ISOLATION OF STIGMASTEROL AND SITOSTEROL

FROM PETROLEUM ETHER EXTRACT OF

AERIAL PARTS OF AGERATUM CONYZOIDES (ASTERACEAE)
ANJOO KAMBOJ*, AJAY KUMAR SALUJA1
Guru Gobind Singh College of Pharmacy, Yamuna Nagar135001
(Haryana), India*, 1A.R. College of Pharmacy, Vallabh Vidhyanagar,
388120 (Gujarat), India Email: anjookamboj@gmail.com, anjoo73_kamboj@indiatimes.com
Received: 24 Sep 2010, Revised and Accepted: 27 Oct 2010

ABSTRAK
Skrining fitokimia Umum udara bagian Bandotan ( Asteraceae ) mengungkapkan adanya steroid , terpen , fenolik
senyawa , saponin , asam lemak , alkaloid . Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi dan
mengkarakterisasi prinsip bioaktif dari bagian udara dari
tanaman . Memiliki rakyat luas penggunaan obat . Untuk isolasi senyawa , kering udara bagian bubuk Ageratum
conyzoides menjadi sasaran panas
ekstraksi dengan petroleum eter ; Ekstrak ini disaponifikasi dengan alkohol KOH dan mengalami kromatografi .
Senyawa hasil isolasi adalah
dimurnikan dengan kloroform . Isolasi dan pemurnian diberikan bubuk kristal putih yang menjadi sasaran fisik,
kimia dan spektral
identifikasi oleh IR , 1H - NMR , 13C - NMR dan GC - MS . Senyawa itu disimpulkan sebagai stigmasterol dan sitosterol .
Kata kunci : Ageratum conyzoides , fitokimia , Stigmasterol , - sitosterol , asam lemak .

PENDAHULUAN
Penggunaan tanaman dan persiapan mereka untuk mengobati penyakit menular
merupakan praktek kuno dan di masa lalu mungkin satu-satunya metode
tersedia. Namun, studi sistemik tanaman untuk mendeteksi
aktivitas antimikroba adalah relatif origin15 baru-baru ini . ini
investigasi telah dipicu oleh munculnya dan penyebaran
mikroorganisme resisten antibiotik menyebabkan efektif rentang hidup
antibiotik yang ada terbatas . Oleh karena itu kerajaan tanaman sedang
disaring untuk agen kemoterapi baru dan efektif . tinggi
tanaman dapat melayani baik sebagai calon simplisia antimikroba juga
sebagai sumber agen anti infeksi baru .

Bandotan adalah tanaman herba kecil milik

Keluarga Asteraceae1,2. Hal ini lembut berbulu, tegak, bercabang, gulma tahunan
hingga 80-90 cm. Ini adalah tanaman tropis yang digunakan di berbagai bagian
Afrika, Asia dan Amerika Selatan untuk menyembuhkan berbagai penyakit. itu
tanaman telah konon digunakan sebagai pencahar, obat penurun panas, untuk
opthalmia, kolik, pengobatan bisul dan luka berpakaian 3-5. itu
Sifat antienteralgic dan antipiretik tanaman juga
ditunjukkan dalam review pada 'Tanaman obat dari Senegal' 6. Dalam beberapa

Negara-negara Afrika, tanaman telah populer digunakan untuk penyakit kulit,

penyembuhan luka, penyakit mental dan menular, sakit kepala dan
dyspnea, digunakan dalam pengobatan tradisional untuk antiasthmatic nya,
Efek antispasmodic dan hemostatik, masalah rahim, pneumonia
dengan menggosok mereka di dada pasien 7-10. Akarnya, daun,
bunga dan seluruh tanaman yang digunakan sebagai obat. Berbagai
senyawa kimia termasuk alkaloid, kumarin, flavonoid,
chromenes, Benzofuran, sterol dan terpenoid yang hadir dalam
spesies.
Tujuan dari penelitian ini adalah untuk mengidentifikasi dan mengkarakterisasi
prinsip bioaktif dari bagian udara dari Ageratum conyzoides. di
makalah ini, kami melaporkan isolasi dan karakterisasi diketahui
Senyawa dari Ageratum conyzoides yaitu stigmasterol dan
EKSPERIMEN
Koleksi, Identifikasi dan persiapan bahan tanaman
Bagian udara tanaman dikumpulkan dari Herbal Nature Park,
Chuharpur, Yamuna Nagar, Haryana pada bulan September 2007.
Tanaman ini taksonomi diidentifikasi, disahkan oleh Profesor
Dr JS Sodhi, HOD, Botani Departemen, Guru Nanak Khalsa College,
Yamuna Nagar, Kurukshetra University, Haryana dan disimpan
AR College of Pharmacy, Vallabh Vidhya Nagar, Gujarat. antena
bagian tanaman dipisahkan secara manual adalah udara kering, bubuk,
diayak, ditimbang dan disimpan di udara wadah ketat dan selanjutnya
disebut sebagai bubuk obat

