Fraccionamiento

Subcelular

Todo proceso de fraccionamiento subcelular tiene dos

etapas:
- ruptura de las clulas o tejidos( homogenizacin del tejido)
- separacin de la fraccin deseada por centrifugacin

Tcnicas de
HOMOGENIZACIN

Mtodos mecnicos:

- Sonicacin
- Pasar las clulas por orificios provocando su ruptura.
- Homogenizadores(mortero,juguera,homogenizador de
pistn)

Mtodos qumicos:

- Detergentes

Homogeneizacin

Objetivo: romper la membrana plsmica liberando los organelos

en suspensin con un mnimo dao funcional y estructural
Medios mecnicos:
Morteros con y sin abrasivos (tej. Vegetales)
Homogenizadores tipo Potter (tej. Animales)
Homogenizadores tipo Dounce
Homogenizadores de alta velocidad
Tratamientos enzimticos previos en algunos
casos (aorta, msculo, algunos tumores)
Elastasa
Colagenasa
Hialuronidasa

Medio de suspensin

Baja viscosidad
Proteccin osmtica
Preservacin de la membrana
Prevencin de aglutinacin
Prevencin de adsorciones
Sacarosa
Glucosa
Manitol
polialcoholes

Centrifugacin

Esquema de una Ultracentrfuga

Centrifugacin Diferencial

CENTRIFUGACION DIFERENCIAL

Fracciones

Contenido

g*min

ncleos

600*10mi
n

mitocondrias

3000*10
min

lisosomas

25000*
10min

microsomas y
membrana

100000*
30min

fraccin
soluble

N
M

Centrifugacin en Gradiente de Densidad

(ISOPCNICA)
Permite la separacin de
la gran mayora de los
componentes celulares.
Densidad mayor en el
fondo del tubo.
Los ms utilizados:
Sacarosa
Percoll
Metrizamida
CsCl (muy corrosivo,rotor
de titanio)

Uso de marcadores especficos.

Se utilizan para evaluar la separacin por

fraccionamiento subcelular.
Se basa en el uso de substratos para las
enzimas caractersticas de cada organelo.

Malato dehydrogenasa

Sulfito citocromo c
reductasa
Monoamino oxidasa

Citocromo c oxidasa

Lisosomas

N-acetil b-glucosaminidase
Fosfatasa cida

Catalasa
Acyl-CoA oxidasa

NADPH citocromo c reductasa

Glucosa 6 fosfatasa

RE - microsomas

Aplicaciones en Biologa celular.

Esta tcnica ha sido ampliamente utilizada en biologa
celular, por tanto, posee variadas aplicaciones:
Identificacin y caracterizacin de organelos.
Entrega informacin acerca de la organizacin estructural
y funcional de la clula.
Reconocimiento de protenas.

Localizacin de actividades enzimticas.

Permite entender funcionamiento de la clula gracias al
estudio de sus partes.