Universidad Veracruzana

Facultad de Qumica Farmacutica Biloga

Laboratorio de Inmunologa
Diana Santos Roque

GUA DE ESTUDIO PERFIL REUMATOIDE

a) PROTENA C REACTIVA
1. Fundamento
Fue descubierta por William Tillet y Thomas Francis en el ao 1930. La
reconocieron como una sustancia en el suero de los pacientes que sufran
inflamaciones agudas que reaccionaban con el polisacrido C del neumococo.
El gen que codifica para la PCR se encuentra en el cromosoma 1 (1q21-q23).
Tiene 224 residuos y una masa molecular de 25106 Da. A esta clase de
protenas se les conoce como pentraxinas.
La protena C (protena plasmtica) es segregada en el hgado cuando hay una
inflamacin aguda, infeccin o degradacin tisular en el organismo. El
incremento en los procesos inflamatorios se debe al aumento de concentracin
plasmtica de IL-6 (producida por macrfagos, clulas endoteliales y linfocitos
T). Ejerce una accin proinflamatoria relacionada con la de la IL-1 y TNF,
citoquinas que promueven su sntesis. Acta fundamentalmente sobre
hepatocitos, inducindolos a producir reactantes de fase aguda (como en
nuestro caso la protena C reactiva). Por ello su determinacin tiene un cierto
valor diagnstico.
Se dice que es una protena de fase aguda por su presencia en los procesos
inflamatorios. Es una globulina que gracias al polisacrido C de los neumococos
da lugar a un precipitado. La protena C est asociada a la fosfocolina en
microbios. Se cree que su funcin en ellos es ayudar en la unin de las clulas
daadas a los macrfagos, facilitando as la fagocitosis. Tambin se cree que la
PCR juega un papel importante en la inmunidad innata, como un primer
sistema de defensa frente a infecciones.
Actualmente los niveles sricos mayores a 10 mg/L se consideran como un
marcador que indica la presencia de una respuesta inflamatoria aguda. Niveles
por debajo de 1 mg/L se encuentran en individuos sanos, y la presencia de PCR
en cantidades de entre 1 y 10 mg/L se consideran como relacionadas con un
riesgo incrementado de padecer, a plazos indefinidos, enfermedades
coronarias.
La PCR-Ltex es una tcnica de aglutinacin en porta para la deteccin
cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partculas de ltex
recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por molculas
de PCR presentes en la muestra del paciente.

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2. Diagrama de la tcnica

Prueba cualitativa

observar presencia
o ausencia de
aglutinacion
macroscopica

Positivo: formacin
de agregados

colocar una gota

de suero en una
disivison de la
placa de vidrio

mezclar con un
palillo y oscilar
suavemente la
placa durante 2
min

Negativo:
suspensin
uniforme sin
aglutinacion visible

en otra divisin
colocar una gota
de suero control
positivo y en otra
control negativo

aadir a muestra y
controloes una
gota de latex
antiproteina C
reactica

Prueba cuantitativa

para obtener la
[ Proteina C
Reactiva] multiplicar
el recproco de la
dilucin ms alta que
haya dado resultado
positivo

preparar diluciones
1:2, 1:4, 1.8, 1:16,
1:32 y 1:64 del suero
problea en solucion
buffer

mezclar con un
palillo, oscilar
suavemente la placa
durante 2 min

poner una gota de

cada dilucin en las
divisiones de la placa

aadir una gota de

latex proteina C
reactiva

PCR(mg/l)= Ttulo x
sensibilidad de la
reaccin (mg/l)

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3. Qu es la protena C reactiva?
La Protena C-reactiva es una protena de fase aguda, presente en el suero de
pacientes sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayora
de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos daados, inflamacin y
neoplasias malignas. El incremento de concentracin de esta protena se
produce despus de unas horas de desarrollarse la inflamacin pudiendo
alcanzar niveles de
300 mg/L en 12-24 horas
4. en qu enfermedades aparece esta prueba?
Verificar exacerbaciones de enfermedades inflamatorias como artritis
reumatoidea, lupus o vasculitis.
Determinar si un antinflamatorio est funcionando para tratar una enfermedad
o afeccin.
Sin embargo, un nivel de PCR bajo no siempre significa que no se presente una
inflamacin. Los niveles de PCR pueden no estar elevados en personas con
artritis reumatoidea y lupus, pero la razn de esto no se conoce.
Un examen de PCR ms sensible, llamado anlisis de la protena C reactiva
alta sensibilidad, est disponible para determinar el riesgo de cardiopata
una persona. Muchos consideran que un nivel de PCR alto es un factor
riesgo positivo para una cardiopata; sin embargo, no se sabe si la PCR
meramente un signo de enfermedad cardiovascular o si realmente juega
papel en la causa de problemas cardacos.

de
en
de
es
un

B) FACTOR REUMATOIDE
1. Fundamento
Los factores reumatoides son anticuerpos
inmunoglobulina propia del organismo.

que

reaccionan

con

la

Las partculas de ltex recubiertas con gama-globulina son aglutinadas por los
FR presentes en la muestra. La aglutinacin provoca un aumento de turbidez
proporcional a la concentracin de FR en la muestra, y por comparacin con un
calibrador de FR de concentracin conocida, se puede determinar el contenido
de FR en la muestra ensayada.

