por el
respirmetro de Warburg. Produccin de cidos.

3.1.5. Mtodos Turbidimtricos (indirectos)

Se basan en la capacidad de las clulas para dispersar la luz que incide sobre ellas.
Dado que el tamao de las clulas en cultivo puro permanece casi constante, el grado de
dispersin es directamente proporcional a la biomada presente.
Se mide en trminos de TURBIDEZ, disminucin de la luz transmitida a travs del tubo, lo
que equivale a mayor cantidad de luz absorvida.
Al aumentar la masa microbiana, aumenta la turbidez y aumenta la absorvancia
Ambos parmetros se miden con un espectofotmetro que mide unidades de densidad
ptica
Tambin se puede medir la turbidez por comparacin con escalas prefabricadas.


3.2. Mtodos directos de medida del nmero de clulas

3.2.1. Recuento en cmara de Petroff-Hausser

Las cmaras de recuento son portas excavados modificados sobre cuya superficie esta marcada
una rejilla con pequeos cuadros de rea conocida. Se utilizan para contar el nmero de clulas
por unidad de volumen de suspenciones bacterianas. Para trabajar se cubre la cmara con un
portaobjetos y por capilaridad se introduce la muestra.

La de Petroff-Hausser se utiliza para contar bacterias. La excavacin mide 0.02 mm de profundidad
y est dividida en 25 cuadros grandes, subdivididos a su vez en 16 pequeos (hay 400 celdillas en
1mm2)


3.2.2. Recuento en placa. Diluciones seriadas

Los mtodos de recuento de nmero de clulas que hemos visto hasta ahora (los directos) no
distinguen entre clulas vivas y muertas. En muchos casos conviene contar las clulas vivas, y esto
en laboratorio se suele hacer mediante el recuento de viables. (Una clula se define como viable
cuando, colacada en un medio adecuado, es capaz de dividirse y dar descendencia). El mtodo
habitual de lograr esto es sembrar pequeas alcuotas de diluciones adecuadas de un cultivo
original sobre placas de Petri con medio slido (con agar). Cada clula viable dar origen a una
colonia visible despus del tiempo adecuado de incubacin. Contando las colonias visibles,
teniendo en cuenta la dilucin de la que proceden y el volumen de alcuota utilizado, es fcil
deducir el nmero de clulas viables en la suspensin original. (Para esto, mira el ejemplo de la
diapositiva, y sobre todo, estate atento a la prctica correspondiente, que se suele realizar en la 3
tanda).

3.2.3. Recuento sobre filtros de membrana

Se usa para suspensiones diluidas de bacterias. Se hace pasar un gran volumen de suspensin a
travs de una membrana de nitrocelulosa o de nylon estriles (con un dimetro de poro que
retiene las bacterias pero permite el trnsito de sustancias). Posteriormente, el filtro se deposita
sobre la superficie de un medio de cultivo slido. Las colonias se forman sobre el filtro a partir de
las clulas retenidas. Dichas colonias se cuentan, deducindose la concentracin original de viables
en funcin del volumen de suspensin que se hizo pasar por el filtro.



CRECIMIENTO BALANCEADO (= EQUILIBRADO)
Una poblacin de bacterias que se encuentre en un medio adecuado en el que se
mantienen constantes todos sus parmetros nutricionales y ambientales, crece de forma
tal que el incremento por unidad de tiempo de masa celular, n
o
de clulas, ADN, ARN,
protenas, etc., es un valor constante y similar en cada caso:
M/M = N/N = [ADN]/[ADN] = [protenas]/[protenas] = ... = K
As pues, durante este crecimiento, de tipo exponencial o logartmico, el cultivo se
comporta como una reaccin autocataltica de primer orden:
Velocidad de aumento del componente = K{cantidad del componente}
Tambin se puede decir que el n
o
de clulas, la masa celular u otros componentes se
duplican en un mismo lapso de tiempo determinado.
Este tipo de crecimiento se denomina balanceado o equilibrado. Se caracteriza, pues, por
ser el crecimiento en el que
todos los constituyentes celulares se duplican en un mismo tiempo, o dicho de
otra manera:
aquel en el que estos constituyentes aumentan proporcionalmente por un mismo
factor en la unidad de tiempo. Este factor es el coeficiente exponencial de
crecimiento (), que es caracterstico para cada cepa bacteriana en cada medio
determinado.
EXPRESIN MATEMTICA DEL CRECIMIENTO BALANCEADO
Para deducirla vamos a aprovechar la definicin emprica anterior, atendiendo por un lado
al aumento de la masa celular, y por otro al incremento del nmero de individuos.
a) En funcin del aumento de masa celular:
, y por lo tanto, dM = Mdt
Si integramos, resulta: M/M
0
= e
(t-t0)

