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CONTAMINACION
de Mayo del 2015
ATMOSFERICA

Universidad
Nacional
Federico
Villarreal
Autor:
Bujaico
Determinacin
Bustillos Clarisa Zelmira
Santivaez
Orellana Steve Fredy

del Landa
Analtico y
Curva

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

Universidad Nacional Federico Villarreal

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

Facultad de Ingeniera Geogrfica,

Ambiental y Ecoturismo

CONTAMINACION ATMOSFERICA
DETERMINACION DEL LANDA ANALITICO Y CURVA
ESPECTRAL
PROFESOR
ALUMNOS

: Ing. Omar Vsquez.

: BUJAICO BUSTILLOS

CLARISA
SANTIVAEZ
ORELLANA STEVE FREDY
ESTEBAN CUTIPA
MIJAIL

VII CICLO
LIMA PER
2015

ndice
I.

INTRODUCCION.......................................................................................................... 3

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

II.

OBJETIVOS................................................................................................................. 4
Objetivo General........................................................................................................... 4
Objetivos Especfico...................................................................................................... 4

III.

MARCO TEORICO..................................................................................................... 4

3.1.

Transmitancia y Absorbancia...............................................................................6

3.2.

Ley de Lambert-Beer........................................................................................... 7

3.3. Instrumentacin para la medicin de absorbancias de la luz visible y

ultravioleta: espectrofotmetro UV-visible....................................................................7
3.4.

Obtencin de un espectro de absorcin..............................................................8

3.5.

Curva Analitica.................................................................................................... 8

IV.

MATERIALES............................................................................................................ 9

V.

PROCEDIMIENTO........................................................................................................ 9

VI.

RESULTADOS........................................................................................................... 9

VII.

CONCLUSIONES.................................................................................................... 11

VIII.

BIBLIOGRAFIA....................................................................................................... 11

I.

INTRODUCCION
La espectrofotometra UV-visible es una tcnica analtica que permite
determinar la concentracin de un compuesto en solucin. Se basa en que las
molculas absorben las radiaciones electromagnticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentracin. Para

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotmetro, en el que se

puede seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solucin y
medir la cantidad de luz absorbida por la misma. En esta prctica se darn a
conocer las caractersticas generales y conceptos relacionados con la
espectrofotometra. A continuacin y tras la explicacin del funcionamiento
del espectrofotmetro se harn espectros de absorcin con el fin de
determinar la longitud de onda donde la muestra presenta la mxima
absorcin, y tras realizar las correspondientes rectas de calibrado se
cuantificarn las concentraciones de distintas biomolculas.
II.

OBJETIVOS
Objetivo General
Determinar la absorbancia mxima para nitritos y fosfatos, mediante la
espectrofotometra.
Objetivos Especfico

III.

Determinar los valores de absorbancia para nitritos y fosfatos a

diferentes longitudes de onda.
Realizar la curva espectral para los nitritos y fosfatos.

MARCO TEORICO
El estudio a nivel bioqumico de cualquier biomolcula requiere la utilizacin
de tcnicas analticas que permitan su determinacin cualitativa y
cuantitativa, as como su caracterizacin fsico-qumica y biolgica. Uno de los
mtodos ms sencillos, accesibles, tiles y utilizados es la espectroscopa, en
general, y la espectroscopa ultravioleta-visible, en particular. Se pueden
identificar y cuantificar biomolculas en solucin y en muestras biolgicas,
con el empleo de reactivos especficos que reaccionan con el compuesto a
analizar y forman un producto coloreado que permite detectarlo en muestras
complejas. El fundamento de la espectroscopa se debe a la capacidad de las
molculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del
espectro UVvisible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una
molcula puede absorber y la eficiencia con la que se absorben dependen de
la estructura atmica y de las condiciones del medio (pH, temperatura, fuerza
inica, constante dielctrica), por lo que dicha tcnica constituye un valioso
instrumento para la determinacin y caracterizacin de biomolculas. Las
molculas pueden absorber energa luminosa y almacenarla en forma de
energa interna. Esto permite poner en funcionamiento ciclos vitales como la
fotosntesis en plantas y bacterias. Cuando la luz (considerada como energa)
es absorbida por una molcula se origina un salto desde un estado energtico
basal o fundamental, E1, a un estado de mayor energa (estado excitado), E2.
Y slo se absorber la energa que permita el salto al estado excitado. Cada
molcula tiene una serie de estados excitados (o bandas) que la distingue del
resto de molculas. Como consecuencia, la absorcin que a distintas
longitudes de onda presenta una molcula -esto es, su espectro de

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

absorcinconstituye una sea de identidad de la misma. Por ltimo, la

molcula en forma excitada libera la energa absorbida hasta el estado
energtico fundamental.
Figura 1: Diagrama de niveles de energia en una molecula

Fuente: Espectrofometra; Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de

biomolcula.

