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PRINCIPALES MÉTODOS Y TÉCNICAS DE

ESTUDIO DE LOS HONGOS.


COLECTA

HONGOS MICROSCÓPICOS HONGOS MACROSCÓPICOS


AISLAMIENTO.

 Transferencia directa.
 Dilución en placa.
 Esterilización superficial.
 Utilización de carnadas.
 Cámaras húmedas.
CULTIVO DE MICROORGANISMOS.

 Proceso de inducir su
crecimiento.

 El cultivo in vitro necesita la


preparación de sustancias
que el hongo pueda utilizar
como alimento: MEDIOS
DE CULTIVO.
CULTIVO DE MICROORGANISMOS.

 Los primeros medios de


cultivo que se utilizaron
fueron naturales:
 Leche, orina, sangre
diluida, jugos de
verduras.

 !TORTILLAS!!!
MEDIOS DE CULTIVO

 No existe un medio de
cultivo universal.

 El crecimiento y
desarrollo dependen de
varios factores:
disponibilidad de
nutrimentos, pH,
temperatura, humedad.
MEDIOS DE CULTIVO. No se sabe su
composición
química
 Complejos (sustratos Sales inorgánicas y
naturales). compuestos orgánicos

Tienen un grupo de
 Sintéticos (Czapek).
sustancias conocidas
y otro de sustancias
 Semi-sintéticos (PDA). naturales

 Selectivos. Son usados


principalmente para
aislar a grupos de
hongos específicos.
COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO.

 Fuente de carbono Glucosa, sucrosa, fructuosa, manitol, etc.

 Fuente de nitrógeno Peptonas, aminoácidos, compuestos


de amonio y nitratos.

 Vitaminas.
Tiamina, biotina.
 Factores de
crecimiento. Cualquier sustancia requerida
en cantidades muy pequeñas.
TIPOS DE MEDIOS DE CULTIVOS

 Sólidos.
cuando se necesita una gran cantidad de esporas.
Agar.

• Líquidos
cuando se necesita calcular biomasa u obtener
grandes cantidades de micelio.
ANTIBIÓTICOS USADOS EN MEDIOS DE CULTIVO.

 Penicilina (Gram +).

 Estreptomicina (Gram +-)

 Cloranfenicol (Gram +-).

 Garamicina (Gram +-).


MÉTODOS DE ESTERILIZACIÓN.

 Por calor. Desnaturalizan proteínas y ácidos nucleicos


• Calor húmedo (121º
15’).
• Calor seco. Material de vidrio y metal. (180ºC
1.
porSe1.5utiliza para materiales
o 2 horas).
• Incineración. Material de metal y de vidrio.
termolábiles.
2. Circulación de gases tóxicos
 Por agentes químicos. Las(óxido
sustancias termolábiles se
de etileno,
pasan a través deglutaraldehído,
filtros
 Por filtración. Radiación noformaldehído,
ionizante: luz UV (100-400nm). Se
especiales.
etc.) durante
usa para esterilizar 10 horas.
superficies en áreas de
 Por radiación. trabajo.
Radiación ionizante: Rayos X, gamma. Se usa
para esterilizar equipo pre-empaquetado y otros
equipos quirúrgicos.
REGISTRO DE CARACTERÍSTICAS
MACROSCÓPICAS.

 Color del anverso y


reverso.
 Aspecto (liso, rugosos,
polvoso, etc.)
 Tamaño.
 Producción de exudado.
 Velocidad de
crecimiento.
ELABORACIÓN DE PREPARACIONES.

 Agua.
 Lactofenol.
 Ácido láctico.
 Alcohol polivinílico.
 Floxina.
 Azul de algodón.
MICROSCOPÍA

 Una de las principales


herramientas de la
microbiología, es el
microscopio de luz.

 MANEJO

 El revólver se usa para rotar los


objetivos
MANEJO DE MICROSCOPIOS.

El microscopio nunca se carga con una mano.


NO ARRASTRAR SOBRE LA MESA!!!!!!!!!
MANEJO DE MICROSCOPIOS.

USAR UNICAMENTE LA PERILLA MICROMÉTRICA

 La distancia de
trabajo disminuye
conforme la
magnificación se
aumenta
MANEJO DE MICROSCOPIOS.

 El aceite de inmersión
tiene el mismo índice de
refracción del vidrio por
lo que funciona como
otro lente

• El objetivo de 100X se
limpia con papel cera y
con movimiento
circulares suaves

RARA VEZ UTILIZAREMOS EL OBJETIVO DE 100X


MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.

