MEDIOS DE CULTIVO PARA HONGOS

Un medio de cultivo es un sustrato o una solucin de nutrientes que permite el

desarrollo de microorganismos. En las condiciones de laboratorio para realizar un
cultivo, se debe sembrar sobre el medio de cultivo elegido las muestras en las que los
microorganismos van a crecer y multiplicarse para dar colonias. Las necesidades
nutricionales de las bacterias varan considerablemente; mientras que algunas slo
requieren de sustancias simples por lo que son llamadas bacterias no exigentes, otras
necesitan de sustancias complejas como la sangre, el suero, la albmina o plasma y se
les llama bacterias exigentes.
Los medios de cultivos son sustancias o compuestos nutritivos que permiten el
desarrollo microbiano en el laboratorio, el pH est generalmente entre 6,8 a 7,6 en el
caso de medios usados en microbiologa clnica. Actualmente no existe un medio de
cultivo que satisfaga el aislamiento de todos los hongos de importancia mdica, por ello
en el laboratorio de micologa existe una amplia variedad de medios de cultivo, cuyos
usos estn condicionados al hongo a investigar. Tambin son importantes la temperatura
y el tiempo incubacin, as como tambin los contenedores de los medios de cultivo
(placas o tubos). Generalmente se recomienda como temperatura de incubacin de 2830 C, as como tambin a temperatura ambiente. Para el reparto de los medios de
cultivo en micologa, eventualmente pueden usarse placas petri, por cuanto ofrecen
mayor superficie en donde pueda diseminarse el material a cultivar, pudiendo evitarse la
deshidratacin dispensando aproximadamente 40 ml. de medio de cultivo por placa; el
uso de tubos tapa rosca de gran calibre son lo ms recomendable, usualmente no
presenta el problema de deshidratacin, no debiendo dejarse la tapa totalmente cerrada,
sino ligeramente abierta, para permitir una adecuada aireacin, porque el desarrollo
ser anormal o inhibido, retardando as la identificacin de los hongos. La incorporacin
de agentes antibacterianos como cloranfenicol (16 ug/ml), gentamicina (5-100 ug/ml),
penicilina (20 ug/ml), estreptomicina (40 ug/ml), norfloxacina (5 ug/ml), y
ciprofloxacina (5ug/ml), incrementan considerablemente la posibilidad de obtener
cultivos libres de presencia bacteriana como contaminante. Tambin se puede usar la
cicloheximida (actidione, 0.5 ug/ml), para inhibir el desarrollo de hongos saprfitos de
rpido crecimiento, pero este es adems capaz de inhibir el desarrollo de algunas
levaduras como C. neoformans, especies de Candida, especies de Trichosporon,
especies de Aspergillus, P. boydii, entre otros; por esta razn el uso de cicloheximida
debe ser cuidadosamente empleada en los medios usados.
REACTIVOS Y COLORANTES
Para el estudio de los hongos es necesario del uso de reactivos y colorantes. Si se trata
de una muestra clnica (pus, esputo, raspados de piel, fragmentos de pelo, etc.) es
necesario el empleo de aclarantes que permitan resaltar las estructuras fngicas al
disolver el moco o queratina de la muestra. Teir es un proceso de colorear
artificialmente los microorganismos con colorantes o reactivos con el objeto de facilitar
su observacin y estudio al microscopio. Los colorantes son compuestos orgnicos
conformados por anillos bencnicos que tienen un grupo auxocromo (intensifican el
color y mejoran la afinidad del colorante) y uno cromforo (imparte color). Los
colorantes deben conservarse en frascos de color mbar. Se recomienda preparar en
cantidades para un consumo no mayor de un mes.

Medios de cultivo
AGAR SABOURAUD CON CLORANFENICOL Y CICLOHEXIMIDA
(MICOBIOTIC, MICOSEL)
Medios selectivos para el aislamiento de hongos a partir de muestras clnicas y no
clnicas. Se han aadido agentes selectivos para inhibir las bacterias. El cloranfenicol es
un antibitico de amplio espectro que inhibe una amplia variedad de bacterias gram
negativas y gram positivas, pero puede tener un efecto inhibidor en numerosos hongos
patgenos. Se ha demostrado que los antimicrobianos como la penicilina, la
gentamicina y la estreptomicina, o una combinacin de las mismas, son eficaces en la
inhibicin de bacterias sin afectar el crecimiento fngico2-5. Estos medios se utilizan
para el aislamiento de hongos a partir de muestras clnicas o materiales en los que se
sospeche la presencia de contaminantes bacterianos. Su utilizacin requiere de algunas
consideraciones por cuanto en capaz de inhibir hongos de importancia mdica (Candida
no albicans, especies de Aspergillus, Zygomycetes, Cryptococcus neoformans, especies
de Trichosporon, P. boydii entre otros).
Agar micobiotic o micosel

36 g

Agua destilada

1000 ml

Adicionar el agar al agua, mezclar y hervir hasta disolver el medio completamente.

Ajustar el pH a 6.5 0.2 y dispensar alcuotas de 20 ml. en tubos tapa rosca limpios.
Esterilizar en autoclave por 15 min. a 121 C. e inclinar los tubos hasta que el agar se
solidifique.