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Generalmente, los anticuerpos se dirigen contra la regin Fc de la
molcula IgG. El factor reumatoide puede detectarse en el suero de la
mayora de los pacientes con artritis reumatoide y es importante para el
diagnstico y la prognosis de pacientes con altas concentraciones. Estos
pacientes tienden a sufrir una forma ms severa de la enfermedad y
desarrollan ms fcilmente complicaciones no relacionadas con las
articulaciones. Los factores reumatoides no son especficos a una enfermedad
y pueden ocurrir con menor frecuencia en varias otras enfermedades
autoinmunes, inflamacin crnica y en individuos normales.

2. Diagrama de la tcnica

Prueba cualitativa

poner 0.95 ml de
solucin glicina
salina y aadir 0.05
ml de suero y
mezclar

Hacer control
negativo y positivo

observar
aglutinacin

colocar una gota de

la mezcla anterior
en una placa de
vidrio y agregar una
gota de reactivo FR

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Prueba cuantitativa

colocar 8tubos en
la gradilla y
marcarlos

adicionar 0.5 ml de
sol. reguladora
glicina-salina pH
8,2

en el tubo agregar
0.5 ml de la
dilucion 1:20
preparada en
prueba cualitativa

hacer diluciones
1:40, 1:80, 1:160,
1:320, 1:640,
1:1280, 1:2560,
1:5120

colocar una gota de

la dilucion en una
placa y mezcar con
una gota de
reactivo ltexglobulina

aplicar movimiento
rotatorio 2 minutos

observar presencia
de aglutinacion

3. Qu es el factor reumatoide?
El factor reumatoide (FR) es una prueba que mide la presencia y nivel de la IgM
especfica contra las inmunoglobulinas IgG anormales, producidas por los
linfocitos de la membrana sinovial, de las articulaciones de personas afectadas
por la artritis reumatoide.
2. Qu utilidad tiene su determinacin?
Es utilizado en el diagnstico de la artritis reumatoide (AR).
Resultados elevados sin correlacin con la AR pueden ocurrir en hasta 10% de
los pacientes saludables, 25% de mayores de 70 aos, en portadores de
infecciones crnicas (sfilis, lepra, brucelosis, esquistosomiasis, llagas,
hepatitis) y en enfermedades como Lupus, Sjgren, poliomyositis, gota y otros
disturbios donde hay aumento de gammaglobulinas.
3. Qu es la artritis reumatoide, cmo y por qu se produce?

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La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad sistmica, inflamatoria
, crnica, de etiologa desconocida, cuya expresin clnica ms import
ante se encuentra en la inflamacin articular lo que lleva
progresivamente a distintos grados de invalidez. Tiene distribucin mundial. La
prevalencia vara de 0,2 % a 1 % de la poblacin blanca adulta; en los mayores
de 65 aos de edad este porcentaje sube de un 4 a 6 %.
La inflamacin y la destruccin articular caractersticas de la AR, son procesos
complejos multice-lulares, en los cuales se pueden distinguir tres fases
La primera es una fase de Induccin que precede las manifestaciones
clnicas. En esta fase, se plantea que causas ambientales, como
el cigarrillo, mi-croorganismos o stress actan so-bre un individuo que
tiene predisposicin gentica para iniciar un fenmeno de autoinmunidad,
con la aparicin de autoanticuerpos, como el factor reu-matoide (FR) o
los anticuerpos anti pptidos citrulinados.
No se conocen los mecanismos por los cuales la tolerancia inmunolgica de los
li-nfocitos T y B se rompe y aparecen estos autoanticuerpos. Pareciera
existir una alteracin sistmica de la regulacin inmune, posiblemente
una
aberrante
seleccin tmica o fallida tolerancia perifrica. En este ambiente propicio a la
autoinmunidad, otros factores, biomecnicos, infecciosos, micro vasculares
o neurolgicos, precipitan la segunda fase, Inflamatoria articular de la
enfermedad.
En la membrana sinovial, habitualmente hipocelular, se
observa la proliferacin de la ntima (sinoviocitos), de fibroblastomiles y
la
infiltracin
subntima
de
macrfagos,
linfocitos
T,
B,
clulas plasmticas, clulas cebadas y linfocitos NK. Es posible que
citokinas secretadas
por macrfagos y sinoviocitosfibroblasto smiles,
como
el
Factor
de
Necrosis
Tumoral
alfa
(TNF) y la IL
1 sean cruciales en la activacin del endotelio el que expresa molculas de adh
esin lo que permite la entrada de linfocitos a la sinovial. La destruccin tisula
r lleva a la aparicin de neoantgenos, como el colgeno tipo II,
constituyente principal del cartlago articular, lo que contribuye a la
cronicidad de la inflamacin. La enorme infiltracin de linfocitos de la
sinovial, podra corresponder al reclutamiento celular estimulado por la
aparicin de nuevos antgenos, lo que explicara las dificultades
en encontrar expansin oligoclonal de los linfocitos T, ya que habra
muchos antgenos estimulando la proliferacin de ellos.
La membrana sinovial inflamada, se diferencia en la zona de unin con el
cartlago y el hueso, en un tejido de granulacin particular denominado
Pannus,
que
es
el
que
va

