Ejemplo: Un disacaridasa de la levadura pude hidrolizar sacarosa y maltosa, de

acuerdo a la siguiente tabla:

Sacarosa
(Mm)
5
10
20
50
100

Glucosa liberada
(moles/10min)
40
60
80
100
109

Maltosa
(mM)
5
10
20
50
100

Glucosa liberada
(moles/10min)
48
80
120
172
200

Utilizar todos los mtodos cintica de Michaelis Menten para calcular Km

respectivos y las velocidades mximas, para cada sustrato, en las condiciones
del experimento.
Las reacciones catalizadas por el enzima sern:
Sacarosa+ Agua

Glucosa + Fructuosa

Maltosa+ Agua

2 Glucosa

La velocidad habr que medirla contabilizando moles de sustrato transformado,

en vez de moles de glucosa liberada. En el primer caso ambos valores coincide;
en el segundo, no.
Se calcula la tabla de inversos (1/ [S]) Y (1/V), en mili moles de sustrato
hidrolizado en 10 min.
A.- SUSTRATO : SACAROSA
La velocidad usamos el sustrato trasformado
Glucosa liberada=sacarosa consumida

Sacaro
sa
inicial
(mM)
5
10
20
50
100

glucosa
liberada
(mmoles/10
min)
0,04
0,06
0,08
0,1
0,109

v = sacarosa
consumida
(mmoles/10
min)
0,04
0,06
0,08
0,10
0,109

A.1.- MICHAELIS MENTEN:

V=

VmaxS
Km+S

1/S

1/v

v/s

s/v

0,20
0,10
0,05
0,02
0,01

25,00
16,67
12,50
10,00
9,17

0,008
0,006
0,004
0,002
0,001

125,00
166,67
250,00
500,00
917,43

Vmax
(aproximado)
Km
(aproximado)

0,113mmol/min
10 mM

A.2.- LINEAWEAVER

1
Km
1
=
+
V VmaxS Vmax

Lineaweaver
30.00
20.00

1/v(min/mmol)

f(x) = 83.31x + 8.34

10.00
0.00
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25

1/s(mM-1)
1
8.3365 min
=
,Vmax=
Vmax
mmol

1
=0.12 mmol/min
3365 min
8.
mol

km
=83.312mM /minmmol , K m=VmaxX 83.312=9.9936 mM
Vmax

A.3.- EODI-HOFTEE

V Vmax V
=

S
Km
Km

eodi-hofftee
0.0100
0.0080
0.0060

f(x) = - 0.1x + 0.01

V/S(mmol/minmM) 0.0040
0.0020
0.0000
0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12

V(mmol/min)

1
1
=0.1001=Km=
=9.9901 mM
km
0.1001
Vmax
=0.012mmol/minmM =Vmax=0.0129.9901=0.11988 mmol/ min
km
A.4.- LAGMUIR

S
Km
S
=

V Vmax Vmax

Lagmuir
1000
800

f(x) = 8.34x + 83.2

600
s/v(mMmin/mmol)

400
200
0
0

20 40 60 80 100 120
S(mM)

1
8.3411 min
1
=
,Vmax =
=0.1199 mmol/min
Vmax
mmol
8.341 min
mol
km
=83.198mM /minm mol , Km=VmaxX 83. 198=9. 97446 mM
Vmax

B.-SUSTRATO: MALTOSA

Glucosa/Maltosa = 2/1
Maltosa
inicial
(mM)
5
10
20
50
100

Glucosa
Liberada
(mmoles/10
min)
0,048
0,08
0,12
0,172
0,2

v = Maltosa
consumida
(mmoles/10
min)
0,024
0,04
0,06
0,086
0,1

B.1.- MICHAELIS MENTEN:

V=

VmaxS
Km+S

Vmax (aproximado)
Km (aproximado)

0,102 mmol/min
15mM

1/S

1/v

v/s

s/v

0,20
0,10
0,05
0,02
0,01

41,67
25,00
16,67
11,63
10,00

0,0048
0,0040
0,0030
0,0017
0,0010

208,33
250,00
333,33
581,39
1000,0
0

B.2.- LINEAWEAVER

1
Km
1
=
+
V VmaxS Vmax

Lineaweaver
50.00
40.00

f(x) = 166.76x + 8.32

30.00

1/v(min/mmol)

20.00
10.00
0.00
0.00

0.10

0.20

0.30

1/s(mM-1)

1
8.3187 min
1
=
,Vmax =
=0. 12 02 mmol/min
Vmax
mmol
8 . 3187 min
mol
km
166.76 mM
=
, Km=VmaxX 166.76 mMmin/mol=20.0464 mM
Vmax minmmol
A.3.- EODI-HOFTEE

V Vmax V
=

S
Km
Km

EODI-HOFFTEE
0.0060
0.0050

f(x) = - 0.05x + 0.01

0.0040

V/S(mmol/minmM)

0.0030
0.0020
0.0010
0.0000
0

0.05

0.1

V(mmol/min)

1
1
=0.0499 ( mM1 )=Km=
=20.040 mM
km
0. 0499
Vmax 0.006 mmol
=
=Vmax=0.00620.040=0. 1202mmol/min
km
minmM

B.4.- LAGMUIR

S
Km
S
=

V Vmax Vmax

Lagmuir
1200.0
1000.0

f(x) = 8.33x + 166.43

800.0
s/v(mMmin/mmol)

600.0
400.0
200.0
0.0
0

20

40

60

S(mM)

80 100 120

0.15

1
8.3293 min
1
=
,Vmax=
=0. 12005 mmol/min
Vmax
mmol
8.3293 min
mol
km
166.43 mM
=
, Km=VmaxX 166.43=19.1813 mM
Vmax minm mol