Aplicando logaritmos neperianos:

De aqu se puede deducir que el coeficiente es

b) En funcin del aumento del nmero de clulas.
Supongamos que partimos de una clula. Tras una divisin (generacin celular),
tendremos 2, tras dos divisiones tendremos 4, luego 8, etc: tenemos una serie geomtrica.
1, 2, 2
2
, 2
3
, 2
4
, ... 2
n
(donde n es el nmero de generaciones transcurridas). Si en vez de
partir de una clula partimos de N
0
clulas iniciales, tenemos:
N = N
0
2
n
; por lo tanto:
N/N
0
= 2
n

Por otro lado, el nmero de generaciones se puede calcular fcilmente teniendo en
cuenta el tiempo transcurrido y conociendo el tiempo medio de generacin (g):

Sustituyendo esta expresin en la frmula {12.3} tenemos:
N/N
0
= 2
(t-t0)/g

Apliquemos logaritmos neperianos:

Ahora bien, como estamos ante un crecimiento balanceado, las dos expresiones
matemticas {12.1} y {12.4} que hemos deducido (la de la seccin A, basada en masa, y la
de la seccin B, basada en nmero de individuos) son equivalentes:
, y por lo tanto:
(t-t
0
) = (t-t
0
)/gln2, de donde se deduce el valor del coeficiente de crecimiento
exponencial:
, expresado en h
-1

Esta es la expresin matemtica del coeficiente del crecimiento balanceado, en funcin
del tiempo medio de generacin (g).
En un medio ideal, sin limitacin de nutrientes, este coeficiente es =
mx
, o sea, el
mximo valor posible del coeficiente para esa cepa en ese medio. Es decir, es un
crecimiento balanceado no restringido.
En un medio donde exista algn nutriente limitante (o sea, cuya concentracin est por
debajo del lmite de eficiencia de las permeasas), el crecimiento balanceado es de tipo
restringido, de modo que el coeficiente real de crecimiento es inferior al mximo, segn la
frmula emprica siguiente (ecuacin de Monod):


Donde [S] es la concentracin del nutriente limitante; K
S
es la constante de saturacin,
equivalente a la concentracin de nutriente para la que el coeficiente es semimximo.
Como se puede ver, la tasa de crecimiento (medida por ) es una funcin hiperblica de la
concentracin del sustratro (nutriente) limitante (ver grfico). Este sustrato puede ser una
fuente de C y/o de energa, fuente de N, de P, un factor de crecimiento, etc.
Ejemplos de KS:
la KS para la glucosa en E. coli es 110-6M
la KS para el triptfano en esta bacteria es 210--7 M
Estos bajos valores se deben a la alta afinidad de las permeasas de membrana hacia los sustratos,
lo cual es una adaptacin evolutivamente adquirida de las bacterias a los medios muy diluidos en
nutrientes en los que normalmente viven. (Por el contrario, los medios de laboratorio donde se
suelen cultivar las bacterias suelen ser ms concentrados).




