IDENTIFIKASI AMFETAMIN SECARA KUANTITATIF DAN

KUALITATIF

Disusun oleh:
Kelompok
Nama

Prodi
Semester
Tingkat

: 5 (lima)
: Agnes Felicia L
Elsa Angelina
Lidwina Septie Ch
Melianti
Natalia indri
Thomas F
Wurry Priliandry
:D IV Analis Kesehatan
: 6 (enam)
: 3 (tiga)

SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN PERDHAKI CHARITAS

PALEMBANG
2014

Identifikasi ATS Secara Kualitatif Dan Kuantitatif

Upaya untuk menentukan identitas obat, pendekatan analitis harus
memerlukan penentuan setidaknya menggunakan dua parameter. Hal ini diakui
bahwa pemilihan parameter dalam kasus tertentu akan mempertimbangkan obat
yang terlibat dan sumber daya laboratorium yang tersedia untuk analis.
A. Tes Persumtif
Tes presumtif prosedurnya berupa penyaringan terdiri dari dua atau tiga tes
independen. Tes untuk memberikan indikasi ada atau tidak adanya obat dalam
sampel uji. Tes persumtif ini baik, karena semua teknik analisis,
memaksimalkan kemungkinan hasil yang benar, dan meminimalkan
kemungkinan positif palsu. Namun, tes presumtif tidak dianggap cukup untuk
identifikasi obat dan hasil harus dikonfirmasi dengan tes laboratorium
tambahan.
Tes presumtif lebih sering digunakan sebagai uji lapangan, meskipun juga
dilakukan di laboratorium sebagai prosedur penyaringan pertama. Untuk ATS
tes skrining, tes warna, atau tes spot, biasanya digunakan, meskipun
immunoassay tes dan sejumlah teknik instrumental cepat dan portabel juga
tersedia. Metode skrining Instrumental seperti spektrofotometer mobilitas ion
(ion-scan), spektrometer massa portabel, FTIR atau Raman spektrometer,
baru-baru ini telah mendapatkan popularitas. Banyak alat tes komersial untuk
skrining ATS yang tersedia, tetapi harus diuji spesifisitas dan sensitivitas.

1. Tes Warna
Tes Warna merupakan tes kimia sederhana dan tercepat dapat
diterapkan pada sampel. Kebanyakan tes warna sangat sensitif,

preman,

hanya beberapa menit yang diperlukan untuk menyelesaikan tes yang sukses,
dan Hasil terbaik diperoleh dengan jumlah sampel terkecil, sering kurang dari
satu mg.

Karena sampel dapat bervariasi dalam kemurnian (konsentrasi ATS),

dan zat-zat yang tidak terkait mungkin ada, warna yang ditunjukkan oleh tes
ini harus ditafsirkan dengan hati-hati.

Teknik uji Warna

Yang paling penting tes warna untuk zat ini Marquis, Simon dan uji
Chen. Uji Marquis memungkinkan perbedaan antara amphetamine dan cincin
analog tersubstitusi. Tes Simon umumnya digunakan sebagai tes untuk amina
sekunder, seperti cincin methamphetamine dan amfetamin tersubstitusi
sekunder, termasuk MDMA dan MDE. Namun, amina sekunder lainnya,
misalnya, dietilamina dan piperidin, dapat memberikan warna yang sama.
Secara umum, warna yang intens namun mungkin cepat memudar di hadapan
beberapa kotoran. Penting untuk analis mengkonfirmasi hasil tes Simon
dengan melakukan tes tambahan,misalnya, tes Marquis. Tes Chen digunakan
untuk membedakan efedrin, pseudoefedrin, norephedrine, fenil propanolamin
dan methcathinone dari amphetamine dan methamphetamine, yang tidak
bereaksi dengan Chen tes reagen.
Tes keempat, uji asam galat, menyediakan cara sederhana untuk
perbedaan MDMA, MDA dan MDEA dari amfetamin atau metamfetamin,
karena bereaksi secara khusus dengan senyawa aromatik methylenedioxy.
Prekursor berisi methylenedioxy-substruktur, seperti safrole dan isosafrol
juga bereaksi.

Uji Marquis

Tempatkan sejumlah kecil (1-2 mg bubuk, atau 1-2 tetes cairan) dari
bahan yang dicurigai di piring spot.

Tambahkan satu tetes Marquis Reagent 1, satu tetes reagen 2, dan

aduk.

Amati warna.

Uji Simon

Tempatkan sejumlah kecil (1-2 mg bubuk, atau 1-2 tetes cairan) dari
bahan yang dicurigai dalam piring spot.

Tambahkan satu tetes Reagen Simon 1 dan aduk.

Tambahkan satu tetes Reagen Simon 2, dan kemudian satu tetes reagen 3.

Amati warna

Uji Chen

Tempatkan sejumlah kecil (1-2 mg bubuk, atau 1-2 tetes cairan) dari
bahan yang dicurigai dalam piring spot.

Tambahkan 2 tetes Reagen Chen 1.

Tambahkan 2 tetes Reagen Chen 2, kemudian tambahkan 2 tetes Reagen 3

dan aduk.

Amati warna.

Uji asam galat

Tempatkan sejumlah kecil (1-2 mg bubuk, atau 1-2 tetes cairan) dari
bahan yang dicurigai dalam tabung reaksi kecil.

Tambahkan satu tetes Reagent Gallic acid.

Amati warna.

Hasil
tes asam galat digunakan untuk mengidentifikasi, secara umum, cincin
substitusi methylenedioxy dan ATS individu dengan sub-struktur, hasilnya tidak
disertakan secara terpisah, untuk zat individu, dalam tabel. Warna hijau tua
menunjukkan adanya MDA, MDMA, MDE, N-hidroksi - MDA atau MMDA.
Dalam beberapa kasus, misalnya, MDE dan N-hidroksi - MDA, warna hijau dapat
berubah menjadi coklat selama tes.
Tabel 1 hasil uji Warna

Senyawa
Amphetamine

Reagen Marquis
Orange, Perlahan
lahan berubah

Reagen Simon

Reagen Chen

NR *

NR *

coklat
Secara bertahap
Cathinone

NR

NR *

berubah menjadi
kuning atau
orange

Dimethylamphetamine

Orange

NR *

NR *

NR

NR *

Ungu

biru

NR *

Ephedrine
Pseudoephedrine
N-Ethylamphetamine

Kuning, menjadi
coklat
Orange, Perlahan

Metamfetamin

lahan berubah
coklat

Sedikit biru,
Methcathinone

NR

cincin, seperti
endapan

Norephedrine
2C-B
2C-T-2

NR
Kuning

Cahaya merah
muda, orange

2C-T-7
DMA
DOB

hijau

NR
Hijau

berubah menjadi
kuning atau
orange

NR

Ungu

NR *

NR *

NR *
NR *

Hijau

Gelap
Kuning

Secara bertahap

hijau

NR *
NR *

DOET

Coklat kuning

FLEA

Biru gelap/hitam

MBDB

Biru gelap/hitam

Biru

MDA

Biru gelap/hitam

NR *

MDDM

Biru gelap/hitam

NR *

NR *
NR *

NR *

MDEA

Biru gelap/hitam

MDMA

Biru gelap/hitam

MDOH

Biru gelap/hitam

MMDA
4-MTA
PMA

NR

Biru

coklat

NR *

Biru

NR *

Ungu

NR *

NR *

NR

NR *

cahaya
hijau

NR *

STP/DOM

Kuning

NR *

TMA

Orange

NR *

NR *

Catatan: NR = tidak ada reaksi

* Warna reagen harus dianggap sebagai negatif.