En espectroscopa el trmino luz no slo se aplica a la forma visible de

radiacin electromagntica, sino tambin a las formas UV e IR, que son
invisibles. En espectofotometra de absorbancia se utilizan las regiones del
ultravioleta (UV cercano, de 195-400 nm) y el visible (400-780 nm).
Figura 2: Espectro Electromagnetico

Fuente: Espectrofometra; Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de

biomolcula.

La regin UV se define como el rango de longitudes de onda de 195 a 400

nm. Es una regin de energa muy alta. Provoca dao al ojo humano as como
quemadura comn. Los compuestos con dobles enlaces aislados, triples
enlaces, enlaces peptdicos, sistemas aromticos, grupos carbonilos y otros
heterotomos tienen su mxima absorbancia en la regin UV, por lo que sta
es muy importante para la determinacin cualitativa y cuantitativa de
compuestos orgnicos. Diversos factores -como pH, concentracin de sal y el
disolvente- que alteran la carga de las molculas, provocan desplazamientos
de los espectros UV. La fuente de radiacin ultravioleta es una lmpara de
deuterio. En la regin visible apreciamos el color visible de una solucin y que
corresponde a las longitudes de onda de luz que transmite, no que absorbe.
El color que absorbe es el complementario del color que transmite. Por tanto,

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

para realizar mediciones de absorcin es necesario utilizar la longitud de

onda en la que absorbe luz la solucin coloreada. La fuente de radiacin
visible suele ser una lmpara de tungsteno y no proporciona suficiente
energa por debajo de 320 nm.
Figura 3: Longitudes de onda de los diferentes colores.

Fuente: Espectrofometra; Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de

biomolcula.

III.1.

Transmitancia y Absorbancia.

Cuando un rayo de luz de una determinada longitud de onda de intensidad Io

incide perpendicularmente sobre una disolucin de un compuesto qumico
que absorbe luz o cromforo, el compuesto absorber una parte de la
radiacin incidente (Ia) y dejar pasar el resto (It), de forma que se cumple: Io
= Ia + It.
Figura 4: Radiacion incidente

Fuente: Espectrofometra; Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de

biomolcula

La transmitancia (T) de una sustancia en solucin es la relacin entre la

cantidad de luz transmitida que llega al detector una vez que ha atravesado
la muestra, It, y la cantidad de luz que incidi sobre ella, Io, y se representa
normalmente en tanto por ciento: % T = It/Io x 100 La transmitancia nos da
una medida fsica de la relacin de intensidad incidente y transmitida al pasar
por la muestra. La relacin entre %T y la concentracin no es lineal, pero
asume una relacin logartmica inversa.
La absorbancia (A) es un concepto ms relacionado con la muestra puesto
que nos indica la cantidad de luz absorbida por la misma, y se define como el
logaritmo de 1/T, en consecuencia: A = log 1/T = -log T = -log It/ Io. Cuando la
intensidad incidente y transmitida son iguales (Io = It), la transmitancia es del
100% e indica que la muestra no absorbe a una determinada longitud de

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

onda, y entonces A vale log 1 = 0. La cantidad de luz absorbida depender de

la distancia que atraviesa la luz a travs de la solucin del cromforo y de la
concentracin de ste.
III.2.

Ley de Lambert-Beer.

