Coloracin de WRIGHT

Juego de soluciones para la coloracin segn WRIGHT para Microscopa

1/1 2007-08 Rev. 2

PRINCIPIO
El tpico color de los ncleos celulares, mayoritariamente rojo prpura, se
basa en la interaccin molecular entre eosina y un complejo azur B
ADN. Ambos colorantes forman el complejo. La intensidad de la
coloracin depende del contenido de azur B y de la relacin entre azur B
y eosina amarilla. El resultado de tincin puede ser influido por diferentes
factores como el valor del pH de la solucin y de la solucin tampn, las
substancias tampn (amortiguadores), el tiempo de tincin y la fijacin.


CONTENIDOS

COLORANTE DE WRIGHT SOLUCION
Listo para su uso
Eosina-Azul de Metileno segn Wright Certificado 0.8 g/l
Alcohol metilico R.A. 1 l


BUFFER GIORDANO Ph:7.0 PARA WRIGHT
-Listo para su uso
Di-Sodio hidrogenofosfato 12 H2O 14.02 g/l
Potasio Di-hidrogenofosfato 3.522 g/l
Agua desmineralizada tipo II cs

CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
Las soluciones deben almacenarse entre 15C y 30C y protegidos
de la luz. Despus de abierto el contenido almacenado entre 15C y
30C y protegidos de la luz es estable hasta la fec ha de caducidad
indicada en la etiqueta.
Temperaturas inferiores a 15C puede precipitar co lorantes de las
soluciones colorantes.
Los frascos deben mantenerse siempre bien cerrados.


PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS
La solucin R1 Colorante de Wright solucin es INFLAMABLE y
TXICA. Txico por inhalacin, en contacto con la piel y en caso de
ingestin. Txico: peligro de efectos irreversibles muy graves por
inhalacin y en caso de ingestin. Irritante para los ojos y la piel.
Mantener el envase bien cerrado. Mantener alejada de las llamas
no fumar. Tomar medidas cautelares contra descargas de
electricidad esttica. Evitar el contacto con la piel. Usar ropa y
guantes protectores adecuados
Observe la simbologa en los rtulos de las soluciones.
Las soluciones usadas y las caducadas deben eliminarse como
desechos especiales, debiendo cumplir las regulaciones locales para
el desecho de compuestos peligrosos.


MATERIALES ADICIONALES REQUERIDOS NO SUMINISTRADOS
Microscopio
Portaobjetos
Cubreobjetos
Cubeta de tincin
Frasco lavador
Agua
Cronometro y/o timer

MUESTRAS
Se deben usar laminas nuevas y prelavadas con alcohol de 96% para
quitar la grasa.
Deben utilizarse frotis frescos de sangre total o frotis frescos procedentes
de sangre anticoagulada con EDTA. Los frotis ms gruesos (p.ej., mdula
sea) generalmente requieren tiempos de tincin ms largos.

Toda muestra biolgica debe se considerada como
potencialmente infecciosa.






PROCEDIMIENTO

1. Realizar en una placa un extendido de la muestra con el borde de
otra placa. Dejar secar.
2. Colocar los frotis de sangre completamente secos, en la gradilla de
tincin adecuada.
3. Cubrir el portaobjetos con 12 ml de R1 Colorante de Wright
Solucin.
4. Tras 1 minuto, aadir un volumen igual de BUFFER GIORDANO Ph:
7.0 PARA WRIGHT, soplar para homogenizar hasta permitir que la
mezcla adquiera un brillo verde metlico.
5. Se deja actuar de 3 a 6 minutos.
6. Lavar con agua corriente, dejar secar a temperatura ambiente.
7. Leer al microscopio con objetivo de 40X o 100X y aceite de
inmersin.

RESULTADO

Tipo de clula Resultado
Linfocitos ncleo azul violeta
citoplasma azul
Monocitos ncleo (lobulado) azul violeta
citoplasma azul claro
Granulocitos neutrfilos ncleo azul oscuro
citoplasma rosa plido
grnulos tono rosado a azul claro
Granulocitos eosinfilos ncleo azul
citoplasma rosa plido
grnulos rojo ladrillo

Granulocitos basfilos ncleo purpura a azul oscuro
grnulos azul oscuro-negros
Trombocitos (Plaquetas) Azul
Eritrocitos rojizo


CONTROL DE CALIDAD
El control de calidad en la microscopia de extendidos sanguneos
depende directamente de la formacin y experiencia del profesional que
validar la calidad de los extendidos, coloracin, etc.


NOTAS SOBRE EL EMPLEO

Los procedimientos de tincin indicados en el presente inserto han
dado resultados satisfactorios en nuestros laboratorios. Las
preferencias de color individuales pueden precisar ligeros ajustes de
los tiempos.
Agua altamente clorada puede debilitar la coloracin de contraste.



BIBLIOGRAFA
1. Hematology: Principles and Procedures, Sixth Edition, Brown AB, Lea & Febiger,Philadelphia
1993 p101
2. Clark, George, Stains and staining (Microscopy), 4
th
edition, Williams & Wilkins, (1981).



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