Catatan analit
(A) ATS spesifik
Hasil tes warna dapat berubahan dari hasil uji warna. Meskipun berbagai
macam

warna

yang digunakan untuk

produksi

tablet

ATS,

sebagian

warna yang larut dalam air, dan kelarutan mereka dapat dimanipulasi dengan
mengubah pH larutan. Dalam kasus tersebut, oleh karena itu, analis harus
menyesuaikan prosedur ekstraksi dan menghilangkan warna sama sekali sebelum
melanjutkan ke tes warna itu sendiri.
Dalam kasus, ketika tes warna tidak dapat ditafsirkan dengan jelas karena
kehadiran tablet pewarna, prosedur berikut akan sering menghasilkan hasil yang
diterima:
Tempatkan sejumlah kecil (sekitar 10 mg) dari sampel ke dalam tabung
reaksi kecil. Menambahkan sekitar 1 ml metanol (atau 1 ml 4:1 campuran
metanol: metilen klorida). Setelah penyaringan melalui glass wool, menguap
sampai kering. kemudian dilanjutkan dengan uji warna dengan hati-hati
menambahkan larutan sampel air di piring spot dan menambahkan warna reagen.
Karena sampel yang sudah diencerkan, 3 tetes reagen per satu tetes larutan sampel
akan cukup.

Kehadiran pengencer dan adulterants juga dapat mengganggu reaksi warna

dan menghasilkan hasil tes negatif palsu. Sedangkan uji Simon dapat
menyebabkan hasil negatif palsu ketika adulterants atau pengencer yang hadir
dalam sampel ATS, tes Marquis kurang sensitif sampel tercemar oleh karena itu,
lebih baik ketika konsentrasi ATS disampel sangat rendah.
(B) Umum
Warna-warna yang dijelaskan adalah penilaian subjektif karena persepsi
individu warna. Karena itu, aspek subjektif dari evaluasi warna, untuk itu
diperlukan setiap analis untuk menguji standar referensi yang tepat untuk
memastikan bahwa ia dapat mengenali setiap hasil uji warna. Demikian pula,
disarankan untuk melakukan pengujian tanpa substansi sasaran untuk memastikan
keakraban dengan warna reagen.
tes warna negatif umumnya cukup dapat diandalkan dalam membangun
tidak adanya senyawa target; Namun, hasil positif hanya dugaan indikasi
kemungkinan adanya suatu senyawa. Banyak

senyawa lain, sering tidak

berbahaya dan tidak terkendali oleh undang-undang nasional atau internasional,

dapat memberikan warna yang sama dengan tes reagen.
Oleh karena itu, wajib bagi analis untuk mengkonfirmasi tes warna positif
dengan menggunakan tes laboratorium tambahan.
Untuk menghilangkan kemungkinan hasil positif palsu karena tempat yang
terkontaminasi.

2.

Tes Anion

Pengujian anion bertujuan untuk forensik biasanya memanfaatkan kelarutan

gabungan dengan reaksi yang dipilih di mana hasil ditentukan ada atau tidak
adanya, dan kelarutan, dari endapan. Kelarutan ATS berbeda dan garam dalam air
dan beberapa pelarut dijelaskan di bawah ini.

Metode Untuk Identifikasi dan Analisis Amfetamin, Metamfetamin

Amfetamin dan garamnya

Air

Dasar

Hidroklorida

Posfat

Sulfat

Sedikit

Larut

Larut

Larut

Larut

Sedikit

Sedikit larut

larut
Metanol atau etanol

Larut

larut
Dietil eter

Larut

Tidak larut

Tidak larut

Tidak larut

Kloroform

Larut

Larut

Tidak larut

Tidak larut

Metafetamin dan Garamnya

Base

Hidroklorida

Air

Sedikit larut

Larut

Metanol atau etanol

Larut

Larut

Dietil eter

Larut

Tidak larut

kloroform

Larut

Larut

Ring-Tersubstitusi ATS dan Garamnya

Bebas dari cincin tersubstitusi ATS umumnya tidak larut dalam air dan larut
dalam etanol, dietil

eter, kloroform dan pelarut organik lainnya. Garam

hidroklorida mereka larut dalam air dan etanol, sedikit larut dalam kloroform, dan
tidak larut dalam dietil eter. Kelarutan zat individu kelompok ini tergantung pada
ATS cincin tersubstitusi tertentu yang dimaksud.

Metode
Semua reagen harus disiapkan sesuai dengan prosedur yang ditetapkan. Rincian
persiapan reagen dijelaskan dalam lampiran II.
Uji Perak Nitrat
Sampel ATS diketahui dilarutkan dalam beberapa tetes air deionisasi dan diobati
dengan 1-2 tetes larutan AgNO3. Hasil untuk anion umum adalah tercantum di
bawah ini. Karena anion lain juga dapat memberikan hasil yang sama, tes
tambahan atau sosialisasi keterbatasan pengujian harus dilakukan.
Klorida: Bentuknya endapan putih yang tidak larut dalam nitrat pekat asam.
Endapan larut dalam larutan amonia encer, dari mana dapat kembali dipicu oleh
penambahan asam nitrat.
Bromida: Bentuk kuning pucat krim berwarna endapan yang tidak larut dalam
asam nitrat. Endapan sangat lambat larut dalam larutan amonia encer dan larut
dalam larutan amonia pekat. Hal ini dapat diendapkan dengan penambahan asam
nitrat.
Iodida: Bentuk endapan kuning cerah yang sedikit larut dalam terkonsentrasi
larutan amonia tetapi larut dalam larutan tiosulfat.
Sulfat: Bentuknya yang berwarna kristal endapan ringan yang dapat dengan
mudah diidentifikasi dengan menempatkan solusi pengujian pada slide mikroskop
dan mencari karakteristik "diamond" berbentuk kristal perak sulfat.
Fosfat: Bentuk endapan kuning muda, yang larut dalam amonia encer solusi, atau
asam nitrat dingin.
Untuk sulfat dan fosfat garam, tes khusus tambahan dapat dilakukan:
Uji garam sulfat

Yang tidak diketahui sampel ATS (sekitar 100 mg) dilarutkan dalam air dan
diperlakukan dengan larutan barium klorida. Sebuah endapan putih, yang tidak
larut dalam asam klorida, menunjukkan adanya garam sulfat.
Uji garam fosfat
sampel ATS (sekitar 100 mg) dilarutkan dalam larutan yang terbuat dari volume
yang sama (misalnya, 1 ml masing-masing) larutan asam nitrat (10% v / v) dan
larutan amonium molibdat (10% b / v). Dengan pemanasan, pembentukan
endapan terang kenari kuning, yang larut dalam larutan amonia, menunjukkan
kehadiran garam fosfat.
Catatan Analitis
Karena semua tes anion dilakukan dalam larutan air, air-kelarutan Garam ATS
merupakan pra-kondisi untuk hasil yang berarti. Mencuci endapan dengan air
sebelum melakukan tes untuk pembubaran endapan sangat penting untuk
menghilangkan larut (non-endapan) anion.
3. Uji Mikrokristal
Uji Microcrystal uji cepat, sederhana, dan sangat sensitif untuk identifikasi zat
dan isomer optik mereka. Mereka melibatkan pembentukan Kristal dari reaksi
senyawa target dengan pereaksi kimia, diikuti dengan analisis kristal yang
dihasilkan dengan menggunakan mikroskop polarisasi.
Metode
Bentuk paling sederhana dari tes terdiri dari penambahan setetes pereaksi sesuai
dengan tes substansi, diikuti dengan mengamati dan menganalisis kristal yang
terbentuk di bawah mikroskop polarisasi. Dalam rangka mempertahankan catatan
yang akurat, fitur karakteristik kristal harus dijelaskan. hasil tes paling akurat
adalah dengan foto. Jika foto tidak tersedia sketsa bentuk kristal sangat
membantu.

