6.5.2.

2 Agitar los tubos positivos de la prueba presuntiva antes de ser inoculados en los tubos de caldo
EC.
6.5.2.3 Con el asa de siembra estril, transferir una o ms asadas de un cultivo positivo de CLT a un tubo
con caldo EC. Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos.
6.5.2.4 Incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 C en Bao Mara por 24 2 horas.
6.5.2.5 Luego de la incubacin, retirar los tubos, observar la produccin de gas y proceder a realizar la
lectura, considerando positiva toda formacin de gas en los tubos Durham (Fermentacin) y
turbiedad en los tubos. Anotar los resultados.
6.5.2.6 Con las lecturas obtenidos calcular el NMP de acuerdo a las porciones y combinaciones
empleadas (vase anexo 2 o 3).

6.5.3 Escherichia coli
6.5.3.1 Con el asa de siembra estril, transferir una o ms asadas de un cultivo positivo de CLT a un tubo
con caldo EC con MUG Repetir el procedimiento para todos los tubos presuntivos
6.5.3.2 Incubar los tubos inoculados a 44.5 0.2 "C en Bao Mara por 24 2 horas.
6.5.3.3 Los tubos positivos (que presenten gas y turbiedad), se exponen a una lmpara de luz UV de 365
nm, la presencia de una fluorescencia azul se considera como una reaccin positiva para E. coli.
Anotar los resultados.
6.5.3.4 Paralelo a los anlisis de las muestras, analizar los controles positivos de la cepa de E coli (MUG
positiva), un control negativo cepa termotolerante de Klebsiella pneumoniae (MUG negativa) y un
medio de cultivo sin inocular,

6.5.3.5Anotar los resultados obtenidos y calcular el NMP de acuerdo a la frmula y las porciones y
combinaciones empleadas (vase anexo 2 o 3).

6.6 Determinacin del Nmero Ms probable (NMP)
6.6.1 El clculo de la densidad probable de bacterias Conformes totales, fecales y E. coli est basado en
la combinacin de los resultados positivos y negativos obtenidos en cada dilucin. La densidad de
conformes se expresa como NMP de colformes por 100 rnL y se obtiene a travs de la tabla en ia
que se presenta el lmite de confianza de 95% para cada valor de NMP determinado.
6.6.2 Los valores de NMP, para una variedad de combinaciones de tubos positivos y negativos se
presentan en el anexo 2 y 3.
6.6.3 Los valores de NMP presentados en el anexo 2 se refieren especficamente a la combinacin de
resultados positivos obtenidos cuando son inoculados una serie de 10 tubos con volmenes de 10
mL de muestra.
6.6.4 Los valores de NMP presentados en el anexo 3 se refieren especficamente a la combinacin de
resultados positivos obtenidos cuando son inoculados series de 5 tubos con volmenes de 10 mL,
1 mL, 0,1 mL de muestra.
6.6.5 Cuando se inoculan ms de tres series de diluciones decimales, seleccionar las tres diluciones
segn los ejemplos que se detallan: (ver cuadro 1 )
a) Como primer nmero del cdigo seleccionar la lectura correspondiente a la dilucin ms
alta que d resultados positivo en los 5 tubos y la lectura de las dos diluciones subsiguientes
para completar el cdigo. (Ejemplo 1).
b) S la dilucin ms baja examinada tiene menos de cinco porciones con resultados
positivos, seleccinela y las siguientes dos diluciones mayores (Ejemplo 2 y 3).
c) Cuando ocurra un resultado positivo en una dilucin ms alta que en las tres
seleccionadas de acuerdo con las reglas aqu dadas, cambie la seleccin a la dilucin ms
baja que tenga menos de cinco resultados positivos y las siguientes dos diluciones mayores
(Ejemplo 4).
d) Cuando todas las reglas de seleccin dadas aqu hayan dejado sin seleccionar cualquier
dilucin mayor con resultados positivos, aada el resultado de aquellas diluciones mayores
con resultados positivos al resultado de la dilucin anterior. (Ejemplo 5).
e) Si no hubieran suficientes diluciones mayores examinadas para seleccionar tres
diluciones, entonces seleccione la siguiente dilucin menor (anterior) (Ejemplo 6).

Tabla N 1: Valores para la seleccin del cdigo
Ejemplos
Tubos positivos / mL y volumen de muestra
Cdigo NMP/100 mL
10 1 0.1 0.01 0.001
1 5 5 1 0 0 5-1-0 330
2 4 5 1 0 0 4-5-1 48
3 0 0 1 0 0 0-0-1 1,8
4 5 4 4 1 0 4-4-1 400
5 5 4 4 0 1 4-4-1 400
6 5 5 5 5 2 5-5-2 54 000

6.6.6 Calcular el valor de NMP de acuerdo a la siguiente formula:
NMP /100 mL = Valor de la tabla X 10
V(*)
(*) Volumen de muestra inoculada en la primera dilucin seleccionada.
6.6.4