CRECIMIENTO DIAUXICO
El crecimiento diaxico es un tipo crecimiento microbiano bifsico que tiene lugar cuando hay
presentes dos sustratos diferentes que pueden ser utilizados como fuente de carbono. En este
tipo de crecimiento microbiano se observa una curva de crecimiento bifsica debido a la
utilizacin secuencial de distintas fuentes de carbono. El metabolismo del organismo es selectivo
para uno de los sustratos (se usa la fuente de carbono que permite un crecimiento ms rpido) y
cuando la agota, comienza a metabolizar el otro.
Supongamos que inoculamos una bacteria en un medio
lquido provisto de dos fuentes de carbono (p. ej.,
glucosa y lactosa), de las cuales una (en este ejemplo,
la glucosa) es usada preferencialmente. Si
representamos la cintica del crecimiento poblacional
segn hemos aprendido en el apartado anterior,
obtenemos una curva como la de la figura siguiente:
Obsrvese que se dan dos fases de crecimiento
exponencial separadas por una breve fase intermedia
estacionaria. Esta modalidad de crecimiento con dos
fases exponenciales se conoce con el nombre de
crecimiento diuxico.
1. Bases del crecimiento diuxico:
La bacteria usa en primer lugar slo la fuente preferencial de C (en este caso, la glucosa, que suele
ser la fuente preferencial en muchos heterotrofos), sin "tocar" la otra fuente. Una vez que agota la
primera fuente, se dispone a usar la segunda (ej.: lactosa), pero tarda un tiempo hasta que
sintetiza los enzimas catablicos necesarios para degradar esa segunda fuente. Cuando las
bacterias han logrado niveles de esos enzimas adecuados, se restablece el crecimiento
exponencial, aunque, como se puede constatar en el grfico, con una pendiente menor (lo que
significa que esta fuente alternativa permite una tasa m menor que la preferencial).







CULTIVOS CONTINUOS. SISTEMAS ABIERTOS
Es un cultivo balanceado mantenido por tiempo indefinido por un sistema de flujo que se
compone de:
una cmara de cultivo de volumen constante,
a la que llega un suministro de nutrientes,
y de la que se eliminan o separan los productos txicos de desecho (por un dispositivo de
rebosadero).
Una vez que el sistema alcanza el equilibrio, el nmero de clulas y la concentracin de nutrientes
en la cmara permanecen constantes, y entonces se dice que el sistema est en estado
estacionario, con las clulas creciendo exponencialmente.
Los parmetros a tener en cuenta son:
flujo (f), medido en ml/h
volumen de la cmara de cultivo (v, en ml)
densidad celular en la cmara (x)
factor de dilucin D = f/v (en h--1). El inverso de este factor de dilucin es el tiempo medio
de residencia (1/D= TMR)
Existe una prdida de clulas por el rebosadero: -dx/dt = xD
El crecimiento bruto es dx/dt = xm
Por lo tanto, el crecimiento neto es dx/dt = xm - xD = x(m - D)
Si logramos que el coeficiente de crecimiento (m ) se haga igual al factor de dilucin (D), entonces
dx/dt = 0, y por lo tanto la concentracin de clulas se hace constante (x= x). El cultivo se
encuentra entonces en estado dinmico de equilibrio. Las prdidas de clulas por drenaje se
compensan con las ganancias por crecimiento.
Existen dos tipos de procedimientos para obtener cultivos continuos:
1.1. Turbidostato
Permite cultivos continuos con un coeficiente m cercano al m mx, trabajando a valores altos de
D. Ello lo logra ajustando los valores de densidad celular de modo que ningn factor nutricional se
haga limitante.
Se dice que es un sistema de control interno porque es la misma concentracin de bacterias la que
regula el flujo de entrada y de salida (por medio de un mecanismo electrnico basado en la
medicin y control de la densidad ptica del cultivo).