B. KROMATOGRAFI LAPIS TIPIS (KLT) *

KLT telah menjadi salah satu teknik yang paling umum digunakan untuk
pemisahan dan identifikasi obat. Hal ini cepat (analisis tidak lebih lama dari tiga
puluh menit), sensitif (sub-miligram kuantitas analit diperlukan), sangat fleksibel
dalam fase gerak baik stasioner, dan bisa menerima berbagai macam zat, di dasar
dan garam bentuk, mulai dari paling polar dengan bahan non-polar yang paling.
Hal ini juga setuju untuk varietas teknik visualisasi, dan itu adalah murah.
Meskipun keuntungan nyata dari TLC, di banyak negara, tidak diterima sebagai
suatu teknik untuk identifikasi obat.

Pelat KLT (Fase Stasioner)

Lapisan: gel G Silica dengan ketebalan lapisan 0,25 mm, dan mengandung
indikator, yang berfluoresensi di bawah sinar UV panjang gelombang 254 nm
Catatan: Pelat disiapkan oleh analis harus diaktifkan sebelum digunakan dengan
menempatkan mereka ke dalam oven untuk setidaknya 10 sampai 30 menit pada
suhu 120 C. Pelat kemudian disimpan dalam desikator lemak bebas silika biru
gel. Aktivasi panas biasanya tidak diperlukan untuk lapisan ikatan kimia (pelat
komersial).
Ukuran tipe pelat: 20x20 cm, 20 x 10 cm, 10 x 5 cm (10 x 5 cm pelat harus
digunakan dengan sisi 10 cm vertikal di tangki KLT).

Sistem Pelarut (Fase Gerak)

Sistem A

: Methanol 100
Konsentrat amonia 1.5

Sistem B

: Ethyl acetate 85
methanol 10
Konsentrat amonia 5

Sistem C

: Cyclohexane 75

toluene 15
Diethylamine 10

Metode
Sistem Pelarut
Siapkan sistem pelarut seakurat mungkin dengan menggunakan pipet dan
mengukur silinder. Biarkan sistem pelarut dalam tangki TLC untuk sementara
waktu cukup untuk memungkinkan saturasi fasa uap yang akan dicapai sebelum
analisis (dengan tangki kertas berlapis penyerap, ini memakan waktu sekitar 5
menit).
Persiapan standar ATS dan solusi sampel
Bentuk standar dan sampel, garam atau dasar, tidak penting. Entah bentuk akan
memuaskan. Karena sifat dasar pelarut berkembang, senyawa bermigrasi.
ATS solusi standar: harus disiapkan pada konsentrasi sekitar 2 mg / ml dalam
metanol. Harus disimpan dalam gelap dan tempat yang dingin.
Solusi sampel ATS (ATS sampel tidak diketahui): solusi Sampel harus disiapkan
pada konsentrasi sekitar 5mg/ml dalam metanol. Dalam kasus-kasus, di mana
kemurnian ATS diduga menjadi sangat rendah karena pemalsuan, mungkin
diperlukan untuk mempersiapkan solusi sampel lebih terkonsentrasi (sepuluh kali
lebih terkonsentrasi solusi yang disarankan sebagai titik awal). Untuk sampel ATS
dalam bentuk selain bubuk, solusi sampel harus disiapkan sebagai berikut:
Tablet: menggiling sejumlah tablet (setelah rencana pengambilan sampel
umum) sampai menjadi bubuk halus dan menyiapkan solusi bubuk.
Kapsul: Keluarkan isi dari sampel yang representatif dari kapsul (berikut
rencana pengambilan sampel umum) dan mempersiapkan solusi bubuk.
Larutan encer: Spot langsung, atau setara 5mg/ml, jika konsentrasi dari
ATS diketahui.
Penotolan sampel
Letakkan kedua 1 L dan 5 L tempat larutan sampel, bersama-sama
dengan 2 L dari larutan standar (s) ke pelat KLT (Kontrol negatif harus

diterapkan ke pelat). Spotting harus dilakukan dengan hati-hati, tanpa merusak

permukaan pelat tersebut.
Titik awal yang dijalankan yaitu, "garis bercak," harus 2 cm dari bagian
bawah piring. Jarak antara aplikasi sampel (tittk bercak) harus minimal 1 cm, dan
bintik-bintik tidak harus ditempatkan lebih dekat dari 1,5 cm ke tepi sisi pelat.
Untuk menghindari noda menyebar selama pengembangan, ukuran dari sampel
tempat harus sekecil mungkin (2 mm).
Biarkan tempat kering, dan tempat piring ke pelarut jenuh TLC (kejenuhan
dari fasa uap dicapai dengan menggunakan bantalan pelarut jenuh atau kertas
saring sebagai lapisan tangki). Lepaskan piring dari tangki pembangunan segera
setelah pelarut mencapai garis pembangunan ditandai sebelumnya; jika tidak,
bintik-bintik menyebar akan terjadi.
Metode / Visualisasi reagen analit Target dan hasil
A. sinar UV pada 254 nm metode Universal. Banyak zat, termasuk ATS,
memberikan bintik-bintik ungu di piring dinyatakan hijau neon.
B. Ninhydrin reagen amina primer dan sekunder dilampirkan ke atom karbon
alifatik, seperti amphetamine dan methamphetamine, mengakibatkan
violet atau bintik-bintik merah muda.
C. diasamkan kalium Sensitif reagen umum. Kebanyakan primer dan
sekunder amina reagen iodoplatinate memberikan tempat biru muda.
D. Fast Black K primer dan amina sekunder memberikan yang warna
berbeda-beda dari violet (amina primer) ke oranye atau oranye-merah
(amina sekunder).
E. Marquis Perbedaan antara reagen tersubstitusi dan cincin tersubstitusi
ATS.
F. Fluorescamine reagen (Fluram) reagen Sensitif untuk amina primer.
Direkomendasikan untuk deteksi konsentrasi rendah amina primer.
G. Simon reagen. Reagen umum untuk amina sekunder (efedrin dan
pseudoephedrine tidak bereaksi).
H. Dragendorff ragent. Reagen umum untuk alkaloid dan basa nitrogen.

Kata kunci :
Metode / Visualisasi reagen
A. Plate sinar UV dikeringkan di bawah sinar UV pada 254nm dan 366nm.
B. Ninhydrin reagen: Siapkan larutan 10% dalam etanol. Semprot piring
dengan reagen ninhidrin dan keringkan dalam oven pada suhu 120 C
selama minimal 15 menit. Warna violet atau ungu dihasilkan oleh amina
primer seperti amphetamine dan amina sekunder seperti methamphetamine
dan Efedrin.
C. Diasamkan dengan reagen kalium iodoplatinate Larutkan 0.25g platinic
klorida dan 5g kalium iodida dalam air 100 ml. Tambahkan 2 ml asam
klorida pekat. Semprot piring dengan larutan kalium iodoplatinate dan
mengamati bintik-bintik berwarna Amphetamine dan methamphetamine
bintik abu-abu ungu-coklat- pada latar belakang merah muda.
D. Fast Black K Solusi: Siapkan larutan 1% dari garam Hitam K dalam air
[2,5-Dimethoxy-4-((4-nitrophenyl)

azo)

benzena

diazonium

tetrachlorozincate (2:1)] Solusi B: 1 N NaOH Semprot piring dengan

larutan A dan mengamati bintik-bintik berwarna. Amina sekunder seperti
methamphetamine dan MDMA menghasilkan bintik-bintik segera. Larutan
B menghasilkan bintik-bintik berwarna untuk amphetamine.
E. Marquis reagent:
Tambahkan 8-10 tetes larutan formaldehida 40% addkan dengan 10 ml
asam sulfat pekat. Metode untuk identifikasi dan analisis amfetamin,
metamfetamin Penyemprotan dengan Marquis reagent tidak dianjurkan
karena asam sulfat pekat terlibat. Namun, memberikan informasi
tambahan yang berguna untuk membedakan antara ATS, misalnya, setelah
deteksi dengan ninhidrin. Untuk itu, drop reagen Marquis dengan pipet
Pasteur pada tempat yang sudah terdeteksi.
F. Fluorescamine reagen (Fluram)
Larutkan 10 mg fluorescamine dalam 50 ml aseton. keringkan Air dengan
blower udara panas. Amati piring di bawah sinar UV pada 366 nm.
Amphetamine

memberikan

warna

kuning

neon

titik

terang.

