OBTENCIN DE ETANOL POR FERMENTACIN A PARTIR DE SACAROSA

RICARDO TENORIO, LISBETH A. REYES, LUZ A. TRIANA S.

Fermentaciones, Universidad Incca de Colombia Sede Bogot,
.Bogot - Colombia. Tel: 4442200

RESUMEN

Para esta prctica se trata experimentalmente de analizar el comportamiento de la levadura
Saccharomyces Cerevis a diferentes concentraciones (0.1%,0.5,1%, 1.5%, 2%) para obtener etanol;
por medio del proceso de fermentacin que se realiza al metabolizar la fuente de carbono. Se realiz
una solucin de panela al 20%, se ajust pH a 3.5 y se disolvi la levadura en agua caliente. Se
procedi a realizar la mezcla de levadura y sustrato (solucin de panela). Para las muestras se le
realizaron las pruebas de PH, Brix, biomasa y acidez despus de esperar un tiempo de reaccin (8
Das de realizada la mezcla), los resultados obtenidos fueron favorables para las condiciones de
desarrollo de la levadura.
INTRODUCCIN
La fermentacin es un proceso biolgico en plena ausencia de aire, originado por la actividad de
algunos microorganismos que procesan los azucares para obtener como productos finales:
un alcohol en forma de etanol, dixido de carbono (CO2) en forma de gas y unas molculas
de ATP que consumen los propios microorganismos en su metabolismo celular energtico
anaerbico. El etanol resultante se emplea en la elaboracin de algunas bebidas alcohlicas, tales
como el vino, la cerveza, la sidra, el cava, etc.
Los objetivos de esta prctica es obtener alcohol por fermentacin de una solucin de panela y,
reconocer y aplicar los principios en que se fundamenta la produccin y purificacin de etanol,
proveniente del proceso de fermentacin.
La humanidad emplea la fermentacin alcohlica desde tiempos inmemoriales para la elaboracin
de cerveza (empleando cereales) y del vino(empleando el fruto de la vida: la uva en forma
de mosto) fundamentalmente. Los griegos atribuan el descubrimiento de la fermentacin al
dios Dionisio. Algunos procesos similares como el de la destilacin alcohlica ya surgen en el
ao 1150 de la mano de Arnau de Vilanova. Fue un elemento ms a considerar en el desarrollo
histrico de la alquimia durante la Edad Media.
En el ao 1864 se identific el gas CO2 resultante de la fermentacin por el qumico Mac Bride y
en 1766 Cavendish lo describi como: el gas existente en la atmsfera determinando adems la
proporcin de dixido de carbono con respecto al azcar empleado en el proceso, que rondaba el
57%. En esta poca se empez a descubrir, gracias observaciones cientficas, que la fermentacin
alcohlica se produca tambin en substancias no dulces. Antoine Lavoisier hizo experimentos
en 1789 determinando las cantidades de los elementos intervinientes en la fermentacin (carbono,
oxgeno e hidrgeno). Con el advenimiento de los descubrimientos qumicos en el ao 1815 el
investigador francs Joseph Louis Gay-Lussac fue el primero en determinar una reaccin de
fermentacin obteniendo etanol a partir de glucosa, a pesar de este logro los fundamentos de la
fermentacin alcohlica eran completamente desconocidos. Existe durante el siglo XIX un debate
cientfico por establecer la hiptesis de la fermentacin. Durante los aos 1830s los
qumicos Jns Jakob Berzelius y Justus von Liebig desarrollaron una teora mecanicista que explica
la fermentacin, teoras que estaban en contraposicin con las creencias de Louis Pasteur en el
ao 1857 que se fundamentaba en la teora vitalista como explicacin de los mecanismo bsicos
de la fermentacin, fue el mismo Pasteur que en el ao 1875 demostr que la fermentacin era un
proceso anaerbico.
En el ao 1818 Erxleben, De La Tour en Francia, Schwann y Ktzing en Alemania (1837)
descubren que las levaduras (organismos microscpicos unicelulares) son la causa del proceso, pero
no fue hasta que Eduard Buchner en el ao 1897 descubre que la enzima zimasa es la responsable
final de la fermentacin alcohlica trabajo por el que recibe el premio Nobel de Qumica. Este
descubrimiento atrajo el inters de otros cientficos, entre ellos Harden y Young quienes en el
ao 1904 mostraron que la zimasa perda sus propiedades fermentativas bajo condiciones
de dilisis, demostrando que la fermentacin dependa de una sustancia de bajo peso molecular que
se quedaba retenida en los finos poros de la membrana de la dilisis. La fermentacin poda bajo
estas circunstancias volver a ser restablecida aadiendo simplemente de nuevo las levaduras, esta
substancia descubierta por Harden y Young se denomin cozimasa, y fue eventualmente encontrada
como una mezcla de iones fosfatados, difosfato de tiamida y NAD+. Sin embargo la caracterizacin
de la cozimasa no fue completada hasta el ao 1935. El bioqumico Otto Heinrich Warburg en
conjuncin con Hans von Euler-Chelpindescubren en el ao 1929 que el cofactor nicotinamida
adenina dinucletido (NADH) juega un papel muy importante en el proceso interno de la
fermentacin. En 1937, los investigadores Erwin Negelein y Hans Joachim Wulff comprueban que
mediante la cristalizacin de los subproductos de la fermentacin la enzima alcohol
deshidrogenasa es protagonista en algunos sub-procesos realizando un papel importante.
Los descubrimientos posteriores a partir del periodo que va desde mediados del siglo XX hasta
comienzos del siglo XXI se centran exclusivamente en la mejora de los procesos de fermentacin
alcohlica y conciernen ms a la optimizacin del rendimiento industrial bien sea mediante una
buena seleccin de cepas de levaduras, de una temperatura de funcionamiento ptima, de cmo
realizar fermentacin en un proceso continuo: biorreactores.
MATERIALES
Matraz de 500 ml fondo plano
Agitador
Vaso de precipitado 150ml
Tubo de fermentacin
Termmetro
Probeta 250ml
Miel de caa o panela
pH metro
Buffer pH 4 y 7
Balanza de dial
Refractmetro
Saccharomyces cerevisea
(NH
4
) SO
4
o ( NH
4
) H
2
PO
4