Inconvenientes:
es difcil de manejar y ajustar;
si las bacterias tienen tendencia a adherirse a superficies (paredes internas del aparato),
los resultados de medida de la D.O. quedan falseados (infravalorados).
Aplicaciones
Se emplea bastante en el estudio de los factores que incrementan o disminuyen la tasa de
crecimiento.
1.2. Quimiostato
Para introducirnos al funcionamiento del quimiostato, partamos de la observacin de lo que
pasara en el turbidostato si desconectamos el fotmetro y ajustamos la bomba 1 para que vierta
medio fresco al cultivo a una tasa (flujo) menor que el que mantiene la m cercana a la m mx:
Las bacterias tenderan a crecer a mayor velocidad que su dilucin debida a adicin de medio
fresco; por lo tanto, en un principio aumentara la concentracin de bacterias.
Pero este incremento no podra continuar indefinidamente. Pero el crecimiento tampoco se
detendra. De hecho, tras un cierto tiempo, el cultivo alcanzara un nuevo estado estacionario de
equilibrio, en el que la tasa de crecimiento se hace proporcional a la tasa de adicin de medio
fresco. En este caso, el cultivo crece exponencialmente, pero a tasas m <m mx. Sigue creciendo
exponencialmente porque la tasa de dilucin del cultivo es una funcin exponencial del tiempo.
La m submxima viene determinada en el quimiostato por la tasa de dilucin (D). La cintica sigue
siendo exponencial, ya que en el nuevo estado estacionario de equilibrio la tasa de crecimiento
compensa a la tasa de dilucin, que como sabemos, es una funcin exponencial.
- Ventajas del quimiostato en comparacin con el turbidostato:
En un quimiostato, los microorganismos pueden cultivarse a una amplia variedad de tasas de
crecimiento exponencial, mientras que, como vimos, en el turbidostato se cultivan en un rango
estrecho de valores de m cercanos al m mx.
El quimiostato permite crecimientos balanceados restringidos debido a que existe un nutriente o
sustrato presente en una concentracin suficientemente baja como para limitar la densidad de
poblacin.
SR es la concentracin de nutriente en el reservorio, y determina el valor de S, que es la
concentracin de nutriente limitante en el recipiente de cultivo.
La tasa de adicin de ese sustrato determina la tasa de crecimiento.
As pues, el quimiostato tambin permite elegir la densidad de clulas a la que se quiere trabajar.
- Expresin matemtica del quimiostato:
x = concentracin celular en equilibrio
Y = constante de rendimiento en el medio empleado (masa de microorganismo formada/masa de
sustrato consumida)
SR= concentracin del sustrato limitante en el reservorio
D = factor de dilucin
KS= constante de saturacin respecto del sustrato limitante
La frmula nos dice que sabiendo Y, KS y m mx se puede fijar la densidad celular (x) simplemente
ajustando dos parmetros del aparato:
SR (concentracin del sustrato o nutriente limitante en el reservorio)
D (coeficiente de dilucin, regulable por el flujo)
Por otro lado, se puede demostrar tambin que la concentracin de sustrato limitante en
equilibrio en la cmara de cultivo es:
S= KSD/(m mx- D)
Esta frmula nos dice que el efecto principal de cambiar el flujo (D) es alterar la concentracin S de
sustrato limitante en el cultivo, lo que a su vez afecta a la tasa especfica de crecimiento (m ).
Vase la grfica compleja en el esquema, bajo el dibujo del quimiostato. Algunos comentarios
(atindase la explicacin del profesor):
La densidad del cultivo es muy similar en un amplio margen de tasas de dilucin (D). Este margen
es el ms adecuado para hacer estudios en el quimiostato. En cambio, el valor de tiempo de
generacin (g) vara ampliamente. O sea, el quimiostato puede obtener tasas de crecimiento muy
diferentes, sin que se afecte la densidad celular.
En cambio, a altas tasas de dilucin la concentracin microbiana cambia rpidamente, y en un
margen estrecho el cultivo puede drenarse totalmente (DC: dilucin crtica).
A muy bajas diluciones (DM) el quimiostato no funciona si el nutriente limitante es la fuente de
energa. Ello se debe a que en esas condiciones, la fuente de energa slo se usa para reacciones
de mantenimiento de la integridad celular, pero no queda para el crecimiento. A este valor lo
llamamos energa de mantenimiento. Los procesos relacionados con esta energa de
mantenimiento son el potencial de membrana, el transporte de solutos y la renovacin de
protenas.
- Aplicaciones del cultivo continuo en quimiostato:
Aportan una fuente continua de clulas en fase exponencial, lo que se aplica a procesos
industriales de fermentacin (produccin de bebidas alcohlicas, de antibiticos, de aminocidos,
etc).
En el quimiostato, el crecimiento a bajas concentraciones de sustrato permite estudiar:
aspectos fisiolgicos (por ejemplo, catabolismo del sustrato limitante);
seleccin de mutantes


