Methamphetamine tidak terdeteksi. (Untuk stabilisasi pada 366 nm,

semprot dengan larutan 10% v / v dari trietylamine dalam diklorometana).
G. Simon reagen
Larutkan 100 mg sodium nitroprusside dan 2 g natrium karbonat dalam 10
ml air (yaitu, larutan air yang mengandung natrium nitroprusside pada
konsentrasi 1%, dan natrium karbonat pada 20%). Siapkan reagen baru
sebelum digunakan. Semprot piring dengan reagen Simon. Tempatkan
piring dalam tangki kosong bersama dengan gelas yang berisi
asetaldehida. Tutup tangki. Uap asetaldehida akan menyebabkan
methamphetamine tempat untuk menjadi warna biru intens. Amina primer
tidak dapat dideteksi, karena sensitivitas rendah sistem untuk kelompok
zat, dan gangguan pada latar belakang warna ketika amonia digunakan
dalam pelarut berkembang.
H. Dragendorff reagen Larutan stok: Larutkan 0,85 g bismut subnitrate
(dasar) dalam 10 ml asam asetat. Encerkan dengan 50 ml dengan air dan
tambahkan 8 g kalium iodida dalam 20 ml air Semprot piring dengan
larutan yang dibuat dari 1 ml larutan stok Dragendorff, 2 ml asetat asam
dan 10 ml air. Warna bervariasi dari oranye ke ungu.

Interpretasi
Setelah visualisasi, menandai tempat (misalnya, dengan pensil), dan
menghitung faktor retardasi (Rf) nilai-nilai:
Jarak migrasi: dari asal ke pusat zona analit (spot)
Rf =
Pengembangan jarak: dari asal pelarut depan.
Hal ini sangat umum untuk mengekspresikan faktor retensi sebagai Rf x
100, disebut sebagai HRF.
Hasil
Bandingkan warna dan nilai-nilai Rf sampel ATS. Nilai Rf untuk beberapa
ATS diberikan dalam Tabel 2.

Tabel 2. Nilai Rf sering ditemui ATS dan adulterants TLC sistem

NAMA ATS

TLC sistem
A

Amphetamine

0.48 (0.43)

0.37 (0.43)

Chatinone

0.66

0.56

DOB

0.37

0.32

(0.13)

DOET

0.36

0.32

(0.24)

DMA

0.37

0.33

0.19

N-ethylamfetamin

0.47

0.37

(0.47)

Methamphetamine 0.35 (0.31)

0.22 (0.42)

(0.28)

MDA

0.33 (0.42)

(0.18)

0.36 (0.39)

NAMA ATS

C
(0.20)

TLC sistem
A

MDMA

0.31 (0.33)

0.21 (0.39)

MMDA

0.40

0.31

PMA

0.41 (0.73)

0.33 (0.43)

(0.23)

STP / DOM

0.35 (0.51)

0.31 (0.41)

(0.15)

TMA

0.35

0.20

EPHEDRINE

(0.30)

(0.25)

(0.05)

CAFFEIN

(0.52)

(0.52)

(0.03)

(0.24)

Nilai Rf dalam kurung telah diperoleh dengan menggunakan pelat silika diresapi
dengan metanol KOH (0,1 mol / l).
Catatan analitis
Penting bahwa standar referensi ATS dijalankan secara bersamaan di piring yang
sama. Atau, reproducibility dapat secara signifikan ditingkatkan dengan
menggunakan senyawa referensi dan dikoreksi nilai Rf (Rfc). Untuk tujuan

identifikasi, baik nilai Rf dan warna bercak setelah penyemprotan dengan reagen
visualisasi yang berbeda harus selalu dipertimbangkan.
C. KROMATOGRAFI GAS (GC)-ionisasi nyala DETECTOR (FID)
Untuk analisis GC dari ATS. Menggunakan kolom kapiler dengan diameter
internal antara 0,2 dan 0,32 mm. GC prosedur memanfaatkan kolom megabore
kapiler (0,53 mm diameter internal) merupakan sarana untuk memperbaiki
menyelesaikan daya dibandingkan dengan kolom dikemas, dan lebih kuat
daripada bore kapiler sistem kolom sempit. Lama GC sistem yang dirancang
untuk kolom dikemas dapat dikonversi untuk digunakan dengan kolom megabore.

Metode
1. ANALISIS KUALITATIF
Persiapan standar ATS dan solusi sampel Larutan standar ATS: timbang 25 mg
garam ATS standar (s) ke dalam labu volumetrik 25 ml dan addkan sampai tanda
dengan air. Pipet sebuah aliquot dari 1 sampai 5 ml larutan ini ke dalam 10 ml
gelas tutup tabung. Tambahkan larutan 5% natrium hidroksida sampai pH 10.
Kemudian tambahkan 5 ml ekstrak pelarut. Membalikkan tabung reaksi
setidaknya 10 kali atau vortex selama 1 menit dan biarkan berdiri sampai lapisan
terpisah. Dengan menggunakan pipet tetes, pindahkan lapisan pelarut (Misalnya,
kloroform) melalui natrium sulfat anhidrat lapisan ke dalam botol GC.
Solusi sampel ATS (unknown sample ATS): berat 25-150 mg sampel, tergantung
pada kemurnian diantisipasi, untuk mendapatkan konsentrasi akhir sekitar 1 mg /
ml garam analit, ke dalam labu ukur 25 ml addkan dengan air.
Pipet larutan dari 1 sampai 5 ml larutan ini ke dalam gelas 10 ml tutup tabung
reaksi. Tambahkan larutan 5% natrium hidroksida sampai pH 10. Lalu tambahkan
5 ml pelarut ekstraksi (misalnya, kloroform).
Stopper dan membalikkan tabung reaksi setidaknya 10 kali atau vortex selama 1
menit dan biarkan berdiri sampai lapisan terpisah. Dengan menggunakan pipet
tetes, mentransfer lapisan pelarut melalui natrium sulfat anhidrat lapisan ke dalam
botol GC.

Inject 1-2 ul lapisan pelarut ke dalam GC.

Jika sampel cepat diperlukan, sampel dapat diambil secara langsung dalam etanol
/ amonia berair (99:1), dan disuntikkan ke kromatografi gas. Dengan
menggunakan metode ini, kondisi injektor dan kolom dapat memburuk lebih cepat
dibandingkan dengan sampel diekstraksi (Catatan: Metode ini tidak cocok untuk
analisis kuantitatif karena sulit untuk menghasilkan kromatografi baik di
keberadaan amonia).