Solucin NaOH
METODOLOGA

















RESULTADOS
Para esta prctica se procedi a tomar grados Brix pH y acides titulable y se realiz conteo de
microorganismos que se presenta en la tabla 1 y se grafic Brix Vs [Levadura], pH Vs [Levadura],
acidez Vs [Levadura] y Biomasa Vs [Levadura] como se muestra en las grficas 1, 2, 3 y 4


Tabla 1






Grafica 1
Se grafic los grados Brix Vs la concentracin de levadura








Grafica 2









Grafica 3







0
1
2
3
4
0 0.5 1 1.5 2 2.5
p
H

[levadura]
pH Vs [Lev]
0
2
4
6
8
10
0 0.5 1 1.5 2 2.5
B
r
i
x


[levadura]
Brix Vs [Lev]
0
0.5
1
1.5
2
2.5
0 0.5 1 1.5 2 2.5
%
a
c
i
d
e
z

[levadura]
%Acides Vs [lev]



Grafica 4









El analisis que mostramos a continuacin son de los resultados obtenidos en el dia No 8 del
proceso de fermentacin ejecutado en el laboratorio con concetraciones diferentes de levadura
como se muestra en la tabla 1

El sustrato utilizado fue miel de caa panela que contine sacarosa, glucosa y fructuosa, la
sacarosa es hidrolizada a traves de la intervencin del complejo enzimatico para romper las
molecula de sacarosa y poder extraer la glucosa y la fructuosa las cuales son metabolizadas
para obtener un rendimiento optimo de etanol; esto lo podemos lo observar la grafica 1 donde
los Brix dismunuyen a medida que la concentracin de levadura aumenta, ya que hay mas
biomasa disponble para degradar glucosa en etanol.

El pH optimos para la fermentacin de levaduras esta entre 3.5 y 5.5. Este ph habitualmente
favorece el crecimiento y la actividad fermentativa para el etanol; los resultados obtenidos
esperimentalmente que se muetran en la grafica 2 nos indican que en la fermentacion el pH
no estaba contante y se bajo de rango optimo para la produccion de etanol, ya que en la
grafica 4 de biomasa Vs concentracion de levadura observamos que en una concentracion
0.5 hay un cresiminto de biomasa y un Ph aproximadamente contante que seria unas
condiciones favorables para la produccion de etanol, cuando se pasa a la concentracion 1%
de levadura decae la produccion de biomasa y el proceso fermntativo se ve afectado como
sus paramertos. Ersto tabien se ve reflejado en la grafica 3 ya que el % de acidez es
muy variable para cada concetracion de levadura


El crecimiento de las levaduras y la produccion de productos es evidentemente dependiente
de ciertas carencias nutricionales del del sustrato o medio que se utilice, especialmente en
nitrgeno para sintetisar sus proteinas, carbohidratos como glucosa utilizado como fuente de
carbono para producir etanol.

Los parametro pH, temperatura y sustrto influyen en el rendimiento del alcohol producido
atraves de la degradacion de azucares por levaduras, cuando se modifican las condiones
optimas para la degradacion la levadura puede subrir cambios en el metabolimos y nos
arroja otro tipo de productos .
-2.00E+10
0.00E+00
2.00E+10
4.00E+10
6.00E+10
8.00E+10
1.00E+11
1.20E+11
0 0.5 1 1.5 2 2.5
B
i
o
m
a
s
a


[levadura]
Biomasa Vs [lev]

CONCLUSIONES
Se observ la produccin de gas CO
2
al desplazarse el agua contenida en la vlvula de
fermentacin, y de etanol en el aroma de la solucin. Accin de las levaduras en su proceso de
degradacin de los azucares presentes aportados por la panela; lo que conllevo a bajar la
concentracin de Bx, el pH y por tal la acidez.
Se pudo determinar que las clulas presentes en la solucin aumento notablemente al ser fermentada
luego de ocho das, de acuerdo a la dilucin de 1 en 10 se obtuvieron 2*10
4
UFC/mL y 1,55*10
8

para la muestra sin fermentar. Esto se dio principalmente a las condiciones aptas y al tiempo dado
para el proceso.
Se puede concluir que la concentracin ms favorable para la obtencin de biomasa en de 0.5 a
1% de levadura
Bibliografa