CINTICA DE CRECIMIENTO EN SISTEMAS CERRADOS Y SU
EXPRESION MATEMATICA

Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo apropiado, los mismos comienzan a
dividirse activamente empleando los nutrientes que le aporta el medio de cultivo para "fabricar"
nuevos microorganismos. Este proceso contina hasta que algn nutriente del medio de cultivo se
agota (sustrato limitante) y el crecimiento se detiene. Tambin puede detenerse el crecimiento
por acumulacin de alguna substancia inhibidora formada por los mismos microorganismos, pero
supngase por ahora que ste no es el caso y que la primera alternativa es la vlida. Luego hay dos
aspectos claramente diferenciables que hacen al crecimiento microbiano: uno estequiomtrico,
por el cual la concentracin final de microorganismos obtenidos depender de la concentracin y
composicin del medio de cultivo, y el otro cintico, el que dir con qu velocidad se lleva a cabo
el proceso.

Importancia:
Es importante conocer la cintica de crecimiento de los cultivos microbianos porque es necesario
poder predecir cmo va a evolucionar un cultivo, cmo va a ir consumindose el substrato y cmo
se va a ir acumulando el producto de una fermentacin. Sin conocer estos factores es muy
imprudente iniciar el cultivo en un fermentador de 10.000 litros, por ejemplo, con el coste que ello
supone, puesto que no podemos predecir qu va a pasar, cundo va a completarse el crecimiento,
cmo se va a acumular el producto, etc.
En los sistemas cerrados (que pueden ser lquidos o slidos), no existe aporte continuo de
nutrientes, ni drenaje de clulas ni de sustancias de desecho.
En estos sistemas la fase exponencial de crecimiento balanceado no restringido dura slo unas
cuantas generaciones, debido al agotamiento de nutrientes y/o a la acumulacin de desechos

1. CRECIMIENTO EN UN SISTEMA CERRADO EN MEDIO SOLIDO:
En los sistemas cerrados (que pueden ser lquidos o slidos), no existe aporte continuo de
nutrientes, ni drenaje de clulas ni de sustancias de desecho.
En estos sistemas la fase exponencial de crecimiento balanceado no restringido dura slo unas
cuantas generaciones, debido al agotamiento de nutrientes y/o a la acumulacin de desechos.
La cintica del crecimiento de microorganismos que crecen aislados. Es la forma de crecimiento de
la levadura (hongo unicelular) y de las bacterias.

Las clulas aisladas cultivadas en un volumen finito de medio de cultivo
Tienen las siguientes propiedades:


CURVA DE CRECIMIENTO EN UN SISTEMA CERRADO EN MEDIO LQUIDO CURVA DE CRECIMIENTO
(BATCH)




















Como se puede constatar en el anterior grfico, el crecimiento en un sistema cerrado
consta de varias fases, que pasamos a comentar:

1.1. Fase de retardo (fase lag)
Es el perodo de tiempo durante el que el inculo se adapta a las condiciones del medio fresco
sobre el que se ha sembrado. Se trata de un perodo de ajuste metablico. Su duracin depende
de varios factores:
Tamao del inculo;
Bondad del inculo (estado metablico previo del inculo): si el inculo procede de clulas
en fase estacionaria de un cultivo anterior, la fase lag es larga. Ello se debe a que los
contenidos en coenzimas y otros constituyentes de las clulas son bajos, y las clulas
deben reponerlos en el medio fresco.
Si las clulas estn daadas por algn agente, el lag tambin es largo, ya que necesitan un
tiempo para la reparacin de los daos.
Si las clulas del inculo se tomaron de un cultivo previo en fase logartmica, el lag es ms
corto.
Medio del que procede el inculo:
Si el medio es similar al medio fresco, el lag es ms corto;
Si el medio del inculo era un medio rico y el medio fresco es ms pobre, la fase de
retardo se hace ms larga, porque las bacterias necesitan un tiempo adicional para activar
la sntesis de las enzimas biosintticas que estaban reprimidas en el medio rico.

