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VALTEK DIAGNOSTICS
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Santiago CHILE


E-mail: info@valtek.cl WEB site: http://www.valtekdiagnostics.com Rev. N2
CERTIFICADO DE CONFORMIDAD Y TRAZABILIDAD DISPONIBLE A SOLICITUD
BILIRRUBINA DIRECTA - DIAZO ACIDO
Set de reactivos para la determinacin colorimtrica de bilirrubina directa en suero o plasma.

Para uso en el diagnstico in vitro.

SIGNIFICANCIA CLINICA

La bilirrubina es producto de la degradacin de la
hemoglobina en el sistema retculo endotelial, la cual es
transportada al hgado unida a albumina. Esta bilirrubina,
conocida como bilirrubina indirecta o libre, es insoluble en
agua y es conjugada en el hgado con cido glucurnico,
siendo excretada hacia el intestino por va biliar, donde es
metabolizada por la flora bacteriana. La bilirrubina total
corresponde a la suma de la bilirrubina indirecta o libre, y la
bilirrubina conjugada o directa. Un aumento en la bilirrubina
total es producto de una obstruccin en la va biliar; hepatitis;
cirrosis; enfermedad hemoltica y algunas deficiencias
enzimticas hereditarias. La bilirrubina indirecta o libre, se
encuentra elevada por causas pre-hepticas, tales como
enfermedades hemolticas, o bien problemas metablicos
intra-hepticos que involucran el proceso de conjugacin. En
neonatos es importante el control de la bilirrubinemia, ya que
la bilirrubina indirecta o libre es neurotxica.

FUNDAMENTOS DEL METODO

La mayora de los mtodos utilizados para la determinacin
de bilirrubina utilizan cido sulfanlico diazotizado,
formndose azobilirrubina coloreada.
En medio acuoso slo reacciona la bilirrubina conjugada o
directa. En presencia de cido sulfanlico diazotizado, los
glucurnidos de bilirrubina y la bilirrubina-delta reaccionan,
formndose azobilirrubina que en pH cido presenta un peak
de absorcin a 560 nm.
La azobilirrubina formada es medida fotomtricamente entre
540 y 600 nm, siendo la intensidad del color formado
directamente proporcional a la cantidad de bilirrubina directa
presente en la muestra.

REACTIVOS

Conservados entre 2 y 8C., estables hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta.
Preparacin reactivo de trabajo: Agregar al momento de
utilizar, por cada 1 ml. de reactivo Sulfanlico, 1 gota de
reactivo nitrito de sodio ( o 0.05 ml.), mezclar. Estable por 24
horas protegido de la luz.

Composicin reactivo de trabajo:
Acido sulfanlico 30 mM
HCl 165 mM
Nitrito de sodio 0.50 mM

MUESTRAS

Utilizar suero o plasma libre de hemlisis. Realizar el ensayo
dentro de un plazo no mayor a las 2 horas, en caso contrario
refrigerar la muestra entre 2 y 8C., o bien congelar a -20C.
para perodos ms largos. Mantener protegidas de la luz.



EQUIPO REQUERIDO

Espectrofotmetro o fotocolormetro de filtros capaz de medir
absorbancias a 560 nm (rango 540-600 nm); timer, pipetas y
bao termorregulado a 37 C.

TECNICA

Desconocido Blanco reactivo
Muestra (ml) 0.10 ----
Reactivo trabajo (ml) 1.00 1.00
Agua destilada (ml) ---- 0.10
Mezclar e incubar EXACTAMENTE 3 minutos a temperatura
ambiente o 1 minuto a 37C., llevando a cero el instrumento
con el blanco reactivo.

Es posible realizar el ensayo sin preparar reactivo de trabajo,
para lo cual se debe agregar a cada tubo 1 ml. de reactivo
Sulfanlico, y luego directamente 1 gota de reactivo Nitrito de
Sodio.

CALCULOS

Para obtener las concentraciones de bilirrubina total o
directa, debe realizarse una curva de calibracin o bien
utilizar un factor a partir de un standard de concentracin
conocida, con el cual se procede en la forma descrita para
las muestras en la tcnica de bilirrubina total. El factor o la
curva obtenidos con el reactivo para determinacin de
bilirrubina total son vlidos para la determinacin de
bilirrubina directa, y se recomienda verificar su validez con
cada nuevo kit de bilirrubina total.

FACTOR = Concentracin Standard
Abs.Standard
Concentracin muestra (mg/dl) = FACTOR x Abs. Muestra

OBSERVACIONES

! El factor o la curva de calibracin deben obtenerse
solamente con el reactivo para bilirrubina total.
! La reaccin es lineal hasta 20 mg/dl
! Para muestras peditricas, el volumen de muestra
puede ser disminudo a la quinta parte. El resultado
obtenido se multiplica por 5.
! Es recomendable el realizar un blanco para cada
muestra, en tal caso se utliza solamente reactivo
Sulfanlico.

RANGOS DE REFERENCIA

Bilirrubina Directa: 0 a 0.3 mg/dl

BIBLIOGRAFIA

1. Malloy H.T. & Evelyn K.A., J.Biol.Chem.119(481),1937.
2. Jendrassic L. & Grof P., Biochem Z. 291(81),1938.
3. Walters M. I. & Gerarde H. W., Micro J.15(231)1970.
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