Pembahasan Penentuan Kadar Protein Total

Penentuan kadar protein total

dilakukan dengan metode Biuret
menggunakan pereaksi biuret yang
terdiri atas Na
2
CO
3
2% dalam NaOH
0,1N, CuSO
4
1% dan K-Na Tartrat
2%. Tahap pertama yang dilakukan
adalah penetuan panjang gelombang
maksimum untuk mengetahui pada
panjang gelombang berapa sampel
mengalami absorbansi maksimal.
Sampel yang digunakan pada tahap
ini adalah kasein 300 g/mL,
sedangkan panjang gelombang
pengukuran absorbansi dilakukan
pada panjang gelombang 400-800
nm dan diperoleh panjang
gelombang maksimumnya adalah
635 nm dengan absorbansi maksimal
0,0028.
Kemudian dilakukan
pembuatan kkurva kalibrasi larutan
protein dengan sampelnya juga
kasein dengan konsentrasi awal 500
g/mL, dan kemudian diencerkan
hingga didapat variasi konsentrasi 0-
450 g/mL dengan interval
konsentrasi 50 g/mL sebanyak
sepuluh tabung. Dari kesepuluh
tabung tersebut diukur absorbansinya
pada panjang gelombang maksimum
yaitu 635 nm, dan diperoleh nilai
berturut-turut adalah 0,000167 ;
0,009867 ; 0,0102 ; 0,0145 ;
0,017734 ; 0,014734 ; 0,009567 ;
0,0064 ; -0,001167 ; 0,021567. Dari
hasil ini dibuat kurva hubungan
konsentrasi dengan absorbansi
dimana kurva yang terbentuk
tidaklah linier dan nilai regresinya
(R
2
) sangat jauh dari 1 yaitu 0,0398.
Persamaan garis yang terbentuk
adalah y = 9,523.10
-6
x + 8,2143.10
-3
,
dimana y adalah absorbansi dan x
adalah konsentrasi.
Terakhir, ditentukan kadar
protein total dari fraksi protein
jangkrik 40% dan 80%, pada panjang
gelombang maksimum 635 nm dan
diperoleh nilai absorbansinya
nerturut-turut adalah 0,5862 dan
0,2103. Dari hasil ini dapat
ditentukan kadar protein total yang
terdapat pada masing-masing fraksi
enzim dengan persamaan yang ada
dan diperoleh kadar protein pada
fraksi 40% yaitu 60693,657 g/mL,
dan pada fraksi 80 % diperoleh kadar
proteinnya yaitu 21220,80 g/mL.
Kesimpulan
-



difraksinasi dengan dengan
penambahan garam Ammonium
sulfat ((NH
4
)
2
SO
4
) 40 dan 80 %.
Aktivitas enzim protease ditentukan
dengan metode titrasi formol,
aktivitas enzim lipase dengan titrasi
alkalimetri, dan kadar protein total
dengan metode biuret.