 No existe un método
universal.
 El objetivo es preservar
la viabilidad y la
estabilidad genética de
los cultivos.
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.

 No existe
Transferencia
un método
periódica (3 meses a
2 años).
universal.
 El objetivo es preservar
la viabilidad y la
Ventajas:
estabilidad
Simple, barato genética de
los cultivos.
Desventajas:
Tardado, laborioso, se contamina
fácilmente, la morfología y fisiología
puede cambiar con el tiempo.
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.

 Aceite mineral estéril (1-10 años).

Ventajas:
Los cultivos se pueden mantener por varios años y
reduce la infestación de ácaros.

Desventajas:
El hongo continúa creciendo y existe la selección de
mutantes que puedan crecer bajo condiciones
desfavorables. Es difícil drenar el aceite y en ese proceso
el hongo es susceptible de contaminación.
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.

 Agua destilada y estéril (1-10 años).

Ventajas:
No influye en la tasa de crecimiento ni en la viabilidad del cultivo, la
estabilidad genética es mayor, se suprimen los cambios
morfológicos.

Desventajas:
Preservación a mediano plazo.
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.
Sílica gel (8 años)

Se colocan cristales de sílica en tubos y se esterilizan


con calor seco.

Las esporas se suspenden en una solución al 10% de


leche deslactosada.

La solución de esporas se vierte en la sílica y se


mantienen a temperatura ambiente durante 1 o 2
semanas.

Se evalúa la viabilidad y si responden bien se sellan los


tubos y se mantienen a 4ºC
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.
Liofilización.

Es un proceso de deshidratación en el cual las


suspensiones de esporas son congeladas.

Se seca al vacío para sublimar el hielo.

No todos los hongos resisten el proceso.

El crioprotector se usa para evitar la deshidratación


total los más usados son glutamato de sodio,
peptona, varios azucares o mezclas de azucares y
leche deslactosada.
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.

 Nitrógeno líquido (-196ºC/ 25 años).

El material se suspende en glicerol 10%, se enfría


gradualmente y se coloca dentro de un tanque con N líquido a
-196ºC (el vapor de N líquido está a -150ºC).
Si soportan la temperatura pueden conservarse
indefinidamente.
Hay un cese completo de la división celular y el arresto total del
metabolismo.
Ventajas:
Prevención de variabilidad genética aumentada, no requieren
mucho tiempo, no es laborioso, no se contamina.
Desventajas:
El aparato y el nitrógeno líquido son muy caros y este último
debe reemplazarse cada 2 días.
HONGOS MACROSCÓPICOS
TOMA DE DATOS EN EL CAMPO.

 Substrato.
 Color.
 Sabor (OJO ).
 Olor.
 Consistencia.
 Reacciones químicas.
HERBORIZACIÓN.

 Deshidratación de
material fresco.

 Sirven para comparar,


identificar y conservar
registros.
ELABORACIÓN DE PREPARACIONES.

 Reactivo de Melzer.
(azul a negro = amiloide;
rojo a violeta =
dextrinoides).

 KOH.
MÉTODOS DE PRESERVACIÓN.

 Los macromicetos se conservan herborizados


y se etiquetan correctamente.
• Número de especímenes colectados.
• Nombre científico completo.
• Descripción del sustrato.
• Localidad exacta.
• Nombre del colector.
• Fecha de colección.
• Nombre de la persona que determinó.
ORIGEN DE LA TECNICA DE CULTIVOS PUROS.

 1872 Schroeter: Los cultivos se pueden mantener puros sobre


superficies nutritivas sólidas (rebanadas de papa).
 1880 Koch: usó una solución de gelatina al 5 a 10% sobre piezas
planas de vidrio.
 La gelatina tenía las siguientes desventajas:
• Se derrite a temperaturas relativamente bajas.
• Es digerida por una gran cantidad de microorganismos.
• Acumulaba una gran cantidad de polvo y microorganismos del aire.
1881 Hesse: propuso la utilización del agar como sustituto de la
Gelatina (polisacárido de Gelidium sp.)
• No es digerida fácilmente y no es una fuente de nutrimentos.
• Se disuelve cerca del punto de ebullición del agua y se licua a 39ºC
Petri: vació el medio de cultivo en platos circulares y los tapó.

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