Ekstraksi dan Isolasi

Bubuk (400g) bagian udara Ageratum conyzoides telah dihilangkan lemaknya
mendalam dengan petroleum eter (60-80oc) dalam ekstraktor soxhlet.
Pelarut pulih di bawah tekanan untuk mendapatkan gelap
coklat kehijauan massa berminyak (5.6g), yang dicap sebagai minyak
Ekstrak eter (PEE) dan disimpan dalam lemari es. Marc yang dihasilkan
adalah udara kering pada suhu kamar dan kemudian mendalam diekstraksi
berturut-turut dengan pelarut dengan peningkatan polaritas dan terkonsentrasi
tekanan tereduksi dan diberi label sesuai. minyak bumi
Ekstrak eter bagian udara pabrik itu disaponifikasi menggunakan 1M
alkohol KOH, untuk menghilangkan bahan lemak dan kemudian selanjutnya
dijemput di petroleum eter dan pelarut diuapkan ke
menghasilkan 3g materi unsaponified. Fraksi ini mengandung lebih rendah
jumlah komponen dari ekstrak unsaponified 16.
pemisahan kromatografi
Sebuah jumlah kecil materi unsaponifiable dilarutkan dalam
kloroform dan solusi ini terlihat di TLC piring menggunakan Precoated
aluminium dengan silika gel 60 F254. Kemudian pelat TLC adalah
dijalankan oleh sistem pelarut tertentu dan dilihat secara individual di bawah UV
ringan dan juga (5%) asam sulfat dalam metanol reagen. melalui
beberapa percobaan percontohan ditemukan bahwa senyawa
Fraksi unsaponifiable dipisahkan oleh sistem pelarut
kloroform dan etanol dalam proporsi 9,8: 0,2. itu
kromatogram ketika dikembangkan yodium ruang menghasilkan enam sampai
tujuh tempat masing-masing dan tiga tempat di Rf (0,43, 0,64, 0,95)

menjadi coklat kemerahan segera berubah menjadi ungu atau violet mengindikasikan
zona inti untuk steroid. Kromatografi kolom PEE adalah
dilakukan dengan menggunakan silika gel (Mesh 60-120) yang dikemas menggunakan basah
Metode pengepakan dalam heksana. Kolom dijalankan menggunakan heksana,
kloroform dan metanol dengan teknik elusi gradien. TLC adalah
digunakan untuk memantau eluat. Sebanyak 158 eluat dikumpulkan.
Fraksi serupa dikumpulkan bersama-sama. Pemurnian lebih lanjut
dilakukan dengan menggunakan KLT preparatif. Spots diidentifikasi, tergores
dan eluat menggunakan petroleum eter dan kloroform sebagai pelarut 15, 16.
Akhirnya eluat ST menghasilkan satu tempat ketika mengalami TLC menggunakan
beberapa sistem pelarut kloroform termasuk: etanol (9,8: 0,2),
etil asetat: etanol (9,8: 0,2), kloroform: etil asetat (4: 1) dan
itu menunjukkan untuk menjadi senyawa yang homogen. ST kristal putih
bubuk (100mg) dengan titik leleh (144-146oC) adalah lebih
mengalami IR, Proton NMR (400MHz), Carbon-13 NMR (100 MHz)
dan GC-MS untuk memastikan struktur kimia.
Pengujian alcohol
4g dari cerric amonium nitrat dilarutkan dalam 10 ml HNO3 2N, pada
pemanasan ringan. Beberapa kristal senyawa terisolasi dilarutkan dalam 0.5ml dari dioksan. Larutan
ditambahkan ke 0.5ml dari cerric
ammoinium nitrat reagen dan diencerkan untuk 1ml dengan dioksan dan
terguncang dengan baik. Kuning dikembangkan untuk warna merah menunjukkan
Kehadiran kelompok hidroksil alkohol 18.