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a erosionar el hueso y cartlago en la tercera fase de Destruccin arti
cular. La persistencia de
la
inflamacin
crnica
destructiva
aumenta
las
comorbilidades
como
la
enfermedad
cardiovascular y la osteoporosis.

4. Qu otras pruebas de laboratorio pueden utilizarse para el diagnstico

de artritis reumatoide?
Estudios bioqumicos basales en el diagnstico de artritis reumatoide:
Biometra hemtica, reactantes de fase aguda (Velocidad de sedimentacin
globular y protena C reactiva, transaminasas, fosfatasa alcalina, creatinina
srica y EGO
5. Cul es la relacin entre el factor reumatoide y la protena C reactiva?
La protena C reactiva nos sirve para evaluar la actividad inflamatoria de la
enfermedad, ahora bien el factor reumatoide nos sirve para la evaluacin de
inflamacin articular y est asociada con destruccin articular rpida.

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C) ANTIESTREPTOLISINAS
1. Fundamento
La antiestreptolisina (ASL) son anticuerpos especficos contra productos
extracelulares de Streptococcus pyogenes (estreptococos del grupo A: GAS),
entre los cuales la antiestreptolisina O (ASO) es la ms empleada en los
anlisis de laboratorio. La determinacin de la antiestreptolisina O proporciona
informacin til para el diagnstico y la monitorizacin de las infecciones
humanas por estreptococos, como amigdalitis, otitis, erisipela, escarlatina y
enfermedades asociadas como la fiebre reumtica o la glomerulonefritis. Los
anticuerpos contra la estreptolisina O pueden detectarse entre 1 y 3 semanas
despus de la infeccin, y los valores mximos se alcanzan entre 3 y 6
semanas despus. Los valores patolgicos de ASO indican siempre una
infeccin por estreptococos, mientras que los resultados negativos no excluyen
la posibilidad de una infeccin por GAS actual o pasada.

2. Diagrama de la tcnica

Prueba
cualitativa

Mexclar y agitar
durante 2
minutos

colocar una
gota de suero
en la placa

observar la
presencia de
aglutinacin

y en otras
divisiones
colocar control
negativo y
positivo

aadir una gota

de latexestreptolisina O,
previamente
homogenizado

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Prueba cuantitativa

preparar diluciones 1:2,

1:4, 1:8, 1:16, 1:32

poner una gota de la

dilucion en la placa

observar aglutinacin

mezclar conun palillo y

oscilar durante 3 minutos

aadir una gota de ltex

estreptolicina O

el contenido corresponde
a:

1:2 = 400 UI/ml

1:4= 800 UI/ml
1:8= 1600 UI/ml
1:16=3200UI/ml
1:32=6400 UI/ml

3. Qu es la antiestreptolisina y quin la produce y cuntos tipos hay?

Las antiestreptolisinas son anticuerpos dirigidos contra la hemolisina "o" del
estreptococo beta hemoltico y se "consideran normales" si son menores a 200
u todd.
Las antiestreptolisinas determinan el contacto del individuo con el estreptococo
en un perodo de seis meses, los ttulos mayores a 500 ut nos determina
contacto reciente con la bacteria en un perodo de tres semanas
aproximadamente.
4. que son las antiestreptolisinas y qu importancia tiene su
determinacin?

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Es la medicin de anticuerpos nti-Estreptococo betahemoliticos del
tipo A. esta bacteria produce una enzima llamda estreptolisina O, que
puede destruir hemates y el cuerpo reacciona produciendo anticuerpos
antiestreptolisina O

5. Qu relacin hay entre antiestreptolisinas, la fiebre reumtica y la

glomerulonefritis postestreptocccica?
La glomerulonefritris tambin se ve aumentado el ttulo de
antiestreptolisinas debido a que es una infeccin estreptoccica, la fiebre
reumtica en el cual tambin puede verse relacionado la accin de la
estreptolisina O.
6. Cul es la diferencia entre la artritis reumatoide y la fiebre reumtica?
La Fiebre Reumtica es una enfermedad desencadenada por la infeccin por un
germen llamado Estreptococo. La enfermedad, que puede daar
permanentemente el corazn, se manifiesta con una artritis transitoria, una
carditis (afectacin cardiaca), erupciones o ndulos cutneos, as como una
alteracin de los movimientos denominado corea.

7. Cules son los valores normales de antiestreptolisinas?