Pero aun cuando la inoculacin se hace desde un cultivo previo en fase logartmica, cuyo medio
sea idntico al medio fresco, se observa siempre una fase lag. Por qu?:
Necesidad de neutralizar sustancias txicas en el medio fresco;
Porque se produce dilucin de ciertos metabolitos intracelulares al inocular las
bacterias en el medio nuevo; por lo tanto, hasta que no se vuelva a alcanzar una
concentracin de esos metabolitos adecuada para el crecimiento, ste no arranca.

Ejemplo: Supongamos que inoculamos una bacteria heterotrfica en un medio ligeramente cido,
sometido a aireacin: en un principio, se produce dilucin de CO2, por lo que se retardan
reacciones de carboxilacin que requieren este CO2, y se produce un retardo.
1.1.1 Fase de transicin, de crecimiento acelerado, que conduce a

1.2. Fase de crecimiento exponencial (= fase logartmica).
La fase 2 se debe a que cada clula entra en la fase exponencial con desfase respecto de sus
compaeras. Ello demuestra que las clulas del inculo no estn todas en las mismas condiciones
fisiolgicas.
Durante la fase logartmica se da un crecimiento balanceado no restringido durante unas pocas
generaciones (normalmente menos de 10). El tiempo de generacin (g) es caracterstico para cada
especie o cepa, en cada medio concreto:
El valor del tiempo de generacin (g) depende de:
Composicin del medio
Temperatura
pH
Osmolaridad (tonicidad), etc.

Divisin binaria de clulas procariotas. 1 El cromosoma circular est unido a un punto de la
membrana plasmtica 2El cromosoma se duplica. Las dos copias estn fijas a la membrana en
puntos cercanos 3 La clula se alarga, se agrega nueva membrana plasmtica entre los puntos de
unin 4 La membrana plasmtica crece hacia el interior 5 La clula original se ha dividido en dos
clulas hijas. La imagen corresponde al corte transversal de una clula procariota durante la fisin
binaria en una etapa similar a la fase 4 descripta.

Los microorganismos heterotrofos suelen crecer ms rpidamente en los medios complejos, ricos,
que en los medios sintticos, y dentro de estos ltimos, mejor con glucosa que con otras fuentes
de carbono. Algunos microoorganismos tienen, a su temperatura ptima tiempos de generacin
muy cortos (15, 20 min), mientras que otros tienen crecen ms lentamente, con tiempos de
generacin que pueden ser de varias horas o incluso das.

1.2.1. Fase de aceleracin negativa, de crecimiento desequilibrado, que conduce a

1.3. Fase estacionaria: Esta fase se caracteriza porque el coeficiente neto de crecimiento se
hace nulo (m = 0), pero an existe crecimiento. Lo que ocurre es que el crecimiento bruto
se equilibra con las muertes celulares.
En este perodo se agotan nutrientes especiales y se acumulan sustancias de desecho. Incluso el
pH del medio empieza a hacerse inadecuado para el crecimiento celular.
Si la bacteria crece en un medio complejo, la fase 4 de transicin (de aceleracin negativa) puede
ser relativamente larga, debido a que va recurriendo a fuentes alternativas (p. ej., puede recurrir a
aminocidos como fuente de C una vez agotados los hidratos de carbono).
En la fase estacionaria an existen reacciones metablicas, pero el metabolismo general es
diferente al de la fase logartmica:
Las clulas son ms pequeas, debido a que existe divisin celular despus de que se
haya detenido el incremento de masa.
Suelen ser ms resistentes a agentes fsicos y qumicos;
Existe reciclado de ciertos materiales intracelulares;
aja el contenido en ARN.

