Lp. 16: Identificarea bacililor gram-negativi non-fermentativi: Pseudomonas aeruginosa.

Examenul citobacteriologic al urinii

OBIECTIVE:
Cunoaterea etapelor identificrii unui bacil gram-negativ non-fermentativ ;
nsuirea etapelor examenului citobacteriologic al urinii n infecii produse de ageni
oportuniti.
Identificarea bacililor gram-negativi non-fermentativi: Pseudomonas aeruginosa
1.
Caractere microscopice: bacili gram-negativi, drepi sau uor ncurbai, fini, dispui izolat, n perechi
sau scurte lanuri, nesporulai.
2.
Caractere de cultivare: nepretenioi nutritiv, strict aerobi, cresc la temperaturi ntre 5-42C, cu miros
caracteristic (flori de tei sau iasomie), produc pigmeni difuzibili n mediu (piocianin, pioverdin, piorubrin,
piomelanin). Culturile au luciu metalic. Pe geloz-snge, coloniile sunt hemolitice.
3.
Caractere biochimice: catalazo-pozitivi, oxidazo-pozitivi, metabolism oxidativ al glucozei, reduc
nitraii, alcalinizeaz coloana i panta de agar TSI, lactozo-negativi, indol-negativi.
Examenul citobacteriologic al urinii
Indicatie: - suspiciunea de infecie de tractus urinar
Condiia microbiologic a tractului urinar:
- rinichii + ureterele + vezica urinar= normal sterile;
- uretra distal = normal
colonizat (stafilococi coagulazo-negativi, enterococi, difterimorfi,
enterobacteriacee).
Etiologia bacterian a infeciilor tractusului urinar (ITU):
1)
bacterii condiionat patogene
Bacili gram negativi:
o
Escherichia coli;
o
Proteus mirabilis;
o
Enterobacter cloacae
o
Klebsiella pneumoniae
o
Pseudomonas aeruginosa.
Coci gram pozitivi:
o
Enterococcus faecalis;
o
Staphylococcus saprophyticus
o
Staphylococcus aureus;
o
Streptococcus agalactiae;
Bacili gram pozitivi:
o
Corynebacterium urealyticum
2)
bacterii patogene primare:
o
Mycobacterium tuberculosis.
Etapele examenului citobacteriologic al urinii n ITU determinate de bacterii condiionat patogene:
1)
Prelevarea urinii pentru examen cito-bacteriologic:

Prelevri uzuale: proba curat, prins n zbor din jetul mijlociu;

Prelevri speciale: aspiraia suprapubian, prelevri prin cateter.

Proba curat prins n zbor din jetul mijlociu:
o
Toaleta local cu ap i spun, urmat de uscarea zonei decontaminate;
o
Momentul prelevrii: prima urin de diminea sau dup cel puin 3 ore de la miciunea
anterioar;
o
Volumul prelevat: 20 ml pentru izolarea cantitativ a microorganismelor condiionat patogene.
Transportul probelor la laborator pentru examinare n maxim o or de la prelevare. Refrigerarea urinii dac
se temporizeaz examinarea.
Alte prelevate utile diagnosticului de ITU
- urin (sumar de urin);
- snge (hemocultur) la pacienii cu suspiciune de pielonefrit.

2)
Examen microscopic
aprecierea calitii probei - celule epiteliale scuamoase sunt markerii contaminrii vaginale
- aprecierea piuriei - camera Fuchs Rosenthal > 10 leucocite / mm3 = PIURIE
< 3 leucocite / mm3 = piurie absent
3 - 10 leucocite / mm 3 este necesar proba Addis care
stabilete prezena sau absena piuriei
-frotiu de urin colorat Gram > 1 leucocit / cmp microscopic = PIURIE
- aprecierea bacteriuriei (frotiu din urin colorat Gram) prezena a > 1 2 bacterii cu aceleai caractere
microscopice/cmp = BACTERIURIE SEMNIFICATIV (se coreleaz cu > 105 UFC/ml urin n
urocultura cantitativ)
3)
Urocultura cantitativ = nsmnarea pe geloz snge i pe agar MacConkey a cte 0,1 ml din
diluia 10-2 a urinii omogenizate urmat de incubare la 37C i numrarea coloniilor dezvoltate. Calculm
bacteriuria dup formula :
Nr. UFC/mL = ND1/volumul nsmnat
N = nr. colonii dezvoltate pe mediu
D = inversul diluiei
Interpretarea rezultatelor :
a)
O singur specie de bacili gram-negativi izolat n concentraie de 10 4-5 UFC/ml, de stafilococi
4
5x10 UFC/ml sau levuri 104 UFC/mL: - n prezena piuriei = ITU;
-n absena piuriei = colonizare abortiv / prob examinat tardiv fr
refrigerare imediat.
b) Dou tipuri de izolate care depesc fiecare 10 5 UFC/mL: - pe o singur prob = cel mai frecvent
contaminare
-n 2 probe succesive = infecie mixt
c) Mai multe tipuri de bacterii care depesc fiecare 10 5 UFC/mL = contaminare/ prob examinat tardiv fr
refrigerare imediat.
4)
Identificarea bacteriei cu semnificaie clinic
5)
Antibiograma
Pentru Pseudomonas aeruginosa
- Metoda difuzimetric
- Agar Mueller-Hinton
- Antibiotice: peniciline anti-Pseudomonas (ticarcilina, piperacilina), aminoglicozide (gentamicina,
tobramicina, amikacina), fluorochinolone (ciprofloxacina, moxifloxacina), cefalosporine (cefoperazona,
ceftazidima, cefepim), carbapeneme (meropenem, imipenem)
n sal se gsesc:
- frotiuri de urin colorate Gram
- frotiuri de cultur colorate Gram
- urocultura cantitativ (geloz snge, agar MacConkey)
- testul catalazei
- testul oxidazei
- antibiograma difuzimetric pentru Pseudomonas aeruginosa