Hasil
Identifikasi

dilakukan

dengan

membandingkan

waktu

retensi

analit

dengan standar referensi. Urutan elusi adalah sebagai berikut: amphetamine

<methamphetamine

<pseudoephedrine

<efedrin

<PMA

<PMMA

<MDA

<MDMA <4-MTA <MDEA <MBDB <2C-B. Di bawah kondisi yang dijelaskan,

kafein dan ketamin, yang sering ditemukan dalam sampel ATS di beberapa
daerah, mengelusi setelah 2C-B.
2. ANALISIS KUANTITATIF
Tiga metode untuk analisis GC-FID kuantitatif ATS disediakan di bawah ini:
metode standar tunggal (A) dan metode standar (B dan C). Metode A dan B tidak
memerlukan derivatisasi, sedangkan metode C membutuhkan silylation.
Metode A: metode standar Tunggal , metode A cocok untuk pemeriksaan ATS
secara kuantisasi. Metode Ini melibatkan persiapan larutan standar ATS dengan
konsentrasi yang sama dengan konsentrasi analit.
Pembuatan larutan baku internal (IS): timbang akurat sekitar 25 mg standar
(misalnya, n-tetradecane atau lainnya n-alkana dengan bahkan jumlah atom
karbon, atau difenilamin) dan di larutkan dalam 25 ml pelarut pengekstrak
(misalnya, kloroform). Jika standar internal solusi digunakan untuk ekstraksi,
konsentrasi sasaran sebaiknya disiapkan dalam rentang instrumen linear (tidak
lebih dari 0,5 mg / ml).
Persiapan standar ATS dan solusi sampel : ATS standar dan larutan sampel harus
mengikuti prosedur yang diuraikan di atas untuk analisis kualitatif, dengan

menggunakan larutan standar internal untuk ekstraksi dari ATS standar dan
sampel, sebagai berikut: (A) ATS standar di Timbang akurat sekitar 25 mg garam
ATS standar (s) masukkan kedalam volumetrik labu 25 ml dan addkan sampai
tanda dengan air. pipet secara akurat sebuah aliquot dari 1 sampai 5 ml larutan ini
ke dalam 10 ml gelas tutup tabung. Tambahkan larutan 5% natrium hidroksida
sampai pH 10. Kemudian tambahkan 5 ml larutan baku internal.
Tutup dan membalikkan tabung reaksi setidaknya 10 kali atau vortex selama 1
menit dan biarkan berdiri sampai lapisan terpisah. Dengan menggunakan pipet
tetes, pindahkan lapisan pelarut yaitu natrium sulfat anhidrat ke dalam botol GC.
Menganalisis larutan standar dalam rangkap tiga atau lebih. (B) sampel ATS
(sample diketahui ATS) Timbang akurat 25-150 mg sampel, tergantung pada
kemurnian, untuk mendapatkan konsentrasi akhir sekitar 1 mg / ml garam analit,
larutkan menggunakan labu volumetric 25 ml dan addkan sampai tanda air.
Sampel diantisipasi kemurnian ditentukan secara empiris. pipet secara akurat
sebuah aliquot dari 1 sampai 5 ml larutan ini ke dalam 10 ml gelas tutup tabung.
Tambahkan larutan 5% natrium hidroksida sampai pH 10. Kemudian tambahkan 5
ml larutan baku internal. Tutup dan membalikkan tabung reaksi setidaknya 10 kali
atau vortex selama 1 menit dan biarkan berdiri sampai lapisan terpisah. Dengan
menggunakan pipet tetes, pindahkan lapisan pelarut yaitu natrium sulfat anhidrat
Persentase Isi obat dalam sampel dapat dihitung dengan menggunakan rumus:
ATS % =
dimana
ATS (%) = Isi ATS diketahui (sebagai dasar atau garam, = kemurnian sampel)
CST = Konsentrasi ATS larutan standar (mg / ml), yang telah dipersiapkan bawah
(a), di atas (=berat standar ATS murni per mili-pelarut liter)
CATS = Konsentrasi ATS larutan sampel yang tidak diketahui (mg / ml),
yang telah dipersiapkan di bawah (b), di atas (= berat diketahui ATS
sampel per mililiter pelarut)

AATS / IS = Jumlah kawasan Puncak yang tidak diketahui ATS dibagi dengan luas
puncak standar internal (sebaiknya, rata-ratadikerjakan secara duplo)
Ast/IS = Jumlah Luas puncak standar ATS dibagi dengan jumlah luas puncak dari
standar internal (rata-rata penentuan rangkap tiga)
Metode B: metode Multiple-standar tanpa derivatisasi Metode di bawah ini adalah
metode kalibrasi multi-titik yang direkomendasikan, divalidasi. Metode GC untuk
analisis kuantitatif dari ATS, dengan dan tanpa derivatization.
Pembuatan larutan baku internal (IS) Timbang akurat 0,3-0,4 g standar internal
yang dipilih (n-tetradecane, n-alkana lain, difenilamin, atau ATS struktural terkait
dalam bentuk dasar) tambahkan ke dalam labu ukur 500 ml encerkan dengan
kloroform untuk memberikan Larutan standar internal dari 0,6-0,8 mg / ml.
Pembuatan larutan standar ATS (solusi kalibrasi GC) Larutan stok standar harus
mengandung semua senyawa dalam konsentrasi ions sekitar 1000 mg / l.
Untuk persiapan larutan stok: (A) beratnya sekitar 1000 mg garam ATS
menjadi 1000 ml labu volumetrik dan add kan sampai tanda dengan air. (B) pipet
secara akurat 5 ml larutan ini ke dalam gelas tutup uji 20 ml. tambahkan 5 ml
kloroform. (C) Stopper dan kocok dengan baik, kemudian diamkan sampai lapisan
terpisah. Menggunakan pipet Pasteur, mentransfer sekitar 1 ml lapisan kloroform
melalui natrium sulfat anhidrat ke dalam gelas kecil.
Persiapan beberapa standar kalibrasi titik
Level

Larutan

calibrasi

standar

Larutan

IS CHCl3 (l)

ATS (l)

Konentrasi dari
garam

(l)

(mg/l)

Level 1

20

100

880

20

Level 2

40

100

860

40

Level 3

60

100

840

60

Level 4

80

100

820

80

Level 5

100

100

800

100

ATS

Metode C: metode Multiple-standar dengan derivatisasi

Siapkan diderivatisasi ATS standar dan sampel solusi dengan mengukur sebuah
aliquot (misalnya, 100ml) solusi standar melalui natrium sulfat anhidrat ke dalam
gelas kecil Langkah (c) di atas) bersama-sama dengan aliquot dari 100 ml, larutan
standar internal 750 ml, kloroform dan 50 ml BSTFA (atau BSTFA + 1% TMCS)
menjadi sampel GC botol. Menggunakan 50 mL BSTFA di setiap langkah untuk
persiapan larutan standar dan sampel, dan menambahkan kloroform untuk
membuat sampai 1 ml.

D. GAS spektrometri massa kromatografi (GC-MS)

GC-MS adalah salah satu teknik yang paling umum digunakan untuk identifikasi
secara kuantisasi, pada sampel obat forensik. Persiapan standar ATS dan solusi
sampel Sampel disiapkan seperti yang dijelaskan dalam metode GC yang
diberikan sebelumnya. Persiapan derivatif adalah particularly diinginkan ketika
spektrum massa molekul underivatized adalah nilai diagnostik rendah.
Derivatisasi dari ATS biasanya menghasilkan ion fragmen rasio m / z lebih tinggi
dan kelimpahan yang lebih tinggi. Ion massa yang tinggi lebih spesifik dan
mereka memiliki Nilai diagnostic lebih, karena mereka tidak terpengaruh oleh
campur ion latar belakang seperti kolom berdarah atau kontaminan lainnya.
untuk penggunaan di GC-MS, sampel amina primer juga dapat diambil langsung
dalam karbon disulfida (CS2), Yang menghasilkan pembentukan isothiocyanate,
derivatif yang memberikan spektrum massa lebih karakteristik dari senyawa
induk.
dan kolom dapat memburuk lebih cepat daripada dengan sampel diekstraksi.
untuk penggunaan di GC-MS, sampel amina primer juga dapat diambil langsung
dalam karbon disulfida (CS2), yang menghasilkan pembentukan isothiocyanate,
derivatif yang memberikan spektrum massa lebih karakteristik dari senyawa
induk.

Hasil
Identifikasi dilakukan dengan membandingkan waktu retensi dan spektrum massa
analit dengan standar referensi. Semua senyawa diidentifikasi oleh GC-MS dan
dilaporkan oleh analis harus dibandingkan dengan spektrum massa saat standar
acuan yang tepat, sebaiknya diperoleh dari instrumen yang sama, dioperasikan di
bawah kondisi yang sama.