1.3.1. Fase de transicin hacia

1.4. Fase de muerte exponencial:
Se da muerte y lisis masiva, exponencial, del cultivo. Se debe a agotamiento de reservas de
energa. Algunas veces las clulas aparecen grandes, hinchadas, distorsionadas (formas
fantasmas, ghost). La pendiente de esta parte de la curva depende de las especies (por
ejemplo, en bacterias entricas es suave, mientras que en Bacillus es ms acentuada).
Te recuerdo que puedes hacer un experimento "virtual" con la curva de crecimiento de una
bacteria. Que disfrutes.

2. CRECIMIENTO EN SISTEMAS CERRADOS EN MEDIOS SLIDOS
Un medio slido es una solucin nutritiva (como el lquido), pero incorporado a un gel, que le da
consistencia.
Los tipos de gelificantes usados para los medios slidos (ms explicaciones en la 2 tanda de
prcticas):

agar-agar (o simplemente, agar): es el ms comnmente empleado
Gelatina (inconveniente de que se lica a temperaturas relativamente bajas, y adems,
algunos microorganismos lo degradan por gelatinasas).
Silicagel (o gel de slice): tedioso de preparar. Uso casi exclusivo para
quimioautotrofos.

Los medios slidos se suelen inocular mediante asa de siembra o esptula, diseminando las
bacterias sobre su superficie libre, en recipientes adecuados, como las placas de Petri (ver
prcticas). Tras la incubacin a la temperatura y condiciones pertinentes, cada bacteria o
agrupacin bacteriana que ha quedado en un punto determinado del medio da origen, por
crecimiento, a una acumulacin de clulas, visible a simple vista, denominada colonia.
La densidad de cada colonia es muy alta (del orden de 107 clulas para una colonia de unos 5
mm). Esto se debe a que en el medio slido, a diferencia del lquido, las bacterias no pueden
dispersarse, y durante mucho tiempo este medio slido permite un aporte continuo de nutrientes
(por difusin desde el entorno de la colonia, hacia ella), y eliminacin continua de productos de
desecho (por difusin desde la colonia hacia fuera). Por lo tanto, se parece a un cultivo continuo,
excepto que no hay drenaje de clulas.
Como el alumno comprobar en prcticas (2 tanda), cada especie bacteriana suele originar
colonias de un tipo determinado, en cada medio concreto. Con vistas a la determinacin
taxonmica, se suele tomar nota de una serie de caractersticas de las colonias (caracteres
culturales):
Tamao (relativo)
Forma general
Forma de los bordes de la colonia
Aspecto de la superficie y elevacin sobre el sustrato
Color
Consistencia, etc.






3. EXPRESIN MATEMTICA DE LA CINTICA DEL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS:









N=X

CRECIMIENTO LOGARTMICO EN CULTIVOS POR LOTES:

En cultivos por lotes, tal y como se ha descrito con anterioridad, existe una fase de crecimiento,
llamada fase de crecimiento logartmico. La velocidad de crecimiento para esta fase es
directamente proporcional a la concentracin de las clulas y est dada por la siguiente relacin:

Si quitamos el signo de proporcionalidad

= (1)

= Velocidad o tasa de crecimiento bacteriano en la fase de crecimiento logartmico

=Velocidad especifica de crecimiento
X= concentracin de microorganismos

CRECIMIENTO CON SUSTRATO LIMITADO:

Si el sistema tiene un limitante y este es el sustrato, una vez que ste empiece a escasear el cultivo
de microorganismos termina de crecer, por lo que su crecimiento tiene un lmite. En un cultivo
continuo su crecimiento tambin es limitado, y el comportamiento del cultivo de
microorganismos, sigue experimentalmente la siguiente relacin propuesta por Monod.