Esta ley expresa la relacin entre absorbancia de luz monocromtica (de

longitud de onda fija) y concentracin de un cromforo en solucin: A = log
I/Io = cl La absorbancia de una solucin es directamente proporcional a su
concentracin a mayor nmero de molculas mayor interaccin de la luz con
ellas-; tambin depende de la distancia que recorre la luz por la solucin a
igual concentracin, cuanto mayor distancia recorre la luz por la muestra ms
molculas se encontrar-; y por ltimo, depende de , una constante de
proporcionalidad -denominada coeficiente de extincin- que es especfica de
cada cromforo. Como A es adimensional, las dimensiones de dependen de
las de c y l. La segunda magnitud (l) se expresa siempre en cm mientras que
la primera (c) se hace, siempre que sea posible, en M, con lo que las
dimensiones de resultan ser M-1cm-1. Este coeficiente as expresado, en
trminos de unidades de concentracin molar (o un submltiplo apropiado),
se denomina coeficiente de extincin molar (M). Cuando, por desconocerse
el peso molecular del soluto, la concentracin de la disolucin se expresa en
otras unidades distintas de M, por ejemplo gL-1, las dimensiones de
resultan ser distintas, por ejemplo g-1Lcm-1, y al coeficiente as expresado
se denomina coeficiente de extincin especfico (s). La ley de Lambert-Beer
se cumple para soluciones diluidas; para valores de c altos, vara con la
concentracin, debido a fenmenos de dispersin de la luz, agregacin de
molculas, cambios del medio, etc.

III.3.
Instrumentacin para la medicin
de absorbancias de la luz visible y ultravioleta: espectrofotmetro
UV-visible.
La medicin de absorbancia de la luz por las molculas se realiza en unos
aparatos llamados espectrofotmetros. Aunque pueden variar en diseo, en
especial con la incorporacin de ordenadores para el anlisis de datos, todos
los espectrofotmetros constan, segn se indica en la figura, de:
a. Una fuente de energa radiante: lmpara de deuterio y tungsteno.
b. Un monocromador para la seleccin de radiaciones de una
determinada longitud de onda: filtros, prismas, redes de difraccin.
c. Un compartimento donde se aloja un recipiente transparente (cubetas
o tubos) que contenga la muestra Pueden ser de vidrio, cuarzo o
plstico transparente. Para medir en UV se deben usar las de cuarzo o
slice fundido, porque el vidrio no transmite la radiacin UV.
d. Un detector de luz y un amplificador convertidor de las seales
luminosas en seales elctricas.
e. Un registrador o sistema de lectura de datos.

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

Desde el punto de vista operativo, el primer paso es seleccionar la fuente de

luz y longitud de onda a la que se va a realizar la medida. Hay
espectrofotmetros de un solo haz (con una sola celdilla para alojar la cubeta
con la muestra) y de doble haz (con dos celdillas para dos cubetas); en
nuestro caso se trabajar con los de un solo haz. Se mide primero la
absorbancia del disolvente (conocido como blanco) y al que se le asigna el
valor de cero mediante el ajuste del mando, de forma que la intensidad
incidente y transmitida sean iguales (Io = It), y por tanto la absorbancia es
cero. A continuacin se pone en la celdilla la cubeta con la muestra y se lee la
absorbancia de sta.
Figura 5: Espectofotometro

Fuente: Espectrofometra; Espectros de absorcin y cuantificacin colorimtrica de

biomolcula

III.4.
absorcin.

Obtencin de un espectro de

El espectro de absorcin es una representacin grfica que indica cantidad de

luz absorbida () a diferentes valores de .
La interaccion entre las ondas electromagnticas y la materia de la regin UVvisible es el campo de estudio de la electroscopia UV-visibles o
espectrofotometra. Esta basada en la relacin que presenta un haz de luz
incidente en la muestra y el haz de luz que pasa por la solucin.
Su estudio se basa en que la cantidad de luz absorbida por la materia
presente en la solucin es caracterstica del compuesto. La respuesta de

Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

dicho componente es funcin de las caractersticas del haz de luz incidente

en la muestra, lo que permite determinar la respuesta en funcin de la
calidad del haz proporcionado. Dicho conjunto de respuestas ene l rango de
longitud de onda en la gama UV-visible se denomina espectro de absorcin;
dicha respuesta es caracterisitca de cada compuesto.
III.5.

Curva Analitica.

Para obtener una curva de calibrado de un compuesto se preparan soluciones

de diferentes concentraciones del mismo, determinndose para cada una de
ellas el valor de absorbancia a max. Estos valores de absorbancia se
representan en el eje de abscisas (eje de x) y los de concentracin en el eje
de ordenadas (eje de y). Se observar que, a bajas concentraciones, el
aumento de concentracin se corresponde con un incremento lineal en la
absorbancia (zona de cumplimiento de la ley de Lambert-Beer). A
concentraciones altas la linealidad se pierde y se observa que la lnea se
aplana, por lo que las medidas son poco fiables. La representacin de
Lambert-Beer, A = cl, nos permitir calcular el valor del coeficiente de
extincin molar, que corresponde a la pendiente de la recta.
IV.