E. KROMATOGRAFI CAIR KINERJA TINGGI (HPLC)

Selain GC, HPLC adalah teknik lain pemisahan utama yang biasa digunakan
dalam

analisis

reproduktifitas

obat

forensik.

terbaik

dan

Untuk

memudahkan

pendeteksian,

terbalik

persiapan

sampel,

kromatografi

fase

direkomendasikan untuk analisis ATS dan cincin mereka tersubstitusi analog.

Kolom paling universal dan serbaguna adalah terikat oktadesil silika kolom (C18).
Panjang kolom, diameter, ukuran partikel, ukuran pori-pori dan beban karbon
harus dipertimbangkan sebelum pemilihan akhir kolom. Karena ada berbagai
macam fase stasioner dan mobile yang tersedia untuk analis, hanya pedoman
disajikan di bawah ini.
Metode
Persiapan standar ATS dan solusi sampel
Larutkan jumlah yang tepat dari standar atau sampel dalam fase gerak, penargetan
konsentrasi komponen aktif antara 0,05-0,50 mg / ml. Contoh solusi harus
disaring sebelum analisis. Saham dan standar solusi harus disiapkan dari standar
referensi. Standar kerja harus berada dalam rentang linear detektor dan sekitar 80120% dari konsentrasi sasaran. Beberapa titik kalibrasi diinginkan tetapi metode
standar tunggal juga diterima.
Hasil
Identifikasi dilakukan dengan membandingkan waktu retensi analit dengan bahwa
standar referensi dan, jika tersedia, dengan menggunakan beberapa panjang
gelombang UV atau diode array atau deteksi pemindaian UV cepat. Kekhususan

metode ini penting, karena selalu ada kemungkinan bahwa senyawa serupa
mengelusi pada waktu retensi yang sama. Perintah elusi khas adalah sebagai
berikut: norephedrine, efedrin, amfetamin, methamphetamine, MDA, MDMA dan
MDEA. Pemisahan efedrin/pseudoefedrin dan norephedrine / norpseudoephedrine
pasangan bisa sulit, dan mungkin memerlukan sedikit penyesuaian kondisi HPLC.

F. FOURIER TRANSFORM INFRARED (FTIR) SPEKTROSKOPI

Spektroskopi inframerah secara luas digunakan sebagai uji kualitatif juga metode
kuantitatif untuk penentuan dan analisis struktur ATS. Analisis FTIR dapat
menjadi alat yang sangat berguna untuk penyaringan cepat ATS tablet dan bubuk,
memberikan indikasi mengenai homogenitas tablet
preparasi sampel
Sebuah teknik diinginkan adalah metode halida disc, dapat dianalisis ulang
berkali-kali, jika disimpan lebih dari pengering a. Metode halida disk yang *
terdiri dari penggilingan sampel kering dengan sangat halus bubuk, kemudian
pencampuran sekitar 1 mg bubuk sampel dihomogenisasi dengan 200 mg hati-hati
dikeringkan dan digiling halida alkali. Namun, KCl sedikit kurang higroskopis,
dan umumnya direkomendasikan atas KBr, terutama ketika analit adalah garam
hidroklorida (untuk menghilangkan masalah pertukaran halida). Namun, spektrum
yang diperoleh dengan metode ini tidak dapat langsung dibandingkan dengan
yang diperoleh dari salah satu metode yang dijelaskan di atas.
Isolasi obat murni dari sampel
Isolasi basa bebas ATS
Larutkan 25-50 mg sampel dalam 1 ml 0,1 N asam tartaric. Tambahkan 4-5 tetes
amonium hidroksida dan ekstrak dengan kloroform. Melewati lapisan kloroform
melalui kolom kecil berisi plug kapas untuk menghilangkan partikel tersuspensi.
Biarkan sebagian dari solusi kloroform menguap langsung ke cakram KBr dan

merekam spektrum inframerah dari basa bebas, misalnya, dengan film tipis
Teknik pada cakram KBr.

Isolasi garam ATS

Giling sampel menjadi serbuk 20-50 mg dengan 1-2 ml kloroform. Saring,
mengumpulkan ekstrak. Menyebabkan kristalisasi, filter, kristal kering, dan
menjalankan spektrum inframerah Hasil dari garam ATS oleh salah satu metode
yang dijelaskan di bawah ini.

Metode
Spectra garam ATS dicatat dengan sampel disusun sebagai berikut
metode:

KBr halida disc (1-1,5%)

Nujol memikirkan metode

Metode langsung, misalnya pemantulan difusi ATR

Metode pantul

Spectra ATS basa dicatat dengan sampel disusun sebagai berikut

metode:

Metode film tipis

Kartu IR

Metode langsung, misalnya pemantulan difusi ATR

Metode persiapan sampel IR alternatif untuk methamphetamine

Metode ekstraksi kering Serial
Tempatkan 200 mg sampel bubuk methamphetamine ke Pasteur sekali pakai pipet
dengan plug glass wool. Cuci sampel dengan 1 ml-bagian aseton dan
mengumpulkan fraksi aseton. Biarkan kolom kering dan kemudian bilas dengan 1
ml aliquot-metanol dan mengumpulkan fraksi metanol. Bahan larut kemudian
dapat dihapus dari pipet. Semua fraksi diperiksa oleh spektroskopi inframerah
untuk identifikasi.

Pemisahan fisik / selektif re-kristalisasi

Prosedur di bawah ini juga bekerja untuk jenis campuran ditunjukkan; mereka
tidak bekerja dengan baik dengan amphetamine hydrochloride.
Campuran diketahui mengandung metamfetamin: Tambahkan dalam gelas 25 mg
sampel 20 ml dari 2:1 campuran kloroform dan heksana. Tambahkan dietil eter
untuk mengendapkan metamfetamin. Filter, kering dan memperoleh spektrum IR
(methamphetamine hidroklorida).
Campuran diketahui mengandung metamfetamin, pseudoefedrin, dan efedrin:

Tempatkan 100 mg sampel dalam secarik kertas saring dan cuci dengan 40
ml 3:1 campuran kloroform dan heksana.

Cuci dengan kloroform, dan keringkan, untuk pemeriksaan (efedrin

hidroklorida). menguapkan larutan asli.

Larutkan satu setengah sampel ini dalam 20 ml 2:1 campuran kloroform

dan heksana, berkonsentrasi sekitar setengah volume awal,

Dan menambahkan dietil eter untuk mengendapkan methamphetamine.

Filter,

kering

dan

memperoleh

spektrum

IR

(methamphetamine

hidroklorida).

Larutkan setengah lainnya dari sampel dalam 2 ml kloroform dan

tambahkan 1,6 ml heksana untuk mengendapkan pseudoefedrin tersebut.
Filter, kering dan memperoleh IR spektrum (pseudoefedrin hidroklorida).

Hasil
Identifikasi dilakukan dengan membandingkan spektrum analit dengan standar
referensi, atau dari perpustakaan spektral.

G. ANALISIS ISOMERS OPTIK

Kebanyakan ATS memiliki satu atom karbon asimetrik mengakibatkan sepasang
enantiomer untuk setiap ATS. Tergantung pada sumber, oleh karena itu, bentuk
enansiomer berbeda amfetamin, metamfetamin atau lainnya ATS mungkin
ditemui di sampel diajukan untuk analisis.. Di negara-negara di mana perundang-

undangan nasional mensyaratkan bahwa spesifik isomer optik ini diidentifikasi,

prosedur analit berikut dapat digunakan.

1. MELTING POINT
Perbandingan titik leleh sampel dicampur dengan standar acuan murni
enatiomerically adalah tes cepat dan sederhana untuk membedakan optik isomer.
Sebagai contoh, d-dan-l methamphetamine hydrochloride memiliki Titik lebur
yang sama (170-175 C), tetapi campuran dari jumlah yang sama dari kedua
isomer optik (campuran rasemat) memiliki titik lebur yang lebih rendah (130-135
C). Metode ini membutuhkan sampel yang cukup murni. Umumnya, titik leleh
harus ditentukan dengan menggunakan sampel kering.