.. (2)
=Velocidad especifica de crecimiento

=mxima velocidad de crecimiento

=Constante promedio de velocidad. Concentracion de sustrato a la mitad del

mximo de velocidad de crecimiento. Masa/unidad de volumen
=concentracin del sustrato. Masa/unidad de volumen

Sustituyendo (1) en (2)

Graficando en el plano:

Estas ecuaciones nos permiten predecir cul ser el nmero de clulas, masa celular, etc. despus
de un cierto tiempo de cultivo (t) si conocemos ; o bien, poder calcular la tasa de crecimiento a
partir de medidas experimentales del incremento en el nmero de clulas, biomasa, etc.
Basado en el concepto que una clula se divide dando dos clulas hijas, y stas a su vez se vuelven
a dividir dando dos clulas cada una de ellas, se presenta en el siguiente cuadro la proliferacin de
una poblacin de clulas a partir de una sola, con un tiempo de generacin de 30 minutos.














Al graficar en un sistema de coordenadas el tiempo (abscisas) y el nmero de clulas (ordenadas)
se obtiene una grfica como la que se muestra en el siguiente esquema:

Los tiempos de duplicacin varan segn el microrganismo del que se trate. Por ejemplo:
Eschericha coli 0,35 hs
Rhizobium meliloti 1,8 hs
Nitrobacter sp aproximadamente 20 hs

Rendimiento de la utilizacin del substrato
El rendimiento de utilizacin de diferentes substratos puede ser diferente (hay substratos, o
alimentos, que "engordan" ms que otros), vara entre diferentes microorganismos (en un smil
antropomrfico: hay personas que engordan ms que otras comiendo lo mismo) y vara tambin
en funcin de otras condiciones ambientales o fisiolgicas (no engorda lo mismo uno al comer algo
si est sano o enfermo o si est en verano o en invierno). Tambin vara el rendimiento en funcin
de que el metabolismo sea oxidativo o fermentativo.

Podemos calcular el rendimiento de la utilizacin
del substrato en funcin de la cantidad de
substrato aadido al cultivo, o en funcin de la
cantidad de carbono presente en ese substrato
(por ejemplo). Asimismo, podemos calcular la
cantidad de biomasa total 8gramos de clulas,
por ejemplo) o de carbono presente en las
clulas (aproximadamente el 505 de la masa
celular corresponde a carbono).



Haciendo las transformaciones que se indican a la
derecha sobre la frmula que relaciona la
variacin de biomasa con la de substrato, llegamos
a la definicin de un nuevo
concepto qs denominado tasa especfica de
consumo de substrato por el organismo.

La tasa especfica de consumo de substrato la podemos considerar la "velocidad" con la que el
organismo consume el substrato. Evidentemente, cuanto mayor sea la tasa de consumo mayor
ser la velocidad de crecimiento (). Asimismo, cuanto mayor sea el rendimiento del substrato
consumido, tambin mayor ser la tasa de crecimiento.
Sin embargo, hay una cierta compensacin entre la tasa de consumo del substrato y el
rendimiento de forma que los microorganismos que tienen altas tasas de consumo de substrato
tienen rendimiento ms bajo (o cuando se dan las condiciones para una alta tasa, el rendimiento
disminuye). A esta correlacin inversa se le conoce con el nombre de efecto Pasteur.

Relacin entre la tasa de crecimiento () y la concentracin de substrato (S)
En condiciones de substrato abundante, la concentracin de este no afecta al valor de ; pero
cuando el substrato se hace limitante, s existe ese efecto. La expresin matemtica que relaciona
ambos parmetros se conoce con el nombre de ecuacin de Monod y es la siguiente:

En esta ecuacin la tasa de crecimiento ()
depende de la mxima que puede alcanzar el
microorganismo, de la concentracin de substrato
y de un valor Ks que representa la concentracin
de substrato a la que se alcanza una tasa de
crecimiento igual a la mitad de la mxima.

La ecuacin de Monod tendr mucha importancia al tratar de cultivos continuos. Para que se
cumpla esta ecuacin el rendimiento debe ser independiente de la concentracin de substrato.