DOSAGGIO PROTEINE E PREPARAZIONE CAMPIONE DA

CARICARE SU GEL
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Il lisato normalmente conservato a -20C e quando lo si utilizza bisogna

lavorare in ghiaccio.
In una cuvetta mettere solo 1ml di BIORAD(Bianco).
Nelle altre mettere 1ml di BIORAD e 1ml di lisato(Campioni).
I campioni vaddo semre dosati in trilo(3 cuvette per ogni campione).
N.B. La madre di BIORAD(5X) va diluita in acqua milliQ(1:4).
Prima di posizionare le cuvette nello spettrofotometro coprire le aperture con
del Parafilm e ribaltarle 5 volte.
Leggere allo spettrofotometro a 595 nm.
Le misure sono significative se almeno 2 dei 3 valori distano non pi di 0,005.
I valori letti allo spettrofotometro rappresentano la quantit di proteine in g.
Utilizzando la stima della concentrazione proteica ottenuta allo
spettrofotometro, calcolare la concentrazione del campione e quindi quanti l
caricare nel gel.
Portare a 18 l con acqua milliQ.
Subito prima del caricamento aggiungere 6 l di Lemly(che passa cos da 4X a
1X) ad ogni campione, tranne il marker.
Lasciare i campioni nel termoblocco a 95C per 10 minuti.
Dare una spinnata in centrifuga e tenere a temperatura ambiente (non
rimettere in ghiaccio).
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