Pengujian steroid.
Reaksi Salkowski: Beberapa kristal dilarutkan dalam kloroform
dan beberapa tetes asam sulfat pekat ditambahkan ke
solusi. Sebuah warna kemerahan terlihat di lapisan kloroform atas
Liebermannburchard
Reaksi: Beberapa kristal dilarutkan dalam
kloroform dan beberapa tetes asam sulfat pekat yang
ditambahkan ke dalamnya diikuti dengan penambahan 2-3 tetes anhidrida asetat.
Solusi berubah violet biru dan akhirnya hijau 18
karakterisasi spektroskopi
Metode spektroskopi yang berbeda yang digunakan untuk menjelaskan
struktur senyawa hasil isolasi ST. Di antara spektroskopi yang
teknik IR, 1H-NMR, 13C-NMR dan GC-MS dilakukan. itu
spektrum infra merah tercatat pada FTIR Perkin Elmer, 1H-NMR dan
Spektrum 13C-NMR direkam menggunakan CDCl3 sebagai pelarut pada Bruker
Muka II 400 NMR spektrometer Saif Panjab University,
Chandigarh dan GC-MS spektra dicatat pada resolusi tinggi
spektrometer massa (sistem Perkin Elmer Auto) di Canggih
Pusat instrumentasi Riset dan Teknologi Terapan,
Anand, Gujarat, India dan data diberikan dalam m nilai / z.
Spektrum serapan IR menunjukkan puncak serapan pada-3373.6cm 1
(O-H peregangan.); 2.940,7 cm-1 dan 2867.9cm-1 (alifatik C-H
peregangan); 1641.6cm-1 (puncak serapan C = C); penyerapan lainnya
puncak termasuk 1457.3cm-1 (CH2); 1381.6cm-1 (OH def), 1038.7cm-1
(sikloalkana) dan 881,6 CM

1HNMR (CDCl3, 400MHz) dari ST: 1HNMR telah memberikan sinyal pada
3.2 (1H, m, H-3), 5.26 (1H, m, H-6), 5,19 (1H, m, H-23), 4,68 (1H, m, H22), 3,638 (1H, m, H-3), 2.38 (1H, m, H-20), 1,8-2,0 (5H, m) ppm.
Puncak lain yang diamati pada 0,76-0,89 (m, 9H), 0,91-1,05 (m, 5H),
1,35-1,42 (m, 4H), 0,69-0,73 (m, 3H), 1,8-2,00 (m, 5H), 1,07-1,13 (m,
3H), 1,35-1,6 (m, 9H) ppm.
13CNMR (CDCl3, 100MHz) dari ST: 13CNMR telah memberikan sinyal pada 150,98,
145.2 (C-5), 139,8 (C-22), 121,7, 118,89 (C-6), 79,03 (C-3), 55,3 (C14), 55,18 (C-17), 50,45 (C-9), 48,3 (C-9), 40,8 (C-20), 40,1 (C-12),
39.2 (C-13), 38,9 (C-4), 38,6 (C-12), 37,18 (C-1), 37.12 (C-10), 36,3
(C-8), 35.59 (C-20), 34,29 (C-22), 34,24 (C-7), 32,66 (C-8), 29,86 (C25), 29.71 (C-16), 28,41 (C-2), 28,1 (C-15), 27,4 (C-28), 26,1 (C-11,
26), 21,6 (C-27), 19,32 (C-19), 17.71 (C-21), 15,6 (C-18, 29).
FAB-MS spektroskopi menunjukkan puncak ion molekul pada 414 yang
sesuai dengan rumus molekul, C29H50O. Puncak ion juga
diamati pada m / z 367, 271, 255, 229189, 175, 161, 133, 121, 105,
107, 95, 81, 69, 55, 41.