2. TES mikrokristal
Tes mikrokristal untuk isomer optik amfetamin:
Uji klorida emas [5% HAuCl4 di H3PO4] Mentransfer sejumlah kecil sampel
bubuk ke dalam depresi rongga geser, dan tambahkan satu atau dua tetes reagen
volatilizing (larutan NaOH 5%). Ini membebaskan amina bebas dalam bentuk
basa bebas yang mudah menguap, yang naik dari solusi sebagai uap. Segera
mentransfer setetes pereaksi pengujian (5% HAuCl4 di H3PO4) ke slide kaca dan
membalikkan slide melintang atas sampel rongga. Reagen kemudian bereaksi
dengan uap amina hadir dalam rongga. Setelah selang waktu yang tepat,
membalikkan kembali slide reagen dan memeriksa untuk kristal dalam reagen
atau di tepi drop reagen.

Hasil

Baik d-dan l-amphetamine memberikan mikrokristal, menyerupai batang panjang

kuning atau jarum kasar dan pisau panjang dan sempit. Cara untuk membedakan
mereka adalah untuk membentuk rasemat, yang tidak memberikan kristal yang
berbeda.. Kristal ini sebagian besar terbentuk setelah inversi. Untuk tujuan ini,
menambahkan beberapa bubuk sampel yang tidak diketahui untuk sejumlah kecil

dikenal garam d-amphetamine dalam satu rongga. Ulangi tes di atas. campuran
yaitu (d + d) atau (l + l) akan memberikan batang kuning panjang dll.
metamfetamin d-Methamphetamine diuji dengan 5% HAuCl4 di H3PO4
memberikan "V" pisau dengan satu sisi yang lebih pendek dari sisi lain. lMethamphetamine memberikan bentuk karakteristik ujung berbentuk cerutu
(mereka lancip di kedua sisi ujung pisau). d, l-Metamfetamin bentuk tunggal dan
"X" pisau yang kadang-kadang berbentuk "Pisau".

MDMA
MDMA diuji dengan 5% HAuCl4 di H3PO4 memberikan kristal berbentuk X
putih Kristal ini mirip dengan d, lmethamphetamine dengan emas klorida, namun
dapat dibedakan dengan praktek.
Catatan: Karena MDMA sangat sensitif dalam bereaksi dengan reagen emas
klorida, hanya sebagian kecil sudah cukup untuk hasil yang baik. Tes emas
klorida juga berguna untuk prekursor efedrin dan pseudoefedrin, dan dapat
berguna untuk nikotinamida dan kafein.

Hasil
d-Methamphetamine memberikan jarum orange panjang. dl-Methamphetamine
memberikan batang oranye-merah dengan karakteristik miring berakhir.

3. TEKNIK INSTRUMENTAL
Ada beberapa metode instrumental langsung (GC kiral, HPLC atau CE) dan
metode derivatisasi tidak langsung tersedia untuk analisis isomer optik ATS.
Pemilihan metode tergantung pada ruang lingkup analisis, ketersediaan peralatan
dan persyaratan laboratorium lainnya.. Kekuatan dan kelemahan dari kedua
pendekatan harus dipertimbangkan dengan hati-hati. Metode instrumental Direct
memungkinkan analisis isomer optik tanpa derivatisasi, menggunakan fasa diam
kiral dan / atau aditif kiral untuk menjalankan penyangga (CE). Metode tidak
langsung didasarkan pada derivatisasi analit dengan kirai reagen untuk
menghasilkan dua diastereoisomer yang berbeda dengan yang berbeda fisiko-

kimia sifat yang dapat dipisahkan pada fase diam akiral. Metode menggunakan
derivatisasi kiral dasarnya lebih murah dan melakukannya tidak memerlukan
peralatan khusus atau kolom. Teknik GC Kromatografi gas (GC) adalah teknik
mapan untuk pemisahan kiral. itu dapat dilakukan dengan menggunakan metode
langsung, menggunakan kolom kapiler kiral, atau metode tidak langsung, di mana
pemisahan ini dicapai dengan menggunakan reagen kirai dan akiral fasa diam.
Kromatografi gas kiral (metode GC langsung) Fasa diam yang tersedia secara
komersial untuk pemisahan GC isomer optik biasanya diproduksi dengan
penambahan siklodekstrin makromolekul diderivatisasi untuk fase diam umum.
Yang paling umum digunakan fase diam kiral untuk ATS adalah betasiklodekstrin

berbasis.

metode

Preparasi

sampel

(ekstraksi)

untuk

analisis GC kiral adalah sama seperti untuk normal GC.

Derivatisasi kiral (metode GC tidak langsung)

Diastereoisomer dari ATS dapat disusun dengan menggunakan reagen yang
berbeda seperti acylchlorides, alkylsulphonates, isothiocyanates, chloroformates.
Asam Mosher (trifluoromethyl)-asam fenilasetat], asam Mosher klorida, dan Ntrifluoroasetil-1-prolyl klorida (TPC, juga dikenal sebagai TFAP-Cl) paling
populer. Asam dan asam klorida hasil Mosher dalam derivatisasi kuantitatif yang
paling amina, dengan pengecualian efedrin dan pseudoefedrin. Hal ini dapat
digunakan

sebagai

reagen

untuk

kedua

GC

dan

analisis

HPLC.

TPC dikenal untuk menghasilkan turunan stabil hampir semua ATS termasuk
Kelompok efedrin.

Teknik HPLC
Untuk HPLC, berbagai pendekatan yang telah digunakan, termasuk derivatisasi
dengan reagen kiral, penggabungan aditif kiral dalam fase gerak, dan penggunaan
fase diam kiral. Berbagai kolom HPLC kiral tersedia secara komersial. Kinerja
fasa diam kiral dalam HPLC telah ditingkatkan secara dramatis dalam beberapa
tahun terakhir, meskipun analisis tersebut masih mahal.

Teknik CE
Zona elektroforesis kapiler sangat menguntungkan untuk analisis kiral karena
memungkinkan untuk pemisahan yang sangat efisien enansiomer tanpa
derivatisasi dan kolom khusus (kapiler). Untuk pemisahan ATS, aditif kiral untuk
buffer run seperti hidroksil-propil beta-siklodekstrin yang umum digunakan.

Teknik Infrared (IR)

Meskipun enantiomer memiliki spektrum inframerah yang sama,
inframerah (IR) spektroskopi dapat digunakan untuk membedakan antara
enantiomer dari senyawa diberikan setelah mengubahnya menjadi diastereomer
yang sesuai.
ATS, adalah semua basa organik dapat dengan mudah bereaksi dengan
asam organik kiral untuk membentuk diastereomer. D-dan l-amphetamine,
misalnya, dapat digabungkan dengand-mandelic acid untuk membentuk dua
diastereomer, d-amphetamine-d-mandelate danl-amphetamine-d-mandelate, yang
memiliki spektrum IR yang berbeda.
Metode
Larutan garam ATS (10-50 mg) dibuat basa, dan ATS diekstraksi ke
dalam metilen klorida. Methylene chloride dikeringkan natrium sulfat anhidrat
dan dipekatkan sampai sekitar 2 ml. Sebuah larutan jenuh d-mandelic acid dalam
metilen klorida ditambahkan, beberapa tetes pada satu waktu, sampai solusi ATS
dinetralkan

(pH

kertas).

D-mandelate-ATS

garam

diperbolehkan

untuk

mengkristal, solusi disaring melalui hisap, dan kristal dicuci dengan sebagian
kecil dari metilen klorida. Setelah kering, disc KBr dari kristal dipersiapkan, dan
spektrum inframerah diperoleh. Prosedur ini diulang menggunakan isomer optik
murni yang diketahui dari ATS yang sesuai.