V.

MATERIALES

probetas

pipetas

bomba

espectrofotometro

papel milimetrado

agua destilada

PROCEDIMIENTO
A partir de una solucin diluida de un compuesto, cuya absorbancia mxima
entra dentro del rango de medida del espectrofotmetro, se ver el valor de
absorbancia a diferentes longitudes de onda frente a un blanco que contenga
el disolvente de la solucin de la muestra a caracterizar. A partir del espectro
de absorcin se obtendr el valor de al que el compuesto presenta la mayor
absorbancia (max). Dicho se utilizar a la hora de hacer determinaciones
cualitativas y cuantitativas del compuesto.

Diluimos nitrito en 3 tubos de ensayo, a diferentes concentraciones: a

2.5, 5 y 10 ppm.
Preparamos una muestra blanco.
Luego colocamos la muestras 4 muestras en el especctofometro.

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Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

VI.

Visualizamos desde un landa analtico de 420 nm hasta 610 nm.

Apuntamos los datos obtenidos y luego los trabajamos en Excel, para
poder hablar la cuerva espectral.
Y el mismo procedimiento lo realizamos para el azul de metileno,
visualizamos desde un landa analtico de 500 nm hasta 700 nm.

RESULTADOS

Lectura de absorbancia para el azul de metileno a diferentes longitudes

de onda ( desde 500nm hasta 700nm) y para nitritos, longitudes de
onda ( desde 420 nm hasta 610 nm).

AZUL DE METILENO

BLANCO

500
520
540
560
580
600
620
640
660
665
675
680
700

0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000

Abs. 1 Abs. 2 Abs. 3

0.006
0.006
0.006
0.011
0.013
0.015
0.019
0.023
0.027
0.035
0.029
0.014
0.008

0.006
0.005
0.008
0.012
0.02
0.033
0.045
0.056
0.076
0.081
0.072
0.058
0.007

0.017
0.015
0.02
0.038
0.066
0.116
0.159
0.2
0.288
0.304
0.278
0.209
0.046

NITRITOS

BLANCO

Abs. 1

Abs. 2

Abs. 3

420
440
460
480
500
520
540
560
580
600
610

0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000
0.000

0.002
0.004
0.018
0.031
0.052
0.074
0.086
0.072
0.038
0.004
0.001

0.003
0.012
0.028
0.056
0.097
0.142
0.165
0.137
0.072
0.015
0.033

0.016
0.028
0.053
0.102
0.172
0.254
0.291
0.244
0.133
0.115
0.010

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Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

Graficas de las curvas espectrales de los nitritos y fosfatos, en relacin

de las lecturas de absorbancia en el eje Y y las longitudes de onda en
el eje X.

AZUL DE METILENO

BLANCO

Abs. 1

Abs. 2

Abs. 3

Fuente: Elaboracion propia.

NITRITOS

Abs. 1

Abs. 2

Abs. 3

VII.

CONCLUSIONES.
La absorbancia maxima obtenida en el azul de metileno fue de 0.304 a
un landa analtico de 665 nm.
La absorbancia maxima obtenida en el nitrito fue de 0.291 a un landa
analtico de 540 nm.

VIII.

BIBLIOGRAFIA

Lpez, A., Ferrero, J. L., Navarro, E., Baeza, A., & Guilln, F. J. (1998). Espectrmetro gamma de alta
resolucin con supresin de efecto Compton para medidas de radiactividad ambiental.
In Proceedings the 24th Annual Meeting of the Spanish Nuclear Society.
Othman, S. (1999). Espectrmetro de impedancia para monitoreo de dao isqumico tisular (Doctoral
dissertation, Tesis de Maestra. Posgrado en Ingeniera Biomdica. Universidad Autnoma
Metropolitana Unidad Iztapalapa. Mxico).

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Determinacin del Landa Analtico y Curva Espectral

Tejeda, G. (1997). Un espectrmetro Raman Dual de muy alta sensibilidad(Doctoral dissertation,

Tesis doctoral, Universidad Autnoma de Madrid).

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