Stigmasterol (C29H48O; Mol.Wt. 412.69)

HASIL DAN PEMBAHASAN

Dari tes positif untuk steroid dan alkohol yang diberikan oleh ST, itu adalah
diasumsikan senyawa yang mengandung inti steroid. ST adalah
jarum kristal putih seperti zat dengan titik leleh 144-146o
c. Pada tunduk kepada analisis IR spektroskopi, yang diamati
pita penyerapan yang 3373.6cm-1 yang merupakan karakteristik dari O-H
peregangan. Serapan pada 2940,7 cm-1 dan 2867,9 cm-1 adalah karena
alifatik C-H peregangan. Frekuensi penyerapan lainnya termasuk
1.641,6 cm-1 sebagai hasil C = C peregangan namun band ini adalah lemah, di
1.457,3 cm-1 adalah frekuensi membungkuk untuk siklik (CH2) n dan 1381,6 cm-1
untuk -CH2 (CH3) 2 . Frekuensi serapan pada 1038 cm-1 menandakan
sikloalkana. Keluar dari pesawat C-H getaran bagian tak jenuh adalah
diamati pada 881cm-1. Frekuensi penyerapan ini menyerupai
frekuensi penyerapan diamati untuk Stigmasterol. Proton NMR
menunjukkan proton dari H-3 muncul sebagai multiplet di 3.2 dan
mengungkapkan adanya sinyal untuk proton olefinat di 5.19 (m),
4.68 (m), 4,6 (m) dan 2,38 (m). Sudut metil proton pada 0,69 (s),
0,80 (s) dan 1,02 (s) sesuai dengan C18 dan C19 proton masing-masing
13C-NMR menunjukkan sinyal dikenali 145.2 dan 121.7 ppm,
yang ditugaskan C5 dan C6 ikatan rangkap masing-masing seperti di 5
spirostene 11. Nilai di 19,32 ppm sesuai dengan karbon sudut
atom (C19). Spectra menunjukkan dua puluh sembilan sinyal karbon termasuk enam
metil, sembilan methylenes, sebelas metana dan tiga kuaterner
karbon. Karbon alkena muncul di 145.2, 139.8, 121.7 dan
118,89 11, 13, 14

Ion-ion molekul lemah diberikan pada m / z 414 dan

puncak karakteristik yang diberikan pada m / z 367 yang sesuai, untuk (M45) atau kehilangan HO + = CH-CH3. Ini menunjukkan bahwa sampel ST
mengandung dua senyawa dengan berat molekul 414 dan 412.
Puncak ion lainnya adalah m / z 271, 273 karena pembentukan
karbokation dengan pemutusan ikatan rantai sisi yang mengarah ke hilangnya
C10H21 dan C10H23 yang sesuai dengan M-141and M-143. itu
berat molekul dan pola fragmentasi menunjukkan bahwa
Senyawa menghadirkan ST adalah -sitosterol dan stigmasterol
masing-masing.
Dehidrasi fragmen pada m / z 273 akan menghasilkan m / z 255,
yang pada dealkilasi berturut-turut akan menghasilkan ion pada m / z 188, 189,
175, 161, 148, 135, 121, 108, 95, 82, 69, 55, 41. Di atas IR, 1HNMR,
13C-NMR dan MS Data spektral dan perbandingan dengan
yang dijelaskan dalam literatur menunjukkan struktur ST menjadi
campuran -sitosterol dan stigmasterol yang mungkin memiliki
Bagian maksimum stigmasterol. Satu-satunya perbedaan antara
dua senyawa adalah adanya C22 = C23 ikatan ganda
Stigmasterol dan C22-C23 ikatan tunggal dalam -sitosterol maka, kurangnya
Perbedaan praktis dalam Rf mereka meskipun penggunaan beberapa pelarut
sistem. Selain itu, literatur telah menunjukkan bahwa sitosterol adalah
sulit diperoleh dalam murni negara 12-14, 17.
CONCLUSION

Dari temuan di atas, -sitosterol dan stigmasterol yang terisolasi

dari minyak bumi ekstrak eter bagian aerial Ageratum
conyzoides dan struktur kimia dijelaskan masing-masing. itu

dilakukan melalui berbagai fisik (ekstraksi pelarut, TLC,

Kromatografi kolom) dan teknik spektral.