ABSORCIN Y ELUCIN DE ANTICUERPOS

I.-ABSORCIN:

la muestra problema es el plasma del paciente con mezcla de anticuerpos.

las clulas para absorber los anticuerpos, son glbulos rojos con antigenicidad
conocida (comercial o preparadas en cada laboratorio)

Esta tcnica busca separar mezclas de anticuerpos del plasma de un paciente que este
sensibilizado con varios aloanticuerpos o que posea una combinacin de aloanticuerpos
ms autoanticuerpos. El mecanismo para hacer esto es mediante el uso de clulas con
antgenos conocidos que puedan atraer alguno de los anticuerpos presentes en la mezcla y
dejar otros libres para posteriormente poder identificar cada uno de ellos.
Uso de la absorcin

Inactivar autoanticuerpos fros o calientes, a fin de permitir la evaluacin de

aloanticuerpos, los que pueden ser enmascarados por los primeros.
Fundamento: en anemias hemolticas por anticuerpos fros es muy potente la
reaccin de los anticuerpos, ya sea en el plasma o en los glbulos rojos del mismo
paciente y es muy difcil compatibilizar transfusiones. En algunos de estos casos,
adems existen mezclas con aloanticuerpos de significancia clnica que estn siendo
enmascarados por la fuerza de la aglutinacin de las aglutininas fras, entonces, se
tiene que brindar un medio en que los anticuerpos fros se peguen a glbulos rojos y
dejen en el resto del plasma, los otros anticuerpos (si es que los hubiere), de esta
forma, se puede identificar y realizar las pruebas de compatibilidad sin
interferencia.

Extraer anticuerpos A y B de sueros que sern usados como reactivos inertes.

Fundamento: en algunas ocasiones se necesita trabajar con plasma inerte, si se
tiene un plasma AB, ste podra servir como plasma inerte, ya que no tiene los
anticuerpos A y B, pero en caso de no disponer, se puede absorber estos anticuerpos
naturales sobre clulas que expresen el antigeno A o B segn corresponda y obtener
as, un plasma libre de anticuerpos para poder usarlo como reactivo inerte o como
control negativo en laboratorio de rutina.

Para separar muestras con mezclas de anticuerpos en plasma o eluados.

Fundamento: si aparece un rastreo de anticuerpos irregulares positivo y luego de
intentar identificar estos anticuerpos nos damos cuenta que aparentemente se est en
presencia de una mezcla de anticuerpos y no se puede identificar por descarte cada
uno de ellos, se puede absorber alguno de los anticuerpos posibles, frente a clulas
que tengan alguno de los antgenos a los que sospechamos estn dirigidos alguno de
los anticuerpos de la mezcla, de esta forma, intentamos dejar un solo anticuerpo en
el plasma del paciente para poder identificar. En el caso del eluado (procedimiento
contrario a la absorcin), es decir, cuando hemos separado anticuerpos que estaban

pegados a clulas problema y queremos saber contra qu estn dirigidos, los

enfrentamos a clulas con antgenos conocidos para que se peguen a ellas y
comprobar as su especificidad.
Procedimiento general:

Elegir g rojos que expresen el antgeno sobre el cual sospechamos est dirigido el
anticuerpo. Lavar 3 a 4 veces con PBS. (verificar que estas clulas no estn
sensibilizadas previo a la absorcin haciendo un C directo)

En el ltimo lavado extraer el sobrenadante con una pipeta para no perder clulas
por inversin, adems a este sobrenadante se le debe enfrentar con clulas testigos A
y B para comprobar que no tenga anticuerpos anti A o B, seguir con los lavados
hasta que este paso d negativo.

Agregar la muestra del paciente (plasma con mezcla de Ac) en igual volumen a las
clulas que tenemos lavadas, mezclar suavemente por inversin. (Ej: 1ml GR
lavados + 1ml Plasma problema).

Incubar por 30 a 60 minutos

a la temperatura ptima del anticuerpo a absorber. Mezclar cada cierto tiempo

Centrifugar por 5 minutos a altas revoluciones (ej: 3000 rpm)

Trabajar con el plasma haciendo un Coombs indirecto para probar que el anticuerpo
que se sospechaba se peg a las clulas.

Se puede hacer un C directo para comprobar la sensibilizacin de las

clulas(absorcin)

II.- ELUCION
De forma habitual, las tcnicas de elucin y absorcin son utilizadas en conjunto para
resolver problemas en laboratorio de inmunohematologa. El objetivo de toda elucin es
interferir con las fuerzas no covalentes que mantienen unido el complejo Ag-Ac. Estas
interferencias pueden ser fsicas (calor, ultrasonido, congelamiento, descongelamiento,
detergentes, etc.), o una accin qumica directa sobre las fuerzas de unin del complejo AgAc, usando, por ejemplo, alteracin de Ph o concentraciones de sal.
USO
Su mayor uso se desarrolla en estudios donde se necesita remover Ac pegados al glbulo
rojo, para luego utilizarlos con diferentes fines, ejemplo:

Diagnstico en laboratorio de la destruccin inmune de eritrocitos, ya sea por

presencia de aloanticuerpos o autoanticuerpos.
Purificar anticuerpos de grupo sanguneo
Detectar antgenos dbiles
Concentrar anticuerpos
Retirar anticuerpos de una mezcla de ellos
Dejar eritrocitos libres de Ac que puedan estar interfiriendo en la tipificacin
sangunea (muestras con Coombs directo 4+)

CONSIDERACIONES
El tipo de anticuerpo que se desea eluir nos dir que tipo de elucin utilizar al momento de
intentar trabajar con una muestra en particular.
Elucin por calor
Se aplica preferentemente en el estudio de la enfermedad hemoltica del recin nacido por
incompatibilidad ABO, y en la elucin de anticuerpos IgM de los eritrocitos (Ejemplo:
enfermedad por aglutininas fras).
En cada mtodo la solucin salina sobrenadante del ltimo lavado se analiza en paralelo
con el eludo, para determinar si la reactividad encontrada en ste ltimo representa la
recuperacin de anticuerpos de la superficie clular, o es el resultado de la contaminacin
por suero residual.
Elucin por cloroformo
Se usa en el estudio de un Coombs directo positivo asociado a anticuerpos reactivos en
caliente (IgG), ya sean auto o aloanticuerpos. En conjunto con tcnicas de absorcin, sirve
para separar mezclas de anticuerpos IgG presentes en un suero.
Elucin cida
Se usa en estudios similares a la elucin por cloroformo, es decir, para separar anticuerpos
de tipo IgG que estn pegados a glbulos rojos.