Hasil
Identifikasi isomer optik dilakukan dengan membandingkan spektra yang
dihasilkan dengan yang diperoleh dari standar referensi murni sesuai. Band IR di
800-1600cm-1 daerah memberikan informasi yang paling analitis khas.
Spektra IR dari garam-garam isomer optik amfetamin dengan asam
mandelic

diberikan

dalam

edisi

awal

dari

manual

PBB

"metode

Direkomendasikan untuk pengujian amphetamine dan methamphetamine"

(ST/NAR/9). Data juga dapat diakses pada halaman web Laboratorium dan Ilmiah
Bagian ini.

TAMBAHAN ANALITIS TEKNIK UNTUK ANALISIS ATS

Ada beberapa teknik analisis tambahan cocok untuk forensik identifikasi dan /
atau kuantisasi ATS, seperti:

Elektroforesis kapiler (CE)

Spektroskopi inframerah gas kromatografi-Fourier berubah (GC-FTIR)

LC-MS dan CE-MS, Near Infrared (NIR) Spektroskopi

Resonansi magnetik nuklir (NMR) spektroskopi (kualitatif dan kuantitatif)

kuantitatif FTIR

kuantitatif TLC

Raman spektroskopi FTIR

Kromatografi ekstraksi gas fase-mikro padat (SPME-GC)

Penjelasan sebagian besar teknik ini adalah di luar lingkup ini "Manual pada
direkomendasikan metode analisis untuk ATS ", dan analis yang dirujuk ke
pelengkap "Manual pada teknik analisis secara umum, karakteristik mereka dan
penggunaan praktis untuk analisis obat ". Empat teknik, NMR kualitatif, CE,
SPME-GC, dan GC-FTIR secara singkat dijelaskan di bawah ini, karena mereka
menawarkan spesifik, pilihan menarik untuk analisis ATS.

A. TEKNIK 1H-NUKLIR (NMR)

Ketersediaan sejumlah besar isomer posisi dari struktural terkait ATS, terutama
cincin tersubstitusi ATS, membutuhkan alat yang efektif yang menyediakan
diperlukan informasi struktural untuk diferensiasi mereka. NMR memungkinkan
analis untuk tegas membedakan antara derivatif amphetamine cincin tersubstitusi
yang berbeda, bahkan di hadapan Pengencer dan adulterants lainnya. Meskipun
substitusi tertentu pola mirip satu sama lain di daerah sesuai dengan proton dari
rantai alkil samping, spektrum terpadu dan pola aromatik sinyal proton
memungkinkan perbedaan mereka dari satu sama lain. Sementara menjadi kuat
alat untuk identifikasi analog, biaya spektroskopi NMR dan keahlian teknis yang
diperlukan mencegah aplikasi luas dalam analisis rutin.
Metode
Larutkan sekitar 20 mg sampel obat dalam 1 ml D2O. Jika bahan tidak larut yang
hadir, centrifuge, mengalihkan langsung supernatan ke dalam NMR tabung. Catat
spektrum solusi ini mengandung bentuk garam dari ATS. Membebaskan basa
bebas dari ATS in situ dengan penambahan 20-30 mg K2CO3 padat dan 0,5 ml
CDCl3 dan merekam spektrum basa bebas. Bandingkan spektrum yang tidak
diketahui dengan spektrum referensi, yang direkam pada transformasi Fourier
instrumen pada 90 MHz menggunakan sudut lain dari 18 (1 Sec) tanpa
penundaan setelah akuisisi data.

B. Kapiler ELEKTROFORESIS (CE)

CE, mirip dengan HPLC, tidak memerlukan derivatisasi atau ekstraksi langkahlangkah, dan karena itu menguntungkan atas GC untuk analisis senyawa ATS.
Berbeda dengan HPLC, CE menawarkan kekuatan menyelesaikan lebih tinggi
untuk analisis zat terlarut tersebut, yang diterjemahkan ke dalam analisis yang
lebih cepat. Penggunaan kapiler dilapisi secara dinamis memberikan peningkatan
yang signifikan dalam presisi, efisiensi puncak dan / atau waktu pemisahan untuk
ATS senyawa lebih dari metode sebanding menggunakan kapiler uncoated.

tambahan pendekatan kapiler dilapisi secara dinamis dapat memungkinkan untuk

analisis kiral cepat sampel menggunakan kapiler yang sama dan sampel botol tapi
lari penyangga yang berbeda.

C. SOLID PHASE-MICRO EKSTRAKSI-GAS KROMATOGRAFI (SPMEGC)

SPME (ekstraksi fase padat mikro) adalah teknik persiapan sampel bebas
pelarut,yang dapat digunakan untuk analisis headspace atas solusi, atau langsung
di atasATS bubuk, atau dapat digunakan untuk (trace) analisis larutan air yang
mengandung ATS. SPME biasanya dilakukan dengan jarum suntik khusus
dilengkapi dengan silikaserat ditempatkan di atas piston jarum suntik. Serat
dilapisi dengan polimer yangfase seperti yang digunakan dalam kolom kapiler.
Selama sampling, serat lapisan menyerap senyawa dari fase gas di headspace, atau
langsung darifase cair. Banyak lapisan serat yang berbeda yang tersedia untuk
analisis ATS dan zat lainnya. Salah satu yang paling digunakan, misalnya, sebuah
polydimethylsiloxane (PDMS) serat dilapisi.
Metode headspace
Sebuah sampel ATS berair dibuat basa untuk mengubah amina ke dalam basis
bebas,sehingga meningkatkan volatilitas mereka. Sampel dapat tambahan
dipanaskan untuk meningkatkan jumlah amina dalam fase gas di atas larutan
sampel. Itu jarum suntik dengan serat terkena ditempatkan di ruang atas di atas
solusi dandasar gratis ATS diserap pada bahan tersebut. Pada kesetimbangan,
diekstrak jumlah setiap senyawa diserap pada bahan tersebut sebanding dengan
konsentrasi merekadalam larutan, meskipun dengan koefisien distribusi yang
berbeda. Setelah ekstraksiselesai, jarum suntik tersebut dipindahkan ke instrumen
analitis yang dipilih. Ketika serat dimasukkan ke dalam dipanaskan pelabuhan GC
injector, amina diekstrak termal desorbed. Dalam HPLC, KTK dan CE, campuran
pelarut yang terelusi amina membentuk serat.

analisis dari sampel air

Serat dicelupkan langsung ke dalam larutan sampel air, yang dibuat basa untuk
melepaskan dasar gratis ATS. Sampel larutan diaduk untuk meningkatkan
pertukaran senyawa antara solusi dan serat untuk ekstraksi cepat. Analisis sampel
dilakukan dengan cara yang sama seperti yang dijelaskan dalam metode
headspace.
D. GAS KROMATOGRAFI-FOURIER TRANSFORM SPEKTROSKOPI
INFRAMERAH (GC-FTIR)
GC-FTIR, sebagai teknik ditulis dgn tanda penghubung lain, menyatukan
keuntungan dari GC teknik pemisahan dengan kekhususan analit tinggi IR. GCFTIR dengan cahaya sel aliran pipa tidak memiliki keterbatasan untuk aliran gas
pembawa, yang membuatnya ideal untuk digunakan dengan kolom bore lebar
pendek, sehingga mengakibatkan analisis efisien dan cepat. Misalnya, ATS yang
paling umum dapat dianalisis dalam waktu kurang dari lima menit. Namun,
karena teknik ini agak sensitif, sejumlah besar zat harus disuntikkan, dan
ketebalan film fase diam sangat penting dalam Agar tidak membebani kolom.

Metode
Persiapan sampel ATS
Persiapan sampel adalah sama seperti untuk analisis GC kualitatif di atas, tetapi
target konsentrasi analit harus 1-10 mg / ml.
Hasil
Identifikasi dilakukan dengan membandingkan waktu retensi dan spektrum FTIR
analit dengan standar referensi.